Динамический сбор внеклеточной жидкости гиппокампа у крыс, находящихся в сознании, в режиме реального времени с использованием системы микродиализа

Внеклеточная жидкость гиппокампа и толпа с помощью метода микродиализа мозга способствуют мониторингу специфических микрозаболеваний центральной нервной системы. Технический микродиализ головного мозга обеспечивает динамическое и непрерывное исследование интерстициальной мозговой жидкости в определенных областях мозга крыс, не подвергшихся анестезии. Начните с фиксации анестезированной крысы на стереотаксическом локаторе мозга и трижды протрите выбритую операционную область тампоном повидон-йода и этанолом перед операцией.

Затем хирургическими ножницами сделайте 1,5-сантиметровый черепно-лицевой разрез посередине и удалите надкостницу хирургическими ножницами и офтальмологическими щипцами. Рассматривая брегму как базальное положение, с помощью черепного сверла проткните эндокраниум, чтобы просверлить двухмиллиметровое отверстие в области CA1 гиппокампа. Теперь закрепите шпильку катетера на захвате стереотаксического локатора мозга и отрегулируйте положение оболочки микродиализа в переднезаднем, медиолатеральном и дорсальном вентральном положениях.

Отрегулируйте дорсовентральный клапан стереолокатора головного мозга и имплантируйте корпус микродиализа в область CA1 на глубине 3,5 миллиметра. Просверлите еще три отверстия диаметром два миллиметра таким образом, чтобы три отверстия образовывали треугольник, в котором отверстие зонда расположено по центру. Ввинчивают имплантаты в отверстия на глубине одного миллиметра и фиксируют зондирующий катетер зубным цементом.

Затем используйте хирургический шов 4-O, чтобы закрыть кожу. Соедините микрошприц микродиализного насоса с устройством пробуждения ACSF и коллектором криогенных образцов в соответствии с инструкциями производителя. Далее, чтобы выпустить воздух в трубопровод, установите микродиализный насос со скоростью один микролитр в минуту.

Затем соедините трубопровод и зонд микродиализа мозга и запустите микродиализный насос со скоростью один микролитр в минуту, чтобы вводить ACSF в зонд до тех пор, пока поверхность зонда не станет слегка влажной. Погрузите зонд в раствор для инъекций гепарина натрия для последующего использования. Чтобы собрать HECF у бодрствующей крысы, вставьте зонд микродиализа мозга в катетер зонда и поместите крысу в камеру с набивкой, чтобы крысы могли свободно передвигаться.

Включите многоканальный поворотный контроллер, чтобы избежать переплетения трубопроводов микродиализа во время свободного движения крысы. Затем включите микрошприцевую помпу и перекачивайте ACSF со скоростью один микролитр в минуту. После 60-минутного уравновешивания микродиализной системы сбора HECF периодически собирайте HECF.

После завершения отбора проб извлеките зонд микродиализа головного мозга из зондового катетера. Погрузите зонд в деионизированную воду и промыть деионизированной водой на 12 часов, чтобы удалить многожильные отложения солей из трубопровода и зонда. Извлеките зонд и поместите его в 0,05% раствор трипсина при температуре четыре градуса Цельсия.

Внеклеточная жидкость гиппокампа, полученная методом микродиализа мозга, похожа на воду, бесцветна и прозрачна с заданной частотой дискретизации. Наиболее важными процедурами являются аккуратная имплантация микродиализа в область CA1 и введение зонда в катетер. Метод микродиализа позволяет помочь динамическому изменению маркеров заболевания в определенных областях мозга, веществу эффективности препарата и катаболизму компонентов препарата в тканях.