Name: mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining
Uploaded: 2012-11-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining at JoVE.com

Bu çalışma CIHR EKİBİ hibe # CTP 82946, bir CIHR hibe # MOP 102741, yanı sıra Kanada sandalye # 216684 ve Strauss Vakfı tarafından desteklenmiştir. ER Kanada Kalp ve İnme Vakfı tarafından burs tarafından desteklenmiştir.

Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) 1. Cerrahi Prosedür (Şekil 1) Geçici orta serebral arter tıkanıklığı (tMCAO) 2 yapılır - 3 aylık erkek C57BL / 6 fareler (22-28g) için. Bu protokol IRCM biyoetik komitesi hayvan bakımı tarafından onaylanmıştır. Cerrahi aletler otoklavda (60 dk için 15 psi az 121 ° C) ile sterilize edildi. Her hayvan arasında, onlar sıcak boncuk sterilizatör (15 sn) kullanılarak sterilize edilmiştir. Cerrahi masa ve diğer ekipmanlar% 70 etanol kullanılarak dezenfekte edilir. Ameliyattan önce iki saat, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) ile analgesized edildi. Şekil 1A. <ol><li> Derinden izofluran% 5 ile farelerin uyuşturan ve daha sonra% 2.5 izofluran de anestezi korumak. Farelerin Vücut sıcaklığı bir ısıtma pedi ile ameliyat sırasında sabit tutulur. </li><li> Kürk ve sk Dezenfekte% 70 etanol ya da Betadin ile. Tıraş inme patofizyolojisi etkileyebilecek saç parçası sürüm, microabrasions ve iltihap üretir bu yana, fare kürk tıraş etmeyin. </li><li> Bir orta hat boyun kesi olun ve yavaşça yumuşak dokuların birbirinden çekin. </li><li> Bir stereo mikroskop (Stemi 2000, Zeiss) altında, bir künt diseksiyon karotis arter bulmak için trakea maruz ve kasları geri çekmek için yapılır. </li><li> Sol ana karotis arter (CCA) dikkatli çevreleyen doku disseke ve CCA geçici 20 mm segmente 5-0 ipek sütür kesim kullanarak geçici bir sütür (1) tıkanmasıyla edilir. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sol internal karotis arter (ICA) ve dış karotis arter (ECA) ve çatallanma ayırın. Bir kalıcı sütür (2) olarak distalde mümkün olduğunca, ECA etrafına yerleştirilir ve biraz sıkı başka bir geçici sütür (3) distal ECA üzerine yerleştirilirçatallanma. </li><li> Kanama önlemek için bir ters eylem cımbız kullanarak sol ICA (4) klipsleyin. Büyük bir dikkatle vagal sinir zarar vermeyecek olunmalıdır. </li><li> Sürekli (2) ve geçici (3) dikiş arasında ECA (5) içine bir küçük delik kesin. </li></ol> 1B Şekil. <ol start="9"><li> , 12 mm uzunluğunda 6-0 silikon kaplı (9-10mm hakkında kaplamalı silikon olan) ECA (6) içine monofilament sütür (Doccol Corporation) tanıtılması tamamen kalıcı sütür distal ECA kesip ICA içine tıkayıcı ters . Sütür sıkıca kanamayı önlemek için monofilament etrafında bağlı ve ters eylem cımbız kaldırılır. </li><li> Tıkayıcı Willis daire MCA kökeni tıkanmak üzere tanıtıldı. ECA ve CCA çatallanma ötesinde 9-10 mm çapındaki ekleme durdurun. Tıkayıcı bloke edilir ve artık hareket edemez. Bakım pterigopalatin arter nüfuz edilmesine dikkat edilmelidir. ECA üzerindeki sütür (3) tig olduğunuhtly pozisyonda mono düzeltmek için bağlanmıştır. </li><li> Bir AutoClip yara kapama sistemi ile cilt kapatın. </li><li> Subkutan salin solüsyonu 1 ml enjekte edilir ve tüm post-kapama süresinin (60 dakika) sırasında bir kızılötesi ısıtma lambası altında fareler yerleştirin. </li></ol> 2. Orta Serebral Arter Kan Akım Restorasyonu Reanesthesia önce neuroscore cerrahinin başarısını değerlendirmek için kontrol edilebilir. <ol><li> Daha önce açıklandığı gibi fareler anestezisi ve autoclips çıkarın. </li><li> Biraz monofilament çekilmesi ve kan reperfüzyon izin ECA üzerine sütür (3) açın. </li><li> Sürekli kan kaybını önlemek için ECA üzerindeki geçici dikiş kapalı kravat. Monofilament yeniden kullanım için tutulur. </li><li> Kan sirkülasyonu sağlamak için CCA üzerine geçici sütür (1) sökün. </li><li> Yara kapatın. Farelerde subkütan başka 1 ml serum fizyolojik verilmelidir. </li><li> 1 saat boyunca ısıtma kızılötesi lamba altında fareler yerleştirin. Hayvan hareketliliği kavuşur emin olduktan sonra, fare kafesinden döndürülür ve ısıtma pedi ve 72 saat için havlu altında bıraktı. Kafesin sadece yarısı fareler çevrelerini seçmek için izin ısıtma pedi üzerine yerleştirilir unutmayın. Ameliyat sonrası kilo kaybı genel olarak görülmektedir, çünkü püre yemek yeme teşvik etmek için bir Petri tabağına yerleştirilir. On iki saat ameliyat sonrası, fareler buprenorfin (0.03 mg / kg bwip) başka bir doz verildi. </li></ol> 3. Sham Operasyonu Sham operasyon için tüm prosedürleri tıkayıcı takılı olmadığından haricinde aynıdır. 4. Neuroscore Nörolojik defisit sadece reperfüzyon sonrası ve yaralanma şiddetinin derecesi sonraki tahmini tMCAO başarısının değerlendirilmesine olanak sağlar. Önceden 5 açıklandığı gibi nörolojik defisit atacak &lt;/ Sup&gt; ve 1, 24, 48 ve 72 saat sonrası reperfüzyon gerçekleştirildi. Bir genişletilmiş altı maddelik ölçek kullanılmıştır: <ul><li> 0: Normal. </li><li> 1: hafif kuyruk tarafından yakalandı zaman veya tutarsız rotasyon olmadan davranışı çizerek, karşı tarafa döndürmek için &lt;% 50 girişimleri. </li><li> 2: hafif çizerek tutarlı, karşı tarafa döndürmek için&gt;% 50 girişimleri. </li><li> 3: güçlü, tutarlı ve çizerek acil, fare burnu neredeyse kendi kuyruğunu ulaşan, fazla 1-2 saniye için bir dönüş konumunda tutar. </li><li> 4: barreling içine ilerleyici ağır dönme, refleks yürüme veya düzeltilmesi kaybı. </li><li> 5: komadaki veya ölmek üzere. </li></ul> 5. Kresil Menekşe Boyama (Şekil 2) PBS çözeltisi perfüzyon takiben, beyinleri hızla izopentan dondurulmuş ve -80 ° C&#39;deC. Fare beyinleri de planlanan immünohistokimyasal çalışmalar bağlı olarak,% 4 paraformaldehit (PFA) ile perfüze edilebilir. Koronal beyin kesitleri (17 um) Kriyostat-kesikler yapılmıştır. Her 30 üzerinden bir bölümü temsil eden bir beyin hasarı ile aynı slayt üzerinde toplanır. Hacim ölçümü için, 2 adet kaydırak (Scion Corporation, Frederick, MD) lezyon değerlendirmek için kullanılan cresyl violet boyama ve görüntü analiz sistemi ile boyanmış. Yaralanma ses keyfi birimler (piksel) hesaplanır, ve her bölüm için kontralateral olmayan lezyonlanan alanının bir yüzdesi olarak ifade edildi. Diğer slaytlar immünohistokimyasal çalışmalar için -80 ° C&#39;de tutulur. Alternatif olarak, PFA-sabit beyin vibratome ve gibi Han ve ark. (2009) 6 tarafından önerilen ölçülen infarkt hacmi ile 30-50 mikron de kesilebilir.

<ol>
	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. B. r. a. i. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=infarction+is+not+reduced+in+SOD-1+transgenic+mice+after+a+permanent+focal+cerebral+ischemia.">infarction is not reduced in SOD-1 transgenic mice after a permanent focal cerebral ischemia.</a> Neuroreport. 5, 293-296 (1993).</li><li>Yang, G., Chan, P. H., Chen, J., Carlson, E., Chen, S. F., Weinstein, P., Epstein, C. J., Kamii, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenic+mice+are+highly+resistant+to+reperfusion+injury+after+focal+cerebral+ischemia.">Human copper-zinc superoxide dismutase transgenic mice are highly resistant to reperfusion injury after focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 25, 165-170 (1994).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+stroke+model+guidelines+for+preclinical+stroke+trials+(1st+edition.">Rodent stroke model guidelines for preclinical stroke trials (1st edition.</a> J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Jiang, S. X., Lertvorachon, J., Hou, S. T., Konishi, Y., Webster, J., Mealing, G., Brunette, E., Tauskela, J., Preston, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlortetracycline+and+demeclocycline+inhibit+calpains+and+protect+mouse+neurons+against+glutamate+toxicity+and+cerebral+ischemia.">Chlortetracycline and demeclocycline inhibit calpains and protect mouse neurons against glutamate toxicity and cerebral ischemia.</a> J. Biol. Chem. 280, 33811-33888 (2005).</li><li>Han, R. Q., Ouyang, Y. B., Xu, L., Agrawal, R., Patterson, A. J., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postischemic+brain+injury+is+attenuated+in+mice+lacking+the+beta2-adrenergic+receptor.">Postischemic brain injury is attenuated in mice lacking the beta2-adrenergic receptor.</a> Anesth. Analg. 108, 280-287 (2009).</li><li>Rousselet, E., Marcinkiewicz, J., Kriz, J., Zhou, A., Hatten, M. E., Prat, A., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCSK9+reduces+the+protein+levels+of+the+LDL+receptor+in+mouse+brain+during+development+and+after+ischemic+stroke.">PCSK9 reduces the protein levels of the LDL receptor in mouse brain during development and after ischemic stroke.</a> J. Lipid Res. 52, 1383-1391 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1986).</li><li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion.">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J. Neurosci. Methods. 174, 18-24 (2008).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 131-192 (2003).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek çakışan çıkarları var. Bu makalenin Üretim ve Serbest Giriş Zeiss, Inc tarafından desteklenen

Farklı zamanlı modeller hastalarda inme sonuçlarını taklit geliştirilmiştir. Inme modelinde seçimi söz konusu biyolojik bağlıdır. Intraluminal MCAO modeli hastalarda iskemik inme en yaygın türlerinden biri taklit ve Tamura modeli 4,7 daha az invaziv ve daha tutarlıdır. Bu nöroproteksiyon, neurorepair ve hücre ölümüne analizler için gerçekten ilginç bir model. Intraluminal modelinin başarısı kontrol edilmesi gereken bu tür hayvan cinsiyet, yaş ve ağırlık, sıcaklık, anestezi ve cerrahi süresi gibi birçok faktöre bağlıdır. Tıkayıcı (uç çapı, uzunluğu, şekli ve esneklik) fiziksel adap MCAO 4 tutarlılığı için kritik öneme sahiptir. Bu yazıda, Doccol Corporation 9-10 mm silikon ile kaplanmış 12 mm uzunluğundaki 6-0 monofilament kullanın. Uzunluğu tüm ICA kapsamında çünkü bu monofilament büyük avantajı subaraknoid kanama azaltmak veWillis ve PPA Circle anterior ve posterior komünikan arterlerden gelir uzunluğu, rezidüel kan akımı, engelledi ve infarkt hacmi azalır değişkenliği (bizim ellerde değişkenliğin% 15) 8 edilir. CCA sütür de infarkt hacmi 9 değişkenliği azalır. Beyin hasarı aşağıdaki tMCAO ölçüde farklı yollar ile tespit edilebilir. Daha önce de belirtildiği gibi nörolojik hasarlar ölçülebilir. Bununla birlikte, bu arada etkin bir ölçü olması zordur. Enfarkt boyutu genellikle TTC boyama ile gerçekleştirilir. Daha yakın zamanda, manyetik rezonans teknikler, aynı zamanda, nöro-koruyucu tedavisi için özellikle ilginç bir teknoloji kullanılır. Böyle neurorepair, hücre ölümü veya hücre çoğalması olarak inme dahil yatan hücresel mekanizmaları anlamak için, immünohistokimyasal olarak farklı marker çalışması kritik ve çok bilgilendirici. Böylece, bizim protocbeyin bölüm preparatları ol bu analizlerin izin veren büyük bir avantaja sahiptir, ve kullanılan fareler sayısını en aza indirir. Ayrıca, Tureyen ark. 10. cresyl violet boyama ve TTC arasında iyi bir korelasyon olduğunu bildirmişlerdir.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Açıklama</strong</td&gt;<td<strong&gt; Şirket</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalog numarası</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stereo mikroskop</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; Stemi 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Fiber-Işık Yüksek Yoğunluklu Illuminator</td&gt;<td&gt; Dolan-Jenner Sanayi A.Ş.</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdIzofluran için&gt; Anestezi sistemi</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İzofluran</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108.737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isıtma battaniye</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Kızılötesi ısıtma lambası</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Ultra ince cımbız, stili 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 78320-5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannas Makas 3 mm Kesme Kenar, Düz</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Stil LA-1 ve MPF-1 Tüm düz bıçaklar</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 77926-5S</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Negatif eylem cımbız, stil KOPINC 5</td&gt;<td&gt; Elektron Mikroskobu Bilimleri</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Makas 5 1/2 &quot;Düz Kesme</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72.960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; AutoClip başlangıç ​​seti</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD AutoClip Kapanış Sist Yara., 9mm Uzun, 100/PK</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 sütür</td&gt;<td&gt; Harvard aparatı</td&gt;<td&gt; 517.763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Sütür materyali PDS II monofilament menekşe, 5-0, RB-1; Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12 mm uzunluğundaki 6-0 silikon kaplı monofilament sütür</td&gt;<td&gt; Doccol Şirketi</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml Seringes</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; 14-823-2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; İğneler 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; Fisher</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; Fareler</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

İnme mortalite ve Dünyada sakatlık önde gelen nedeni üçüncü nedenidir. Tüm inmelerin yaklaşık% 80 İskemik inme hesaplar. Ancak, trombolitik doku plazminojen aktivatörü (tPA) mevcutsa akut iskemik inme tek tedavidir. Bu liderliğindeki araştırmacılar türlerde birçok iskemik inme modelleri geliştirmek için. Kemirgen modellerinde iki tip geliştirilmiştir: global serebral iskemi veya fokal serebral iskemi modeli. Kime yaklaşık% 80 trombotik veya embolik inme, orta serebral arter (MCA), model inme çalışmalar için oldukça uygundur intralüminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) topraklarında meydana hastalarda iskemik inme taklit etmek. Bu model, ilk olarak Koizumi, ve arkadaşları tarafından sıçanlarda geliştirilmiştir. 1986 1 in. Çünkü farelerde genetik manipülasyon kolaylığı, bu modeller de bu türün 2-3 geliştirilmiştir. content &quot;&gt; Bu yazıda, C57/Bl6 farelerde geçici MCA oklüzyonu prosedürü sunuyoruz. Önceki çalışmalar, uç çapı, uzunluğu, şekli, ve esneklik gibi tıkayıcı fiziksel özellikleri infarkt hacmi 4 tekrarlanabilirliği için önemli olduğunu bildirdi. Burada ticari bir silikon kaplı monofilament (Doccol Corporation) kullanılmıştır. diğer büyük avantajı bu monofilament subaraknoid kanama ikna etmek riskini azaltır olmasıdır. Zeiss stereo-mikroskop Stemi 2000 kullanmak, silikon kaplı monofilament internal karotis arter girmiştir (ICA) monofilament kadar eksternal karotis arter (ECA) bir kesik yoluyla MCA tabanı tıkar. kan akımı bir tromboembolik pıhtı lizis bölgesindeki sonrası kan akımının restorasyonu taklit monofilament çıkarılması ile 1 saat sonra restore edildi İnsanlarda. serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ile ve infarkt hacmi ölçümü ile ilk değerlendirilebilir.İskemik farelerin böylece farklı post-reperfüzyon zaman onların nörolojik skoru incelendi. 2,3,5-Triphenyftetrazoliumchlorid (TTC) ile boyanarak, infarkt hacmi değerlendirmek için genellikle yapıldı. Immunhistokimya tarafından birçok kritik belirleyicileri sınamak için bir fırsat sunuyor yana yazıda cresyl violet boyama kullanılır. Bu videoda, biz MCAO prosedürü rapor; nörolojik puanları ve cresyl violet boyama ile infarkt hacminin değerlendirilmesi.

Neuroscore değerlendirme tMCAO inme sonrası başarısını onaylar ve tMCAO post-reperfüzyon verimliliğini belirler. Bizim elimizde, tüm fareler, en azından hafif bir tutarlı kıvırma (neuroscore 2) ve nörolojik kusurların en fazla 72 saat için genel olarak stabil olan sunulan lümen içi prosedürüne tabi tutulmuştur. Çoğu fareler hafif tutarlı curling (neuroscore 2) sergilerler. Kıvrık olmaması gösteren Fare çalışmanın dışında tutulmuştur. Ancak, neuroscore değerlendirilmesi bize yaralı hipokampus ve sağlam bir hipokampus olanlar ile fareler arasında ayrım izin vermez. Mortalite subaraknoid kanama meydana gelmedi düşündüren, ameliyat gün boyunca gözlenmiştir. Subaraknoid kanama bir fare tespit edildiğinde, bu bir sistematik analizi çıkarılmıştır. Ev yapımı monofilamentler daha yumuşak hale Doccol Corporation, gelen silikon kaplı monofilament kullanımı başarısını artırırtMCAO ve subaraknoid kanama azaltır. 24 saat ve 72 saat arasında Mortalite bu model% 14, genel olarak oklüzyon 60 dk Min. Gözlemlenen mortalite muhtemelen bu fare soyu içinde geniş bir enfarktüs hacmini kaynaklanmaktadır. Güçlü bir lezyon tekrarlanabilirliği de onların etki (ler) modeli değişkenliği tarafından gizli olabilir nöro molekülleri okumak için çok ilginç olan (standart sapma% 15) gözlenmiştir. TMCAO sonrasında beyin hasarı ölçüde değerlendirilmesi için, bir malzeme çok uygun bir marker 6 test etmek sahip olmak için oldukça TTC daha cresyl violet boyama (Şekil 2) kullanmayı seçti. Lezyonun boyutu oldukça tutarlıdır. Ancak, bazı farelerde, hipokampus (farelerin yaklaşık% 30) yaralı olduğunu fark ettim. O cresyl violet boyama sonrasında 1 hafta kadar uygulanabilir ilginçtir. Literatürde, beyin enfarktüsü yüzdesi değişir birindendiğer çalışma. Bu fare suşu, anestezi, beyin kesitleri kalınlığı, kullanılan monofilament ya da 6, 7 ikinci boyama seçimine bağlıdır. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Silikon kaplı intraluminal monofilament kullanarak orta serebral arter oklüzyonu şeması. Fare beyin ve silikon kaplı monofilament tanıtımı hazırlamak için ardışık sütür ve klibi gösteren serebral arterlerin bir. Basitleştirilmiş şeması. B. Willis daire ile monofilament pozisyonu temsil edilmektedir. . Monofilament MCA ACA, anterior serebral arter baz tıkanmak üzere ECA aracılığıyla ICA sokulur; BA, baziler arter; CCA, karotis arter; C. Willis, Willis Circle; ECA, eksternal karotid artery; ICA, internal karotis arter; MCA, orta serebral arter; PCA, posterior komünikan arter; PPA, pterigopalatin arter. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2. 72 saat sonrası reperfüzyon. İnfarktı alanı (özellikle striatum, korteks ve komşu beyin bölgeleri) sonra cresyl violet ile boyandı fare beyin Temsilcisi koronal bölümleri beyaz (cresyl menekşe tarafından boyanmadan) görünür. Yaralanma hacmi (beyaz kısmı, sağ hemisfer) ayrılmış ve kontralateral olmayan lezyonlanan alanı (sol hemisfer) bir yüzdesi olarak ifade edilir.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining at JoVE.com

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

mouse-model-intraluminal-mcao-cerebral-infarct-evaluation-cresyl

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

63.3K Görüntüleme.  Clinical Research Institute of Montreal. Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Video: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Nörobilim

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Tıp

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after stroke. These myeloid cell subpopulations can display different phenotypes and functions and need to be distinguished and characterized to study their regulation and contribution to tissue damage. This protocol provides two different methodologies for brain immune cell characterization: a precise stereological approach and a flow cytometric analysis. The stereological approach is based on the optical fractionator method, which calculates the total number of cells in an area of interest (infarcted brain) estimated by a systematic random sampling. The second characterization approach provides a simple way to isolate brain leukocyte suspensions and to characterize them by flow cytometry, allowing for the characterization of microglia, infiltrated monocytes and neutrophils of the ischemic tissue. In addition, it also details a cerebral ischemia model in mice that exclusively affects brain cortex, generating highly reproducible infarcts with a low rate of mortality, and the procedure for histological brain processing to characterize infarct volume by the Cavalieri method.

Brain myeloid cells characterization following stroke can be performed by stereology using the optical fractionator method, or by a flow cytometric analysis of brain leukocytes suspensions. Both are useful techniques to perform an accurate phenotypical distinction of the main myeloid cell subsets found in the ischemic brain.

Geçici veya kalıcı Serebral İskemi Modelinde lökosit alt popülasyonlarının Stereolojik ve Sitometrisi Karakterizasyonu

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options are limited to a small proportion of stroke patients within the first hours after stroke. Novel therapeutic strategies are being extensively investigated, especially to prolong the therapeutic time window. These current investigations include the study of important pathophysiological pathways after stroke, such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Over the last decade, there has been increasing concern about the poor reproducibility of experimental results and scientific findings among independent research groups. To overcome the so-called &#8220;replication crisis&#8221;, detailed standardized models for all procedures are urgently needed. As an effort within the &#8220;ImmunoStroke&#8221; research consortium (https://immunostroke.de/), a standardized mouse model of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo) is proposed. This model allows the complete restoration of the blood flow upon removal of the filament, simulating the therapeutic or spontaneous clot lysis that occurs in a large proportion of human strokes. The surgical procedure of this &#8220;filament&#8221; stroke model and tools for its functional analysis are demonstrated in the accompanying video.

Different models of middle cerebral artery occlusion (MCAo) are used in experimental stroke research. Here, an experimental stroke model of transient MCAo via the external carotid artery (ECA) is described, which aims to mimic human stroke, in which the cerebrovascular thrombus is removed due to spontaneous clot lysis or therapy.

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Fareleri Modelinin Kurulması

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

Yazar Spotlight: İnme Araştırmalarında Yenilikçi Teknikler ve Gelecekteki Yönelimler 

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Geçici veya kalıcı Serebral İskemi Modelinde lökosit alt popülasyonlarının Stereolojik ve Sitometrisi Karakterizasyonu

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli