<ol style="list-style-type:upper-alpha;"><li> Fantom lezyon hazırlanması (fantom için yaklaşık 38-48 saat öncesinde ince iğne aspirasyon biyopsisi yeterlilik (Şekil 1) gerçek pratik oturumu hazırlamak veya ince iğne aspirasyon biyopsisi Kaynak, ABD &#39;AV Phantom&#39; kullanmak için hazır kullanmaktadır. Fantom lezyon (donmadan soğutma altında saklanan) hatta 3 - 4 gün önce hazırlanan oturumda pratik tutulmalıdır. </li><li> FNA yeterlilik Uygulama: Shidham THFV (Fonksiyonel Vana Doku Harvester) (FNA Kaynak, ABD) kullanarak prosedürü gösterdi olmasına rağmen, başka bir ince iğne aspirasyon biyopsisi sistemi (Şekil 2) uygulamak için kullanılan olabilir. </li><li> Serme ve cam slaytlar aspirat işleme (Şekil 3). </li></ol> Gerekli malzeme <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Clear silikon kauçuk, birçok inşaat / ev geliştirme mağazaları kalafat mevcuttur. GETM, DAP, Kırmızı Şeytan, Beyaz Yıldırım, ve yerel zincir markaları da dahil olmak üzere birçok marka mevcuttur. Ohio, ABD, Clear Silikon Kauçuk, Beyaz Yıldırım Ürünler, Cleveland, <a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a> ) </li><li> Caulking Gun </li><li> Bir parça plastik wrap sayfasının (Saran Plus Wrap, SC Johnson &amp; Son Inc, Racine, WI, ABD Cling <a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp</a> </li><li> Lateks eldiven </li><li> Geniş çaplı muz ya da sosis. </li><li> Kalın karton, akrilik levha veya diğer firma ve düz taban plakası (yaklaşık 6 inç X 6 inç). </li><li> FNA ekipmanları performans <ul><li> 25 gauge derialtı iğneler </li><li> Shidham THFV (veya ince iğne aspirasyon biyopsisi gerçekleştirmek için diğer bileşenler) </li><li> cam slaytlar </li><li> renklendirme kitleri </li></ul></li></ol> Adım adım ayrıntıları Fantom lezyon A. Hazırlama (FNA yeterlilik (Şekil 2) uygulamak için 1 ila 2 gün önce fantom hazırlamak veya ince iğne aspirasyon biyopsisi Kaynak, ABD &#39;AV Phantom&#39; kullanmak için hazır kullanmaktadır. <ol><li> Destekleme kurulu 6 X 6 inç boyutunda kesin. </li><li> &#39;Fantom lezyon çekirdek&#39; (muz ya da sosis) 2.5 inç uzun segment kesin. </li><li> 0,5 inç taban plakası kalafat kalın bir tabaka boşaltınız. </li><li> Kalafat bu katman hafifçe &#39;fantom lezyon çekirdek&#39; tuşuna basın. </li><li> Hava kabarcıklarını yakalama olmadan, kalafat höyüğün tamamen gömülü olduğu, böylece &#39;fantom lezyon çekirdek&#39; üzerinde daha fazla kalafat ekleyin . </li><li> Ayarlayın ve eldivenli eli ile &#39;hayalet lezyon çekirdek üzerinde kalafat şekil. </li><li> Plastik wrap 6 X 6 inç boyutunda parça alın ve kalafat höyük kapak ve höyüğün yüzey, temiz, eldivenli el ile düzgün konveks bir yapılandırma içine ayarlamak. </li><li> Sıcak bir yerde, ürün talimatları altında belirtilen kuruma süresi daha uzun 6-8 saat için kalafat höyük tedavi, (genellikle 24 saat) izin verin. </li><li> Kür sonra, kalafat firma olmak, ve plastik ambalaj malzemesi ile kolaylıkla sıyrılır olabilir. </li><li> FNA fantom lezyon kalafat tüm höyük tamamen &#39;hayalet lezyon çekirdek&#39; (muz ya da sosis) içeren merkezinde tedavi yaklaşık 8 saat sonra ince iğne aspirasyon biyopsisi prosedürü uygulamak için kullanılmak üzere hazır. </li></ol> B. AV Phantom lezyon üzerine ince iğne aspirasyon biyopsisi yeterlilik Pratiği. Yüksek kalite elde etme konusunda herhangi bir yaklaşım, kaliteli doğrudan sitoloji smear yeterli FNA aspiratlar kritik aşağıdaki adrese noktaları <ol style="list-style-type:upper-roman;"><li> Iğne gibi prosedürün başlık ima, ince iğneler (yüksek göstergesi sayısı) en az kan sulandırma ile daha iyi aspiratları verim. Faydaları ve kısıtlamaları eleştiren bir denge için, 22 - 25 gauge iğne FNA aspirat kalitesini etkileyen iğne optimal mekanik stabilite için tercih edilir. </li><li> Ince iğne aspirasyon biyopsisi sırasında uygun vakum uygulama ve bırakın sıraları kontrol prosedürü iğne her inme ile örneklenen hücrelerin iğne hub doğru ilerlemek için kritik öneme sahiptir. Ancak, aspire edilen materyal şırınga ile iğne aspirasyon montaj alanına ulaşmak için izin gerekir. Buna engel yoksa, smear (Ancak, bu malzeme, hücre blok hazırlanması için kullanılan ya da konsantrasyonu gibi sitospin gibi yöntemler, filtre yöntemleri, ya da son sıvı bazlı sitoloji preparatları olabilir) yapmak için malzeme almak için zor olabilir. </li><li> Mikrobiyoloji için steril geçer göndererek, aspire edilen numune işleme uygun beceri, doğrudan yayma hazırlanması ve seçmeli immünsitokimya, lenfoproliferatif lezyonlar immunofenotip için seçmeli flow sitometri için hücre blok hazırlama gibi yardımcı testler için uygun triaging yerinde yeterlilik değerlendirmesi de dahil olmak üzere gelişmekte olan çalışmalar yapmak ve çiftleşmekmoleküler testler için riyali (sitogenetik, vb). </li></ol> Ba FNA prosedürü (Shidham Kullanıcı THFV ile gösterilir [1] (ince iğne aspirasyon biyopsisi Kaynak, ABD), ancak, başka bir ince iğne aspirasyon biyopsisi sistemi uygulamak için kullanılan olabilir) Sahne (Şekil 3,4,5). <ol><li> Vanası kapalı FNA montaj hazırlayın. </li><li> Lezyonun bulun ve lezyonun iğne ucu takın. </li><li> Lezyon içine her fro felç lezyon temsilcisi hücresel bileşenleri aspirat, vakum, iğne ucu ile bağlamak için vanayı açın. </li><li> Lezyonun vakum ve örnek farklı alanlarda farklı yönlere lezyon içine iğne takarak koruyun. </li><li> Iğne lümen vakum bağlantısını kesmek için vanasını kapatın. </li><li> Basınç ortam koşulları (Örneğin kısa bir süre için iğne Şırınga-valf kesme &#39;THFV&#39; olarak dahili adımlar, özel bir cihaz kullanılır ve tekrar takın, bu ve diğer adımlar BA1 gelen BA6 aracılığıyla uyumlu beraberliği otomatik valf sistemi farklı adımları izleyerek) [1]. </li><li> Vana kapalı hub sonunda biraz negatif basınç olmadığı sürece lezyon içine kılcal eylem örneğinin kaybını önlemek için, lezyonun iğne çıkarın. </li><li> Doğrudan smear (aşağıya bakınız) (Şekil 6) hazırlamak için cam slayt üzerine aspire içerik yerinden oynatın. </li></ol> Uygun triyaj ile çekilen örnek İşleme Bb. Cam slaytlar aspirat Yayılma ve kaliteli direkt smear (Şekil 6) hazırlanması uygun boyama ve triyaj (Şekil 7,8) izledi. <ol><li> Cam slayt yerinden aspirat bir damla olarak gösterilen çeşitli yaklaşımlar (Şekil 6) [2] tarafından yayılır. Her zamanki yaklaşımı &#39;bir&#39;. Örnek bazı microfragments ile seyreltilmiş kan Ancak, aşırı kan devirme slayt tarafından boşaltılır ve microfragments sonra &#39;a&#39; için benzer bu slayt ve ikinci cam slayt arasında yayılır. Aspirat gibi lenfoproliferatif lezyonlar microfragments olmadan ağırlıklı bir süspansiyon ise, &#39;b&#39; ya da &#39;c&#39; e benzer yayılır. </li><li> Smear yerinde yeterlilik değerlendirilmesi sırasında farklı boyama yöntemleri için yollar çeşitli işleme ve sabit olabilir. Ancak, en iyi yaklaşım kurumasını tüm smear. Havada kurutulduktan sonra leke Romanowski lekeleri (örneğin Difff-Quik leke, Wright leke olarak), metanol fiksasyon sonra veya Pap smear lekeli olabilir tuzlu rehidrasyon ve post-fiksasyon (% 95 etanol veya tercihen 5 ile% 95 etanol % asetik asit) [3]. Obscuring kan nedeniyle müdahalenin ortadan kaldırılması önemli bir yarar [3]. </li><li> Yerinde yeterlilik değerlendirilmesi sırasında, ilk cytomorphologic bulgulara göre, ek triyaj (seçmeli hücre bloğu, elektron mikroskobu, mikrobiyoloji kültürler, flow sitometri, moleküler testler sitogenetik vb gibi) olarak belirtilen önerilir. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="Şekil 1" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">Şekil 1&#39;de bir büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız</a> . Şekil 1 FNA yeterlilik uygulamak için AV Phantom hazırlanması için gerekli malzeme (* kalafat tam kür sonra çıkarırken, sonunda kalafat sopa vermedi Saran plastik örtü kullanın.) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="Şekil 2" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">Şekil 2&#39;de büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 2 AV Phantom lezyon hazırlanması <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="Şekil 3" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">Şekil 3 büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 3 FNA prosedürü Kritik adımlar. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="Şekil 4" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">Şekil 4 büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 4. Kritik adımların EUS-FNA Özeti * (bkz. Şekil 3) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="Şekil 5" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">Şekil 5 büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> FNA proc kritik adımlar Şekil 5 Tuzaklaredure. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="Şekil 6" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">Şekil 6, bir büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 6 iki slaytlar arasındaki ince iğne aspirasyon biyopsisi örneğinin doğrudan smear hazırlanması. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="Şekil 7" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">Şekil 7 büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 7 Islak sabit karşı Hava-kurutulmuş smear. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="Şekil 8" /> <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">Şekil 8&#39;de bir büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Şekil 8. Islak sabit karşı Hava-kurutulmuş smear.

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

İnce iğne aspirasyon biyopsisi (İİAB) çeşitli tümörler ve lezyonların doku tanısı için ekonomik, güvenli ve hızlı bir minimal invaziv bir tekniktir yaygın olarak yapılmaktadır. Bu prosedürde bir 18-27 gauge iğne lezyon içine yerleştirilir, sadece kapiler eylem biçimi minimal yaklaşık 10 ml kadar değişken yoğunluk kontrollü vakum (emme) altında lezyonun farklı alanlarda birden çok kez ileri ve geri taşındı tanı doku malzeme almak için şırınga vakum. Daha fazla sayıda ince iğne doğrudan smear hazırlamak için iyi bir sitoloji malzeme almak için tercih edilir. Hücre bloğu, akış sitometri, elektron mikroskobu, sitogenetik, mikrobiyoloji kültürleri vb işlem basit olmasına rağmen, uygun uygulama ve vakum serbest bırakılması ile uyumlu bir şekilde gerekli adımları çeşitli adımlar kontrol için uygun örnek 18G alır daha geniş bir iğne son derece önemli. optimum sonuçlar için. Özel olarak tasarlanmış yüksek verim iğneler, geleneksel derialtı iğneler veya modifikasyonları olmayan durumu nedeniyle bu yordamı gerçekleştirmek için kullanılır. Ancak, derialtı iğneler, geleneksel bir şekilde kullanılması durumunda düşük bir örnek verim önde gelen birçok sınırlamalar var. Özel şırınga sardı gereksinimi genellikle prosedürün karmaşıklığı ekler. Bu nedenle, ticari olarak uygun İİAB iğne cihazın olmaması nedeniyle, bu çok yönlü bir işlemdir yetersiz numune alma sık görülen bir sorun uğrar. Son zamanlarda, tekrarlanabilirlik ile verimi artan bir cihaz rapor edilmiştir [1]. Buna ek olarak, şu anda sakinleri ve arkadaşlarının da dahil olmak üzere eğitim, sağlık personeli tarafından İİAB performans yeterlilik uygulamak için uygun bir model eksikliği vardır. Biz bir parça karaciğer İİAB yeterlilik uygulamak için lateks eldiven doldurulmuş taze sığır standardize bir model vardı. Ancak, bu model kısa bir sürede organize etmek zordur. Taze sığır karaciğer İhale genellikle sınırlayıcı çıkmaz. Buna ek olarak, karaciğer işleme önemli bir beraberlik olarak geri kirlenme ile ilgili faktörler tanıtmak olabilir. Lateks eldiven için birkaç iğne azabı sonra sızıntı eğilimi antrenman sırasında potansiyel karmaşa yol açar. Biz, piyasada bulunan bir silikon kauçuk kalafat ve diğer kolay kullanılabilir bir malzeme küçük bir parça muz (veya sosis) katıştırma bir roman değil, basit bir yöntem rapor ve açıklar. İİAB fantom böylece klinik ortamda bir lezyon gerçek İİAB prosedürü eşdeğer gömülü örnek malzeme aspirasyonu izin vakumlu korur. Bu video, İİAB fantom lezyon ve İİAB prosedürü uygulayarak prosedürü göstermektedir. Aynı zamanda yayma hazırlama ve boyama [2,3] de dahil olmak üzere alınan numune kısa işleme göstermektedir. Kalafat tedavi için zaman aldığından, fantom lezyon pratik oturumu öncesinde yaklaşık 24 ile 48 saat önceden hazırlanmış olmalıdır. Karşılaştırılabilir fantom lezyon kullanıma hazır (FNA Kaynak, ABD) ticari bir kaynak elde edilebilir. İİAB yeterlilik uygulamak için fantom lezyon klinik ortamda hastalarda İİAB performans başından önce sakinleri ve arkadaşlarının eğitim için kullanılıyor olabilir.

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

Şu anda, sakinleri ve arkadaşlarının da dahil olmak üzere sağlık çalışanlarının ince iğne aspirasyon biyopsisi (İİAB) prosedürü uygulamaya uygun fantom model yoktur. Geçmişte, biz standart uygulamak için İİAB taze sığır karaciğer içeren lateks eldiven oluşan bir model. Ancak, bu model en zorlu yönü taze sığır karaciğer ihale ile, organize ve kısa sürede hazırlamak için zordur. Kirlenme ile ilgili sorunları karaciğer ele, aynı zamanda önemli bir beraberlik. Buna ek olarak, birkaç iğne sonra Eldiven malzemesi sızıntıları karışıklık sonucu, geçer. Biz, ticari olarak satılan silikon kauçuk kalafat, sosis ya da muz küçük bir parça gömme bir roman basit bir yöntem kurduk. Bu model, gerçek bir İİAB prosedürü klinik kitle lezyonları benzeyen gömülü örnekten malzeme vakum mühür ve aspirasyon, tutma sağlar. Iğne hub aspire edilen materyal yayma hazırlama ve boyama ek yeterlilik kolaylaştırılması, gerçek bir İİAB işlemi sırasında satın alınan örnekler benzer işlenebilir.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies at JoVE.com

Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

Kursiyerler tarafından yapılan ince iğne aspirasyon biyopsisi (İİAB) Uygulama kolay ulaşılabilir, uygun lezyon olmaması nedeniyle nispeten zordur. İİAB prosedür ve mastering yeterlilik uygulamak için bir AV hayalet lezyonun hazırlanması nispeten kolaydır.

Hazırlık ve ince iğne aspirasyon biyopsilerinin Pratik Phantom Lezyonlar kullanma

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

preparation-using-phantom-lesions-to-practice-fine-needle-aspiration

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

17.8K Görüntüleme.  University of Wisconsin - Milwaukee. Kursiyerler tarafından yapılan ince iğne aspirasyon biyopsisi (İİAB) Uygulama kolay ulaşılabilir, uygun lezyon olmaması nedeniyle nispeten zordur. İİAB prosedür ve mastering yeterlilik uygulamak için bir AV hayalet lezyonun hazırlanması nispeten kolaydır.

Video: Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Biyoloji

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

Western Blot: Numune Hazırlama Algılama

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

Gelişmiş protein-protein etkileşimleri ve Kinetik DNA lezyonlar, çalışmaya Confocal mikroskobu teknikleri

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

Kas Biyopsilerinde İmmünlabelling Miyofiber Dejenerasyon

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

Dev Virüs Karışım Ayırma için Floresan-Aktive Hücre Sıralama alternatif bir strateji olarak Tek Hücreli Mikro-aspirasyon

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Isolating Myofibrils from Skeletal Muscle Biopsies and Determining Contractile Function with a Nano-Newton Resolution Force Transducer

Striated muscle cells are indispensable for the activity of humans and animals. Single muscle fibers are comprised of myofibrils, which consist of serially linked sarcomeres, the smallest contractile units in muscle. Sarcomeric dysfunction contributes to muscle weakness in patients with mutations in genes encoding for sarcomeric proteins. The study of myofibril mechanics allows for the assessment of actin-myosin interactions without potential confounding effects of damaged, adjacent myofibrils when measuring the contractility of single muscle fibers. Ultrastructural damage and misalignment of myofibrils might contribute to impaired contractility. If structural damage is present in the myofibrils, they likely break during the isolation procedure or during the experiment. Furthermore, studies in myofibrils provide the assessment of actin-myosin interactions in the presence of the geometrical constraints of the sarcomeres. For instance, measurements in myofibrils can elucidate whether myofibrillar dysfunction is the primary effect of a mutation in a sarcomeric protein. In addition, perfusion with calcium solutions or compounds is almost instant due to the small diameter of the myofibril. This makes myofibrils eminently suitable to measure the rates of activation and relaxation during force production. The protocol described in this paper employs an optical force probe based on the principle of a Fabry-P&#233;rot interferometer capable of measuring forces in the nano-Newton range, coupled to a piezo length motor and a fast-step perfusion system. This setup enables the study of myofibril mechanics with high resolution force measurements.

Presented here is a protocol to assess the contractile properties of striated muscle myofibrils with nano-Newton resolution. The protocol employs a setup with an interferometry-based, optical force probe. This setup generates data with a high signal-to-noise ratio and enables the assessment of the contractile kinetics of myofibrils.

İskelet Kas Biyopsilerinden Miyofibrillerin İzlenmesi ve Nano-Newton Çözünürlük Transdüseri ile Kontraktil Fonksiyonun Belirlenmesi

Striated muscle cells are indispensable for the activity of humans and animals. Single muscle fibers are comprised of myofibrils, which consist of ...

Collection of Skeletal Muscle Biopsies from the Superior Compartment of Human Musculus Tibialis Anterior for Mechanical Evaluation

The mechanical properties of contracting skeletal fibers are crucial indicators of overall muscle health, function, and performance. Human skeletal muscle biopsies are often collected for these endeavors. However, relatively few technical descriptions of biopsy procedures, outside of the commonly used musculus vastus lateralis, are available. Although the biopsy techniques are often adjusted to accommodate the characteristics of each muscle under study, few technical reports share these changes to the greater community. Thus, muscle tissue from human participants is often wasted as the operator reinvents the wheel. Expanding the available material on biopsies from a variety of muscles can reduce the incident of failed biopsies. This technical report describes a variation of the modified Bergstr&#246;m technique on the musculus tibialis anterior that limits fiber damage and provides fiber lengths adequate for mechanical evaluation. The surgery is an outpatient procedure that can be completed in an hour. The recovery period for this procedure is immediate for light activity (i.e., walking), up to three days for the resumption of normal physical activity, and about one week for wound care. The extracted tissue can be used for mechanical force experiments and here we present representative activation data. This protocol is appropriate for most collection purposes, potentially adaptable to other skeletal muscles, and may be improved by modifications to the collection needle.

This technical report describes a variation of the modified Bergstr&#246;m technique for the biopsy of the musculus tibialis anterior that limits fiber damage.

Mekanik Değerlendirme için İnsan Musculus Tibialis Anterior Üstün Bölmesi İskelet Kas Biyopsileri Toplama

The mechanical properties of contracting skeletal fibers are crucial indicators of overall muscle health, function, and performance. Human skeletal muscle ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

ÇiftLeşme Bal Arısı Kraliçeleri için Tarımsal Kimyasal Riskin Değerlendirilmesi

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

Hedefler Altında Bölünme ve Etiketleme Kullanılarak Bitkilerde H3K4me3 Modifikasyonunun Profillenmesi

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Kök Eksüdalarında Rhizobacterial Kemoattractants'ın Hızlı Tanımlanması için Geliştirilmiş Bir Kemotaksi Tahlili

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...