Получение почечных органоидов в суспензии из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

В нашем исследовании представлен комплексный и эффективный метод получения почечных органоидов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с использованием условий суспензионного культивирования. Мы подчеркиваем важность начальной плотности клеток и концентрации агонистов WNT во время индуцирующей фазы, что позволит обучить новых исследователей органоидов. В настоящее время трудно получить единую клеточную линию высокой плотности для ИПСК.

Влияние партии было заметным, особенно в различных линиях ИПСК. Почечные органоиды каждой партии могут иметь различную форму и размер. Для получения наилучшей исходной плотности клеток и концентрации CHIR для одной линии iPSC необходимо несколько попыток.

Установлено, что для успешного формирования органоидов почек важна начальная дифференциация промежуточного метода. Наш протокол подробно описывает, как выбрать оптимальную плотность клеток и концентрацию CHIR во время процесса, поскольку различные линии ИПСК показали различия в способности клеток к пролиферации и дифференцировке. Исследователи могут быстро генерировать специфические почечные органоиды из своих ИПСК.

Согласно нашему протоколу, регулируя плотность клеток и концентрацию CHIR, всем нашим исследователям, несомненно, полезно сосредоточиться на заболевании почек. Наши лабораторные исследования в будущем должны быть направлены на оптимизацию метода протокола в моделях заболеваний, регенерацию новых лекарств и скрининг лекарств. В последние пять лет наша лаборатория сосредоточится на эпигенетике и разработке клеточных препаратов для различных наследственных заболеваний почек, основанных на развитии пациентов, ИПСК и моделях организованных заболеваний почек.