Методика выделения и культивирования мезенхимальных стволовых клеток костного мозга челюсти крысы

Данное исследование обеспечивает эффективный и стабильный метод получения достаточного количества высококачественных костного мозга челюсти, мезенхимальных стволовых клеток с сильной способностью к дифференцировке в короткие сроки. Нишевый метод может быть применен при выделении мезенхимальных стволовых клеток костного мозга крыс. В нашем исследовании были успешно выделены высокочистые мезенхимальные стволовые клетки костного мозга челюсти, что является существенным источником клеток для инженерии костной ткани челюсти, особенно в контексте восстановления костных дефектов.

Эти достижения имеют значительные перспективы для этой области. Для начала извлеките крысу из усыпленной крысы. Положение клюва ронжера на стыке извлеченных крыс нижних челюстей и первого коренного зуба.

Отрежьте соединение между нижними резцами и нижней челюстью, затем полностью извлеките нижние резцы. Удалите все коренные зубы, а затем ветвь нижней челюсти. Теперь отделите центральную часть нижней челюсти по дистальному краю последнего моляра, и обнажите полость костного мозга.

Далее наполните одноразовый шприц объемом в один миллилитр готовой средой alpha MEM. Введите иглу в полость костного мозга. Повторно промойте костный мозг в чашке для культивирования, содержащей полную среду альфа-MEM, до тех пор, пока кость не станет белой.

Перелейте вымытый раствор в 15-миллилитровую центрифужную пробирку. Центрифугируйте раствор при 800 G в течение трех минут при комнатной температуре. Когда центрифугирование будет завершено, отпидайте надосадочную жидкость, затем добавьте в пробирку 10 миллилитров полной среды alpha MEM.

Повторно суспензируйте гранулу в среде, и переложите суспензию в новую питательную чашку шириной 10 сантиметров. Теперь с помощью костяного ронжера разделите промывшую нижнюю челюсть на костные ломтики. Переложите срезы кости в пробирку, содержащую три миллилитра 0,1% раствора коллагеназы II типа.

Поместите смесь для ломтиков костей в шейкер на 90 минут при температуре 37 градусов Цельсия и 200 оборотах в минуту. Когда инкубация будет завершена, центрифугируйте переваренную нижнюю челюсть при 800 G в течение трех минут при комнатной температуре. Отпижите надосадочную жидкость, чтобы избавиться от нее, затем перенесите собранные клетки и переваренные срезы костей в луночные планшеты, содержащие 10 миллилитров полной среды альфа-MEM.

Инкубируйте культуры при температуре 37 градусов Цельсия во влажном инкубаторе с добавлением 5% углекислого газа. Через 72 часа замените половину питательной среды свежей средой. Когда адгезивные клетки сливаются на 80-90%, пропускайте их в соотношении один к двум.

Удалите срезы косточки во время второй субкультуры. После 72 часов культивирования большинство клеток были подвешены и круглые, а некоторые прилипли к стенке. Адгезивные колонии, которые были веретенообразными или фибробластоподобными, появлялись уже через пять дней культивирования.

К седьмому дню адгезивные клетки достигли 90% конфлюенции и сформировали форму косяка рыб. Пропущенные клетки показали однородность, имели преимущественно веретенообразную форму и после слияния имели вихревой рисунок.