Helmholtz Derneği Girişimi ve Ağ Fonu, Else Kroener-Fresenius Vakfı&#39;ndan hibe ve Deutsche Forschungsgemeinschaft bir hibe yoluyla Görüntüleme ve Kür Çevre Metabolik Hastalıklar, (- Bu çalışma Helmholtz İttifak ICEMED tarafından (kısmen) finanse edildi SFB 655: dokulara hücreler).

Iş Helsinski Deklarasyonu ve ARVO Hayvan Bildirimi yapışır. Dresden Üniversitesi Hayvan tesisin talimatlarına göre Hayvan doku toplanması için kullanıldı ve ilgili yöntem takip edildi. Hayvanlar ele ve ev sahipliği laboratuvar hayvanlarının kullanımı ve bakımı için Alman Federal kurallarına göre ve çalışma Landesdirektion Dresden tarafından onaylandı edildi. Uygun ötenazi yöntemi konusunda kurumunuzun veteriner politikası (IACUC veya diğer yönetim kurulu) danışın. Özel stok ve reaktiflerin çalışma konsantrasyonları bu protokolü eşlik Reaktif Tablolar bulunabilir. 1.. Kültür Bulaşık Hazırlık <ol><li> 75 ug yeterli bir hacmi ile Coat tabaklar / ml poli-L-ornitin (örneğin 2 ml / oyuk, 6 oyuklu plaka) bir karışımı, 2 gün önce, planlanan diseksiyon bugüne kadar hücre kültürü kuluçka makinesi içinde. </li><li&gt; Aspire poli-L-ornitin ertesi gün ve 5 dakika boyunca PBS içinde 3 ml 2 x de, her yıkayın. </li><li> Nihai yıkama çıkarın, daha sonra plaka fibronektinin (1:250 seyreltilmiş PBS&#39;de 4 ug / ml) ekleyin ve gece boyunca inkübatör bulaşıkları yerleştirin. </li><li> Diseksiyon gününde fibronektin aspire ve yemekleri PBS ile 2x yıkayın. Hala ayrışmış doku kültürü için hazır olana kadar nihai PBS inkübatör yıkayın içeren plakaları dönmek. O zaman, doku kaplama için PBS önce çıkarın. </li><li> Kadar 3 hafta için kuluçka poli-L-ornithinein ile kaplanmış plakalar deposu. Fibronektin ile kaplı plakalar kadar 1 hafta boyunca depolanabilir. Acil ise Fibronektin kaplama az 2 saat içinde yapılabilir. Fibronektin denatürasyona açıktır; çözüm ajitasyon ya da yemekleri kurumasını izin vermeyin. </li></ol> 2. Diseksiyon / Kaplama <ol><li> Bu protokol, 3 yetişkin farelerin (yaş 3-6 ay) kullanımı için geçerlidir. </li><li> Chill önce sıçan ötenazi için buz üzerinde blok kesit beyin. </li><li> Buz üzerine eklendi bFGF ile N2 ortam 5 ml ihtiva eden bir 15 ml Falcon tüpü yerleştirin. </li><li> Kurumunuzun veteriner politikasına göre fareler Euthanize. </li><li> Başın orta hat aşağı bir kesi yaparak kafatası beyin çıkarın. Dikkatli ekstre edilecek beyin için izin kemik soyulmaya forseps kullanın. </li><li> Soğuk PBS içeren bir 10 cm Petri kabı içine beyin yerleştirin. Bu herhangi bir kalıntı saç ve kan kaldıracaktır. (Şekil 1A) </li><li> Soğutulmuş kesit bloğu içine beyin yerleştirin. (Şekil 1B) </li><li> Şekil 1C resimde olduğu gibi blok içine bir yeni temiz bir jilet yerleştirin. </li><li> Şekil 1D &#39;de gösterildiği gibi birinci, ikinci temiz bir traş makinesi bıçak 3 mm kaudal yerleştirin. </li><li> Dikkatle onlarla ilgi bölümünü alarak, blok bıçakları kaldırın. </li><li> Sec FloatPBS içinde daldırarak bıçağı kapalı masına neden. (Şekil 1 E) </li><li> Ilgi alanından hasat doku # 5 forseps kullanarak (bu örnekte biz ön komissura, (anterior) ACA, Şekil 1F kullanılan) ve bFGF içeren 1 ml N2 ortamı içeren 15 ml konik tüp içine toplamak. </li><li> Steril koşullar altında protokol kalan devam eden, bir laminar akış başlığı hücre kültürü içine borusunu. </li><li> Mekanik bir P1000 pipet bağlı 1 ml&#39;lik bir pipet kullanarak doku ayırmak. Yukarı ve aşağı pipet birkaç kez (yaklaşık 20x saniyede 1 pipet döngüsünün bir oranda) konik tüp (Şekil 1G 1-3) tabanına karşı pipet açılışını basarken. Çözelti homojen hale geldiğinde öğütme durdurun. </li><li> Çözüm daha büyük herhangi nondissociated doku altına yerleşmek için izin vermek için 2 dakika bekletin. (Şekil 1G 4) </li><li> Homojen toplayıneous süpernatan ve N2 ortamı içinde 8.5 ml ve 20 ng / ml bFGF, 500 ng / ml Dll4, 500 ng / ml Ang2 ve 200 nMJAK inhibitörü içeren bir konik tüp içine yerleştirin. </li><li> 3 seyreltilmiş hücre çözeltisinin ml / çukur kullanılarak 6-kuyulu plakanın kuyularına 3 Plate. </li><li> 37 ° C,% 5 CO2,% 5 O2 nemlendirilmiş bir hücre kuluçka makinesi içine levha yerleştirin. </li></ol> 3. Günlük Bakım <ol><li> Kaplama 24 saat sonra inhibitör bFGF&#39;yi, Ang2, Dll4, ve JAK içeren N2 Ortamı ile kültür yemekleri orta yerine. </li><li> BFGF, Dll4, Ang2 ve bir sonraki gün JAK inhibitörünün bir bolus ekleyin. </li><li> Ortam değişim ve 10-14 gün toplam etken eklemeler bu alternatif işleme devam edin. </li></ol> 4. Farklılaşma indüksiyon <ol><li> Ortamı içeren inhibitörü bFGF&#39;yi, Dll4, Ang2 ve JAK&#39;ı çekilme ve herhangi bir ek faktörleri içermiyor N2 ortamı değiştirin. </li><li> Her ikinci gün orta değiştirin. </li><li> 10 gün sonra hücreler saptamak ve immünositokimya gerçekleştirin. </li></ol> 5. Immünositokimyasal Algılama <ol><li> Ortam aspire ve 20 dakika boyunca% 4 paraformaldehid, 2 ml hücre kültürü plakaları düzeltin. </li><li> 5 dakika her biri için, 3 ml PBS ile yıkayın 2x. </li><li> PBS aspire, sonra geçirgen ve 20 dakika boyunca% 5 normal eşek serumu (NDS) ve% 0.1 Triton X-100 içeren PBS içinde 2 ml ekleyerek hücreleri bloke eder. </li><li> % 5 NDS içeren PBS birincil antikor karışımı hazırlayın. Tuj1 (sınıf III β-tubulin), GFAP ve CNPase antikorlar farklılaşma işaretlerinin üçlü boyanması için birlikte kullanılabilir ise anti-Nestin antikoru, SC&#39;ler belirlenmesi için de kullanılabilir. </li><li> Engelleme çözeltisi aspire ve de her bir birincil antikor karışımı 1.5 ml. 90 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Birincil antikorlar çıkarın ve 3 ml PBS ile 2 kez yıkama, ve her biri 5 dakika boyunca 5% NDS ihtiva eden PBS içinde 3 ml 1x. </li><li> Prepare PBS içinde% 5 ikincil antikorlar NDS ihtiva etmektedir. </li><li> Nihai yıkama aspire ve de her bir sekonder antikor çözeltisi 1,5 ml ekleyin. Oda sıcaklığında 40 dakika boyunca karanlıkta inkübe edin. </li><li> İkincil antikor çözeltisini çıkarın ve taze hazırlanmış bir DAPI leke 2 ml (PBS içerisinde 500 ng / ml) ilave edilmektedir. 3 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> DAPI çözeltisi aspire daha sonra 5 dakika her biri için, 3 ml PBS ile 3 kez yıkayın. Hücreler artık bir floresan mikroskobu ile görselleştirilebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Cajal, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative Study of Sensory Areas of the Human Cortex. , (1899).</li><li>Altman, J., Das, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoradiographic+and+histological+evidence+of+postnatal+hippocampal+neurogenesis+in+rats.">Autoradiographic and histological evidence of postnatal hippocampal neurogenesis in rats.</a> J. Comp. Neurol. 124, 319-335 (1965).</li><li>Kaplan, M. S., Hinds, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+adult+rat:+electron+microscopic+analysis+of+light+radioautographs.">Neurogenesis in the adult rat: electron microscopic analysis of light radioautographs.</a> Science. 197, 1092-1094 (1977).</li><li>Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+replacement+in+adulthood.">Neuronal replacement in adulthood.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 457, 143-161 (1985).</li><li>Gould, E., Reeves, A. J., Graziano, M. S., Gross, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+neocortex+of+adult+primates.">Neurogenesis in the neocortex of adult primates.</a> Science. 286, 548-552 (1999).</li><li>Kornack, D. R., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuation+of+neurogenesis+in+the+hippocampus+of+the+adult+macaque+monkey.">Continuation of neurogenesis in the hippocampus of the adult macaque monkey.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 5768-5773 (1999).</li><li>Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterogeneity+of+adult+neural+stem+cells+and+the+emerging+complexity+of+their+niche.">The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 357-365 (2008).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Luskin, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+proliferation+and+migration+of+postnatally+generated+neurons+derived+from+the+forebrain+subventricular+zone.">Restricted proliferation and migration of postnatally generated neurons derived from the forebrain subventricular zone.</a> Neuron. 11, 173-189 (1993).</li><li>Lendahl, U., Zimmerman, L. B., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+stem+cells+express+a+new+class+of+intermediate+filament+protein.">CNS stem cells express a new class of intermediate filament protein.</a> Cell. 60, 585-595 (1990).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+neural+precursors+in+the+adult+brain+rescues+injured+dopamine+neurons.">Targeting neural precursors in the adult brain rescues injured dopamine neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 13570-13575 (2009).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+dentate+subgranular+zone+and+rostral+subventricular+zone+after+focal+cerebral+ischemia+in+the+rat.">Neurogenesis in dentate subgranular zone and rostral subventricular zone after focal cerebral ischemia in the rat.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 4710-4715 (2001).</li><li>Zhang, R. L., Zhang, Z. G., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke+and+neurogenesis+in+the+subventricular+zone.">Ischemic stroke and neurogenesis in the subventricular zone.</a> Neuropharmacology. 55, 345-352 (2008).</li><li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+are+MSCs+therapeutic?+New+data:+new+insight.">Why are MSCs therapeutic? New data: new insight.</a> J. Pathol. 217, 318-324 (2009).</li><li>Goldman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+and+progenitor+cell-based+therapy+of+the+human+central+nervous+system.">Stem and progenitor cell-based therapy of the human central nervous system.</a> Nat. Biotechnol. 23, 862-871 (2005).</li><li>Sun, N., Longaker, M. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-based+therapy:+considerations+before+clinical+applications.">Human iPS cell-based therapy: considerations before clinical applications.</a> Cell Cycle. 9, 880-885 (2010).</li><li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient.">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, e1000029 (2009).</li><li>Lindvall, O., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapeutics+in+Parkinson's+disease.">Cell therapeutics in Parkinson's disease.</a> Neurotherapeutics. 8, 539-548 (2011).</li><li>Kittappa, R., Bornstein, S. R., Androutsellis-Theotokis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+eNSCs+in+Neurodegenerative+Disease.">The Role of eNSCs in Neurodegenerative Disease.</a> Mo.l Neurobiol. , (2012).</li><li>Cattaneo, E., McKay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+and+manipulating+neuronal+stem+cells.">Identifying and manipulating neuronal stem cells.</a> Trends Neurosci. 14, 338-340 (1991).</li><li>Jensen, J. B., Parmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+limitations+of+the+neurosphere+culture+system.">Strengths and limitations of the neurosphere culture system.</a> Mol. Neurobiol. 34, 153-161 (2006).</li><li>Duarte, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dosage-sensitive+requirement+for+mouse+Dll4+in+artery+development.">Dosage-sensitive requirement for mouse Dll4 in artery development.</a> Genes Dev. 18, 2474-2478 (2004).</li><li>Maisonpierre, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiopoietin-2,+a+natural+antagonist+for+Tie2+that+disrupts+in+vivo+angiogenesis.">Angiopoietin-2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis.</a> Science. 277, 55-60 (1997).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+regulates+stem+cell+numbers+in+vitro+and+in+vivo.">Notch signalling regulates stem cell numbers in vitro and in vivo.</a> Nature. 442, 823-826 (2006).</li><li>Alderson, R. F., Alterman, A. L., Barde, Y. A., Lindsay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+increases+survival+and+differentiated+functions+of+rat+septal+cholinergic+neurons+in+culture.">Brain-derived neurotrophic factor increases survival and differentiated functions of rat septal cholinergic neurons in culture.</a> Neuron. 5, 297-306 (1990).</li><li>Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+factors+direct+the+differentiation+of+stem+cells+from+the+fetal+and+adult+central+nervous+system.">Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system.</a> Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).</li><li>Ourednik, J., Ourednik, V., Lynch, W. P., Schachner, M., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+display+an+inherent+mechanism+for+rescuing+dysfunctional+neurons.">Neural stem cells display an inherent mechanism for rescuing dysfunctional neurons.</a> Nat. Biotechnol. 20, 1103-1110 (2002).</li><li>Ryu, J. K., Cho, T., Wang, Y. T., McLarnon, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitor+cells+attenuate+inflammatory+reactivity+and+neuronal+loss+in+an+animal+model+of+inflamed+AD+brain.">Neural progenitor cells attenuate inflammatory reactivity and neuronal loss in an animal model of inflamed AD brain.</a> J. Neuroinflammation. 6, 39 (2009).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+factors+stimulate+growth+of+adult+neural+stem+cells.">Angiogenic factors stimulate growth of adult neural stem cells.</a> PLoS One. 5, e9414 (2010).</li><li>Park, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hes3+regulates+cell+number+in+cultures+from+glioblastoma+multiforme+with+stem+cell+characteristics.">Hes3 regulates cell number in cultures from glioblastoma multiforme with stem cell characteristics.</a> Sci. Rep. 3, 1095-1010 (2013).</li><li>Poser, S. W., Shostak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+5.">Ch. 5.</a> Cancer Stem Cells - The Cutting. , 89-110 (2011).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., Rueger, M. A., Mkhikian, H., Korb, E., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+pathways+controlling+neural+stem+cells+slow+progressive+brain+disease.">Signaling pathways controlling neural stem cells slow progressive brain disease.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 403-410 (2008).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Başarılı izolasyon, genişleme, ve yetişkin beyin nöral kök hücrelerin farklılaşması için kritik adımların birçok standart doku kültürü teknikleri ile ortak paylaşılır. Akılda tutulması amacı, yetişkin beyin izole NSC&#39;lerde mümkün olduğunca in vivo özellikleri (Şekil 2J) kadar çok sayıda muhafaza gerektiğidir. Genellikle gerekli dikkat ve uygun hızı arasında bir denge vurdu gerekiyor. Kafatası beyin izolasyonu ile bakımı ilgi bölgenin tanımlanması ö...

Bir yüzyıl önce Ramón Y. Cajal tarafından yapılan beyin hücre mimarisini temel gözlemler tarafından belirlenen nörobiyoloji santral dogma, ergenlik MSS 1. bulunan sinir ağlarının karmaşıklığı verilen sonra nöron olası olduğunu düzenledi. 1960&#39;larda Altman iş, ve sonra Kaplan, 3 H-timidin aslında nöronlar yetişkin beynin farklı bölgelerinde üretilen belirten olgun nöronlarda bulunan olabileceğini gösteren rağmen, dogma 2, 3 tutmaya devam etti. Kanıt songbird beyinlerinde 4 mevcut nöronların sayısında mevsimsel değişiklikleri açıklayan Nottebohm araştırma ile bağlamaya devam etti. 1999 yılına kadar değildi zaman sıçan ilişkisel öğrenme görevlerin performansı yanı sıra Kornack ve Rakic ​​gösteriler yo gözlemleri ile hipokampus artar nöronların nesil Gould ve ark. Yayınlanmış çalışmasıting, daha az sert, fazla plastik beyin kavramı, 5 kabul edilmiş yetişkin makak, 6 nörogenezi devam etmiştir. Bu de novo oluşturulan nöronlar için hücresel kaynak için arama 7 nişler olarak adlandırılan beyin bölgelerinde bulunan kök hücreler (SCS) ayrı bir nüfusun keşfedilmesine yol açmıştır. Subventricular bölgesi ve hipokampus alt granül bölgesi, iki ana bölge nörojenik 8,9 olarak kabul edilir. Bu yerlerde izole hücreler klasik embriyonik veya fetal kaynaklı AVM&#39;ler karakteristiği, kendini yenileme ve farklılaşma potansiyeli göstermektedir. Nöral kök hücreler (NSC&#39;lerde) durumunda, bu nöronlar, astrositler ve oligodendrositler farklı olabilir. Ayrıca, bu SC&#39;ler, ara filament protein Nestin 10 fetal NSC belirteçleri için pozitif leke. Daha yeni çalışmalar AVM&#39;ler bu t sınırlı olmayabilir vurgulamaktadıralanları wo ve aslında sıkıca damar 11 ile bağlantılı bir hücre popülasyonu olarak büyük ölçüde hareketsiz beyin boyunca lokalizedir. AVM&#39;ler yaralanmaya yanıt olarak seferber olan gözlemler nörodejeneratif bozukluğu ve felç 12, 13 kurtarma yardım rejeneratif amaçlı bu hücreleri kullanmak mümkün olma olasılığını göstermektedir. Bu osteoblastlar, kıkırdaklan ve yağ hücreleri 14 olma potansiyeline sahip perivasküler hücreler olarak bulunan mezenkimal kök hücreler (MKH) bağ dokularının iyileşmesi oynadığı rol, farklı değildir. Bununla birlikte, NSC&#39;lerde rutin aspirasyon ve yoğunluk dereceli santrifüj teknikleri ile kemik iliğinden MSC ile aynı şekilde hasat edilemez ve ardından otolog hücre bazlı terapiler olarak kullanılmaktadır. Bunun bir sonucu olarak, bu tür EMB türetilen fetal NSC&#39;lerde veya nöronal öncülerinin kullanımı gibi diğer hücre kaynakları,ryonic kök hücreler yoğun bir başarı 15 dereceleri değişen hayvan hastalık ve yaralanma modellerinde araştırılmıştır. Somatik hücre kaynakları kullanarak uyarılmış pluripotent kök hücre teknolojileri kısıtlı olduğu ve embriyonik hücre ve fetal dokular 16 kullanımı ile ilgili endişeler etik üstesinden, geniş bir uygulama yelpazesi için terapötik açıdan yararlı, hücre bazlı terapiler üretilmesi için bir diğer potansiyel bir yol sunar. Ancak, bu bulguların klinik çeviri 17,18 yanı sıra, düzenleyici izni için dolambaçlı bir yol yaklaşımlar SC-temelli terapötik ile çeşitli nörolojik durumların tedavisi mücadelelerde gösterdiği gibi, zor bir görev olduğunu kanıtlamıştır. Alternatif bir yaklaşım olarak, belirli bir farmakolojik tedavilerin giriş NSC sayıda modüle eden ve Parkinson hastalığı ve felç 19 modellerinde kurtarma kolaylaştırabilir. Strateji, etkili bu hücreleri manipüle etmek için nasıl bir anlayış olabilir ne olursa olsunerişilebilir bir in vitro sistemi gerektirir. NSC&#39;lerde kültürleri, aynı zamanda olarak da bilinen neurospheres toplam kültürleri, ya bir tek tabaka ya da 8,20 olarak gerçekleştirilebilir. Her iki teknik, yaygın multipotent öncülerinin genişletilmesi için kültür koşulları sağlamak tanımlanan, bir mitojen kaynağı olarak Epidermal Büyüme Faktörü (EGF) veya bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF) yani kullanım kurulması için izin kullanılmıştır. Neurosphere kültürleri, bir izole edilmiş hücre tipi klonal yayılma yeteneği eğitim için daha uygun olsa da, sistem 21 genişlemesi sırasında hücrelerin karışık bir popülasyonunun üretilmesi için gösterilmiştir. Buna ek olarak, neurospheres kapalı yapısı, hücrelerin manipülasyonu farmakolojik pratik hale getirir, ve bu faktörler olabilir etkisi nedeniyle yorumlanması neurosphere kendi içinde kurulmuş olan mikro için eleştirilmiştir edilebilir. Tek tabakalı kültürleri, diğer taraftan, olabilir,SC büyümesini ve farklılaşmasını düzenleyen ve özellikle bu hücre popülasyonu hedef yeni bileşikler keşfetmek için bir fırsat açılır sinyal iletim mekanizmaları keşfetmek için güçlü bir araç sağlayarak, küçük molekül kütüphanelerin yüksek kapasiteli ekranlarında istihdam. Sonuç olarak, yeniden üretilebilir beyinde ilgi farklı bölgelerinden yetişkin NSC&#39;lerde kültürleri üretmek için yeteneği, merkezi sinir sistemi (MSS) gelişme çalışmalarından gelen yeni yaklaşımlar içinde rejeneratif ilaç kadar, araştırma uygulamaları geniş bir yelpazede kullanılabilir . Burada sunulan protokol incelemek ve erişkin kemirgen beyin izole MSS AVM&#39;ler arasında farklılaşma potansiyelini değerlendirmek için nasıl gösterir.

<table><tbody><tr><td>6-well tissue culture dishes</td><td>BD Biosciences</td><td>353934</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-ornithine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-3655</td><td> &lt;p&gt;5 mg/ml stock solution prepared in double distilled water (Stable for several months at -20 &amp;deg;C).&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Working concentration 0.5 mg/ml in water (Stable for 1 month at 4 &amp;deg;C).&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>1030-Fn</td><td>Do not agitate stock solution</td></tr><tr><td>Filtration Apparatus</td><td>Corning Life Sciences</td><td>430769</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Mediatech</td><td>10-090-CV</td><td>See note below for complete N2 media preparation</td></tr><tr><td>Apo-transferrin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-2036</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-0516</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5780</td><td>1 M stock solution in ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O (Stable at 20 &amp;deg;C for 6 months)</td></tr><tr><td>Sodium Selenite</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-5261</td><td>500 &amp;micro;M stock solution in ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O (Stable at -20 &amp;deg;C for 6 months)</td></tr><tr><td>Progesterone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-8783</td><td>100 &amp;micro;M stock solution in ethanol (Stable at -20&amp;deg;C for 6 months)</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Mediatech</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB</td><td>Working concentration 20 ng/ml&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Delta4 (Dll4)</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>1389-D4</td><td>Working concentration&amp;nbsp; 500 ng/ml</td></tr><tr><td>Angiopoetin 2 (Ang2)</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>623-AN</td><td>Working concentration&amp;nbsp; 500 ng/ml</td></tr><tr><td>JAK Inhibitor</td><td>Calbiochem</td><td>420099</td><td>Working concentration 200 nM&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-2058</td><td></td></tr><tr><td>15- and 50-ml Conical tubes</td><td>Corning Life Sciences</td><td>430053, 430829</td><td></td></tr><tr><td>Other necessary items include: General dissection instruments, including razor blade and forceps, Adult rat (3-6 months old; Sprague-Dawley or Long Evans), CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; intoxication chamber, Laminar flow hood for cell culture and incubator Incubator (humidified, 37 &amp;deg;C, 5% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;, 5% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;). Note: For complete N2 media preparation, to one bottle of DMEM/F-12 (500 ml) add 0.05 g of apotransferin, 0.0125 g of insulin (freshly predissolved in 1 ml of 10 mM NaOH), 50 &amp;mu;l of putrescine, 30 &amp;mu;l of sodium selenite, 100 &amp;mu;l of progesterone stocks, and 5 ml of penicillin/streptomycin solution.&amp;nbsp; Adjust pH to 7.2, if needed. Filter-sterilize and store at 4 &amp;deg;C for up to 3 weeks and protect from light.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Immunofluorescence Reagents Table</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum (NDS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-9663</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-8787</td><td></td></tr><tr><td>4,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-8417</td><td>5 mg/ml stock solution in methanol</td></tr><tr><td colspan="4">Primary Antibody Table</td></tr><tr><td>Nestin</td><td>Chemicon</td><td>MAB353</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:400&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Mouse IgG1&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Hes3</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-25393</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:100&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Rabbit IgG&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Sox2</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>MAB2018</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:100&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Mouse IgG2a&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>CNPase</td><td>Chemicon</td><td>MAB326</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:200&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Mouse IgG1&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>&amp;beta;-tubulin III (TUJ1)</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>MAB1195</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:500&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Mouse IgG2a&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)</td><td>Dako North America</td><td>Z0334</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor 1:500&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Rabbit&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td colspan="4">Secondary Antibody Table</td></tr><tr><td>Alexa&amp;nbsp;&amp;nbsp; 568</td><td>Invitrogen</td><td>A-21124</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:200&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Goat anti Mouse IgG1&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Alexa 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-21131</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:200&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Goat anti Mouse IgG2a&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Cy5</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>59883</td><td> &lt;p&gt;Dilution Factor: 1:200&lt;/p&gt; &lt;p&gt;Species: Goat anti Rabbit&lt;/p&gt; </td></tr></tbody></table>

growing neural stem cells from conventional and nonconventional regions of the adult rodent brain

Son çalışma merkezi sinir sistemi (MSS) rejenerasyon ve tümörgenez kök hücre popülasyonları (AVM&#39;ler) yetişkin beyin içinde ikamet içerdiğini göstermektedir. Ancak bu mekanizmalar normal olarak sakin hücrelerinin uygun sinir ağlarının işleyişini yanı sıra nörodejeneratif süreçlerin yaralanma ve azaltılması kurtarma rollerini sağlamak için istihdam çok az anlaşılmıştır. Bu hücreler, vasküler ve bağışıklık sistemi hem de düzenleyici sinyallerini içeren bir idame ettiren bir ortam sağlamak &quot;niş&quot; olarak adlandırılan bölgelerde bulunur. Bilinmeyen faktörler hariç belirlenen kültür koşulları altında MSS AVM&#39;ler arasında izolasyon, bakım ve farklılaşma, böylece in vivo davranışları içgörü sağlayarak, farmakolojik veya genetik yollarla tedaviye onları erişilebilir kılar. Burada yetişkin beynin farklı bölgelerinden gelen MSS AVM&#39;ler kültürlerini oluşturmak için yöntemler hakkında detaylı bilgi sunmak ve onların d değerlendirmek için yaklaşımlarnöronlar, astrositler ve in vitro oligodendrosit içine ifferentiation potansiyeli. Bu teknik, tek tek SC&#39;ler ve döl çalışma görselleştirilebilir tek tabakalı bir kültür olarak homojen bir hücre popülasyonu elde edilir. Bundan başka, farklı hayvan modeli sistemlerinde ve klinik örnekler arasında uygulanabilir hasarlı yetişkin sinir sisteminin rejeneratif tepkileri tahmin etmek için daha önce kullanılan edilir.

Nöral kök hücreleri toplamak için hangi ilgi bölgeyi belirlenmesi kritik ilk adımdır ve bu hücrelerin birleşen bir plaka almak için gereken süreyi tanımlar. Örneğin, SVZ klasik nörojenik bir alandır ve dolayısıyla nöral kök hücre, daha yüksek bir göreceli bir oran vardır. Ancak burada sunulan teknik genellikle yetişkinlik döneminde sağlam bir nörojenik potansiyele sahip olarak tanınan değil diğer bölgelerde kullanılabilir. Bu protokolün amaçları için, ön komissura (ön kısım) kull...

Watch this Scientific Journal Video about Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain at JoVE.com

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

growing-neural-stem-cells-from-conventional-nonconventional-regions

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.2K Görüntüleme.  University of Dresden.  Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar. 

Video: Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of multipotent, self-renewing, and expandable neural stem cells. In serum conditions, these multipotent NSPCs will differentiate, generating neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The harvested tissue is enzymatically dissociated in a papain-EDTA solution and then mechanically dissociated and separated through a discontinuous density gradient to yield a single cell suspension which is plated in neurobasal medium supplemented with epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and heparin. Adult rat spinal cord NSPCs are cultured as free-floating neurospheres and adult human spinal cord NSPCs are grown as adherent cultures. Under these conditions, adult spinal cord NSPCs proliferate, express markers of precursor cells, and can be continuously expanded upon passage. These cells can be studied in vitro in response to various stimuli, and exogenous factors may be used to promote lineage restriction to examine neural stem cell differentiation. Multipotent NSPCs or their progeny can also be transplanted into various animal models to assess regenerative repair.

The adult mammalian spinal cord contains neural stem/progenitor cells (NSPCs) that can be isolated and expanded in culture. This protocol describes the harvesting, isolation, culture, and passaging of NSPCs generated from the periventricular region of the adult spinal cord from the rat and from human organ transplant donors.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Gelişim Biyolojisi

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a chemically defined serum-free culture system known as the neurosphere assay (NSA). In this assay, the majority of differentiated cell types die within a few days of culture but a small population of growth factor responsive precursor cells undergo active proliferation in the presence of epidermal growth factor (EGF) and/ basic fibroblastic growth factor (bFGF). These cells form colonies of undifferentiated cells called neurospheres, which in turn can be subcultured to expand the pool of neural stem cells. Moreover, the cells can be induced to differentiate, generating the three major cell types of the CNS i.e. neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. This assay provides an invaluable tool to supply a consistent, renewable source of undifferentiated CNS precursors, which could be used for in vitro studies and also for therapeutic purposes.
This video demonstrates the NSA method to generate and expand NSCs from the adult mouse periventricular region, and provides technical insights to ensure one can achieve reproducible neurosphere cultures. The procedure includes harvesting the brain from the adult mouse, micro-dissection of the periventricular region, tissue preparation and culture in the NSA. The harvested tissue is first chemically digested using trypsin-EDTA and then mechanically dissociated in NSC medium to achieve a single cell suspension and finally plated in the NSA. After 7-10 days in culture, the resulting primary neurospheres are ready for subculture to reach the amount of cells required for future experiments.

This video protocol demonstrates the neurosphere assay method to generate and expand neural stem cells from the adult mouse periventricular region, and provides technical insights to ensure one can achieve reproducible neurosphere cultures.

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Nörobilim

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life span of the animal. They can potentially replace cells that are lost in the aging process or in the process of injury and disease. The existence of neural stem cells (NSCs) was first described by Reynolds and Weiss (1992) in the adult mammalian central nervous system (CNS) using a novel serum&#8208;free culture system, the neurosphere assay (NSA). Using this assay, it is also feasible to isolate and expand NSCs from different regions of the embryonic CNS. These in vitro expanded NSCs are multipotent and can give rise to the three major cell types of the CNS. While the NSA seems relatively simple to perform, attention to the procedures demonstrated here is required in order to achieve reliable and consistent results. This video practically demonstrates NSA to generate and expand NSCs from embryonic day 14-mouse brain tissue and provides technical details so one can achieve reproducible neurosphere cultures. The procedure includes harvesting E14 mouse embryos, brain microdissection to harvest the ganglionic eminences, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in NSA culture. After 5-7 days in culture, the resulting primary neurospheres are passaged to further expand the number of the NSCs for future experiments.

This video protocol demonstrates the application of the neurosphere assay for the isolation and expansion of neural stem cells from the ganglionic eminences of embryonic day 14-mouse brain.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the stem cell community. Many current expansion methods are laborious and costly, and those involving complete dissociation may cause several stem and progenitor cell types to undergo differentiation or early senescence. To overcome these problems, we have developed an automated mechanical passaging method referred to as &#8220;chopping&#8221; that is simple and inexpensive. This technique avoids chemical or enzymatic dissociation into single cells and instead allows for the large-scale expansion of suspended, spheroid cultures that maintain constant cell/cell contact. The chopping method has primarily been used for fetal brain-derived neural progenitor cells or neurospheres, and has recently been published for use with neural stem cells derived from embryonic and induced pluripotent stem cells. The procedure involves seeding neurospheres onto a tissue culture Petri dish and subsequently passing a sharp, sterile blade through the cells effectively automating the tedious process of manually mechanically dissociating each sphere. Suspending cells in culture provides a favorable surface area-to-volume ratio; as over 500,000 cells can be grown within a single neurosphere of less than 0.5 mm in diameter. In one T175 flask, over 50 million cells can grow in suspension cultures compared to only 15 million in adherent cultures. Importantly, the chopping procedure has been used under current good manufacturing practice (cGMP), permitting mass quantity production of clinical-grade cell products.

This protocol describes a novel mechanical chopping method that allows the expansion of spherical neural stem and progenitor cell aggregates without dissociation to a single cell suspension.&#160; Maintaining cell/cell contact allows rapid and stable growth for over 40 passages.

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult neural stem cells in vitro. These assays can be used to compare the precursor potential of cells isolated from genetically different or differentially treated animals&#160;to determine the effects of exogenous factors on neural precursor cell proliferation and differentiation and to generate neural precursor cell lines that can be assayed over continuous passages. The neurosphere assay is traditionally used for the post-hoc identification of stem cells, primarily due to the lack of definitive markers with which they can be isolated from primary tissue&#160;and has the major advantage of giving a quick estimate of precursor cell numbers in brain tissue derived from individual animals. Adherent monolayer cultures, in contrast, are not traditionally used to compare proliferation between individual animals, as each culture is generally initiated from the combined tissue of between 5-8 animals. However, they have the major advantage that, unlike neurospheres, they consist of a mostly homogeneous population of precursor cells and are useful for following the differentiation process in single cells. Here, we describe, in detail, the generation of neurosphere cultures and, for the first time, adherent cultures from individual animals. This has many important implications including paired analysis of proliferation and/or differentiation potential in both the subventricular zone (SVZ) and dentate gyrus (DG) of treated or genetically different mouse lines, as well as a significant reduction in animal usage.

Here we describe a detailed protocol for the simultaneous generation of neural precursor cell cultures, as either adherent monolayers or neurospheres, from the subventricular zone and dentate gyrus of individual adult mice.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. They successively generate transit amplifying cells (TACs) and neuroblasts that differentiate into neurons once they integrate the olfactory bulbs. Emerging fluorescent activated cell sorting (FACS) techniques have allowed the isolation of NSCs as well as their progeny and have started to shed light on gene regulatory networks in adult neurogenic niches. We report here a cell sorting technique that allows to follow and distinguish the cell cycle dynamics of the above-mentioned cell populations from the adult SVZ with a LeX/EGFR/CD24 triple staining. Isolated cells are then plated as adherent cells to explore in details their cell cycle progression by time-lapse video microscopy. To this end, we use transgenic Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator (FUCCI) mice in which cells are red-fluorescent during G1 phase due to a G1 specific red-Cdt1 reporter. This method has recently revealed that proliferating NSCs progressively lengthen their G1 phase during aging, leading to neurogenesis impairment. This method is easily transposable to other systems and could be of great interest for the study of the cell cycle dynamics of brain cells in the context of brain pathologies.

We report a Fluorescent Activated Cell Sorting (FACS)-based method to isolate neural stem cells (NSCs) and their progeny from the subventricular zone (SVZ) of the adult mouse brain. Applied to Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator (FUCCI) transgenic mice, it allows the study of cell cycle progression by live imaging.

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation into three types of cells: neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. Identifying aNSC-derived regions and characterizing the aNSC properties are critical for the potential use of aNSCs and for the elucidation of their role in neural regeneration. The subcallosal zone (SCZ), located between white matter and the hippocampus, has recently been reported to contain aNSCs and continuously give rise to neuroblasts. A low percentage of aNSCs from the SCZ is differentiated into neurons; most cells are differentiated into glial cells, such as oligodendrocytes and astrocytes. These cells are suggested to have a therapeutic potential for traumatic cortical injury. This protocol describes in detail the process to generate SCZ-aNSCs from an adult mouse brain. A brain matrix with intervals of 1 mm is used to obtain the SCZ-containing coronal slices and to precisely dissect the SCZ from the whole brain. The SCZ sections are initially subjected to a neurosphere culture. A well-developed culture system allows for the verification of their characteristics and can increase research on NSCs. A neurosphere culture system provides a useful tool for determining proliferation and collecting the genuine NSCs. A monolayer culture is also an in vitro system to assay proliferation and differentiation. Significantly, this culture system provides a more homogenous environment for NSCs than the neurosphere culture system. Thus, using a discrete brain region, these culture systems will be helpful for expanding our knowledge about aNSCs and their applications for therapeutic uses.

Establishing culture systems for the expansion of adult neural stem cells (aNSCs) allows for the examination and application of aNSCs for therapy. The subcallosal zone (SCZ) has recently been recognized as a novel neuroblast-forming region in adult mice. Here, methods for the isolation, expansion, and differentiation of SCZ-aNSCs are described.

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and expansion of NSCs provide a suitable source of cells for neuroscientists to study the function of neurons and glial cells along with their interactions. There are several reported techniques for the isolation of neural stem cells from adult or embryo mammalian brains. During the microsurgical operation to isolate NSCs from different regions of the embryonic CNS, it is very important to reduce the damage to the brain cells to obtain the highest ratio of live and expandable stem cells. A possible technique for stress reduction during isolation of these cells from the mouse embryo brain is the reduction of surgical time. Here, we demonstrate a developed technique for rapid isolation of these cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence. Surgical procedures include harvesting E13 mouse embryos from the uterus, cutting the frontal fontanelle of the embryo with a bent needle tip, extracting the brain from the skull, microdissection of the isolated brain to harvest the ganglionic eminence, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in suspension culture to generate neurospheres.

Here, we introduce a novel microsurgical technique for the isolation of neural stem cells from the E13 mouse embryo ganglionic eminence.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Nöral Kök ve Oligodendrosit Progenitör Hücre İzolasyonu için Sıçan "Beyin Sağım"

The "Brain Milking" Method for the Isolation of Neural Stem Cells and Oligodendrocyte Progenitor Cells from Live Rats

Tissue-specific neural stem cells (NSCs) remain active in the mammalian postnatal brain. They reside in specialized niches, where they generate new neurons and glia. One such niche is the subependymal zone (SEZ; also called the ventricular-subventricular zone), which is located across the lateral walls of the lateral ventricles, adjacent to the ependymal cell layer. Oligodendrocyte progenitor cells (OPCs) are abundantly distributed throughout the central nervous system, constituting a pool of proliferative progenitor cells that can generate oligodendrocytes.
Both NSCs and OPCs exhibit self-renewal potential and quiescence/activation cycles. Due to their location, the isolation and experimental investigation of these cells is performed postmortem. Here, we describe in detail &#34;brain milking&#34;, a method for the isolation of NSCs and OPCs, amongst other cells, from live animals. This is a two-step protocol designed for use in rodents and tested in rats. First, cells are &#34;released&#34; from the tissue via stereotaxic intracerebroventricular (i.c.v.) injection of a &#34;release cocktail&#34;. The main components are neuraminidase, which targets ependymal cells and induces ventricular wall denudation, an integrin-&#946;1-blocking antibody, and fibroblast growth factor-2. At a second &#34;collection&#34; step, liquid biopsies of cerebrospinal fluid are performed from the cisterna magna, in anesthetized rats without the need of an incision.
Results presented here show that isolated cells retain their endogenous profile and that NSCs of the SEZ preserve their quiescence. The denudation of the ependymal layer is restricted to the anatomical level of injection and the protocol (release and collection) is tolerated well&#160; by the animals. This novel approach paves the way for performing longitudinal studies of endogenous neurogenesis and gliogenesis in experimental animals.

Yazar Spotlight: Yeni Bir Beyin Sağım Protokolü Kullanarak Canlı Hayvanlardan Nöral Kök ve Progenitör Hücrelerin Toplanması 

A method for the isolation of neural stem cells and oligodendrocyte progenitor cells from the brains of live rats is presented here in experimental detail. It allows multiple collections of these cells from the same animals without compromising their well-being.

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi

Tissue-specific neural stem cells (NSCs) remain active in the mammalian postnatal brain. They reside in specialized niches, where they generate new ...

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler'den Kök Hücre

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi

Canlı Sıçanlardan Nöral Kök Hücrelerin ve Oligodendrosit Progenitör Hücrelerin İzolasyonuna Yönelik "Beyin Sağım" Yöntemi