Этот протокол описывает метод измерения внутричерепного давления, среднего артериального давления и давления перфузии головного мозга после нетравматического внутрижелудочкового кровоизлияния у грызунов. Внутричерепное и среднее артериальное давление могут быть измерены точно и надежно с помощью волоконно-оптического датчика, вставленного в кору и бедренную артерию крысы соответственно. Методы, описанные здесь, переводятся в клинические условия, когда пациентам с внутрижелудочковым кровоизлиянием требуется инвазивный мониторинг внутричерепного давления.
Цели этого исследования заключались в создании модели IVH на животных с объективным мониторингом ICP, MAP и CCP после внутрижелудочкового IVH, чтобы авторы могли применять это в дальнейшем в будущих экспериментах, которые будут сосредоточены на влиянии ICP, индуцированных IVH, на последующую дисфункцию памяти. Основные проблемы могут включать точность, так как волоконно-оптические датчики малы. Рассечение бедренной артерии также может представлять проблему для некоторых, особенно для тех, кто не используется в микрохирургических навыках.
После обезболивания крысы вставьте ректальный термометр для непрерывного контроля температуры. Обрежьте волосы на голове и бедренной области и подготовьте кожу тремя чередующимися скрабами бетадина и 70% спирта перед операцией. Аспирировать любые накопленные дыхательные выделения путем временного удаления крысы из вентилятора и аспирации выделений с помощью трубки ПЭ-50, соединенной с 10-миллилитровым шприцем.
Защитите глаза стерильной искусственной слезной глазной мазью. Перед разрезом кожи головы вводят местный бупивакаин в кожу и подкожные ткани. Поместите крысу в положение лежа на стереотаксическую рамку и перекладывайте ее.
Сделайте 1,5-сантиметровый разрез кожи головы вдоль средней линии с помощью скальпеля из 15 лезвий. Применяют мягкое давление марлей при гемостазе. Используя стерильный аппликатор хлопкового наконечника, отделите надкостницу от черепа до тех пор, пока не будет виден ориентир брегмы.
Найдите и разметьте брегму с помощью стереотаксиса и разметьте расположение двух двусторонних отверстий заусенца 1,4 миллиметра сбоку и отрицательных 0,9 миллиметра сзади от брегмы. Используя ручную дрель, создайте эти два небольших черепных отверстия в правом и левом полушариях. Орошайте любые излишки костной стружки стерильным лактированным раствором Рингера.
В правом полушарии поместите направляющую канюлю 22-го калибра на уровне отверстия заусенца, чтобы вставить иглу 28-го калибра через канюлю на глубину правого бокового желудочка для создания внутрижелудочкового кровоизлияния. Подключите волоконно-оптический датчик давления к считывающему устройству. Включите блок считывания и убедитесь, что выбранные единицы измерения находятся в миллиметрах ртутного столба.
Затем загрунтуйте датчик, погрузив его наконечник в небольшой стакан с лактированным раствором Рингера до тех пор, пока блок считывания не считывает ноль и не будет готов к использованию. В левом полушарии аккуратно вставьте датчик давления на глубину от двух до трех миллиметров в кору для мониторинга ВЧП в режиме реального времени. После введения монитора ICP поверните нижний ствол крысы для легкого доступа к левому бедру и паховой области.
После стерильной подготовки и местного введения бупивакаина сделайте 1,5-сантиметровый разрез кожи над задней конечностью скальпелем из 15 лезвий. Рассекните левую бедренную артерию поверхностно гемостатом, а затем более глубокими слоями с помощью щипцов с тонкими кончиками под микроскопом. Определите глубокую синюю бедренную вену, чтобы помочь найти соседнюю артерию.
Отвяжите дистальную бедренную артерию с помощью шелкового шва 3-0 и поместите временный металлический зажим на проксимальную часть бедренной артерии. Иметь второй волоконно-оптический датчик давления, подключенный к уже загрунтованному блоку считывания. Вставьте датчик давления в трубку PE-50, которая затем вставляется в Tuohy Borst.
Подключите Tuohy Borst к трехстороннему запорному крану, соединенному с одномиллиметровым шприцем на одном конце и иглой 22-го калибра с трубкой PE-50 на другом конце. Под микроскопом сделайте двухмиллиметровую артериотомию бедренной кости с помощью микроножек и канюльируйте ее с помощью трубки PE-50, соединенной с остальной частью установки. Аспирируйте 500 микролитров крови с помощью одномиллиметрового шприца и поверните трехсторонний запорный кран, чтобы датчик давления считывал MAP.
Загрунтуйте внутрижелудочковую иглу 28-го калибра, соединенную с трубкой PE-50 с аспирированной кровью для животных IVH и лактированную Ringer's для животных, контролирующих транспортное средство. Затем вставьте эту иглу в направляющую канюлю на глубину правого бокового желудочка. Используя скорость 100 микролитров в минуту, вводят кровь или 200 микролитров стерильного лактированного раствора Рингера в правый боковой желудочек путем накачки одномиллиметрового шприца большим пальцем.
Контролируйте и регистрируйте ДЦП, артериальное кровяное давление и ректальную температуру. Мониторинг и запись значений ICP и MAP после инъекции. После завершения внутрижелудочковой инъекции извлеките трубку PE-50, содержащую датчик давления, вставленный в бедренную артерию, и приложите временный клип к бедренной артерии для предотвращения кровотечения.
Завяжите проксимальную часть бедренной артерии с помощью шелкового шва 3-0 и закройте разрез бедренной кости прерванным способом, используя шелк 3-0. Извлеките направляющую канюлю с помощью внутрижелудочковой иглы в мониторе ДЦП. Запечатайте отверстия заусенца костным воском.
И закрыть черепной разрез 3-0 шелковым швом прерывисто. Нанесите на разрез топический бупивакаин и введите 0,5 миллиграмма на килограмм карпрофена. Не оставляйте животных без присмотра до тех пор, пока они не придут в достаточное сознание для поддержания грудинного покоя.
Позвольте крысам полностью восстановиться после операции под наблюдением и верните их в свои домашние клетки со свободным доступом к пище и воде после выздоровления. Исключая фиктивную группу, МСП значительно увеличивались во время внутрижелудочковой инъекции в ivH и контрольных группах транспортных средств. МСП были выше в группе IVH по сравнению с управлением транспортным средством.
Затем ICP быстро снижались и нормализовались в течение пяти минут после внутрижелудочковой инъекции в этих группах животных. Было отмечено, что МАП оставались одинаковыми на протяжении всей процедуры, тогда как CPP уменьшались во время внутрижелудочковой инъекции либо крови, либо лактированного раствора Рингера. Жизненно важные этапы операции включают правильное расположение и сверление отверстий заусенца и бедренную артериотомию.
Шаги, упомянутые выше, должны тщательно соблюдаться, чтобы гарантировать, что датчики выполняют свою работу по точному считыванию изменений давления.
