Это исследование направлено на совершенствование методов отбора проб молока в исследованиях лактации, особенно у мышей. Мы представляем метод, который преодолевает такие проблемы, как потеря пробы, ограниченный объем и трудоемкие процессы, предлагая оптимизированное решение для сбора молока грызунов и ценный инструмент для исследователей в этой области. Одной из самых больших проблем при проведении исследований на мышах является их небольшой размер, особенно когда речь идет о отборе проб биожидкостей, таких как молоко.
Трудно получить достаточный объем без объединения образцов или ручного сбора двух человек, что делает этот процесс менее практичным во многих случаях. Наш протокол упрощает сбор молока, позволяя одному человеку собрать достаточное количество молока менее чем за 10 минут с помощью легкодоступных лабораторных инструментов. В отличие от других методов, он сводит к минимуму потери проб благодаря непрерывному всасыванию, втягивая молоко непосредственно в сборные пробирки, экономя время и сохраняя объем для анализа.
Для начала прикрепите один конец трубки из ПВХ внутреннего диаметра 5/32 дюйма к вакуумному насосу и закрепите крепление лентой. С помощью прямого соединителя с зазубринами подсоедините другой конец трубки из ПВХ внутреннего диаметра 5/32 дюйма к трубке из ПВХ внутреннего диаметра 1/8 дюйма. Затем с помощью соединителя прикрепите другой конец трубки из ПВХ внутреннего диаметра 1/8 дюйма к игле для подкожных инъекций 18 калибра.
С помощью ножниц отрежьте конец наконечника пипетки P200 примерно на 0,2 сантиметра, чтобы создать отверстие большего размера. Вставьте модифицированный наконечник пипетки P200 через отверстие ограничителя перегородки так, чтобы наконечник был направлен вверх, и прикрепите ограничитель перегородки к стерильной трубке для сбора. С помощью иглы для подкожных инъекций 18 калибра проколите стопор перегородки.
Теперь включите вакуумный насос, чтобы проверить давление всасывания, поместив палец в перчатке на отверстие кончика пипетки В день дойки отделите мать от ее щенков, чтобы молоко накапливалось в железах. Держите детенышей в тепле в гнезде. После обезболивания плотины сильно сожмите фут плотины, чтобы оценить восприятие животного ощущений и боли.
Затем нанесите ветеринарную офтальмологическую мазь на глаза матери, чтобы предотвратить сухость во время анестезии. Поместите обезболенную дамбу на ее спину на твердую рабочую поверхность. Аккуратно очистите молочную область плотины стерильной спиртовой салфеткой.
Введите одну-две единицы окситоцина внутрибрюшинно между четвертой и пятой парой сосков на стороне брюшинной полости, которая не получала никаких инъекций. Аккуратно загрифуйте область шейки плотины недоминирующей рукой. Затем сожмите ткань молочной железы от основания до кончика соска до тех пор, пока не станет видна капелька молока.
Включите пылесос нажатием кнопки включения. Чтобы начать доение, аккуратно приложите перевернутый наконечник пипетки P200 к соску и легким тянущим движением вытяните молоко. Доите все соски до тех пор, пока не будет собран достаточный объем молока.
После этого верните наркозную корову в клетку и убедитесь, что она находится в тепле в течение периода восстановления после анестезии. От 0,1 до 0,5 миллилитров молока может быть собрано с каждой матери менее чем за 10 минут. Концентрация молочного жира значительно увеличилась со 174,4 грамма на литр во второй день после родов до 224,4 грамма на литр в 10-й день после родов.
Концентрации лактозы и общего белка не показали существенных различий между вторым днем после родов и днем 10 после родов. Относительное содержание альфа-S1-казеина и кислого белка сыворотки было выше в молоке после родов на 10-й день по сравнению с молоком на второй день после родов, в то время как бета-казеин был более распространен в послеродовом молоке на второй день, чем в послеродовом молоке на 10-й день. Интенсивность белковых полос на геле для электрофореза визуально подтвердила различия в относительном содержании отдельных молочных белков.
