Name: intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Biz Dr Joshua B. Rubin GL261-luc hücrelerinin hazırlanması yararlı öneri için lentivirüs sisteminin yanı sıra Mahil Rao plazmid cömert bir hediye kabul etmek istiyorum. Beyin Tümörü Araştırma (SSBTR), Barrow Nörolojik Vakfı ve cömert destek için Wallace Vakfı Destekleme öğrenciler çok teşekkür ediyoruz. Joseph Hastanesi ve Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.

1. Hücre Kültürü <ol><li> Kanser Tedavi ve Tanı (DCTD) Ulusal Kanser Enstitüsü (NCI), Frederick, MD Bölümünden GL26 hücre hattı elde edildi. GL261 hücreler tümör büyüme hızının bir miktar ölçümü kolaylaştırmak için bioluminescent Lenti-X HT Ambalaj Mix (Clontech Laboratories, Inc) ve FUW Lentiphos HT Sistemi (Clontech Laboratories, Inc, Mountain View, CA) kullanılarak yapıldı GL plazmid (JB Rubin, MD, PhD laboratuvar cömert bir hediye.) Hücreler% 10 tetrasiklin Fötal Buzağı Serumu (FCS; Clontech Laboratories, Inc), Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Orta (DMEM) devam edildi. GL261 hücreleri de stably pGL4.51 [luc2 / CMV / Neo] gen kodlama luc2 kullanarak vektör (Promega Corp, Madison, WI) ve FuGENE 6 Transfeksiyon Reaktif (IN Roche Applied Science, Indianapolis,) tarafından belirtilen aşağıdaki koşullar transfekte edildi üreticisi. Luc2 gen ateşböceği Lucifera kodon optimize edilmiş versiyonu.standart luc gen göre anlamlı derecede daha yüksek ışık çıkışı sağlar se. Kararlı transfektanları% 10 FCS ve 100 mg / ml Geneticin (G418, Invitrogen Corp, Carlsbad, CA) içeren DMEM medya ve tutuldu. </li><li> Kültürlü hücreler, implantasyon öncesinde trypsinzation tarafından hasat serum olmadan DMEM kez yıkanmış ve 1 x 10 7 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyon serum olmadan DMEM yeniden bekletildi. </li></ol> 2. Cerrahi Kurulum 2 <ol><li> Steril bir ortamda, tüm cerrahi aletleri, sarf malzemeleri, eldiven, örtüleri, vb de dahil olmak üzere, ameliyat boyunca devam eder. </li><li> On hafta eski C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (albino C57BL / 6) farelerde Frederick Hayvansal Üretim Programı, Ulusal Kanser Enstitüsü satın ve ortalama 20 gram ağırlığı (NCI, Frederick, MD) kullanılır. </li><li> Hayvanlar ksilizin (5 mg / kg), ketamin (50 mg / kg) ve buprenorfin (0.05 mg / kg) intraperitoneal anestezi. Içine tutam ameliyat başladı önce hayvan yeterli anestezi olduğunu sağlamak için yapılır. Hayvanın herhangi bir bölümünün Hareketi (azda olsa bile), anestezi düzeyinin azaltılması bir göstergesidir. Hayvan hemen ek bir 3.3 mg / kg xylazine ve 26.6 mg / kg ketamin verilmiştir. Vücut ısısı, vücudu kaplayan bir lamba ve steril pansuman ile korunur. </li><li> Hayvan düzgün uyuşturulduktan sonra, stereotaktik headframe minderli yatak (Model 900 Küçük Hayvan Stereotaksik David Kopf Instruments) [Şekil 1] konur. </li><li> Akwa Tears Oftalmik Yağlayıcı Merhem küçük bir miktar (1 / 4 inç) kornealar üzerine uygulanır. </li><li> Hayvan hayvanın ağzı (hayvanın çene etrafında parmağı ve başparmak koyarak) stereotaktik çerçeve içinde girinti içine açılması ve üst ön dişler kayar stereotaktik çerçeve içinde sabitlenir. Kelepçe emin olun kulaklık hayvanın başının güvenli sıkılır ki incie kafa hizalandığından ve gözleri ancak hayvanın kafasını aşırı güç uygulamak için değil emin olun, ortalanmış. </li><li> O 2 hortum, hayvanın burun delikleri yakın aşağı bantlanmış . Oksijen debisi 0.5 lt / dk. </li><li> Alt sırt ve kuyruk solunum uzlaşma için dikkatli olmak stereotaktik yatağa aşağı bantlanmış. </li><li> Cerrahi kesi yeri traş. Povidin-İyot Swab stickler, iyot hayvanın gözlerinin içine damla değildir emin olun, iyot ile kulakları arasındaki bölgeye geri dönüyor gözleri arasındaki bölgeyi yıkamak için kullanılır. </li><li> Hücreler hemen önce cerrahi implantasyon için hazırlanır ve razı olmayan sağlamak için periyodik olarak karıştırılır. </li><li> 10 ul, 50 mm Dünya Hassas Çalgı (TEFE), Sarasota, FL, iğne ile 26 göstergesi Eğimli şırınga hücre inokulum ile yüklenir. Hücrelerin bir araya kümesinin gibi görünüyorsa şırınga yeniden yüklemek için gerekli olabilir. </li><li> 10 ul şırınga UMP3-1 UltraM yerleştiriliricroPump mikro enjektör (TEFE, Sarasota, FL). </li></ol> 3. İntrakranial İmplantasyonu 2 <ol><li> Cilt insizyonu bir boyutu 15 neşter bıçak ve dişli forseps kullanılarak yapılır. Bregma (kafatasının üst kısmında sagital ve koronal sütür kavşağı) açığa hayvanın kulağına doğru hareket, boyuna hayvanın gözleri arasında 10-15 mm kesi yapılır. Bregma [Şekil 2] distal sinüs alanı ile kolayca karışabilir için düzgün bregma tanımlamak için emin olun. </li><li> Hayvan sedasyon sonra% 0.25 &#39;lik (2.5 mg / ml) bupivakain bir insizyonel içi enjeksiyon alır. </li><li> Burrhole yavaş yavaş bir kafatası nüfuz ve beyin maruz kadar büküm ise iğne çok az basınç uygulayarak, bir 16 gauge 1 ½ inç iğne elle büküm orta hatta sağ bregma posterior 0.1 mm ve 2.3 mm yapılır. </li><li> Şırınga iğnesi Microdrive ste kullanarak pozisyon içine indireotactic şırınga sahibinin sadece beynin yüzeyine temas edene kadar. Bu pozisyonda, iğne, 3 mm derinliğe kadar beyin içine gelişmiş ve 3 dakika boyunca bir yerde saklanmalıdır. </li><li> İğne hücreleri infüze edilmelidir küçük bir cep oluşturarak, beyin yüzeyinin altında 2.6 mm toplam derinliği 0,4 mm geri çekilir. Bu noktada hayvan iğne düzgün yerleştirme ve derinlik sağlamak için bir X-ray görüntü almak isteğe bağlıdır. </li><li> 667 nL / dakika infüzyon hızı ile 2000 nL (2 mcL) bir birime ayarlamak mikro enjektör ile 3 dakika içinde hücre süspansiyonu demlenir. </li><li> Iğne, infüzyon sitesinden sızıntıyı önlemek için 2 dakika yerde kaldı. </li><li> İğne yavaş yavaş tamamen iptal edilir. </li><li> Burrhole Penfield disektör kullanarak kemik balmumu ile doludur. </li><li> Kesi büyük boşluklar cilt sol emin bir 4-0 (1.5 Metrik) Vicryl dikiş kullanılarak sütüre edilir. Vicryl çözülür bir dikiş materyalive bu nedenle sütürler kesi iyileşene kaldırılması gerek yok. </li><li> Ameliyattan sonra hayvanların 30 kafesinin alt yüzeyi ısıtmak için gerekli yüksekliği ayarlanmış bir ısıtma lambası ° C altında bir kafes yerleştirilir Hayvanlar tamamen uyanık olduğunda (kafes normal hareketi tarafından değerlendirilecek) grubu konut iade edilir. Oral ibuprofen ameliyat sonrası 5 gün boyunca kendi içme suyuna eklenir. Ibuprofen (100mg/5ml) 100 mg 473 ml standart bir kemirgen şişe su eklenir. Hayvanlar günlük ve görüntülü gözlenen ve her 3 günde bir tartılır. İki hafta implantasyon sonrası gözlem, iki kez her gün artar. Hunched duruş, daha az hareketlilik ve görünür bir vücut ağırlığı kaybı (≥% 20) içerir azalan sağlık belirtileri göstermeye Hayvanlar ötenazi. Bu belirtiler tümörün yayımlanmış bir tepki vardır ve bunlar tekrarlanabilir, tümör nedeniyle ölüme yaklaşık 1 gün önce görünür. </li></ol> 4. In vivo </em&gt; Biyoparlaklık Görüntüleme 3 <ol><li> [Yaşam] yazılımı başlatın. </li><li> IVIS Görüntüleme Sistemi [başlat IVIS Sistemi] Kontrol panelinin sağ alt tarafında düğmesini tıklayarak Başlamaya. </li><li> Kontrol panelinin sol üst tarafta [Luminesans] Görüntü Modu seçin. </li><li> Görüntüleme luciferase enjeksiyon sonrası kinetik çalışmada gerekli olan en uygun zamanı belirlemek için [Şekil 3]. Bu açıklamalar ateşböceği lusiferaz; <ol class="lalpha"><li> Aşağıda açıklandığı gibi, D-luciferase ateşböceği (Kaliper Yaşam Bilimleri Katalog XR-1001 veya başka bir satıcı, benzer bir ürün 15mg/ml PBS içinde) 10μl / g vücut ağırlığı hayvan içine enjekte edilir. </li><li> 3 dakika bekleyin ve ardından gaz anestezi odası (% 2 O 2 İsofluranın gaz) içine koyarak fare uyutmak. </li><li> Gaz anestezi odasına kapatın ve anestezi vana ve IVIS manifoldu vakum açık. Hemen yer sedatize hayvansıcaklık kontrollü görüntüleme platformu, gaz anestezi manifoldu farenin burun deliği düzgün yerleştirildiğinden emin. İlk görüntü, yaklaşık 5 dakika luciferase enjeksiyon sonra alınmalıdır. IVIS Spectrum cihaz içinde bir defada 5 hayvanlara görüntülenebilir. 5 hayvandan az görüntülü edilecekse, isofluran gaz tasarrufu için kullanılmayan manifold fiş (ler) mümkündür. </li><li> Luciferase ifade için bir kinetik eğri oluşturmak için bir saat için bir dizi oluşturarak her 3 dakikada bir almaya devam edin. <ol><li> Kontrol panelinde [Sıra Setup] düğmesine tıklayın. </li><li> Dizisi editörü görünür. </li><li> Kontrol paneli, sıradaki ilk bioluminescent görüntü ayarlarını belirtin. <ol class="lroman"><li> Orta binning ile başlayan öneririz. </li><li> Ayrıca optimum pozlama süresini belirlemek için Otomatik Pozlama tavsiye ederiz. </li><li> Dizisi editörü [Gecikme] düğmesini seçinnd her edinimi arasındaki 3 dakikalık bir gecikme süresi belirtin. </li></ol></li><li> Dizisi editörü [Ekle] tıklayın. Toplama parametreleri daha sonra tabloya eklenir. </li><li> Sırayla her bir görüntü için 4. adımı yineleyin. </li></ol></li><li> Eğrisi kurulduktan sonra, en uygun görüntüleme süresi, sinyal gücü (yoğunluk) karşı komplo tarafından tespit edilebilir. Resim hayvanların en yüksek in vivo foton anda en güçlü ve en doğru sinyali almak için sayılır. </li></ol></li><li> Ancak Erken deneylerde kullanılan luciferase intraperitoneal (ip) enjeksiyonu, ip enjeksiyonları bazen biraz tümör hiçbir biyoparlaklık gösteren aralıklı sonuçları sonuçlandı. Biz sinyal zaman zaman rastgele olmaması, barsak veya diğer iç organları luciferase teslim bağlı olduğunu varsaydık. Bu nedenle subkutan (sc) luciferase enjeksiyonları kullanmaya başladı ve daha fazla görüntüleme tekrarlanabilirlik gördüm [Şekil 3]. </li><li> Yirmisc enjeksiyon sonrası dakika, tepkisiz kadar O 2% 2 İsofluranın gaz odasına yerleştirerek, hayvanların anestezi. </li><li> Anestezi hayvan (lar) görüntüleme odasına taşınır. Oftalmik merhem görüntüleme uzunluğu nedeniyle kinetik çalışma için kullanılmalıdır. Süresi kısa, çünkü diğer görüntüleme işlemleri için gerekli değildir. </li><li> Görüntü orta binning 5 dakikalık bir poz süresi ile elde edilir. Otomatik satın alma seçeneği de kullanılıyor olabilir. </li><li> Sinyal doymuş ve / veya orta binning zayıf ise, binning ya da pozlama süresi ayarlanabilir. </li><li> Program dosyaları ve daha sonraki görüntü yorum kullanıcının bilgisayarına dizinde kaydedilir. </li></ol> 5. 3D Görüntüleme 3 <ol><li> [Sıra Setup] kontrol paneli penceresi [Görüntüleme Sihirbazı] sekmesini tıklayın. </li><li> Görüntüleme Sihirbazı başlangıç ​​ekranında görüntüleme modu ve cl [Biyoparlaklık]ick [Sonraki]. </li><li> &quot;Biyoparlaklık - DLIT&quot; görüntüleme sihirbazı penceresi [Firefly] muhabiri prob seçin. Seçilen ateşböceği kaynak spektrum emisyon / uyarma elde edilecek altı karşılık gelen filtre seçimleri ile görünecektir. </li><li> Otomatik pozlama toplama Profil C. Varsayılan ayarlar Alan çok iyi bir çalışma parametreleri ve varsayılan seçenekleri ile en son ekran görünecektir; Ancak gerekirse, bu ayarlar değiştirilebilir. </li><li> [Next] ve dizi editörü penceresinde, 20 nm geniş filtreleri (560 nm, 580 nm, 600 Nm, 620 nm, 640 nm ve 660nm) az altı spektral bölgeleri sırası ile doldurulur. Basın [Sıra Edinme]. İlk filtre (560 nm), yüzey topografyası kurmak için bir lazer galvanometre kullanarak yapılandırılmış bir ışık deseni içerir. </li><li> Aracı Paleti [Yüzey Topografya] sekmesini seçin. Yüzey düzeltme, yeniden yapılanma süreci sırasında oluşturulan herhangi bir keskin açıları için hesap yapılabilir.Varsayılan düşük yumuşatma tavsiye edilir. </li><li> [Oluştur] ve tomografi analiz kutusu görünecektir. Tüm hayvan içeren bir kırpma kutusunu çizin ve ardından [Next] düğmesini tıklatın. </li><li> Eşik aracı seçilen bölge üzerinde mor bir maske olarak görünecektir. Hayvanın fotoğrafını maç için maske otomatik olarak ayarlanması gerekir. Gerekirse, daha uygun hayvan anahat uygun maske ayarlayabilirsiniz.Özellik. </li><li> [Finish] ve yeniden inşa mesh görünecektir. Rekonstrüksiyon sonra sonuçları sekmesinde kaydedilebilir. </li><li> Hayvanın yüzey topografya yaratma ardından, [DLIT 3D İmar devam Aracı Paleti aşağı bırakın. </li><li> [Analiz] sekmesi altında yeniden yapılanma gerçekleştirmek için tüm altı dalga boylarını seçin. 600 altında doymuş piksel veya sayıları vermiştir işaretini kaldırın görüntüler. [Parametreler] sekmesinde ayarları varsayılan olarak bırakın. </li><li> [Özellikler] sekmesi altında, &quot;Muscle&quot; varsayılan seçenek olarak listelenir olmalıdırr Doku Özellikleri ve &quot;Ateşböceği&quot; kaynak spektrum olarak listelenmiş olmalıdır. </li><li> Çözümle sekmesi altında [Yeniden İnşa] ve hayvan yüzey ve sinyal kaynağını karşılık gelen yeniden yapılanma 3D rekonstrüksiyon [Şekil 4] görünmelidir. </li><li> Sinyal konumu ve yoğunluğunu belirlemek için, Araç Paleti 3D Araçlar sekmesinde vokseller düğmesini seçin. <ol><li> Görüntülenen tüm vokseller etrafında bir kare çizin ve toplam akı ölçümlerini hacmi sekmesinin altında gösterilir. </li><li> Seçilen vokseller sinyal konumu belirlemek için [Kütle Merkezi] tıklayın. Hayvan koronal, sagital ve transaksiyal dilim görünür ve [Ölçüm İmleç Display] kullanarak hayvanın yüzeyinin voksel merkezine uzaklık ölçülebilir. </li></ol></li><li> Yaşayan Görüntü Yazılımı Kullanıcı Kılavuzu co-kayıt organı atlaslar ve diğer gelişmiş özellikleri hakkında daha fazla bilgi için bakınız. </li></ol> 6. Data Analysis 3 <ol><li> Görüntü kazanmış ve kaydedildikten sonra, [Gözat] düğmesine tıklayarak ve dosyayı seçerek programın dosya erişim. </li><li> Görüntü bilgileri [View] altında bulunan olabilir → [Bilgi]. </li><li> Faiz (ROI) [ROI Araçlar] düğmesine Bölge Of seçerek sinyal yoğunluğu belirlenebilir. Görüntü görüntü kontrol panelinin sol üst köşesinde açılan listeden &quot;Foton&quot; seçerek [Photon] modu altında analiz edilir emin olun. </li><li> &quot;Tipi&quot; açılır listesinde [Ölçüm ROI] düğmesini seçin. Ilgi yatırım getirisini şekli seçin; seçenekleri Daire, Kare, ve Izgara içerir. Elde edilen imge yoğunluğu tüm alanlarını kapsayacak. </li><li> ROI pozisyon bioluminescent sinyal içeren bölgeye yatırım getirisini şekli seçimi sürükleyerek ayarlanır. </li><li> [Ölçü] düğmesine tıklayarak ROI sinyal yoğunluğu hesaplanır. ROI etiket yoğunluğunu gösterir. ROI yönetilen ve USI kaydedilebilirng Yaşayan Image yazılımı. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar: Başarılı hücre implantasyonu implante hücreleri cerrahi gününde IVIS tayfı kullanılarak saptanabilir açıktır. GL261-luc ve GL261-luc2 hücrelerin her ikisi de saptanabilir, ancak daha yüksek bir seviyeye biyoparlaklık [Şekil 5] luc2 gen sağlayacaktır. , Kısa bir süre implantasyon sonra çekilen görüntüler, arka plan olarak göz ardı edilmesi gereken hayvanın pençeleri ve burun non-spesifik sinyal olabilir. Implantasyon yerinde bulunan sinyal gerçek ve sinyal [Şekil 6] zamanla artacaktır. 6 gün sinyal yoğunluğunda düşüş, tekrarlanabilir ve implante hücrelerin bazı tümör kaybı nedeniyle büyük olasılıkla. Tümör yükü nicel ölçümler sonuçta hayvan hastalığa yenik kadar düzenli olarak artmaya gerektiğini tekrarlanabilir. Ancak, büyüme eğrileri implante hücreleri devlet, ya da kaçınılmaz küçük var büyük ölçüde bağlıdır.<html> implantasyon prosedürü iability. Laboratuvarımız her üç günde bir görüntü implante hayvanlar için seçti. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig1.jpg" /> Fareyi doğru uyuşturulduktan sonra Şekil 1, stereotaktik çerçeve yerleştirilir. Fare kafası ağız kelepçe ile sabitlenir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig2.jpg" /> Şekil 2. cilt, ana anatomik işaretleri bregma, koronal ve sagital sütür de dahil olmak üzere tespit açıldıktan sonra . Burrhole, kafatası nüfuz ve beyin maruz kadar küçük bir miktarda basınç yavaş yavaş, 16 gauge 1 ½ inç iğne büküm bregma sağ 2.3mm yapılır. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig3.jpg" /> Şekil 3 subkutan bir kinetik karşılaştırma (iles/ftp_upload/3403/3403fig3_1.jpg &quot;alt =&quot; Figure3.1 &quot;/&gt;) karşı intraperitoneal ( <img src="/files/ftp_upload/3403/3403fig3_2.jpg" alt="Figure3.2" /> Subkütan luciferase enjeksiyon programını göstermek için ve görüntü aşağıdaki luciferase yönetim için en uygun zamanı belirlemek için) luciferase enjeksiyon yapıldı. Üç dakika luciferase sonra fare, sedasyon IVIS Spectrum aleti yerleştirilir ve biyoparlaklık bir kinetik eğri oluşturmak için bir saat ve bundan sonra her 6 dakika için her 3 dakikada bir görüntülü olarak enjekte edildi. Bu luciferase yönetiminin subkutan rota elimizde bir intraperitoneal üstün olduğu ve hayvanların görüntü için en uygun zaman GL261-luc hücreleri kullanılan luciferase enjeksiyonu takiben yaklaşık 25 dakika olduğunu gösterdi. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig4.jpg" /> 3-Boyutlu bir reconst Şekil 4. Birden çok görünümGL261 luc2 hücreleri intrakranial implantasyonu karışıklık fare iskelet ve beyin ile birlikte kayıtlı. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig5.jpg" /> Şekil 5 GL261-luc hücreleri vs GL261-luc2 hücreleri kaynaklanan tümörler elde Foton sayar. Sonuçlar 5 hayvanların ortalama. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3403/3403fig6.jpg" /> Şekil 6 albino C57BL / 6 fare GL261-luc tümör hücre büyüme grafiği. Biyoparlaklık 3 günde ölçülen ve in vivo foton sayısı karşısında gün implantasyon sonrası olarak çizilir. Fotoğraflar çeşitli zaman noktalarında biyoparlaklık göstermektedir. Renklendirme, tümör hücre sayısı (renk çubuğunun sağ tarafında gösterilir) göre biyoparlaklık bir göstergesidir (piksel yoğunluğu). Hayvan hastalığa yenik sonra beyin diseke edildi ve luciferase ex vivo imag elde etmek için topikal eklendi.e içerlek rakam gösterilmiştir.

<ol>
	<li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology:+neuropathological+characterization+and+tumor+progression.">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li><li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. i. m., Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma.">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li><li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems. , (2010).</li><li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model.">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li></ol>

Bu makalenin Ücretsiz Erişim kaliper Life Sciences tarafından desteklenmektedir.

Hücre inokulum 0,4 mm cep oluşturduktan sonra beyin yüzeyinden 2.6 mm derinlikte demlenir. Iğne doğru yerleştirilmesi ve derinlik sağlamak için bir X-ışını, bir C-Kol ya da benzer bir X-ray görüntü yoğunlaştıran cihazı kullanılarak alınabilir, ancak bu isteğe bağlıdır. Hayvan düzgün sedasyon değilse, ameliyat komplikasyonları, hayvan hücre infüzyonu sırasında hareket edebilir ve bu noktada ortaya çıkabilir. Bu iğne parça hücre karışımı veya kanama sızıntıya neden olabilir. Kaçak hücreler, tümör hücrelerinin ektopik büyümesine neden olur. Burrhole protokolü 4 olarak açıklanan 2.3 mm medial yapılırsa da ponksiyon yapılabilir ventrikül önemli değildir. 2 ul metilen mavisi ile bir fare beslerken ve beyin dokusu diseksiyon infüze boya yerini kontrol etmek için iğne ve hücre yayılmasını doğru yerleştirme test edildi. Bu protokolde, in vivo görüntüleme sistemi ve t IVIS SpektrumBu alet ile kullanılmak üzere tasarlanmış Görüntü yazılımı (v 4.0) yaşamak. (Kaliper Life Sciences). In vivo görüntüleme sistemi, görüntü analiz araçları herhangi bir karşılaştırılabilir benzer sonuçlar elde etmek için kullanılabilir. Bu sistemler, deneysel bir intrakranial tümör büyümesini takip geleneksel manyetik rezonans görüntüleme (MRG) üzerinden bazı avantajlar sağlar. 2 araçların en belirgin göreli maliyetler hayvan MRI makineleri çok daha pahalı ve genellikle yetenekli bir MRG teknisyen hizmetleri gerektirir. In vivo görüntüleme, burada açıklandığı gibi son kullanıcı tarafından yapılabilir. MRI veri kantitatif zaman alıcı ve biraz zan ise biyoparlaklık verileri, kantitatif. Ayrıca, MR görüntüleri tümör hücrelerinin yanı sıra ödem ve inflamasyon ve tedavi etkisi tümör ayırmak zor olabilir. Bu nedenlerden dolayı, büyüyen tümörün doğru hacimsel ölçümler elde etmek zor olabilir. Biyoparlaklık ATP, Bu nedenle sadece canlı tümör hücrelerinin tümör boyutu verilerine katkıda bulunmaktadır. Buna rağmen bir makine varsa, MR için bazı avantajları vardır. Hücreler, MRG tarafından görüntülenebilmekte bioluminescent işaretleyici ile etiketlenmesine gerek yoktur. Peri-tümöral ödem görselleştirmek için yeteneği bazı deneysel protokoller için bir avantaj olabilir. Her iki teknolojinin kullanılabilir duruma geldiğinde, her iki teknolojinin gücü birini kullanarak diğer kullanılmasına engel olmadığını, bu yüzden verilerin yanı sıra aynı hayvan peri-tümöral ödem ve inflamasyon varlığı, tümör büyüme elde edilebilir. araştırmacı.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif ya da tedarik Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> GL261-luc2 BioWare Ultra </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Fötal Buzağı Serumu (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu salin (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Fare </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Akwa Tears Yağ Oftalmik merhem </td><td> Akorn Inc. </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (ketamin hidroklorür) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (ksilizin hidroklorür) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük Hayvan Stereotaksik Enstrüman </td><td> Kopf Aletleri </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> SYS-Micro4 Kontrolörü ile UltraMicroPump </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> UMP3-1 </td><td> Eğer mevcut değilse, elle demlenmeye mümkün </td></tr><tr><td> 26 gauge 10μl şırınga iğnesi eğimli </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Forseps </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Hassas Glide İğne </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi Bıçak Kolu </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Boyut 15 Bıçak </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 Vicryl Sütür </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Kemik Wax </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidin-İyot Swab stickler </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-luciferase Potasyum Tuz </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forane (İsofluranın) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Mikroskop </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Herhangi bir cerrahi mikroskop yeterli olacaktır </td></tr><tr><td> Isteğe bağlı anestezi sistemi ile Xenogen IVIS Spectrum </td><td> Kaliper Yaşam Bilimleri </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

intracranial implantation with subsequent 3d in vivo bioluminescent imaging of murine gliomas

Insan glioblastoma multiforme (GBM) özellikleri birçok özetlediği fare glioma 261 (GL261) in vivo modeldir sistemi olarak kabul edilmektedir. Hücre hattı başlangıçta C57BL / 6 singeneik fare suşu 1 3-metil-cholantrene intrakranial enjeksiyonu ile indüklenen; bu nedenle, immünolojik yetkili C57BL / 6 fareler kullanılabilir. GL261 kullanırken, aşağıdaki protokolü, herhangi intrakraniyal bir fare tümör modeli implantasyon ve izleme için kullanılabilir. GL261 hücrelerin stabil bir şekilde ifade ateşböceği lusiferaz (GL261-luc) için tasarlanmış. Biz de CMV organizatörü ifade luc2 gen istikrarlı transfeksiyon parlak GL261-luc2 hücre hattı oluşturdu. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr fareler Ulusal Kanser Enstitüsü, Frederick, MD (C57BL / 6 albino varyant), siyah deri ve kürk neden ışık zayıflama ortadan kaldırmak için kullanılmıştır. Albino C57BL / 6 farelerin kullanımı ile; in vivo görüntüleme IVIS Spektrum kullanarak in vivo imsistemi yaşlanma gün (Kaliper Yaşam Bilimleri, Hopkinton, MA) implantasyonu mümkün. GL261-luc ve GL261-luc2 hücre hatları ebeveyn GL261 hücreler olarak aynı in vivo davranış gösterdi . Insan GBMs paylaşılan histolojik özellikleri ve bu fare modeli bazıları şunlardır: tümör nekroz, pseudopalisades, neovaskülarizasyon, istila, hiperselüler ve inflamasyon 1. Implantasyon öncesinde hayvanlara bir stereotaktik aparatı ve bir kesi yerleştirilen bir intraperitoneal ketamin enjeksiyonu (50 mg / kg) ksilizin (5 mg / kg) ve buprenorfin (0.05 mg / kg), anestezi edildi üzerinden bir neşter ile yapıldı kranial orta hat. Burrhole bregma ve orta hat sağ için 2.3mm 0.1mm posterior yapıldı. Bir iğne 2.6mm derinliği 3mm ve geri 0.4mm derinliğe yerleştirildi. İki ul GL261-luc veya GL261 luc2 hücreleri (10 7 hücre / ml), 3 dakika boyunca infüze edildi . Burrhole kapatıldıbonewax ve kesi dikildi. Stereotaktik implantasyonu takiben bioluminescent hücreler implantasyon günden itibaren saptanabilir ve tümör IVIS Spectrum enstrüman, 3D görüntü rekonstrüksiyonu özelliği kullanılarak analiz edilebilir. Hayvanlar 150μg luciferase / görüntüleme için önce kg vücut ağırlığı 20 dakika subkütan enjeksiyon alırsınız. Tümör yükü, zaman içinde ortalama tümör biyoparlaklık kullanarak miktarı. Tümör taşıyan farelere morbidite değerlendirmek için günlük olarak gözlenmiş ve aşağıdaki belirtilerden biri veya daha fazlası mevcut olduğunda ötenazi: uyuşukluk, ambulasyon yetmezliği, hunched duruş, damat başarısızlık, iştahsızlık&gt;% 10 kilo kaybı ile sonuçlanan. Tümörler tüm hayvanların nekropsi belirgindi.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas at JoVE.com

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

İntrakraniyal GL261 hücrelerin içine C57BL / 6 farelerin implantasyon birçok insan glioblastoma multiforme işaretlerinden özetlemek malign gliomlar üretir. Biz bizi kullanmasına izin stably lusiferaz ifade GL261 hücreleri kullandı<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme tümör progresyonu takip etmek. Ameliyat ve 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Görüntüleme göstermiştir.

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

intracranial-implantation-with-subsequent-3d-vivo-bioluminescent

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

20.4K Görüntüleme.  Barrow Neurological Institute of St. Joseph’s Hospital and Medical Center. 中文

Video: Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most commonly used procedure for human tumor xenograft establishment consisted of the collection of cells from culture flasks, followed by the subcutaneous injection of the collected cells in immunocompromised mice. Whereas this approach still sees frequent use in many laboratories, there has been a significant shift in emphasis over the past decade towards orthotopic xenograft establishment, which, in the instance of brain tumors, requires tumor cell injection into appropriate neuroanatomical structures. Because intracranial xenograft establishment eliminates the ability to monitor tumor growth through direct measurement, such as by use of calipers, the shift in emphasis towards orthotopic brain tumor xenograft models has necessitated the utilization of non-invasive imaging for assessing tumor burden in host animals. Of the currently available imaging methods, bioluminescence monitoring is generally considered to offer the best combination of sensitivity, expediency, and cost. Here, we will demonstrate procedures for orthotopic brain tumor establishment, and for monitoring tumor growth and response to treatment when testing experimental therapies.

Luciferase-modified human brain tumor xenografts can be established intracranially in athymic mice, with subsequent monitoring of tumor growth and response to therapy using bioluminescence imaging. In combination with survival analysis, bioluminescence monitoring is an essential research tool for pre-clinical testing of therapies being considered for treating brain tumors.

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

Transplantation models using human brain tumor cells have served an essential function in neuro-oncology research for many years. In the past, the most ...

Nörobilim

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There is little knowledge about in situ, in vivo, tumor hypoxia during intracranial development of malignant brain tumors because of lack of efficient means to monitor it in these deep-seated orthotopic tumors. Bioluminescence imaging (BLI), based on the detection of light emitted by living cells expressing a luciferase gene, has been rapidly adopted for cancer research, in particular, to evaluate tumor growth or tumor size changes in response to treatment in preclinical animal studies. Moreover, by expressing a reporter gene under the control of a promoter sequence, the specific gene expression can be monitored non-invasively by BLI. Under hypoxic stress, signaling responses are mediated mainly via the hypoxia inducible factor-1&alpha; (HIF-1&alpha;) to drive transcription of various genes. Therefore, we have used a HIF-1&alpha; reporter construct, 5HRE-ODD-luc, stably transfected into human breast cancer MDA-MB231 cells (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc). In vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay is performed by incubating the transfected cells in a hypoxic chamber (0.1% O2) for 24 hr before BLI, while the cells in normoxia (21% O2) serve as a control. Significantly higher photon flux observed for the cells under hypoxia suggests an increased HIF-1&alpha; binding to its promoter (HRE elements), as compared to those in normoxia. Cells are injected directly into the mouse brain to establish a breast cancer brain metastasis model. In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics is initiated 2 wks after implantation and repeated once a week. BLI reveals increasing light signals from the brain as the tumor progresses, indicating increased intracranial tumor hypoxia. Histological and immunohistochemical studies are used to confirm the in vivo imaging results. Here, we will introduce approaches of in vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay, surgical establishment of a breast cancer brain metastasis in a nude mouse and application of in vivo bioluminescence imaging to monitor intracranial tumor hypoxia.

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Bioluminescence imaging of hypoxia inducible factor-1&alpha; activity is applied to monitor intracranial tumor hypoxia development in a breast cancer brain metastasis mouse model.

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Tıp

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting immunodeficient mice subcutaneously with cancer cells and measuring the tumor mass after it becomes visible and palpable. Orthotopic injections of cancer cells aim to introduce the xenograft in the microenvironment that most closely resembles the tissue of origin of the tumor being studied. Brain cancer research requires intracranial injection of cancer cells to allow the tumor formation and analysis in the unique microenvironment of the brain. The in vivo imaging of intracranial xenografts monitors instantaneously the tumor mass of orthotopically engrafted mice. Here we report the use of fluorescence molecular tomography (FMT) of brain tumor xenografts. The cancer cells are first transduced with near infrared fluorescent proteins and then injected in the brain of immunocompromised mice. The animals are then scanned to obtain quantitative information about the tumor mass over an extended period of time. Cell pre-labeling allows for cost effective, reproducible, and reliable quantification of the tumor burden within each mouse. We eliminated the need for injecting imaging substrates, and thus reduced the stress on the animals. A limitation of this approach is represented by the inability to detect very small masses; however, it has better resolution for larger masses than other techniques. It can be applied to evaluate the efficacy of a drug treatment or genetic alterations of glioma cell lines and patient-derived samples.

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Orthotopic intracranial injection of tumor cells has been used in cancer research to study brain tumor biology, progression, evolution, and therapeutic response. Here we present fluorescence molecular tomography of tumor xenografts, which provides real-time intravital imaging and quantification of a tumor mass in preclinical glioblastoma models.

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Kanser Araştırmaları

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality treatment consisting of surgical resection, post-operative radiation therapy and temozolomide chemotherapy 1. New therapeutic approaches are clearly needed to improve patient survival and quality of life. The development of more effective treatment strategies would be aided by animal models of GBM that recapitulate human disease yet allow serial imaging to monitor tumor growth and treatment response. In this paper, we describe our technique for the precise stereotactic implantation of bio-imageable GBM cancer cells into the brains of nude mice resulting in tumor xenografts that recapitulate key clinical features of GBM 2. This method yields tumors that are reproducible and are located in precise anatomic locations while allowing in vivo bioluminescent imaging to serially monitor intracranial xenograft growth and response to treatments 3-5. This method is also well-tolerated by the animals with low perioperative morbidity and mortality.

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

We describe an integrated method for the precise, stereotactic implantation of human glioblastoma multiforme cells into the brains of nude mice and subsequent serial in vivo imaging to monitor growth and response to treatment of the resultant xenografts.

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Farelerde 2P-IVM Kullanarak Beyin Tümörlerinde Nanopartiküllerin Gerçek Zamanlı Takibi

Two-Photon Intravital Microscopy of Glioblastoma in a Murine Model

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the accumulation and distribution of macromolecules in brain tumors in vivo would greatly enhance our ability to understand and optimize drug delivery in preclinical models. This protocol describes a method for real-time in vivo tracking of intravenously administered fluorescent-labeled nanoparticles with two-photon intravital microscopy (2P-IVM) in a mouse model of glioblastoma (GBM).
The protocol contains a multi-step description of the procedure, including anesthesia and analgesia of experimental animals, creating a cranial window, GBM cell implantation, placing a head bar, conducting 2P-IVM studies, and post-surgical care for long-term follow-up studies. We show representative 2P-IVM imaging sessions and image analysis, examine the advantages and disadvantages of this technology, and discuss potential applications.
This method can be easily modified and adapted for different research questions in the field of in vivo preclinical brain imaging.

Yazar Gündemi: Glioblastoma Tedavisinde İlaç Dağıtımını ve Erken Teşhisi Optimize Etmek için Multimodal Görüntüleme Stratejileri

We present a novel approach for two-photon microscopy of the tumor delivery of fluorescent-labeled iron oxide nanoparticles to glioblastoma in a mouse model.

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

The delivery of intravenously administered cancer therapeutics to brain tumors is limited by the blood-brain barrier. A method to directly image the ...

<meta charset="utf8"></head><body>Murin Glioblastomunda Görüntü Kılavuzluğunda Tedavi Uygulaması için Demir Oksit Nanopartikülleri

Nanoparticle Delivery of an Oligonucleotide Payload in a Glioblastoma Multiforme Animal Model

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and aggressive form of primary brain malignancy for which there is no cure. The blood-brain barrier is a significant hurdle in the delivery of therapies to GBM. Reported here is an image-guided, iron oxide-based therapeutic delivery nano platform capable of bypassing this physiological barrier by virtue of size and accumulating in the tumor region, delivering its payload. This 25 nm nano platform consists of crosslinked dextran-coated iron oxide nanoparticles labeled with Cy5.5 fluorescent dye and containing antisense oligonucleotide as a payload. The magnetic iron oxide core enables tracking of the nanoparticles through in vivo magnetic resonance imaging, while Cy5.5 dye allows tracking by optical imaging. This report details the monitoring of the accumulation of this nanoparticle platform (termed MN-anti-miR10b) in orthotopically implanted glioblastoma tumors following intravenous injection. In addition, it provides insight into the in vivo delivery of RNA oligonucleotides, a problem that has hampered the translation of RNA therapeutics into the clinic.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Glioblastoma Tedavisi için Demir Oksit Nanopartikülleri ile Yenilikçi Kanser Tedavileri

The blood-brain barrier is a significant hurdle in the delivery of therapies for glioblastoma, a disease for which there is no cure. Here, we report an in vivo image-guided iron oxide therapeutic nano platform that can bypass this physiological barrier by virtue of size and accumulate in the tumor.

Bir Glioblastoma Multiforme Hayvan Modelinde Bir Oligonükleotid Yükünün Nanopartikül Teslimi

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common and aggressive form of primary brain malignancy for which there is no cure. The blood-brain barrier is a ...

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

Transkript

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Bir Glioblastoma Multiforme Hayvan Modelinde Bir Oligonükleotid Yükünün Nanopartikül Teslimi