Биолюминесцентный резонансный перенос энергии (BRET) для измерения взаимодействий CRAF с белками 14-3-3 в живых клетках

Основное внимание в наших исследованиях уделяется выявлению новых уязвимостей в пути киназы Ras-MAPK путем изучения мутаций, связанных с редкими заболеваниями внутри. Недавно мы разработали еще один анализ на основе BRET для измерения аутоингибиторной активности киназ RAF в живых клетках. Важно отметить, что этот анализ был необходим для характеристики группы редких мутаций зародышевой линии в домене, богатом цистеином BRAF, что продемонстрировало критическую важность этого домена для поддержания аутоингибирования BRAF и предотвращения конститутивной биологической активности BRAF.

Этот анализ измеряет взаимодействие 1433 белков с RAF-киназой CRAF, и эти взаимодействия играют важную роль в опосредовании функции RAF как в развитии, так и в заболевании. Кроме того, этот анализ в сочетании с ранее разработанными методами измерения аутоингибирования RAF и взаимодействия RAF-RAF составляют основу инструментария для анализа регуляторных механизмов киназ RAF в живых клетках.