Bu eser Ulusal kurumları sağlık hibe K08 NS061039-01A2, Nöroloji araştırma için Program tarafından desteklenen &#38; keşif ve A. Alfred Taubman Tıbbi Araştırma Enstitüsü Michigan Üniversitesi'nde. Bu eser morfoloji ve görüntü analiz çekirdek Michigan diyabet araştırma merkezinin Ulusal Sağlık Enstitüleri Grant 5 P 90 DK-20572 diyabet Ulusal Enstitüsü ve sindirim ve böbrek hastalıkları tarafından finanse edilen kullanılır. Yazarlar insan deri örnekleri onların cömert bağış için J. Robinson Singleton ve A. Gordon Smith (Utah Üniversitesi) teşekkür etmek istiyorum.

(Salt Lake City, UT) Utah Üniversitesi diyabet Merkezi'nde büyük topluluk tabanlı birinci basamak sağlık ağdan işe konulardan elde edilen deri punch biyopsi. Bu çalışma Michigan Üniversitesi Kurumsal değerlendirme Komitesi tarafından onaylanmış ve Helsinki Deklarasyonu ilkelerinin ile uyulması. Aydınlatılmış onam test önce her konudan elde edilen yazılı.
 1. Floresans immünhistokimya <ol><li>hazırla punch biyopsi intraepidermal Sinir lifi immünhistokimya için: <ol><li>gerçekleştir 3 mm cilt biyopsileri tıp tarafından personel ve bütün biyopsi 1,5 yer mL Zamboni &#39; s sabitleştirici çözüm (%2 paraformaldehyde, doymuş % 0,3 Pikrik asit fosfat tamponlu tuz (PBS), pH 7,4) gecede 4 ° C'de.</li>
		<li>Durulama örnekleri % 30 Sükroz bir çözüm ile PBS içinde 4 ° C'de 16-24 h ya kadar örnek lavabolar.</li>
		<li>En uygun kesme sıcaklık Embed örnekleri bileşik (OCT) kullanarak bir cryomold. Kalıp içinde aşağı bakacak şekilde epidermis ile tüm 3 mm biyopsi koyun ve kalıp yaklaşık 2 mL Ekim Freeze kalıp ezilmiş kuru buz ile doldurun. Mağaza-80 ° c kadar kullanıma hazır.</li>
		<li>Kesim 50 µm kalınlığında bir cryostat kullanma bölümlerine geçmek ve iyi (% 30 etilen glikol, PBS % 30 gliserol) başına 180 µL antifriz depolama çözümü kullanarak bir 96-şey plaka bireysel Wells saklayın. Aşağıdaki yönergeler 96 iyi plaka 8 kuyular için vardır. 200-300 µm birbirlerinden uzağa bölümler her biyopsi sitesinden leke.</li>
	</ol></li></ol> 1. gün: <ol start="2"> <li>belirsiz stratum korneum etiketleme gidermek: <ol><li>olarak şekil 1 ' de gösterilen etiket 96-şey plaka.</li>
		<li>Damlalıklı 150 µL ikincil antikorlar 34 , 35 nonspesifik bağlama her kuyuya azaltmak için hisse senedi sinyal arttırıcı çözüm. Bölümler inoculating bir döngü kullanarak sinyal arttırıcı çözüm transfer. 
		Not: zarar veya doku bölümleri yırtılma önlemek için doku ile çalışırken dikkat et. Düz bir rocker üzerinde oda sıcaklığında 30 dakika sinyal arttırıcı çözümde tutun.</li>
		<li>Hazırlama durulama her kuyuya 1 fosfat tamponlu tuz (PBS) x 150 µL ekleyerek satır 2 ve 3 / 96-şey plaka kuyuları.</li>
		<li>Dikkatli bir şekilde satır 2 ve 1 x PBS için oda sıcaklığında 10 dakika durulama içine bölümler transfer.</li>
		<li>Durulama, oda sıcaklığında (satır 3) 10 dk 1 x PBS içinde ikinci kez.</li>
	</ol></li> <li>% 5 sığır serum çözüm engelleme albumin (BSA) hazırlamak: <ol><li>% %5 5 BSA içeren çözüm engelleme ve %0,3 Triton X hazırlamak (bkz. Tablo 1) 0.1 M PBS bölümler ise (TX-100) 100 kuluçka sinyal arttırıcı çözüm. BSA çözüm kolayca gitmez. BSA tamamen eriyene kadar girdap çözüm.</li>
		<li>Çözüm her kuyuya engelleme %5 BSA 150 µL ekleyerek satır 4 96-şey plaka engelleme wells hazırlayın.</li>
		<li>Bölümleri çözüm engelleme %5 BSA bireysel kuyu aktarmak ve çözüm için 1-2 h düz bir rocker üzerinde oda sıcaklığında engelleme %5 BSA bölümlerde kuluçkaya.</li>
	</ol></li> <li>%1 BSA çözüm ve seyreltme birincil antikorların durulama hazırlamak: <ol><li>TX-100 (bkz. tablo 2) 0.1 M PBS içinde içeren % 1 BSA ve % 0.3 hazırla % 1 yıkama çözüm bölümleri vardır %5 BSA engelleme çözümde kuluçka. BSA çözüm kolayca gitmez. BSA tamamen eriyene kadar girdap çözüm.</li>
		Bölüm %5 BSA engelleme çözümde kuluçka iken <li>% 1 BSA durulama çözümde birincil antikorlar oranında seyreltin.
		<ol><li>Birincil antikor çözüm 1.500 µL yapıp her ekleyin su kuyusu içinde satır 5.</li>
			<li>Seyreltik birincil antikorlar: sinir özel etiket, tavşan poliklonal Anti-protein gen ürünü 9.5 (PGP9.5) 1:1, 000 kullanın. Mitokondri özgü etiket kullanın, fare monoklonal Anti-pyruvate dehidrogenaz E2/E3bp antikor (PDH), 1: %100 1 BSA çözüm durulama içinde.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>Hazırla birincil antikor: <ol><li>her birincil antikor damlalıklı 150 µL iyi kürek 96-şey plaka 5.</li>
		<li>Döngü aracını kullanarak bölümleri engelleme çözümden (satır 4) satır birincil antikor içeren 5 transfer.</li>
		<li>Plaka kurumasını önlemek için sıkı bir şekilde parafilm ile sarın.</li>
		<li>Örnekleri, oda sıcaklığında 1 h için düz rocker üzerinde yerleştirin ve örnekleri 4 ° C'nin üzerinde düz bir rock'çı, gecede kuluçkaya.</li>
	</ol></li></ol> 2. gün: <ol start="6"> <li>durulama örnekler: <ol><li>satır 6, 7 ve 8 150 µL % 1 BSA çözüm her kuyuya durulama ekleyerek 96-şey plaka hazırla durulama wells.</li>
		<li>Bölümleri ilk % 1 BSA durulama çözüm (satır 6) aktarmak ve oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya. Durular, oda sıcaklığında 7 ve 8 için 1 h satırlardaki çözüm durulama % 1 BSA bölümlerde kuluçka tarafından iki kez daha tekrarlayın.</li>
	</ol></li> <li>Seyreltik çözüm durulama % 1 BSA ikincil antikor: <ol><li>yapmak 1.500 µL iken bölümler %1 BSA çözüm (satır 8) durulama son durulama kuluçka ikincil antikor çözüm.</li>
		<li>Seyreltik ikincil antikorlar: PGP9.5 (yeşil-floresan konjuge keçi Anti-tavşan antikor, 1: 1000) PDH (kırmızı-floresan konjuge keçi Anti-fare, 1:1, 000) % 1 BSA çözüm durulama için.</li>
	</ol></li> <li>Hazırla ikincil antikor: <ol><li>satır 9 96-şey plaka içine ikincil antikor damlalıklı 150 µL.</li>
		<li>Yavaşça çözüm (satır 8) ikincil antikor wells (satır 9) durulama % 1 BSA bölümleri transfer.</li>
		<li>Kullanma parafilm, sıkı bir şekilde bu kurumasını engellemek için plaka sarın. Alüminyum folyo ile kapatın. 1s için oda sıcaklığında düz rocker üzerinde örnekleri yerleştirin ve örnekleri düz bir rocker üzerinde 4 ˚C adlı gecede kuluçkaya.</li>
	</ol></li></ol> 3. gün: <ol start="9"> <li>hazırla temiz 1 x PBS 0,22 µm filtreden süzerek: <ol><li>, damlalıklı 150 µL filtre 1 x PBS satır 10, 11 ve 12.</li>
		<li>Örnekleri 10 satır transfer ve oda sıcaklığında 1 h için 1 x PBS durulayın. 96-şey plaka alüminyum folyo ile kapak ve durulama sırasında düz bir rocker üzerinde yerleştirin. Tekrar filtre 1 x PBS durulama iki kez daha 1s için her oda sıcaklığında satırlar 11 ve 12.</li>
	</ol></li> <li>Doku bölümleri montaj için mikroskop slaytlar hazırlayın: <ol><li>yer 50 µL, filtre uygulanmış bir slayt üzerinde 1 x PBS.</li>
		<li>Transfer bölümünden 1 x PBS (satır 12) içine 50 µL bırak. Dikkatle PBS bölümünü içinde belgili tanımlık damla doku unfolding ve yavaşça cam slayt düzleştirme konumlayın. Cam pipet ile aşırı PBS montaj reaktif sulandrarak önlemek için kaldırın. Cam ampul bölümlerle dokunmayın.</li>
		<li>Damlalıklı 1 - 2 damla DAPI üstünde tepe-in mikroskop slayt kullanarak doğrudan bölüm içeren montaj reaktif bakım bölümü yönünü rahatsız değil. Yavaşça bir 50 mm x 24 mm #1.5 mikroskop cam coverslip bölümünün üzerine yerleştirin.</li>
		<li>Coverslip yerleştirerek süre oluşan herhangi bir hava kabarcıkları temizleyin ve aşırı sıvı coverslip kenarlarını Sil. Yeni bir slayt hazırlamak ve montaj pr tekrarlayıngönderilen her bölüm için.</li>
		<li>Tedavi/kuru oda sıcaklığında karanlık gecede slaytları yerleştirerek montaj medya. 4 ° C-20 ° C için uzun süreli depolama (2 haftadan daha fazla) veya kısa vadeli (1-2 hafta) için slaytları transfer. 
		Not: Birincil antikorlar PGP9.5 veya PDH için adım 1.4.2.2 ihmal ve hiçbir ayırt sinirler veya mitokondri içinde epidermis etiketlerine göre görüntülenen negatif kontrol eder. Pozitif denetimler gerçekleştirilmiştir için PDH bunu kanıtlamak için antikor tüm mitokondri (veri gösterilmez) Etiketler. Pozitif denetimler için etiket mitokondri yeşil flüoresan Protein (GFP) sinyali ile baculovirus ile transduced ve daha sonra sabit ve PDH antikor ve kırmızı floresan ile lekeli kültürlü birincil fare dorsal kök gangliyon nöronlar üzerinde gerçekleştirilen ikincil antikor. GFP ifade tüm mitokondri PDH immünhistokimya (veri gösterilmez) için kırmızı etiketle birlikte etiketli.</li>
	</ol></li></ol> 2. Confocal görüntüleme <ol><li>confocal görüntüleme gerçekleştirmek: <ol><li>toplamak görüntüleri ters bir mikroskop amaçta petrol-daldırma (1,25 sayısal diyafram (N.A.)) X 40 confocal mikroskobu tarama bir lazer kullanarak.
		<ol><li>Her odak düzlemi sırayla floresan sinyallerini almak: çekirdeği: uyarma λ 405 = nm, spektral emisyon filtre λ 420-480 nm = sinir lifleri: uyarma λ = 488 nm, spektral emisyon filtre λ 505-560 nm = Mitoch ondria: uyarma λ = 543 nm, spektral emisyon filtre λ 606-670 nm =</li></ol></li> <li>belgili tanımlık mikroskop bilgisayar yazılımı aşağıdaki tarama parametreleri girin: 600 Hz tarama hızı 2 çerçeve ortalama ve 2.2; zoom 12-bit yoğunluğu çözünürlük (4096 gri düzeyleri).
		<ol><li>Mikroskop bilgisayar yazılımı için en iyi duruma getirilmiş yanal çözünürlük ayarla (tarama çözünürlüğü 1024 x 1024 =) ve Aksiyel çözünürlük/optik kesit (confocal diyafram = 1 havadar adet (AU) ile z-adım boyu 210 nm). 
			Not: Elde edilen XYZ 172.2 çözümlemesidir 172.2 nm x 210 nm ile bir resim büyüklük-in 30-50 µm x 176.1 µm x 176.1 µm x nm.</li>
		</ol></li> <li>Sinir sinyal (yeşil-floresan) için canlı bir tarama etkinleştirmek ve bulun ve üst set z-odak denetimi değiştirmek ve alt doku bölümünde sinir sinyal kapsayacak odak uçak içinde mikroskop bilgisayar yazılımı. Toplam z-genellikle 30-50 µm 50 µm doku bölümün aralıktır.</li>
		<li>Epidermis görüntüde yatay veya dikey olarak konumlandırılmış bir canlı tarama sırasında belgili tanımlık mikroskop bilgisayar yazılımı inceden inceye gözden geçirmek alanıyla döndürme.</li>
		<li>Her sinyal ayrı ayrı inceden inceye gözden geçirmek ve Dedektör (photomultiplier tüp, devresel_ödeme) ayarlamak gerilim ve en aza indirmek/herhangi üzerinde ve doymuş piksel altında kaldırmak için mahsup hesabı. 
		: Dikkat yukarıdaki parametreler ile inceden inceye gözden geçirmek kere z dilimleri sayısına bağlı olarak yaklaşık 20-40 dak.</li>
	</ol></li></ol> 3. 3D görselleştirme ve analiz mitokondri içinde insan Intraepidermal sinir lifleri <ol><li>3D epidermis izole: <ol><li>orijinal görüntüyü çoğaltın ve maksimum yoğunluk kullanın (odak görünümü genişletilmiş) projeksiyon tanımlanmasını ve yalıtılmasını epidermis görüntünün.</li>
		<li>Bulunmadığına stratum korneum ve DermIS gibi istenmeyen alanları kaldırmak için izleme epidermisin üst ve alt kenarları boyunca faiz aracına bir bölgenin kullanmak intraepidermal sinir liflerinin. Bu seçim için kırpma.</li>
	</ol></li> <li>Sinir ve mitokondrial floresan sinyallerini kullanım deconvolution: Not: Deconvolution floresan sinyallerini bütünlüğünü geri yüklemek için yardımcı olur. Bu floresan sinyallerini görüntülerde ne kadar sinyalleri kendi özgün kaynaktan yayılan belirlemek için kullandığı için bu protokol için kullanılan restorasyon kör deconvolution denir (noktası yayıldı fonksiyonu). İşlem başlangıç konumuna geri yaymak sinyal atayarak sinyal çözünürlüğünü artırır.
	<ol><li>Hesapla bir noktası yayıldı fonksiyonu (PSF) yeşil flüoresan sinir sinyal (yeşil-floresan) için aşağıdaki parametrelerle: <ol><li>Ayarla hesaplanmış PSF confocal. Orta Kırılma indisi 1.515 ve sayısal diyafram 1,25 için ayarlayın. Dedektör iğne deliği 1 havadar birimine (yapıyordum) ayarlayın. Set uyarma dalga boyunda 515 için 488 nm ve emisyon dalga boyu için nm.</li>
		</ol></li> <li>Bir PSF kırmızı floresan mitokondrial sinyal (kırmızı-floresan) için aşağıdaki parametrelerle hesaplamak: <ol><li>küme hesaplanan PSF için confocal. Orta Kırılma indisi 1.515 ve sayısal diyafram 1,25 için ayarlayın. Set dedektörü iğne deliği 1 AU. Set uyarma dalga boyunda 617 için 543 nm ve emisyon dalga boyu için nm.</li>
		</ol></li> <li>Sinir ve mitokondri floresan sinyallerini karşılık gelen PSFs kullanarak deconvolution tarafından yukarıda listelenen En İyileştir ve yinelemeli restorasyon özellik ayarla % 100 güven ve bir yineleme sınırına 10 döngüleri.</li>
	</ol></li> <li>Sinir özel yüzeyler oluşturma: <ol><li>Kullanım &#34; yüzey oluşturmak &#34; bir katı yüzey sinirleri deconvolved yeşil-floresan ikincil PGP9.5 etiketleme üzerinden yapmak için aracı tespit sinir.</li>
		<li>Uncheck &#34; düzgün &#34; özelliği ve arka plan Floresans önemli ölçüde daha parlak olduğundan sinir sinyal için eşik ayarlamak için mutlak yoğunluğu özelliğini kullanın.</li>
		<li>Arka plan Floresans önemli ölçüde daha parlak olduğundan sinir sinyal için eşik belirtmek için mutlak yoğunluğu özelliğini kullanabilirsiniz. Doğru bir şekilde sinirler tanımlamak için düşük eşik değerini ayarlamanız.</li>
		<li>Filtre küçük, sinir olmayan yüzeyleri dışarı dayalı boyutuna. 
		Not: gerekirse, el ile ek sinir olmayan yüzeyleri içinde dışarı düzenlemek &#34; düzenleme &#34; sekme birden fazla nesneyi vurgulamak için CTRL tuşunu basılı tutup ardından Delete tuşunu kullanarak silme ile.</li>
	</ol></li> <li>Ayrı tut moduyla sinir özgü floresan mitokondrial sinyal: <ol><li>Düzen sekmesini görüntülemek için sinir yüzey seçin &#34; maskesi özellikleri &#34; özellik. 3.3 adımlarda oluşturduğunuz sinir yüzey mitokondri içinde bu sinirler mitokondrial sinyalleri lenfositi ile ilişkili uzak izole etmek için kullanılır.</li>
		<li>Olarak &#34; maskesi tüm &#39; düğmesi açılır bir &#34; maske kanal &#34; pencere, deconvolved kırmızı-floresan sinyal altında menüyü aşağı doğru seçim &#34; Kanal seçimi &#34; mitokondrial sinyal için.</li>
		<li>Kutusuna onay işareti koymak için tıklatın &#34; maske uygulamadan önce yinelenen kanal &#34; seçenek.</li>
		<li>Tıklayın radyo düğmesini önünde &#34; sürekli iç/dış &#34; için maske ayarları ve tıkırtı belgili tanımlık kutu içinde onay işareti koymak için seçeneğini &#34; ayarla Voksel yüzeye dışında &#34; seçeneği ve 0,00 değeri yazın. Mitokondrial sinyaller sinir yüzey içinde temsil eden yeni kanal oluşturmak için Tamam'ı tıklatın düğmesini.</li>
	</ol></li> <li>Mitokondri özel yüzeyler oluşturma: <ol><li>Kullanım &#34; yüzey oluşturmak &#34; mitokondri bir katı yüzey sinir özgü mitokondrial sinyal--dan yeni oluşturulan floresan kanal üzerinden yapmak için araç 3.4 adım.</li>
		<li>Uncheck &#34; düzgün &#34; özelliği ve seçin &#34; arka plan çıkarma &#34; eşik ayarlamak için özellik. Bu özellik yerel kontrast mitokondrial sinyal çevresinde mitokondri arka plan tanımlamak için kullanır.</li>
		<li>Küme eşik değeri doğru bir şekilde mitokondri tanımlamak için düşük. Bu örnekte daha düşük eşik 2.000 bir 16-bit (65,536) ölçek ayarlamak.</li>
		<li>Mitokondrial yüzeyler boyutuna göre filtre. Voksel sınır için 1.0 voxels kuruldu bu örnekte en düşük hangisi mümkün sınırlayın. Gerekiyorsa, mitokondri yüzeyler içinde dışarı el ile düzenleyin &#34; düzenleme &#34; sekme birden fazla nesne seçmek için CTRL tuşunu basılı tutup ardından Delete tuşunu kullanarak silme ile. 
		Not: Bazen, yazılım ayırt floresan mitokondrial sinyal ile ilişkili olmayan yüzeyleri oluşturur. Bu gibi durumlarda, onlarla kaldırmak mümkündür &#34; düzenleme &#34; sekmesini</li>
	</ol></li> <li>Verme ve analiz xarakteristikaları değerlerini hesaplamak: <ol><li>verme sinir ve mitokondrial yüzeyler için değerler &#34; istatistik &#34; sekmesini elektronik tablo yazılımı ile daha fazla çözümleme için.</li>
		<li>Sinir ve mitokondrial yüzeyler için birim değerleri vermek.</li>
		<li>Bireysel sinir lifleri her görüntüde mevcut saymak ve elektronik tablo değeri kaydedin.</li>
		<li>Her resim için elektronik tablo analizi için aşağıdaki olası değerleri hesaplamak: <ol><li>Bu birim için tüm sinir yüzeyleri toplamak.</li>
			<li>Filtre hacmi az 0,02 µm 3 ve depo gözü aşağıda sinir özgü mitokondrial yüzeyleri dışarı yüzeyler tarafından boyutu. Örneğin, 0.02 gibi-depo gözlerini kullanacak 0,04 0,04 - 0.08 0,08 - 0,16, 0,16 - 0,32, 0,32 - 0,64, 0,64 - 1,28, 1,28 2.56, 2.56 µm 3 büyük. 
			Not: Mitokondrial birimin alt sınır mitonchodria 36 , 37 , 38 daha önce yayımlanmış birimlerde dayalı 0,02 µm 3 kuruldu.</li>
			<li>Depo (0.02 - 2.56 µm 3 büyük) üzerinde sinir özgü mitokondrial yüzeyler her depo gözü içinde sayısı ve yüzeyler toplam sayısını saymak.</li>
			<li>Sinir özgü mitokondrial yüzeyler her depo gözündeki oranı hesaplar. Mitokondri yüzeyler toplam numarasına göre bölünmüş depo gözü başına Kont kullanın.</li>
			<li>Bu birim için tüm sinir özgü mitokondrial yüzeyleri toplamak.</li>
			<li>Toplam sinir yüzey birimin tüm mitokondrial yüzey birimleri toplamına bölünmesi ile sinir mitokondrial sinyali ile oranı hesaplamak.</li>
			<li>Sinir birim başına mitokondri sayısı toplam sinir yüzey hacim mitokondrial yüzeylerin sayısına göre bölerek hesaplamak.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Hiçbir bildirmek için çıkar çatışması.

Bu iletişim kuralı izole etmek, ölçmek ve boyutu ve sinir özgü mitokondri içinde IENFs 3D insan cilt biyopsileri üzerinden dağıtımını çözümlemek için tasarlanmıştır. Protokolünde çeşitli kritik adımlar vardır. Serbest dalgalanma Floresans immünhistokimya leke ve her örneğinde, Araştırma araştırma44,45için daha çok yönlü bir metodoloji sağlayan Çoklu sinyaller çözümlemek için tasarlanmıştır. Bu yordamı confocal mikrosk...

Mitokondri hücre enerji, kalsiyum ve nekrotik düzenleyen ve apoptotik hücre ölüm1,2,3tampon üreten dahil önemli hücresel işlevler hizmet. Sinir sistemi nöronlar hücresel enerji yüksek derecede adenozin trifosfat (ATP) formunda oluşturmak düşündüren vücut4 mitokondrial solunum ile karşılaştırıldığında yüksek bir metabolizma hızı vardır. Bir sürü kanıt belgeleri nöronal işlevleri ATP5, özellikle de sinapslarda6bağlıdır. Bu nedenle, mitokondri nöronlar içinde dağılımı önemlidir.
Bir sürü bilgi bu trafiği ve nöronal mitokondri rıhtım göstermiştir son 10 yıl içinde son derece düzenlenmiştir. Motor proteinler mitokondri nöron boyunca belirli hücresel kompartmanlarda için dağıtma katılmaktadırlar. Nöronlar proje akson ve dendrites uzakta soma mitokondri kaçakçılığı özellikle önemlidir. Kinesin motor proteinler öncelikle anterograd (soma) uzak mitokondri mikrotübüller dinein motor proteinler doğrudan (soma doğru) retrograd hareketliliği7,8,9 süre boyunca, kaçakçılığı doğrudan , 10. böyle bir mitokondri zar potansiyeli ve varlığı ve mitokondrial kaçakçılığı11,12,13yönünü etkileyen impuls iletim hücresel sinyalleri vardır.
Mitokondri taşıma yanı sıra, mitokondri ve Ranvier düğümleri ve sinapslarda8,14, gibi yüksek enerji talepleri belirli hücresel kompartmanlarda için yerelleştirmek için özel proteinler vardır 17. aslında, mitokondri içinde aksonlar hareketli9,13,18çoğu. Özel proteinler gibi syntaphilin çapa mitokondri mikrotübüller diğer proteinler çapa mitokondri aktin sitoiskeleti19-21ise akson boyunca için. Büyüme faktörleri ve kalsiyum gibi iyonları mitokondri hareket onları gerekli21,22,23nerede olduklarını bölgelerine yerelleştirmek için kesilmesi desteklemek için rapor edilmiştir.
Birlikte ele alındığında, ticareti ve mitokondri yerleştirme nöronlar için düzgün bakımından çok önemlidir. Bu destek, Alzheimer hastalığı, amyotrofik lateral skleroz, Charcot Marie Tooth hastalığı, Huntington hastalığı, herediter Spastik dahil olmak üzere çeşitli nörolojik koşullar ile ilişkili mitokondrial kaçakçılığı bozulma olmuştur paraparesis ve optik Atrofi15,24,25,26,27. Son yıllarda yapılan çalışmalarda diyabetik nöropati, diyabet28,29,30ile,31 ilişkili duyu kaybı için potansiyel bir mekanizma olarak mitokondrial disfonksiyon ve patoloji üzerinde odaklanmıştır ,32,33. Diyabet mitokondri Kutanöz sinir biten duyusal projeksiyonlar içinde dağıtım değiştirir hipotezdir. Bu nedenle, bir teknik görselleştirmek ve mitokondri içinde intraepidermal sinir lifleri (IENFs), dorsal kök gangliyon duyusal afferents distal ipuçları ölçmek için geliştirilmiştir. Teknik Floresans immünhistokimya özel mitokondrial ve sinir lifi etiket sinir özgü dağılımını ölçmek için sinyalleri güçlü 3D görüntü analiz yazılımı ile confocal mikroskobu z serisi satın alma ile birleştirir. Bu hedefe ulaşmak için insan Kutanöz punch biyopsi üzerinden mitokondri.

<table><tbody><tr><td>2% Zamboni&#039;s Fixative</td><td>Newcomer Supply, Middleton, WI&amp;nbsp;</td><td>1459A</td><td>2% paraformaldehyde, 0.2% saturated picric acid in phosphate buffered saline (PBS), pH 7.4</td></tr><tr><td>10x Phosphate Buffered Saline (PBS)&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA</td><td>BP399-4</td><td>To make up 1x PBS</td></tr><tr><td>Image-iT FX Signal Enhancer</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts</td><td>I36933</td><td>enhances Alexa Fluor dye signals by reducing nonspecific binding</td></tr><tr><td>Anti-Protein Gene Product 9.5 Antibody (Rabbit Polyclonal)</td><td>Proteintech Group Inc. Rosemont, IL</td><td>14730-1-AP</td><td>abbreviated as PGP9.5, replaces discontinued AbD Serotec (Cat. No. 7863-0504) antibody</td></tr><tr><td>Anti-Pyruvate Dehydrogenase E2/E3bp Antibody (Mouse Monoclonal)</td><td>abcam, Cambridge, MA</td><td>ab110333</td><td>abbreviated as PDH</td></tr><tr><td>Goat anti-mouse Secondary antibody Alexa Fluor 594 conjugate</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts</td><td>A-11034</td><td>red-fluorescent conjugated secondaryantibody</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit Secondary antibody Alexa Fluor 488 conjugate</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts</td><td>A-11032</td><td>green-fluorescent conjugated secondaryantibody</td></tr><tr><td>Albumin, from Bovine Serum</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>A7906-100</td><td>abbreviated as BSA</td></tr><tr><td>Triton X- 100</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>T9284</td><td>abbreviated as TX-100</td></tr><tr><td>0.22 &amp;micro;m Filter</td><td>EMD Millipore, Billerica&lt;br/&gt; MA</td><td>MILLEX GP SLGP 033NS</td><td>0.22 &amp;micro;m Millipore filter</td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA</td><td>13-374-10</td><td>Curwood Wisconsin LLC Parafilm M (PM-996)</td></tr><tr><td>Non-calibrated Loop</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA</td><td>22-032092</td><td>inoculating Loop by Decon LeLoop (MP 199-25)</td></tr><tr><td>96-well Assay Plate</td><td>Corning Incorporated, Corning, NY</td><td>3603</td><td>96-well flat bottom plate</td></tr><tr><td>Prolong Gold antifade reagent with DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts</td><td>P-36931</td><td>DAPI staining of nuclei</td></tr><tr><td>Microscope Cover Glass 50 x 24 mm</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA</td><td>12-544E</td><td>Coverslips</td></tr><tr><td>Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA</td><td>12-550-15</td><td>Microscope Slides</td></tr><tr><td>Leica SP5 Laser Scanning Confocal Microscope</td><td>Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL</td><td>SP5</td><td>Confocal Microscope</td></tr><tr><td>Volocity x64 Software&amp;nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Waltham , MA</td><td>version 4.4.0</td><td>Volocity software is used for Steps 3.1 and 3.2 in the protocol for image processing</td></tr><tr><td>Imaris x64 3 Dimensional Analysis Software</td><td>Bitplane, Concord, MA</td><td>version 7.7.1</td><td>Imaris software is used for Steps 3.3 through 3.5 in the protocol for image analysis</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft, Redmond, WA</td><td>version Office 2013</td><td>Excel spreadsheet software is used for Step 3.6 in the protocol to summarize morphometric features</td></tr><tr><td>Optimum Cutting Temperature Compound</td><td>Sakura Finetek USA, Inc., Torrance, CA</td><td>4583</td><td>abbreviated as OCT</td></tr><tr><td>Leica Cryostat</td><td>Leica Biosystems, Buffalo Grove, IL</td><td>CM1850</td><td>Cryostat for cutting 50 &amp;micro;m sections</td></tr><tr><td>CellLight Mitochondria-GFP, BacMam 2.0</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts</td><td>C10600</td><td>Used as a postive control to label mitochondria with a green fluorescent signal</td></tr></tbody></table>

three-dimensional imaging and analysis of mitochondria within human intraepidermal nerve fibers

Bu iletişim kuralının amacı mitokondri içinde intraepidermal sinir lifleri incelemektir. Bu nedenle, 3D görüntüleme ve analiz teknikleri sinir özgü mitokondri yalıtmak ve duyusal sinir distal ucu mitokondri hastalığı kaynaklı değişikliklere değerlendirmek için geliştirilmiştir. Protokol Floresans immünhistokimya, confocal mikroskobu ve görselleştirmek ve sinir özgü mitokondri ölçmek için 3D görüntü analiz teknikleri birleştirir. Detaylı parametreleri yordamlarda sinir özgü mitokondri yalıtmak için bu teknikleri kullanmayı gösteren somut bir örnek vermek için tanımlanır. Hangi sinirler ve mitokondri yeşil ve kırmızı floresan sinyali ile sırasıyla görselleştirmek için dolaylı ayirt tarafından izledi biyopsi, deri doku bölümleri içinde mitokondrial sinyalleri yumruk ve antikorlar sinir etiketlemek için kullanıldı. Z-serisi görüntüleri confocal mikroskobu ile satın alınan ve 3D analiz yazılımı işlemek ve sinyalleri analiz etmek için kullanıldı. İçinde açıklanan tam parametreleri takip için gerekli değildir, ancak boyama boyunca, toplama ve analizi adımları seçilmiş olanlar ile tutarlı olması önemlidir. Bu iletişim kuralı bir floresan sinyal aksi Yalnız çalışmak imkansız diğer sinyalleri yalıtmak için kullanıldığı çok çeşitli koşullar uygulanabilir olduğunu gücüdür.

Görselleştirme ve mitokondri içinde insan IENFs miktar
Floresans immünhistokimya sinirler, mitokondri ve çekirdekleri görselleştirmek için Çoklu sinyaller insan cilt biyopsileri içinde eşzamanlı etiketleme için sağlar. 96-şey plaka immünhistokimya yordamdaki adımları düzenlemek için kullanışlı bir yol var. Şekil 1 bu kadar çözümler 12 aşamalarında işlen...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers at JoVE.com

Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

Bu iletişim kuralı görselleştirmek ve sinir özgü mitokondri ölçmek için üç boyutlu (3D) görüntüleme ve çözümleme teknikleri kullanır. Teknikleri bir floresan sinyal başka bir floresan sinyalinden gelen verilerin bir alt kümesini yalıtmak için kullanıldığı diğer durumlar için geçerlidir.

Üç boyutlu görüntüleme ve mitokondri içinde insan Intraepidermal sinir lifleri analizi

The goal of this protocol is to study mitochondria within intraepidermal nerve fibers. Therefore, 3D imaging and analysis techniques were developed to ...

three-dimensional-imaging-analysis-mitochondria-within-human

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.2K Görüntüleme.  University of Michigan Medical School. Bu iletişim kuralı görselleştirmek ve sinir özgü mitokondri ölçmek için üç boyutlu (3D) görüntüleme ve çözümleme teknikleri kullanır. Teknikleri bir floresan sinyal başka bir floresan sinyalinden gelen verilerin bir alt kümesini yalıtmak için kullanıldığı diğer durumlar için geçerlidir.

Video: Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

Three-dimensional Imaging of Nociceptive Intraepidermal Nerve Fibers in Human Skin Biopsies

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. At present, it is common practice to collect 3 mm skin biopsies from the distal leg (DL) and the proximal thigh (PT) for the evaluation of length-dependent polyneuropathies 3. However, due to the multidirectional nature of IENFs, it is challenging to examine overlapping nerve structures through the analysis of two-dimensional (2D) imaging. Alternatively, three-dimensional (3D) imaging could provide a better solution for this dilemma.
In the current report, we present methods for applying 3D imaging to study painful neuropathy (PN). In order to identify IENFs, skin samples are processed for immunofluorescent analysis of protein gene product 9.5 (PGP), a pan neuronal marker. At present, it is standard practice to diagnose small fiber neuropathies using IENFD determined by PGP immunohistochemistry using brightfield microscopy 4. In the current study, we applied double immunofluorescent analysis to identify total IENFD, using PGP, and nociceptive IENF, through the use of antibodies that recognize tropomyosin-receptor-kinase A (Trk A), the high affinity receptor for nerve growth factor 5. The advantages of co-staining IENF with PGP and Trk A antibodies benefits the study of PN by clearly staining PGP-positive, nociceptive fibers. These fluorescent signals can be quantified to determine nociceptive IENFD and morphological changes of IENF associated with PN. The fluorescent images are acquired by confocal microscopy and processed for 3D analysis. 3D-imaging provides rotational abilities to further analyze morphological changes associated with PN. Taken together, fluorescent co-staining, confocal imaging, and 3D analysis clearly benefit the study of PN.

In order to study the changes of nociceptive intraepidermal nerve fibers (IENFs) in painful neuropathies (PN), we developed protocols that could directly examine three-dimensional morphological changes observed in nociceptive IENFs. Three-dimensional analysis of IENFs has the potential to evaluate the morphological changes of IENF in PN.

İnsan Cilt Biyopsiler içinde Nosiseptif İntraepidermal Sinir Elyaf üç boyutlu görüntüleme

A punch biopsy of the skin is commonly used to quantify intraepidermal nerve fiber densities (IENFD) for the diagnosis of peripheral polyneuropathy 1,2. ...

Tıp

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their close-to-surface positioning facilitates microscopic imaging of skin nerve endings in living intact animal. Using multiphoton microscopy, it is possible to obtain fine images overcoming the problem of strong light scattering of the skin tissue. Reporter transgenic mice that express EYFP under the control of Thy-1 promoter in neurons (including periphery sensory neurons) are well suited for the longitudinal studies of individual nerve endings over extended periods of time up to several months or even life-long. Furthermore, using the same femtosecond laser as for the imaging, it is possible to produce highly selective lesions of nerve fibers for the studies of the nerve fiber restructuring. Here, we present a simple and reliable protocol for longitudinal multiphoton in vivo imaging and laser-based microsurgery on mouse skin nerve endings.

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

The protocol for dynamic longitudinal imaging and selective laser lesion of nerve endings in reporter transgenic mice is presented.&#160;

Cilt Tek Sinir Endings Vivo İki-Foton Mikrokopisi

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Nörobilim

Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Cristae'yi Görselleştirmek için 3D Teknik

A Three-Dimensional Technique for the Visualization of Mitochondrial Ultrastructural Changes in Pancreatic Cancer Cells

Understanding the dynamic features of the cell organelle ultrastructure, which is not only rich in unknown information but also sophisticated from a three-dimensional (3D) perspective, is critical for mechanistic studies. Electron microscopy (EM) offers good imaging depth and allows for the reconstruction of high-resolution image stacks to investigate the ultrastructural morphology of cellular organelles even at the nanometer scale; therefore, 3D reconstruction is gaining importance due to its incomparable advantages. Scanning electron microscopy (SEM) provides a high-throughput image acquisition technology that allows for reconstructing large structures in 3D from the same region of interest in consecutive slices. Therefore, the application of SEM in large-scale 3D reconstruction to restore the true 3D ultrastructure of organelles is becoming increasingly common. In this protocol, we suggest a combination of serial ultrathin section and 3D reconstruction techniques to study mitochondrial cristae in pancreatic cancer cells. The details of how these techniques are performed are described in this protocol in a step-by-step manner, including the osmium-thiocarbohydrazide-osmium (OTO) method, the serial ultrathin section imaging, and the visualization display.

Yazar Spotlight: Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Ultrastrüktürel Değişikliklerin Görselleştirilmesi için Üç Boyutlu Bir Teknik  

This protocol describes how to reconstruct mitochondrial cristae to achieve 3D imaging with high accuracy, high resolution, and high throughput.

Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Ultrastrüktürel Değişikliklerin Görselleştirilmesi için Üç Boyutlu Bir Teknik

Understanding the dynamic features of the cell organelle ultrastructure, which is not only rich in unknown information but also sophisticated from a ...

Kanser Araştırmaları

Visualization of Endosome Dynamics in Living Nerve Terminals with Four-dimensional Fluorescence Imaging

Four-dimensional (4D) light imaging has been used to study behavior of small structures within motor nerve terminals of the thin transversus abdominis muscle of the garter snake. Raw data comprises time-lapse sequences of 3D z-stacks. Each stack contains 4-20 images acquired with epifluorescence optics at focal planes separated by 400-1,500 nm. Steps in the acquisition of image stacks, such as adjustment of focus, switching of excitation wavelengths, and operation of the digital camera, are automated as much as possible to maximize image rate and minimize tissue damage from light exposure. After acquisition, a set of image stacks is deconvolved to improve spatial resolution, converted to the desired 3D format, and used to create a 4D "movie" that is suitable for variety of computer-based analyses, depending upon the experimental data sought. One application is study of the dynamic behavior of two classes of endosomes found in nerve terminals-macroendosomes (MEs) and acidic endosomes (AEs)-whose sizes (200-800 nm for both types) are at or near the diffraction limit. Access to 3D information at each time point provides several advantages over conventional time-lapse imaging. In particular, size and velocity of movement of structures can be quantified over time without loss of sharp focus. Examples of data from 4D imaging reveal that MEs approach the plasma membrane and disappear, suggesting that they are exocytosed rather than simply moving vertically away from a single plane of focus. Also revealed is putative fusion of MEs and AEs, by visualization of overlap between the two dye-containing structures as viewed in each three orthogonal projections.

Four-dimensional (4D) imaging is utilized to study the behavior and interactions among two types of endosomes in living vertebrate nerve terminals. Movement of these small structures is characterized in three dimensions, permitting confirmation of events such as endosome fusion and exocytosis.

Dört boyutlu Floresans Görüntüleme ile Sinir Terminalleri Yaşayan endozom Dinamiği Görselleştirme

Four-dimensional (4D) light imaging has been used to study behavior of small structures within motor nerve terminals of the thin transversus abdominis ...

Analysis of Brain Mitochondria Using Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy

Human brain is a high energy consuming organ that mainly relies on glucose as a fuel source. Glucose is catabolized by brain mitochondria via glycolysis, tri-carboxylic acid (TCA) cycle and oxidative phosphorylation (OXPHOS) pathways to produce cellular energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Impairment of mitochondrial ATP production causes mitochondrial disorders, which present clinically with prominent neurological and myopathic symptoms. Mitochondrial defects are also present in neurodevelopmental disorders (e.g. autism spectrum disorder) and neurodegenerative disorders (e.g. amyotrophic lateral sclerosis, Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases). Thus, there is an increased interest in the field for performing 3D analysis of mitochondrial morphology, structure and distribution under both healthy and disease states. The brain mitochondrial morphology is extremely diverse, with some mitochondria especially those in the synaptic region being in the range of &#60;200 nm diameter, which is below the resolution limit of traditional light microscopy. Expressing a mitochondrially-targeted green fluorescent protein (GFP) in the brain significantly enhances the organellar detection by confocal microscopy. However, it does not overcome the constraints on the sensitivity of detection of relatively small sized mitochondria without oversaturating the images of large sized mitochondria. While serial transmission electron microscopy has been successfully used to characterize mitochondria at the neuronal synapse, this technique is extremely time-consuming especially when comparing multiple samples. The serial block-face scanning electron microscopy (SBFSEM) technique involves an automated process of sectioning, imaging blocks of tissue and data acquisition. Here, we provide a protocol to perform SBFSEM of a defined region from rodent brain to rapidly reconstruct and visualize mitochondrial morphology. This technique could also be used to provide accurate information on mitochondrial number, volume, size and distribution in a defined brain region. Since the obtained image resolution is high (typically under 10 nm) any gross mitochondrial morphological defects may also be detected.

Mitochondrial visualization and analysis from mammalian brain tissue is a challenging task. Here, we describe how three dimensional (3D) reconstruction analysis from the serial block-face scanning electron microscopy (SBFSEM) can be used to gain insights on the morphological and volumetric analysis of this critical energy generating organelle.

Seri Blok-Yüz Taramalı Elektron Mikroskop Kullanarak Beyin Mitokondri Analizi

Human brain is a high energy consuming organ that mainly relies on glucose as a fuel source. Glucose is catabolized by brain mitochondria via glycolysis, ...

Analyzing Mitochondrial Transport and Morphology in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neurons in Hereditary Spastic Paraplegia

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human neurons, which may contribute to neurodegeneration in various disease states. Although it is challenging to examine mitochondrial dynamics in live human nerves, such paradigms are critical for studying the role of mitochondria in neurodegeneration. Described here is a protocol for analyzing mitochondrial transport and mitochondrial morphology in forebrain neuron axons derived from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). The iPSCs are differentiated into telencephalic glutamatergic neurons using well-established methods. Mitochondria of the neurons are stained with MitoTracker CMXRos, and mitochondrial movement within the axons are captured using a live-cell imaging microscope equipped with an incubator for cell culture. Time-lapse images are analyzed using software with &#34;MultiKymograph&#34;, &#34;Bioformat importer&#34;, and &#34;Macros&#34; plugins. Kymographs of mitochondrial transport are generated, and average mitochondrial velocity in the anterograde and retrograde directions is read from the kymograph. Regarding mitochondrial morphology analysis, mitochondrial length, area, and aspect ratio are obtained using the ImageJ. In summary, this protocol allows characterization of mitochondrial trafficking along axons and analysis of their morphology to facilitate studies of neurodegenerative diseases.

Impaired mitochondrial transport and morphology are involved in various neurodegenerative diseases. The presented protocol uses induced pluripotent stem cell-derived forebrain neurons to assess mitochondrial transport and morphology in hereditary spastic paraplegia. This protocol allows characterization of mitochondrial trafficking along axons and analysis of their morphology, which will facilitate the study of neurodegenerative disease.

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

Neurons have intense demands for high energy in order to support their functions. Impaired mitochondrial transport along axons has been observed in human ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study of this movement in situ was only possible using radioisotopic pulse-labeling, which permits analysis of axonal transport in whole nerves with a temporal resolution of days and a spatial resolution of millimeters. To study neurofilament transport in situ with higher temporal and spatial resolution, we developed a hThy1-paGFP-NFM transgenic mouse that expresses neurofilament protein M tagged with photoactivatable GFP in neurons. Here we describe fluorescence photoactivation pulse-escape and pulse-spread methods to analyze neurofilament transport in single myelinated axons of tibial nerves from these mice ex vivo. Isolated nerve segments are maintained on the microscope stage by perfusion with oxygenated saline and imaged by spinning disk confocal fluorescence microscopy. Violet light is used to activate the fluorescence in a short axonal window. The fluorescence in the activated and flanking regions is analyzed over time, permitting the study of neurofilament transport with temporal and spatial resolution on the order of minutes&#160;and microns, respectively. Mathematical modeling can be used to extract kinetic parameters of neurofilament transport including the velocity, directional bias and pausing behavior from the resulting data. The pulse-escape and pulse-spread methods can also be adapted to visualize neurofilament transport in other nerves. With the development of additional transgenic mice, these methods could also be used to image and analyze the axonal transport of other cytoskeletal and cytosolic proteins in axons.

We describe fluorescence photoactivation methods to analyze the axonal transport of neurofilaments in single myelinated axons of peripheral nerves from transgenic mice that express a photoactivatable neurofilament protein.

Excised Mouse Tibial Nerve Nörofilament Transport Görüntüleme ve Analizi

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...

Expanding the Toolkit for In Vivo Imaging of Axonal Transport

Axonal transport maintains neuronal homeostasis by enabling the bidirectional trafficking of diverse organelles and cargoes. Disruptions in axonal transport have devastating consequences for individual neurons and their networks, and contribute to a plethora of neurological disorders. As many of these conditions involve both cell autonomous and non-autonomous mechanisms, and often display a spectrum of pathology across neuronal subtypes, methods to accurately identify and analyze neuronal subsets are imperative.
This paper details protocols to assess in vivo axonal transport of signaling endosomes and mitochondria in sciatic nerves of anesthetized mice. Stepwise instructions are provided to 1) distinguish motor from sensory neurons in vivo, in situ, and ex vivo by using mice that selectively express fluorescent proteins within cholinergic motor neurons; and 2) separately or concurrently assess in vivo axonal transport of signaling endosomes and mitochondria. These complementary intravital approaches facilitate the simultaneous imaging of different cargoes in distinct peripheral nerve axons to quantitatively monitor axonal transport in health and disease.

Expanding the Toolkit for In Vivo Imaging of Axonal Transport

Using transgenic fluorescent mice, detailed protocols are described to assess in vivo axonal transport of signaling endosomes and mitochondria within motor and sensory axons of the intact sciatic nerve in live animals.

Üç boyutlu görüntüleme ve mitokondri içinde insan Intraepidermal sinir lifleri analizi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

İnsan Cilt Biyopsiler içinde Nosiseptif İntraepidermal Sinir Elyaf üç boyutlu görüntüleme

Cilt Tek Sinir Endings Vivo İki-Foton Mikrokopisi

Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Ultrastrüktürel Değişikliklerin Görselleştirilmesi için Üç Boyutlu Bir Teknik

Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Ultrastrüktürel Değişikliklerin Görselleştirilmesi için Üç Boyutlu Bir Teknik

Pankreas Kanseri Hücrelerinde Mitokondriyal Ultrastrüktürel Değişikliklerin Görselleştirilmesi için Üç Boyutlu Bir Teknik

Dört boyutlu Floresans Görüntüleme ile Sinir Terminalleri Yaşayan endozom Dinamiği Görselleştirme

Seri Blok-Yüz Taramalı Elektron Mikroskop Kullanarak Beyin Mitokondri Analizi

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

Excised Mouse Tibial Nerve Nörofilament Transport Görüntüleme ve Analizi

Aksonal Taşımacılığın In Vivo Görüntülemesi için Araç Kitinin Genişletilmesi