We would like to acknowledge Beth Levine for critically reviewing the manuscript, Valerie Tassinari for developing the genotyping protocol, and Matt Ferola and Carlos Maya for their exceptional animal care.

Tüm deneyler Hayvanların Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından açıklanan protokollere uygun olarak yürütülmektedir ve ALS TDI kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Hayvanlar, Konut ve Araştırma Tasarımı Not:. SOD1-G93A fare koloni başlangıçta Gumey ve diğerleri 7 tarafından üretilen yüksek kopya B6SJLTgN (SOD1G93A) 1Gur suşundan elde edilmiştir. Koloni şu anda vahşi tip C57BL / 6-SJL F1 dişilerle transgenik C57BL / 6-SJL erkek kapısı tarafından muhafaza ediliyor. F1 hayvanlar B6 dişilerle SJL erkek geçerek üretilir. Fareler yaş 35-45 günde ALS TDI haftalık sevk edilir. <ol><li> Farenin en az bir hafta bir çalışmaya vermeden önce (18-23 ° C ve% 40-60 nem arasındaki bir sıcaklıkta 12 saat ışık / karanlık döngüsü) hayvan tesisine alıştırıldı izin verir. </li><li> Ev erkek SOD1-G93A mikrofongrup erkek savaşmak eğilimi ev sahipliği beri kafes başına e bir fare. Kafes başına iki adede kadar Evi dişi SOD1-G93A fareler. Plastik kulübe şeklinde çevresel zenginleştirme sağlar. Fareler su / gıda, içme ilaç yönetimini gerektiren bir çalışmanın parçası olmadıkça, yiyecek ve su ad libitum sağlayın. Bu gibi durumlarda, oranı ve kayıt gıda ve su. </li><li> Yaş gününde 50 civarında bir ilaç etkinlik çalışmaya başlamak ve 64 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli fareler (kohort başına 32) içerir. Son olarak, çalışmalar yürüten araştırmacılar deneysel koşullara kör olduğundan emin olun. Not: Bu tipik bir ilaç etkinlik çalışması ancak önce ya da sonra çalışmaya başlamak için tercih olabilir terapötik müdahale türüne göre yaş gününde 50 başlar önerilir. Not: kohort başına 32 fare cinsiyete özgü ilaç etkilerini tespit etmek güç olan bir çalışma. Cinsiyete özgü karşılaştırmalar gerekiyorsa, kohort başına 24 fare, genel ilaç etkisini tespit etmek için yeterli olacaktır.</li></ol> 2. Vücut Ağırlığı <ol><li> Günlük gram onda biri bir hassasiyetle çalışmalarda tüm fareler için rekor vücut ağırlıkları. Not: Vücut ağırlığı hastalığın ilerlemesi ve kronik ilaç tedavisinin doğabilecek halsizlik hassas bir göstergesidir. </li><li> Fare vücut ağırlıkları dolayısıyla, sabahları daha yüksek olması, bir gün süresince önemli ölçüde değişebilir, her gün aynı zamanda etrafında onları kaydedin. </li></ol> 3. Nörolojik Puanlama Sistemi (NeuroScore) <ol><li> Günlük olarak, aşağıdaki üç koşullar altında fare gözlemleyerek her bir fare için değerlendirilmesi nörolojik puanları (NS) bir sekans dahilinde gerçekleştirilebilir: b) fare) yürümeye bırakıldı ve parezi c başlamasından sonra a), fare kuyruk tarafından askıya Fare yan yerleştirilir. <ol><li> Kuyruk süspansiyon testi için, gıda havzası uzak, 1-2 sn evlerine kafes tel üstünden kuyruk tabanından fareyi yaklaşık 1.5 &quot;tutun atıl ikenarka ayaklarında Erving. Süspansiyon testi 3 kez tekrarlayın ve en tutarlı sonucu kaydedin. </li><li> Yürüme testi, bazı çekiş ve 25 cm yürüme mesafesi sağlayan temiz bir yüzeye üzerinde fare koyun (örn., Bir kağıt havlu kaymasını önlemek için aşağı bantlanmış). Onun yürüyüşü izlerken fare 75 cm toplam (kağıt havlu 3X uzunluğu) yürümek için izin verin. </li><li> &quot;Doğrulma refleksi&quot; test için sol veya sağ tarafına fare koyun ve bir kronometreler her iki taraftan yardımsız kendini yukarı sağa süresini ölçmek kullanarak. Not: Bu testin sadece bir deneme gereklidir. </li></ol></li><li> 0&#39;dan 4. Not bağımsız bir ölçekte (sol veya sağ) Her hindlimb of NS belirleyin: Sağ hindlimb NS 1 iken Örneğin 0 puan, 1, sol hindlimb NS 0 olduğunu gösterir. </li><li> (Tablo 1&#39;de verilmiştir özet) gözlem aşağıdaki kümesine karşılık gelen nörolojik puanları (0-4) atayın:<ol><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 0 (Ön-semptomatik) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb normal yayvan yani sunar, tam uzakta yanal orta hatta uzanan ve 2 saniye bu pozisyonda kalır veya uzun. Fare yürümeye izin, normal yürüyüş görülmektedir. </li><li> Fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb anormal yayvan, yani sunar, bu çökmüş veya kısmen yanal orta hatta doğru çöktü YA o kuyruk süspansiyon sırasında titreyen VEYA o geri çekilir edilir: gözlenmektedir aşağıdaki eğer NS 1 (İlk semptomlar) atama / sıktı. Fare yürümeye izin verildiğinde normal VEYA biraz yavaş yürüme görülmektedir. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 2 (parezi başlangıcı) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb çok uzanan değil, kısmen ya da tamamen yıkılmış olduğunu. (Hala ortak hareket olabilir). Fare yürümeye izin verildiğinde, hindlimb ileri mot için kullanılıriyon ancak ayak 90 cm yürüyüş sırasında en az iki kez aşağı doğru kıvrılıp VEYA ayak herhangi bir parçası kafes alt / masa boyunca sürükleyerek. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 3 (Felç) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, hindlimb VEYA minimal eklem hareket içinde sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde öne Ancak hindlimb ileri hareket için kullanılan DEĞİLDİR hareket vardır. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş olduğunda, İKİ taraftan 10 saniye içinde kendini sağa yapabiliyor. Not: Nadiren, felç başlangıcından sonra, idrar nem arka ayaklarında görünebilir. Tedavi edilmeyen idrar nem idrar &quot;yanık&quot; ve deri lezyonları neden olabilir. Saç kırpma yoluyla idrar nem davranın, ılık su idrar çıkarmak ıslatırken uygulamak ve yavaşça kuru kurulayın. Cilt lezyonları varsa Antibiyotik uygulanırtic merhem. </li><li> Aşağıdaki gözlenmesi halinde NS 4 (İnsanca son nokta) atayın: fare kuyruğu tarafından askıya alındığında, arka ayaklarında sert felç var. Fare yürümeye izin verildiğinde, hiçbir ileri hareket yoktur. Fare sol VE sağ tarafına yerleştirilmiş edildiğinde, YA taraftan 10 saniye içinde kendini sağa mümkün değildir. Yani, refleksi yokluğu. </li></ol></li></ol> 4. Veri Girişi ve Analizi <ol><li> Bir ilaç etkinlik çalışması sırasında, bir Laboratuar Bilgi Yönetim Sistemi (LIMS) her bir fare için veya ticari olarak satılan elektronik tablo yazılımı içine toplanan verileri girin. Not: ALS TDI geliştirilen LIMS yazılım dahili çalışmalardan toplanan tüm veriler için merkezi bir depo, ALS TDI müfettişler için zamanla bu veriler elverişli erişilebilir hale getirmek. LIMS, tüm çalışma günlerinde geri soyu, vücut ağırlığı veya nörolojik skoru, eşsiz kimliği ile, herhangi bir bireysel fare izlerve ömrü boyunca kaydetti başka gözlemleriniz içerir. LIMS sonuçta daha sonraki analizler için kullanılan bir elektronik tablo oluşturur. </li><li> Bir ilaç etkinlik çalışmasında, yani tüm fareler insancıl uç noktasına ulaştığında, kullanım tablosu programı (Malzeme Tabloya bakınız) Sol ve sağ hindlimb NS ortalamasını alarak her gün için, her bir fare için kombine NS hesaplamak tamamlanmasının ardından . Sonra, her fare ve her bir fare, belirli bir NS geçirdiği gün sayısı her NS ortanca yaşı hesaplamak. </li><li> İstatistiksel yazılımı elektronik tablo yazılımı veri alma yoluyla zaman içinde NS genel değişimleri analiz (Malzeme Tablo). Regresyon etkileri gibi medyan NS yaşı ve uyuşturucu tedavi ile, beklenen NS tahmin sıralı lojistik regresyon modeli kullanılarak bu verileri takınız. Log-rank ki-kare testi kullanılarak etkisi olabilirlik olasılığını tahmin ve NS ilerlemesi üzerine uyuşturucu tedavi etkisi istatistiksel olup olmadığını belirlemekly anlamlı (adım-adım talimatlar için İletişim Kod Dosyası bakınız). Not: Bir p-değeri &lt;0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmektedir. Not: İstatistiksel analiz yöntemi NS veri ve bireysel fareler için NS yörüngeleri değişken doğası sıralı doğasını saygılıdır. Bireysel NS yörüngeleri yeterli NS tepkilerin yansıtıcı olmayan NS zaman ilişkili grup ortalamaları sonuçlanan belirgin farklı olabilir, çünkü tercih edilir. Buna ek olarak, bazı durumlarda, NS özellikle sıfır-bir aralığında değişebilir. </li><li> Son olarak, kullanım grafik yazılımı ilaç ile tedavi edilen ve kontrol hayvanları için grafikler &quot;Ordinal NS Medyan Yaş vs NS Beklenen&quot; oluşturmak için (Malzeme Tabloya bakınız) (Şekil 2; Yan Kod adım adım talimatlar için Dosya bakınız). Uygun y-ekseninden hastalığın başlangıcından (i ortalama yaşı enterpolasyonlayarak ilaç ile tedavi edilen ve kontrol grupları arasında vardiya tahmin etmek bu grafikleri kullanabilirsiniz.e., x-ekseninde NS 2). Not: İki grup arasında ortalama yaş farkı ilaca bağlı değişimi temsil ve etkinin büyüklüğü pratik bir önlem olarak kabul edilir. Not: Semptomatik hastalığın ilerlemesini yavaşlattı göstermektedir beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sağa kaymalar. Tersine, beklenen NS vs ortanca yaş eğrisi sola kaymalar semptomatik hastalığın ilerlemesini hızlandırılmış göstermektedir. </li></ol>

<ol>
	<li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu,Zn+superoxide+dismutase+mutation.">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li><li>Rosen, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+Cu/Zn+superoxide+dismutase+gene+are+associated+with+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Nature. 362 (6415), 59-62 (1993).</li><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+transgenic+mouse+models+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+in+preclinical+drug+studies.">The use of transgenic mouse models of amyotrophic lateral sclerosis in preclinical drug studies.</a> J Neurol Sci. 152, Suppl. 1 (6415), (1997).</li><li>Scott, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design,+power,+and+interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS.">Design, power, and interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li><li>Hegedus, J., Putman, C. T., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+preferential+motor+unit+loss+in+the+SOD1+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Time course of preferential motor unit loss in the SOD1 G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurobiol. Dis. 28 (2), 154-164 (2007).</li><li>Gordon, T., Ly, V., Hegedus, J., Tyreman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+of+denervated+muscle+fibers+in+hindlimb+muscles+after+sciatic+nerve+transection+in+wild+type+mice+and+in+the+G93A+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Early detection of denervated muscle fibers in hindlimb muscles after sciatic nerve transection in wild type mice and in the G93A mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Neurol. Res. 31 (1), 28-42 (2009).</li><li>Gurney, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu,Zn+superoxide+dismutase+mutation.">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li><li>Kim, K., Moore, D. H., Makriyannis, A., Abood, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AM1241,+a+cannabinoid+CB2+receptor+selective+compound,+delays+disease+progression+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis.">AM1241, a cannabinoid CB2 receptor selective compound, delays disease progression in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur. J. Pharmacol. 542 (1-3), 1-3 (2006).</li><li>Weydt, P., Hong, S. Y., Kliot, M., Moller, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS.">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li><li>Azari, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+and+anatomical+effects+of+systemically+administered+leukemia+inhibitory+factor+in+the+SOD1(G93A+G1H)+mouse+model+of+familial+amyotrophic+lateral+sclerosis.">Behavioural and anatomical effects of systemically administered leukemia inhibitory factor in the SOD1(G93A G1H) mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain Res. 982 (1), 92-97 (2003).</li><li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thiazolidinediones+expand+body+fluid+volume+through+PPARgamma+stimulation+of+ENaC-mediated+renal+salt+absorption.">Thiazolidinediones expand body fluid volume through PPARgamma stimulation of ENaC-mediated renal salt absorption.</a> Nat. Med. 11 (8), 861-866 (2005).</li><li>Savcheniuk, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+probiotic+therapy+on+development+of+experimental+obesity+in+rats+caused+by+monosodium+glutamate.">The effect of probiotic therapy on development of experimental obesity in rats caused by monosodium glutamate.</a> Fiziol. Zh. 60 (2), 63-69 (2014).</li><li>Smittkamp, S. E., Brown, J. W., Stanford, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+and+characterization+of+orolingual+motor+deficits+in+B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J+mice.">Time-course and characterization of orolingual motor deficits in B6SJL-Tg(SOD1-G93A)1Gur/J mice.</a> Neuroscience. 151 (2), 613-621 (2008).</li><li>C, M., Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+low+expressor+line+of+transgenic+mice+carrying+a+mutant+human+Cu,Zn+superoxide+dismutase+(SOD1)+gene+develops+pathological+changes+that+most+closely+resemble+those+in+human+amyotrophic+lateral+sclerosis.">A low expressor line of transgenic mice carrying a mutant human Cu,Zn superoxide dismutase (SOD1) gene develops pathological changes that most closely resemble those in human amyotrophic lateral sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 93 (6), 537-550 (1997).</li><li>Wegorzewska, I., Baloh, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDP-43-based+animal+models+of+neurodegeneration:+new+insights+into+ALS+pathology+and+pathophysiology.">TDP-43-based animal models of neurodegeneration: new insights into ALS pathology and pathophysiology.</a> Neurodegener. Dis. 8 (4), 262-274 (2011).</li><li>Hatzipetros, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C57BL/6J+congenic+Prp-TDP43A315T+mice+develop+progressive+neurodegeneration+in+the+myenteric+plexus+of+the+colon+without+exhibiting+key+features+of+ALS.">C57BL/6J congenic Prp-TDP43A315T mice develop progressive neurodegeneration in the myenteric plexus of the colon without exhibiting key features of ALS.</a> Brain Res. 1584, 59-72 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu yazıda, doğru uygulandığı takdirde, güvenilir SOD1-G93A farelerde hastalığın ilerlemesini değerlendirmek ve ilaca bağlı değişikliklerin belirlenmesi yeteneğine sahip, hızlı ve basit bir video protokol açıklar. Farklı gruplar SOD1-G93A farelerin 8-10 için fenotipik skorlama sistemleri geliştirdiler ederken, sık sık prosedürü hakkında yeterli bilgi sağlamak ve replikasyon için yetersiz kalmaktadır yok. Sonuç olarak, skorlama sistemleri nadiren onları geliştiren belirli bir gr...

1990&#39;ların ortalarında, kalkınma SOD1-G93A transgenik fare modeli Amyotrofik lateral skleroz (ALS) 1 en yaygın olarak kullanılan hayvan modeli olmuştur beri. Bu transjenik fare modeli, genetik olarak amino asit 93 (G93A) alanin mutasyona ALS ilişkili glisin barındıran insan Cu / Zn süperoksit dismutaz 1 (SOD1) geni, bir mutant formu aşın ifade etmek üzere geliştirilmiş. G93A mutasyonu topluca makyaj ailesel ALS vakalarının 2 yaklaşık beşte biri SOD1 genindeki mutasyonlar biridir. SOD1-G93A modeli, bu nihai birlikte, bu tür motor nöron kaybı, ilerleyici kas güçsüzlüğü ve atrofi gibi insanlarda ALS patolojik özellikleri birçok özetlediği çünkü ALS onun bariz genetik bağlantıya ek olarak ALS ilaç geliştirme araştırma beygir haline gelmiştir felç ve ölüm 3. Genellikle transjenik hayvan modellerinde olduğu gibi olsa da, doğal bir iki oradaSOD1-G93A fareler ile bağlantılı rahatsızlık derecesinde değişkenliğin. Scott ve ark. En az 24 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli farelerin Kusaklara 4 biyolojik değişkenlik yarattığı gürültüyü aşmak için uyuşturucu etkinlik çalışması tasarımlarda gerekli olduğunu tespit ettik. Agresif hastalığın ilerlemesi ve günlük izleme ihtiyacı ile birlikte bu çalışmalarda gerekli hayvanların çok sayıda nöromusküler gücünü ve işlevini ölçmek için mükellef, zaman alıcı ve potansiyel stresli tekniklerin kullanılmasını yasaklayan (örneğin, elektromiyografi, kavrama kuvveti, rotorod , vs.). Bunun yerine, güvenilir hızlı bir şekilde SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonunu değerlendirir in vivo tarama aracı ihtiyacını vurgulamaktadır. ALS TDI bir protokol ortalama fare başına en az 30 sn SOD1-G93A farelerin kas fonksiyonlarının değerlendirilmesi güvenilir sağlar geliştirildi. Bu protokol, encompabasında ve video Bu raporda açıklanan basit bir nörolojik skorlama sistemi (NeuroScore) kullanarak hindlimb fonksiyonun günlük değerlendirmesini de kapsar. Hindlimb açıkları erken SOD1-G93A farelerin 5,6 hastalığın nörolojik belirtisi bildirdi çünkü NeuroScore hindlimb fonksiyonu odaklanmıştır. Dahası, ALS TDI tarafından geliştirilen protokol parezi (hafif veya kısmi felç), ilerlemesi ve felç şiddetinin başlangıç ​​tarafsız bir değerlendirme sağlar ve hastalığın ilerlemesinde ilaca bağlı değişiklikleri belirlemek için yeterli hassastır.

<table><tbody><tr><td>B6SJLTgN(SOD1G93A)1Gur strain</td><td>The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td><td>002726</td><td>Strain of mice used in this study</td></tr><tr><td>Breeders</td><td>Biomedical Research Models, Inc., Worcester, MA</td><td></td><td>Colony maintainance</td></tr><tr><td>Scale</td><td>Navigator OHAUS, Parsippany, NJ</td><td>Model N14120</td><td>Used to weigh mice</td></tr><tr><td>Nutra-GelH</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>#S4798</td><td>Wet food provided to sick mice</td></tr><tr><td>Irradiated Lab Animal Diet</td><td>Harlan, Indianapolis, IN</td><td>2918-111914M</td><td>Chow diet</td></tr><tr><td>Lab-grade Sani-chips</td><td>Harlan Teklad, Indianapolis, IN</td><td>7090</td><td>Bedding</td></tr><tr><td>JMPH&amp;nbsp;</td><td>SAS Institute, Inc., SAS Campus Drive, Cary, NC</td><td>&amp;nbsp;v10.0.2</td><td>Statistical software</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft, One Microsoft Way, Redmond, WA</td><td>Excel 2013 (v 15.0)</td><td>Spreadsheet software</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 5</td><td>GraphPad software Inc., La Jolla, CA</td><td>v5.4</td><td>Graphing software</td></tr><tr><td>Mouse Huts</td><td>Bio-Serv, Flemington, NJ</td><td>K3272</td><td>For environmental enrichment</td></tr></tbody></table>

a quick phenotypic neurological scoring system for evaluating disease progression in the sod1-g93a mouse model of als

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening protocol, demonstrated in video herein, which reliably assesses the neuromuscular function of SOD1-G93A mice in a quick manner. This protocol encompasses a simple neurological scoring system (NeuroScore) designed to assess hindlimb function. NeuroScore is focused on hindlimb function because hindlimb deficits are the earliest reported neurological sign of disease in SOD1-G93A mice. The protocol developed by ALS TDI provides an unbiased assessment of onset of paresis (slight or partial paralysis), progression and severity of paralysis and it is sensitive enough to identify drug-induced changes in disease progression. In this report, the combination of a detailed manuscript with video minimizes scoring ambiguities and inter-experimenter variability thus allowing for the protocol to be adopted by other laboratories and enabling comparisons between studies taking place at different settings. We believe that this video protocol can serve as an excellent training tool for present and future ALS researchers.

2014 değerlendirildi sırasında 90 erkek ve 94 dişi olmayan tedavi SOD1-G93A fareler için nörolojik puanı verileri ALS TDI okudu. Sonuçlar kadınlara oranla NS 1 de yaşamlarının büyük bir oranda kanıtladığı gibi erkek fareler genellikle, dişi farelere göre daha agresif bir hastalık ilerlemesini sahip olduğunu göstermektedir. NS 2 ve NS 3 cinsiyetler arasında neredeyse eşit sıklıkta görülür. O &quot;normal&quot; bir fenotip olarak kabul edilir, çünkü NS 0 analize dahil edilmiştir. NS 4 de ...

Watch this Scientific Journal Video about A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS at JoVE.com

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

This video protocol describes a sensitive, reliable, and quick method for evaluating the neuromuscular deficits in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

a-quick-phenotypic-neurological-scoring-system-for-evaluating-disease

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

19.4K Görüntüleme.  ALS Therapy Development Institute. This video protocol describes a sensitive, reliable, and quick method for evaluating the neuromuscular deficits in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.

Video: A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

A Simple Composite Phenotype Scoring System for Evaluating Mouse Models of Cerebellar Ataxia

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously published phenotype assessments in several disease models, including spinocerebellar ataxias, Huntington s disease and spinobulbar muscular atrophy. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. Each measure is recorded on a scale of 0-3, with a combined total of 0-12 for all four measures. The results effectively discriminate between affected and non-affected individuals, while also quantifying the temporal progression of neurodegenerative disease phenotypes. Measures may be analyzed individually or combined into a composite phenotype score for greater statistical power. The ideal combination of the four described measures will depend upon the disorder in question. We present an example of the protocol used to assess disease severity in a transgenic mouse model of spinocerebellar ataxia type 7 (SCA7).
Albert R. La Spada and Gwenn A. Garden contributed to this manuscript equally.

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebellar ataxia. Measures include hind limb clasping, ledge test, gait and kyphosis. This protocol effectively discriminates between affected and non-affected individuals, and detects the progression of affected individuals over time.

Serebellar Ataksi Fare Modelleri Değerlendirme Basit Kompozit Fenotip Puanlama Sistemi

We describe a protocol for the rapid and sensitive quantification of disease severity in mouse models of cerebella ataxia. It is derived from previously ...

Nörobilim

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 years for the sporadic disease and around 50 years for the familial disease. Due to its progressive course, 50% of the patients die within 30 months of symptom onset. In order to evaluate novel treatment options for this disease, genetic mouse models of ALS have been generated based on human familial mutations in the SOD gene, such as the SOD1 (G93A) mutation. Most important aspects that have to be evaluated in the model are overall survival, clinical course and motor function. Here, we demonstrate the clinical evaluation, show the conduction of two behavioural motor tests and provide quantitative scoring systems for all parameters. Because an in depth analysis of the ALS mouse model usually requires an immunohistochemical examination of the spinal cord, we demonstrate its preparation in detail applying the dorsal laminectomy method. Exemplary histological findings are demonstrated. The comprehensive application of the depicted examination methods in studies on the mouse model of ALS will enable the researcher to reliably test future therapeutic options which can provide a basis for later human clinical trials.

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

A mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is examined clinically and behaviorally. As a prerequisite for an accompanying immunohistological analysis the preparation of the spinal cord is depicted in detail.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Tıp

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating disease, with clinical features similar to the progressive forms of multiple sclerosis (MS). The mice show progressive disability with loss of motor and sensory functions, which can be assessed with multiple apparatuses and protocols. Among them, the Rotarod performance test is a very common behavioral test, its advantage being that it provides objective measurements, but it is often used assuming that it is straightforward and simple. In contrast to visual scoring systems used in some models of MS, which are highly subjective, the Rotarod test generates an objective, measurable, continuous variable (i.e., length of time), allowing almost perfect inter-rater concordances. However, inter-laboratory reliability is only achieved if the various testing parameters are replicated. In this manuscript, recommendations of specific testing parameters, such as size, speed, and acceleration of the rod; amount of training given to the animals; and data processing, are presented for the Rotarod test.

An optimized testing protocol is presented in this paper for the Rotarod performance test, used for measuring progressive neurological disability in TMEV-infected mice.

Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. The paradigm includes tests for spontaneous alternation in a Y-maze, novel object recognition, and limb clasping. These tests were selected because they: 1) interrogate function of cognitive or motor domains and the correlate neural circuitry relevant to the human disease state, 2) have clearly defined endpoints, 3) have easily implementable quality control checks, 4) can be run in a moderate throughput format, and 5) require little intervention by the investigator. These methods are designed for investigators looking to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks, or functional motor behaviors associated with Alzheimer's disease mouse models. The methods described here use behavioral tests that engage a number of different brain regions including hippocampus and various cortical areas. Investigators that desire cognitive tests that specifically assess cognition mediated by a single brain region could use these techniques to supplement other behavioral tests.

Described here is a staged, behavioral screening approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. These methods are optimized to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks.

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

Repeated Measurement of Respiratory Muscle Activity and Ventilation in Mouse Models of Neuromuscular Disease

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated measurements over weeks or months of accessory respiratory muscle activity while simultaneously measuring ventilation in a non-anesthetized, freely behaving mouse. The technique includes the surgical implantation of a radio transmitter and the insertion of electrode leads into the scalene and trapezius muscles to measure the electromyogram activity of these inspiratory muscles. Ventilation is measured by whole-body plethysmography, and animal movement is assessed by video and is synchronized with electromyogram activity. Measurements of muscle activity and ventilation in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis are presented to show how this tool can be used to investigate how respiratory muscle activity changes over time and to assess the impact of muscle activity on ventilation. The described methods can easily be adapted to measure the activity of other muscles or to assess accessory respiratory muscle activity in additional mouse models of disease or injury.

This paper introduces a method for repeated measurements of ventilation and respiratory muscle activity in a freely behaving amyotrophic lateral sclerosis (ALS) mouse model throughout disease progression with whole-body plethysmography and electromyography via an implanted telemetry device.

Nöromusküler Hastalığının Fare Modelinde Solunum Kas Aktivitesi ve Havalandırma tekrarlanan ölçüm

Accessory respiratory muscles help to maintain ventilation when diaphragm function is impaired. The following protocol describes a method for repeated ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of Compound Muscle Action Potential from the Forelimbs in Mouse Models of Motor Neuron Degeneration

Assessing the functionality of the nerve axon provides detailed information on the progression of neuromuscular disorders. Electrophysiological recordings provide a sensitive approach to measure nerve conduction in humans and rodent models. To broaden the technical possibilities for electromyography in mice, the measurement of compound muscle action potentials (CMAPs) from the brachial plexus nerve in the forelimb using needle electrodes is described here. CMAP recordings after stimulating the sciatic nerve in hindlimbs have been previously described. The newly introduced method here allows for the evaluation of the nerve conductivity at an additional site, and thus provides a more profound overview of the neuromuscular functionality. The technique provides information on both the relative number of functional axons and the myelination level. Thereby, this method can be applied to assess both axonal diseases as well as demyelinating conditions. This minimally invasive method does not require extraction of the nerve and therefore it is suitable for repeated measurements for longitudinal follow-up in the same animal. Similar recordings are performed in clinical setups to emphasize the translational relevance of the method.

In Vivo Electrophysiological Measurement of Compound Muscle Action Potential from the Forelimbs in Mouse Models of Motor Neuron Degeneration

The measurement of nerve conduction is a useful tool to assess mouse models of neurodegeneration but it is frequently only applied to stimulate the sciatic nerve in hindlimbs. Here, we describe a technique to measure compound muscle action potential (CMAP) in vivo in the mouse forelimb muscles innervated by the brachial plexus.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Assessing the functionality of the nerve axon provides detailed information on the progression of neuromuscular disorders. Electrophysiological recordings ...

EAE Hastalık Şiddetini Değerlendirmek için Omuriliğin Histolojik Boyanması

Scoring Central Nervous System Inflammation, Demyelination, and Axon Injury in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by active immunization with protein components of the myelin sheath and Complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) or by the transfer of myelin-specific T effector cells from rodents primed with myelin protein/CFA into na&#239;ve rodents. The severity of EAE is typically scored on a 5-point clinical scale that measures the degree of ascending paralysis, but this scale is not optimal for assessing the extent of recovery from EAE. For example, clinical scores remain high in some EAE models (e.g., myelin oligodendrocyte glycoprotein [MOG] peptide-induced model of EAE) despite the resolution of inflammation. Thus, it is important to complement clinical scoring with histological scoring of EAE, which also provides a means to study the underlying mechanisms of cellular injury in the central nervous system (CNS).
Here, a simple protocol is presented to prepare and stain spinal cord and brain sections from mice and to score inflammation, demyelination, and axonal injury in the spinal cord. The method for scoring leukocyte infiltration in the spinal cord can also be applied to score brain inflammation in EAE. A protocol for measuring soluble neurofilament light (sNF-L) in the serum of mice using a Small Molecule Assay (SIMOA) assay is also described, which provides&#160;feedback on the extent of overall CNS injury in live mice.

Yazar Spotlight: Multipl Sklerozda Obeziteyi Otoimmün İnflamasyona Bağlayan Yolun Açıklanması 

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) serves as an animal model of multiple sclerosis. This article describes an approach for scoring spinal cord inflammation, demyelination, and axonal injury in EAE. Additionally, a method to quantify soluble neurofilament light levels in the mice serum is presented, facilitating the assessment of axonal injury in live mice.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by ...

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Serebellar Ataksi Fare Modelleri Değerlendirme Basit Kompozit Fenotip Puanlama Sistemi

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Multipl Skleroz Fare Modeli Progressive Nörolojik Engellilik Ölçümü

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Nöromusküler Hastalığının Fare Modelinde Solunum Kas Aktivitesi ve Havalandırma tekrarlanan ölçüm

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması