Name: mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining
Uploaded: 2012-11-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 40 s
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이 연구는 CIHR TEAM 부여 # CTP 82946, CIHR 부여 # 걸레 102,741뿐만 아니라 캐나다 의자 # 216684와 스트라우스 재단에 의해 지원되었다. ER은 캐나다 심장 질환 및 뇌졸중 재단의 화목에 의해 지원되었다.

과도 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 1. 수술 절차 (그림 1) 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 (tMCAO)는 2 일에 수행됩니다 - 3 개월 된 남자 C57Bl / 6 마​​우스 (22~28g)에. 이 프로토콜은 IRCM 생명 윤리위원회 동물 관리에 의해 승인되었습니다. 수술 도구 autoclaving (60 분 15 PSI에서 121 ° C)의 소독을했다. 각 동물 사이, 그들은 뜨거운 비드 살균기를 (15 초)를 사용하여 소독되었습니다. 수술 테이블 및 기타 장비는 70 % 에탄올을 사용하여 살균합니다. 수술 전에 2 시간, 마우스는 buprenorphine (0.03 밀리그램 / kg bwip)로 analgesized되었습니다. 그림 1A. <ol><li> 깊이 isoflurane 5퍼센트과 쥐를 마취시키다 후 2.5 % isoflurane에서 마취를 유지합니다. 마우스 본체 온도는 가열 패드와 수술 중 지속적으로 유지됩니다. </li><li> 모피와 SK를 소독70 % 에탄올 또는 Betadine으로 인치 면도는 뇌졸중 pathophysiology에 영향을 미칠 수 있습니다 머리카락 자료, microabrasions과 염증을 생산하고 있기 때문에, 우리는 마우스 털을 면도하지 않습니다. </li><li> 중간 선에 목을 절개하고 부드럽게 부드러운 조직을 분열. </li><li> 스테레오 현미경 (Stemi 2000, Zeiss)에서 무딘 절개는 경동맥을 찾습니다 기관을 표시하고 근육을 철회 수행됩니다. </li><li> 왼쪽 온목 동맥 (CCA)는주의 깊게 조직을 주변에서 해부되고 CCA가 일시적으로 20mm 세그먼트에 5-0 실크 봉합 컷을 사용하여 임시 봉합 (1)에 의해 occluded 있습니다. 좋은 치료는 vagal 신경을 손상하지 행사해야합니다. </li><li> 왼쪽 내부 온목 동맥 (ICA)와 외부 온목 동맥 (ECA)의 분기를 분리합니다. 영구 봉합 (2)와 같은 distally 가능한, ECA 주위에 배치하고 있으며, 약간 빡빡 다른 임시 봉합 (3)에 말초 ECA에 위치분기. </li><li> 피를 피하기 위해 리버스 액션 핀셋을 사용하여 왼쪽 ICA (4) 클립. 좋은 치료는 vagal 신경을 손상하지 행사해야합니다. </li><li> 영구 (2) 및 임시 (3) 봉합 사이의 ECA (5)에 작은 구멍을 잘라 버릴거야. </li></ol> 1B 그림. <ol start="9"><li> , 12mm 길이 6-0 실리콘 코팅 (9~10mm에 대한 코팅 실리콘입니다) ECA (6)에 모노 필라멘트의 봉합 (Doccol 공사)를 소개 완전히 영구적 봉합에 말초 ECA을 잘라 ICA에 occluder로 바꾸 . 봉합은 단단히 출혈을 방지 할 수있는 모노 필라멘트 주위에 연결되어 있으며 리버스 액션 핀셋이 제거됩니다. </li><li> occluder는 윌리스의 원에있는 MCA의 출처를 막다하기 위해 도입된다. ECA와 CCA의 분기 이후 9~10밀리미터 주변의 삽입을 중지합니다. occluder가 차단되어 더 이상 이동할 수 없습니다. 주의 pterygopalatine 동맥을 통과하지 행사해야합니다. ECA에서 봉합 (3) 싸움이다htly 위치에서 모노 필라멘트를 해결하기 위해 묶어. </li><li> autoclip의 상처 폐쇄 시스템과 피부를 닫습니다. </li><li> 피하 생리 식염수 1 ML를 삽입하고 모든 포스트 가림 기간 (60 분) 동안 적외선 가열 램프에서 마우스를 놓습니다. </li></ol> 2. 중간 뇌 동맥 혈액 흐름의 복원 reanesthesia 전에 neuroscore은 수술의 성공 여부를 평가하기 위해 확인하실 수 있습니다. <ol><li> 로 이전에 설명 된 생쥐를 마취하고 autoclips를 제거합니다. </li><li> 약간 모노 필라멘트 탈퇴 및 혈액 reperfusion을 허용하도록 ECA에 봉합 (3) 엽니 다. </li><li> 영구적으로 혈액 손실을 방지하기 위해 ECA에서 임시 봉합을 묶어. 모노 필라멘트는 재사용을 위해 보관됩니다. </li><li> 혈액 재순환을 허용 할 수있는 CCA로 임시 봉합 (1)를 제거합니다. </li><li> 상처를 닫습니다. 마우스 피하에 또 다른 하나 ML 생리 식염수을 받아야합니다. </li><li> 1 시간에 대한 적외선 가열 램프 아래에 마우스를 놓습니다. 동물이 이동성을 회복 여부를 확인 후, 마우스의 케이지에 반환되고 가열 패드, 72 시간 용 수건에서 떠났다. 케이지의 절반 만이 쥐가 자신의 환경을 선택할 수 있도록 가열 패드에 배치되어 있습니다. 후 수술 체중 감소는 일반적으로 관찰되기 때문에, 다진 식품을 섭취 권장 할 수있는 배양 접시에 배치됩니다. 열두 시간 수술, 쥐 buprenorphine (0.03 밀리그램 / kg bwip)의 또 다른 복용량을 받았습니다. </li></ol> 3. 위장 운영 체하다 작업의 모든 절차가 occluder가 삽입되어 있지 제외하고 동일합니다. 4. Neuroscore 신경 결손은 reperfusion 이후 부상의 심각성의 정도의 이후 평가 tMCAO의 성공의 평가를 할 수 있습니다. 이전 5에 설명 된대로 신경 결손이 채점 &lt;/ 저녁을 먹다&gt;, 1, 24, 48, 72 시간의 포스트 reperfusion에서 수행. 확장 여섯 점 척도가 사용됩니다 : <ul><li> 0 : 정상. </li><li> 1 : 부드러운 꼬리가 감지 할 때 사용하거나 일관성없이 회전 동작을 돌고, contralateral 측면으로 회전 할 &lt;50 % 시도합니다. </li><li> 2 : 가벼운 돌고 일관 contralateral 측면으로 회전 할&gt; 50 % 시도. </li><li> 3 : 강한 일관성과 돌고 즉시, 마우스는 코가 거의 꼬리를 도달과 함께, 이상 1-2 초 동안 회전 위치를 보유하고 있습니다. </li><li> 4 : barreling으로 진행 심한 회전, 반사를 산책하거나 righting의 손실. </li><li> 5 : 혼수 상태 나 죽어가는. </li></ul> 5. Cresyl 보라 착색 (그림 2) PBS 솔루션 재관류 후, 머리는 빠르게 이소 펜탄에 고정되어 있으며 -80에 저장 °C. 마우스 뇌는 계획 immunohistochemistry 연구에 따라 4 % paraformaldehyde (PFA)와 perfused 될 수 있습니다. 코로나 뇌 섹션 (17 μm)의 그라 이오 스탯 - 상처가 수행됩니다. 매 30에서 한 섹션은 대표 뇌성 부상을 가지고 동일한 슬라이드에 수집됩니다. 볼륨 정량화를 들어, 2 슬라이드 (귀공자 공사, 프레데릭, MD)이 병변을 평가하는 데 사용 된 cresyl 보라색의 착색 및 이미지 분석 시스템으로 얼룩 져 있습니다. 부상의 볼륨은 임의의 단위 (픽셀)으로 계산하고, 각 섹션에 대한 contralateral 비 lesioned 지역의 백분율로 표시되었습니다. 다른 슬라이드 immunohistochemistry 연구를 위해 -80 ° C에 보관됩니다. 또한, PFA-고정 뇌는 vibratome 등 한 외. (2009) 6에서 권장하는 측정 경색 볼륨을 사용하여 30-50 μm에서 절단 할 수 있습니다.

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	<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn. J. Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Chan, P. H., Kamii, H., Yang, G., Gafni, J., Epstein, C. J., Carlson, E., Reola, L. 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다른 뇌졸중 모델은 환자 뇌졸중 결과를 모방하기 위해 개발되었습니다. 스트로크 모델의 선택은 생물학적 질문에 따라 달라집니다. intraluminal MCAO 모델은 환자의 허혈성 뇌졸중의 가장 일반적인 유형 중 하나를 모방하고 타무라 모델 4,7보다 침습적 더 일치합니다. 이 neuroprotection, neurorepair 및 세포 죽음에 분석을위한 정말 흥미로운 모델입니다. intraluminal 모델의 성공은 제어​​해야하는 등 동물의 성별, 나이, 무게, 온도, 마취 및 수술 시간 등 여러 요인에 따라 달라집니다. occluder (팁 직경, 길이, 모양, fexibility)의 물리적 예절은 MCAO (4)의 일관성 중요하다. 여기, 우리는 Doccol 공사 9~10밀리미터에 실리콘으로 코팅 12mm 길이의 6-0 모노 필라멘트를 사용합니다. 의 길이는 모든 ICA를 적용하기 때문에이 모노 필라멘트의 가장 큰 장점은 subarachnoid의 출혈을 줄일 수 있으며,윌리스와 PPA의 마법사 협회의 앞쪽과 뒤쪽 통신 동맥에서 나오는 길이, 잔류 혈액의 흐름은, 예방 및 경색 볼륨 감소의 다양성 (우리의 손에 다양성의 15 %)은 8입니다. CCA의 봉합은 또한 경색 볼륨 9 다양성을 낮 춥니 다. 뇌 손상 다음 tMCAO의 범위는 여러 가지 방법에 의해 평가 될 수있다. 앞서 언급 한 바와 같이 신경 결손을 측정 할 수 있습니다. 그러나이 방법으로 효율적인 측정을하기가 어렵습니다. 경색의 범위는 일반적으로 TTC의 착색에 의해 수행됩니다. 최근 자기 공명 기술은 또한 neuroprotective 트리트먼트 특히 흥미로운 기술을 사용합니다. 이러한 neurorepair, 세포 사망 또는 세포 증식 등의 행정에 관여 기본 세포 메커니즘을 이해하려면, immunohistochemistry에 의해 서로 다른 마커의 연구는 중요하고 매우 유익한 것입니다. 따라서, 우리 protoc뇌 섹션 준비의 충실한이 분석을 허용하는 큰 이점을 가지고 있으며, 사용 마우스의 수를 최소화합니다. 또한, Tureyen 외 10. cresyl 보라색의 착색 및 TTC 사이 좋은 상관 관계가있는 것으로보고있다.

<table border="1"&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; 설명</strong</td&gt;<td<strong&gt; 회사 소개</strong</td&gt;<td<strong&gt; 카탈로그 번호</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 스테레오 현미경</td&gt;<td&gt; Zeiss</td&gt;<td&gt; Stemi 2000</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 섬유 - 가벼운 고강도 조명기</td&gt;<td&gt; Dolan - 제너 산업 주식회사</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdisoflurane을위한&gt; 마취 시스템</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isoflurane</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 108737</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 난방 담요</td&gt;<td&gt; Gaymar Medsearch</td&gt;<td&gt; TP22G</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 적외선 가열 램프</td&gt;<td</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 울트라 고급 핀셋, 스타일 5</td&gt;<td&gt; 전자 현미경 과학</td&gt;<td&gt; 78,320 - 5TI</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vannas 가위 3mm 커팅 에지, 직선</td&gt;<td&gt; 전자 현미경 과학</td&gt;<td&gt; 72932-01</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 스타일 LA-1과 MPF-1 모든 부드러운 블레이드</td&gt;<td&gt; 전자 현미경 과학</td&gt;<td&gt; 77926-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 부정적 행동 핀셋, 스타일 KOPINC 5</td&gt;<td&gt; 전자 현미경 과학</td&gt;<td&gt; 72850-F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 가위, 5 1 / 2 &quot;직선을 해부</td&gt;<td&gt; Cedarlane</td&gt;<td&gt; 72,960</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Autoclip 스타터 세트</td&gt;<td&gt; 하버드 장치</td&gt;<td&gt; 34-0557</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; BD Autoclip은 휴관일 Syst을 나갔습니다., 9mm 길이 100/pk</td&gt;<td&gt; 피셔</td&gt;<td&gt; 01-804-5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 5-0 봉합</td&gt;<td&gt; 하버드 장치</td&gt;<td&gt; 517763</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 봉합 재료 PDS II 모노 필라멘트 바이올렛, 5-0, RB-1, Z303H</td&gt;<td&gt; CDMV</td&gt;<td&gt; 6167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 12mm 길이 6-0 실리콘 코팅 모노 필라멘트의 봉합</td&gt;<td&gt; Doccol 기업</td&gt;<td&gt; 60SPRePK5</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml를 Seringes</td&gt;<td&gt; 피셔</td&gt;<td&gt; 14-823 - 2F</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 바늘 26G1 / 2</td&gt;<td&gt; 피셔</td&gt;<td&gt; BD-305111</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td<em&gt; C57BL / 6</em&gt; 마우스</td&gt;<td&gt; IRCM</td&gt;<td</td&gt;</tr&gt;</table

mouse model of intraluminal mcao: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining

행정 사망률 세계에서 장애의 주요 원인의 세 번째 원인입니다. 모든 스트로크의 약 80 % 허혈성 뇌졸중 차지한다. 그러나, thrombolytic 조직 plasminogen 활성 (TPA)는 존재 급성 허혈성 뇌졸중의 유일한 치료입니다. 이 LED 연구자들은 종의 다양한 여러 허혈성 뇌졸중 모델을 개발할 수 있습니다. 쥐 모델의 두 가지 주요 유형이 개발되었습니다 : 글로벌 뇌성 국소 빈혈 또는 초점 뇌성 국소 빈혈의 모델. 누구에 약 80 %가 thrombotic 또는 embolic 스트로크는 중간 대뇌 동맥 (MCA), 모델은 뇌졸중 연구 상당히 관련이 intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)의 영역에서 발생, 환자의 허혈성 뇌졸중을 모방합니다. 이 모델이 처음 고이즈미 외로 쥐 개발되었습니다. 1,986 1인치 때문에 쥐 유전자 조작의 용이성 때문에,이 모델은 또한이 종 2-3으로 개발되었습니다. 내용은 &quot;&gt; 여기, 우리는 C57/Bl6 마우스에 과도 MCA 폐색 절차를 제시한다. 이전 연구 등 팁의 직경, 길이, 모양, 및 유연성 등의 occluder의 물리적 속성 경색 볼륨 (4)의 재현성에 중요하다고보고했습니다. 여기, 상용 실리콘 코팅 monofilaments (Doccol 공사)가 사용되었습니다. 또 다른 큰 이점이 모노 필라멘트가 subarachnoid의 출혈을 유발 할 수있는 위험을 줄일 수 있다는 것입니다. Zeiss 스테레오 - 현미경 Stemi 2000을 사용하여 실리콘 코팅 된 모노 필라멘트는 속목 동맥에 소개되었습니다 (ICA) 모노 필라멘트 때까지 외부 경동맥 동맥 (ECA)의 컷을 통해이 MCA의 기반을 occludes. 혈액 흐름이 thromboembolic 응고의 용해에 후 혈액 흐름의 복원을 모방 할 수있는 모노 필라멘트의 제거로 1 시간 이상 복원되었습니다 인간. 대뇌 경색의 범위가 neurologic 점수 의해 경색 볼륨의 측정에 의해 먼저 평가 될 수 있습니다.허혈성 마우스 따라서 다른 포스트 - reperfusion 시간에 자신의 neurologic 점수에 대해 분석 하였다. 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화 (TTC)와 얼룩, 경색 볼륨을 평가하기 위해 일반적으로 수행되었다. 이 immunohistochemistry하여 많은 중요한 마커를 테스트 할 수있는 기회를 제공하기 때문에 여기에서, 우리는 cresyl 보라색의 착색를 사용했습니다. 이 동영상에서는, 우리는 MCAO 절차를보고, 신경 점수 및 cresyl 보라색의 착색에 의한 경색 볼륨의 평가.

neuroscore 평가는 tMCAO 후 스트로크의 성공을 확인하고 tMCAO 후 reperfusion의 효율성을 결정합니다. 우리 손에, 모든 마우스는 적어도 온화한 일관성 컬링 (neuroscore 2) 신경 적자가 72 시간에 일반적으로 안정 제시 intraluminal 절차를 받게. 대부분의 마우스는 가벼운 일관성 컬링 (neuroscore 2) 나타냅니다. 컬링의 부재를 보여주는 마우스는 연구에서 제외됩니다. 그러나, neuroscore 평가는 우리가 부상당한 해마와 그대로 해마있는 사람과 쥐를 구별 할 수 없습니다. 어떤 사망률은 subarachnoid의 출혈이 발생하지 않은 제안, 수술 일 동안 관찰되지 않았습니다. subarachnoid의 출혈이 마우스에서 확인되는 경우,이 하나는 체계적으로 분석에서 제외됩니다. 집에서 준비 monofilaments보다 부드럽고입니다 Doccol 공사,에서 실리콘 코팅 모노 필라멘트의 사용은의 성공을 증가tMCAO하고 subarachnoid의 출혈을 줄일 수 있습니다. 24 시간과 72 시간 사이의 사망률이 모델에 14 %이며, 같은 일반적으로 폐색의 60 분에보고했다. 관찰 사망률은 아마도이 마우스 변형에 큰 경색 볼륨 때문입니다. 강한 병변 재현성이 또한 효과 (들)이 모델의 다양성에 의해 숨겨 질 수 neuroprotection 분자를 연구하기가 매우 흥미로운입니다 (표준 편차는 15 %입니다) 관찰되었습니다. tMCAO에 따라 뇌 손상의 정도를 평가하기 위해, 우리는 재료의 많은 관련 마커에게 6 테스트해야하기 위해 오히려 TTC보다 cresyl 보라색의 착색 (그림 2)를 사용하도록 선택. 병변의 정도는 비교적 일치합니다. 그러나, 우리는 마우스에 해마가 (쥐 30 %) 부상하고있는 것으로 나타났습니다. 그렇게 cresyl 보라색의 착색이 나중에 일주까지 적용 할 수있는 참고 할 수 흥미 롭습니다. 문학에서 뇌 경색의 비율이 다양 하나에서다른 공부합니다. 이 마우스 긴장, 마취, 뇌 섹션의 두께, 사용 된 모노 필라멘트, 또는 6, 7을 사용 착색의 선택에 따라 달라집니다. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1.jpg" alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/4038/4038fig1highres.jpg" /> 1 그림. 실리콘 코팅 intraluminal 모노 필라멘트를 사용하여 중간 대뇌 동맥의 폐색의 제도. 마우스 뇌와 실리콘 코팅 모노 필라멘트의 도입을 준비하는 연속 봉합 및 클립을 보여 뇌성 동맥의. (간체) 제도. B.는 윌리스의 원을 통해 모노 필라멘트의 위치가 표시됩니다. . 모노 필라멘트는 MCA ACA, 앞 뇌동맥의 기반을 막다하기 위해 ECA를 통해 ICA에 도입, BA, 뇌 바닥 동맥, CCA, 온목 동맥, C. 윌리스, 윌리스의 장 (场), ECA, 외부 경동맥 아르테는보시지, ICA, 내부 경동맥, MCA, 중, 뇌동맥, PCA, 뒤 교통 동맥, PPA, pterygopalatine 동맥. <img src="/files/ftp_upload/4038/4038fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 72 시간 후 reperfusion. 경색 지역 (주로 striatum, 피질과 인접 뇌 영역) 이후 cresyl 보라색으로 물들 마우스 뇌의 대표 코로나 섹션은 흰색 (cresyl 보라색으로 흠없는)에 나타납니다. 부상 볼륨 (흰 부분, 오른쪽 뇌)가 구분이고 contralateral 비 lesioned 지역 (왼쪽 반구)의 백분율로 표시.

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Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

쥐 intraluminal 중간 뇌성 가림 모델은 여기서 제공됩니다. 대뇌 경색의 범위는 neurologic 점수와 cresyl 보라색의 착색, TTC의 대안 얼룩, 병렬 많은 관심 마커에서 테스트 큰 이점을 제공함으로써 평가됩니다.

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

63.3K 조회수.  Clinical Research Institute of Montreal. 쥐 intraluminal 중간 뇌성 가림 모델은 여기서 제공됩니다. 대뇌 경색의 범위는 neurologic 점수와 cresyl 보라색의 착색, TTC의 대안 얼룩, 병렬 많은 관심 마커에서 테스트 큰 이점을 제공함으로써 평가됩니다.

비디오: Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

연구

신경과학

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

의학

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after stroke. These myeloid cell subpopulations can display different phenotypes and functions and need to be distinguished and characterized to study their regulation and contribution to tissue damage. This protocol provides two different methodologies for brain immune cell characterization: a precise stereological approach and a flow cytometric analysis. The stereological approach is based on the optical fractionator method, which calculates the total number of cells in an area of interest (infarcted brain) estimated by a systematic random sampling. The second characterization approach provides a simple way to isolate brain leukocyte suspensions and to characterize them by flow cytometry, allowing for the characterization of microglia, infiltrated monocytes and neutrophils of the ischemic tissue. In addition, it also details a cerebral ischemia model in mice that exclusively affects brain cortex, generating highly reproducible infarcts with a low rate of mortality, and the procedure for histological brain processing to characterize infarct volume by the Cavalieri method.

Brain myeloid cells characterization following stroke can be performed by stereology using the optical fractionator method, or by a flow cytometric analysis of brain leukocytes suspensions. Both are useful techniques to perform an accurate phenotypical distinction of the main myeloid cell subsets found in the ischemic brain.

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options are limited to a small proportion of stroke patients within the first hours after stroke. Novel therapeutic strategies are being extensively investigated, especially to prolong the therapeutic time window. These current investigations include the study of important pathophysiological pathways after stroke, such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity, and regeneration. Over the last decade, there has been increasing concern about the poor reproducibility of experimental results and scientific findings among independent research groups. To overcome the so-called &#8220;replication crisis&#8221;, detailed standardized models for all procedures are urgently needed. As an effort within the &#8220;ImmunoStroke&#8221; research consortium (https://immunostroke.de/), a standardized mouse model of transient middle cerebral artery occlusion (MCAo) is proposed. This model allows the complete restoration of the blood flow upon removal of the filament, simulating the therapeutic or spontaneous clot lysis that occurs in a large proportion of human strokes. The surgical procedure of this &#8220;filament&#8221; stroke model and tools for its functional analysis are demonstrated in the accompanying video.

Different models of middle cerebral artery occlusion (MCAo) are used in experimental stroke research. Here, an experimental stroke model of transient MCAo via the external carotid artery (ECA) is described, which aims to mimic human stroke, in which the cerebrovascular thrombus is removed due to spontaneous clot lysis or therapy.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

경두개 중뇌동맥 폐색 마우스 모델 구축

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. The filament MCAO model typically exhibits a massive cerebral infarction in C57Bl/6 mice that sometimes includes brain tissue in the territory supplied by the posterior cerebral artery, which is largely due to a high incidence of posterior communicating artery atresia. This phenomenon is considered a major contributor to the high mortality rate observed in C57Bl/6 mice during long-term stroke recovery after filament MCAO. Thus, many chronic stroke studies exploit distal MCAO models. However, these models usually produce infarction only in the cortex area, and consequently, the assessment of post-stroke neurologic deficits could be a challenge. This study has established a modified transcranial MCAO model in which the MCA at the trunk is partially occluded either permanently or transiently via a small cranial window. Since the occlusion location is relatively proximal to the origin of the MCA, this model generates brain damage in both the cortex and striatum. Extensive characterization of this model has demonstrated an excellent long-term survival rate, even in aged mice, as well as readily detectable neurologic deficits. Therefore, the MCAO mouse model described here represents a valuable tool for experimental stroke research.

저자 스포트라이트: 뇌졸중 연구의 혁신적인 기법과 미래 방향 

This protocol demonstrates a unique mouse stroke model with a medium-sized infarct and an excellent survival rate. This model allows preclinical stroke researchers to extend the ischemia duration, use aged mice, and assess long-term functional outcomes.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

Intraluminal MCAO의 마우스 모델 : Cresyl 보라 착색에 의한 뇌 경색 평가

요약

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마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델