Ensayo basado en transferencia de energía por resonancia de bioluminiscencia (BRET) para medir las interacciones de CRAF con proteínas 14-3-3 en células vivas

El objetivo principal de nuestra investigación es descubrir nuevas vulnerabilidades en la vía de la quinasa Ras-MAPK a través del estudio de las mutaciones asociadas a enfermedades raras en su interior. Recientemente hemos desarrollado otro ensayo basado en BRET para medir las actividades autoinhibitorias de las quinasas RAF en células vivas. Es importante destacar que este ensayo fue esencial para caracterizar un grupo de mutaciones germinales raras en el dominio rico en cisteína BRAF, lo que demostró la importancia crítica de este dominio para mantener la autoinhibición de BRAF y para prevenir la actividad biológica constitutiva de BRAF.

Este ensayo mide las interacciones de 1433 proteínas con la quinasa RAF CRAF, y estas interacciones desempeñan un papel esencial en la mediación de la función RAF tanto en el desarrollo como en la enfermedad. Además, este ensayo, combinado con ensayos previamente establecidos para medir la autoinhibición de RAF y la interacción RAF-RAF, forman la base de un conjunto de herramientas para diseccionar los mecanismos reguladores de las quinasas RAF en células vivas.