Мы обязательно продемонстрируем, как проводить ПЭТ-визуализацию на мышах in vivo с использованием этих форм, соответствующих телу, и как перемещаться по соответствующей платформе анализа данных. Это позволяет нам удерживать всех животных в одном и том же физическом положении в разные моменты времени, а также может значительно ускорить и стандартизировать последующий анализ изображений с помощью автоматизации. Визуализация in vivo имеет множество преимуществ по сравнению с традиционными экспериментами без визуализации.
Например, визуализация позволяет проводить системную, целостную оценку распределения лекарственного препарата и фармакологических эффектов во всем субъекте, что позволяет не только контролировать эффективность в целевом центре, но и обнаруживать неожиданные внешние активности. Получение высоковоспроизводимых и количественных данных имеет решающее значение для разработки лекарств. Например, исследование распределения кишечника на основе ПЭТ дает огромное количество ценной информации о кинетике соединения, накоплении в тканях и связывании с мишенью.
Однако не хватает эффективных автоматизированных процессов для анализа этих данных. Здесь мы показываем, что изображения ПЭТ-КТ, полученные с помощью этих BCAM, очень однородны и могут быть проанализированы пакетами с помощью облачного автоматизированного инструмента сегментации, что экономит огромное количество времени. Кроме того, мы можем показать, что автоматизированный анализ дал удовлетворительные результаты, согласующиеся с нашим ручным методом.
Нашим следующим шагом будет проведение более комплексной оценки производительности этого автоматизированного инструмента. Мы будем тщательно сравнивать результаты ROI, полученные SAS, с результатами, полученными аналитиками с разным уровнем опыта, и сравним результаты визуализации in vivo с обоснованными количественными данными ex vivo. Для начала прикрепите к зажиму форму для животных, соответствующую телу, или BCAM, соответствующего размера, с верхней частью, перевернутой вверх на 90 градусов.
Положите мышь под наркозом на основание и вытяните ее конечности. Затем аккуратно поместите шаблон для инъекции опухоли BCAM на тыльную сторону мыши. Аккуратно создайте временную круглую опорную метку в нужном месте выреза с помощью маркера.
После того, как отметка будет сделана, снимите шаблонную форму. Используя временные метки в качестве ориентира, подтяните кожу пальцами или щипцами, чтобы создать палатку. Медленно введите иглу и введите суспензию опухолевых клеток подкожно в нужное место.
Выбросьте иглу в контейнер для биологически опасных острых предметов. Осторожно наберите целевую дозу фтора 18 ФДГ в стерильный шприц. Поместите шприц в камеру лунки калибратора дозы и опустите ковш, чтобы измерить дозу радиоактивного излучения.
Снимите стабильные показания с калибратора дозы. Запишите дату и время. Перед инъекцией запишите вес мыши.
Переложите мышь в подходящий ограничитель и найдите хвостовую вену. Затем введите дозу в находящуюся в сознании мышь и запишите время инъекции. Отложите шприц в сторону, а из хвоста удалите лишнюю кровь с помощью марли.
Затем извлеките мышь из ограничителя и поместите ее обратно в соответствующий корпус. Теперь поместите шприц обратно в камеру калибратора дозы и запишите все остаточные показания для расчета дозы. Запишите дату и время считывания остаточной активности.
Через 60 минут после внутривенного введения фтора 18 FDG переведите мышь, находящуюся под наркозом, в BCAM соответствующего размера в зависимости от массы ее тела. Аккуратно возьмите мышь за затылок. Вставьте хвост в прорезь хвоста и заверните его под BCAM.
Затем поместите хвост на хвостовую платформу и закрепите его скотчем. Убедитесь, что позвоночник прямой, и аккуратно закройте BCAM. Расположите все четыре конечности на платформах для лап BCAM и при необходимости закрепите скотчем.
Затем аккуратно защелкните BCAM в челноке станины для визуализации, вставив сначала передний конец. Нажмите на заднюю часть BCAM до щелчка, указывающего на то, что он закреплен на шаттле G8. Чтобы начать, откройте программное обеспечение для сбора данных G8 PET.
Введите в программное обеспечение данные исследования, включая вес мыши, дату, время, начальную дозу, сведения об инъекции и показания остаточной активности. Далее вставьте челнок для визуализации с мышью в отверстие сканера. Выберите подходящие параметры ПЭТ-КТ и получите данные визуализации.
После того, как сбор данных будет завершен, извлеките шаттл с помощью мыши и вставьте его в док-станцию. Нажмите на вертикальный язычок BCAM, чтобы освободить его от шаттла G8. Аккуратно потяните вверх и снимите BCAM с помощью мыши.
Нажмите на два фиксирующих язычка, чтобы откинуть вверх и открыть верхнюю часть BCAM. Затем аккуратно выньте мышку. Для анализа изображений войдите в систему на сайте app.invivo.
ax, и создать проект. Затем нажмите на красную вкладку «Загрузить» в правом верхнем углу окна. Выберите систему визуализации и репортер, используемые в исследовании.
Затем выберите папку с данными изображения. Перейдите на вкладку «Аннотации» в папке проекта. Нажмите «Аннотация», чтобы добавить соответствующую информацию о сканировании, включая имя субъекта, пол, размер BCAM, вес субъекта, название когорты, временную точку и значение введенной дозы.
Для анализа данных нажмите на сканы, чтобы перейти по проектному, групповому и индивидуальному уровням предмета. Затем выберите «Анализировать». В правом верхнем углу окна ленты анализа в разделе Проект выберите символ плюса и выберите Organ Probability MAP или OPM ROI.
Линейный регрессионный анализ показал, что мозг имеет самую высокую корреляцию между автоматизированным анализом OPM и ручными методами, что отражает высокую точность. Правая почка и сердце показали умеренную корреляцию при анализе OPM по сравнению с ручным анализом. Селезенка имела самую низкую корреляцию, вероятно, из-за проблем с ручной сегментацией, что затрудняло ее отличие от близлежащих мягких тканей.
