Повторяющийся забор крови из подключичной вены сознательной крысы

В исследованиях фармакокинетики и токсикокинетики нам необходимо собрать определенное количество крови в определенные моменты времени у крыс, чтобы обнаружить воздействие лекарств. Это исследование описывает простой и эффективный метод сбора крови из подключичной вены у крыс в этом протоколе. Этот метод позволяет повторять, своевременно и легко идентифицировать отбор проб без анестезии и получать высококачественную кровь путем повторного отбора образцов.

Вы должны знать анатомию подключичной вены, способную крысиную удерживающую способность и точку иглы. Метод рискованный, и он требует квалифицированного специалиста. Для начала найдите самую нижнюю точку подключичной треугольной ямки между шеей и передней конечностью у крысы.

Двигайтесь примерно на два-три миллиметра в сторону головы и достигните точки иглы в месте сбора крови. Удалите волосы с помощью электробритвы. Чтобы держать голову, шею и грудь крысы в вертикальном положении, захватите кожу на задней части шеи одной рукой и обнажите место инъекции.

Выпрямите переднюю конечность со стороны места инъекции для поддержания ее уровня. Держите шприц параллельно голове крысы другой рукой и наклоните шприц наружу на пять-10 градусов, чтобы кончик был наклонен в вентральное направление. Вставьте иглу полностью в переднюю полость.

Оттяните шприц назад, чтобы поддерживать отрицательное давление с трубкой. Медленно переместите иглу с глубины на мелководье и вернитесь вверх по тому же пути. Когда кровь попала в шприц-иглу, зафиксируйте положение иглы.

В зависимости от веса и здоровья крыс, контролируйте максимальное количество крови, которое должно быть взято в соответствии со стандартами, установленными комитетом по уходу за животными и их использованию. При отсутствии других требований не удаляйте более 20% от общего объема крови животного в течение 24 часов. Когда будет собран достаточный образец крови, немедленно извлеките шприц и подготовьтесь к обработке крови.

Надавите на место инъекции крысы в течение одной-двух минут, чтобы остановить кровотечение. Так как место сбора находится в нижней части шеи, защемите кожу подключичной вены, чтобы остановить кровотечение, надавливая на нее. Извлеките иглу из шприца и выбросьте ее в острый контейнер для инструмента.

Медленно перенесите кровь из шприца в 1,5-миллилитровую трубку. Прижмите шприц к стенке, чтобы избежать образования пузырьков. Закройте крышку трубки микроцентрифуги и осторожно проведите по ней.

Тщательно смешайте кровь с антикоагулянтом, перевернув ее вверх дном не менее пяти раз. В течение 120 минут после сбора плазмы центрифугируют образец цельной крови при 2000 RCF в течение 10-15 минут при комнатной температуре. Используйте пипетку для переноса верхней плазмы в свежую микроцентрифужную трубку.

Не прикасайтесь к головке пипетки с нижней цельной кровью. Утилизируйте или повторно центрифугируйте плазму, загрязненную эритроцитами. Образцы плазмы, точно собранные из подключичной вены, были полупрозрачными бледно-желтыми.

Неправильный забор крови или манипуляции привели к гемолизу. Во время первого отбора проб масса тела самца животного составляла от 268 до 297 граммов и от 214 до 239 граммов у самок. Во время последнего отбора проб масса тела самца животного составляла от 376 до 462 граммов и от 254 до 300 граммов у самок.

Между токсикокинетическим забором крови наблюдался разрыв в 28 дней. Масса тела животного неуклонно увеличивалась каждую неделю, и клиническое наблюдение было нормальным. Точный метод введения иглы и угол могут обеспечить плавный сбор крови и избежать рисков.

Эта операция требует многократной практики.