Этот метод описывает полный путь проектирования, сборки и характеристики полиэлектролитических сложных мицелл, которые являются наночастицами, которые образуются из самосожверщения противоположно заряженных полимеров. Некоторые серьезные проблемы с полиэлектролитом самосвещения избегают кинетических ловушек и характеризуют наночастицы. Техникасолевой аннеализации, которую мы описываем, позволяет повторно сборки мичеллей с низкой дисперсией как по размеру, так и по форме, и мы описываем методы характеристики, включая рассеяние света, рассеяние малых углов и электронную микроскопию.
Доставка терапевтических нуклеиновых кислот является давней проблемой для наномедицины. Эти полиэлектролитические комплексные мицеллы используют сильный отрицательный заряд нуклеиновой кислоты, чтобы секвестрировать их в ядре мицелла, где нейтральная полимерная корона защищает их от нуклеаз и иммунного ответа. Метод сборки должен применяться к любому типу заряженных полимеров.
Мы протестировали их с несколькими полианиями и поликациями, и метод характеристики должен быть применим к любым самосборным наночастицам, включая наночастицы сурфактанта и другие гидрофобно-управляемые системы. Начните с инкубации раствора олигонуклеотида при 70 градусах Цельсия в течение пяти минут. После инкубации, охладить его в течение 15 минут при комнатной температуре, чтобы термически аннеальных нуклеиновых кислот, а затем добавить 40 микролитров 20 миллимолярной заряженной концентрации диблок кополитера.
Vortex раствор немедленно и инкубировать его в течение пяти минут при комнатной температуре. Для выполнения соли аннеал, добавить раствор хлорида натрия в раствор олигонуклеотида для окончательной концентрации одного молара и вихрь его в течение 10 секунд на максимальной скорости. Инкубировать смесь в течение 10 минут при комнатной температуре, а затем приступить к загрузке его в картридж диализа.
Перед загрузкой, этикетки картриджей с постоянным маркером и замочить их в буфере, по крайней мере две минуты, чтобы увлажнить мембраны. Снимите крышку, скручивая против часовой стрелки и загрузить образец с помощью гель загрузки пипетки отзыв. Аккуратно сожмите мембрану, чтобы удалить избыток воздуха и заменить крышку.
Положите картриджи в 1X PBS 0.5 молярного хлорида хлорида диализа ванны убедившись, что они плавают с обеих мембран подвергаются воздействию ванны. Через 24 часа перенесите картриджи в 1X PBS и замочите его еще на 24 часа. После окончательного диализа, восстановить образец, удалив картриджи из ванны, удаление крышки и удаление образца с гель загрузки пипетки отзыв.
Поместите образец в чистую микроцентрифугную трубку размером 1,5 миллилитра и охладите ее до готовности к использованию. Подготовь образец в инструменте DLS в соответствии с рукописными указаниями, а затем получить данные, по крайней мере одну минуту убедившись, что скорость подсчета является постоянной в течение всего времени приобретения. Изучите данные автокорреляции.
Долгосрочный базовый уровень должен быть плоским, а кривая автокорреляции должна быть гладкой с минимальным рассеянием. Шум в данных может быть улучшен путем получения дополнительных данных. Для выполнения сокращения данных и анализа с помощью Irena начните с импорта micelle в фоновых наборах данных.
Навейте образец и фон вместе по шкале журнала-журнала и вычислите выборку в фоновом соотношении и пройдите проверку высокого асимптота. Вычислил среднее соотношение по этому диапазону и использовал макрос манипуляции данными для масштабирования фона с расчетным соотношением. Затем вычтьте фоновый вычитаемый сигнал и сохраните данные с новым именем, убедившись, что они не переутомят исходные данные.
Откройте макрос моделирования, затем загрузите и навесните фон вычитаемые данные. Чтобы найти примерную модель внешней поверхности полиэлектролитного комплекса micelle, или PCM, выберите поток для умеренного диапазона в управлении данными, убедившись, что включают колебания, если они присутствуют. В элементе управления моделью выберите первую популяцию рассеяния и убедитесь, что она является единственной в использовании.
Выберите распределение размеров для модели, выберите нужный тип распределения и выберите форм-фактор. Этот пример для гибкого цилиндра, который должен быть добавлен вручную под форм-фактором пользователя. Скачать и добавить гибкий форм-фактор цилиндра, а затем ввести имена функций и начальные значения параметров один и два, которые соответствуют длине цилиндра и длины Кун соответственно.
Эти цилиндры длиннее, чем может быть решена SAXS поэтому параметр длины цилиндра фиксируется на большое значение. Установите начальные параметры для поиска, введя значения в поле масштаба, среднего размера и ширины. Затем нажмите вычислить модель, чтобы нарисовать полученный форм-фактор.
После того, как разумные параметры были найдены, нажмите подходят модели для выполнения нелинейных наименее квадратов, пригодных для данных. Далее моделируется рассеяние отдельных полимеров в ядре PCM. Отрегулируйте элементы управления данными, чтобы выбрать диапазон q, где происходит избыточное рассеяние, которое обычно находится в умеренном и высоком диапазоне.
Добавьте вторую популяцию рассеяния и убедитесь, что она является единственной в использовании. Выберите единый уровень для модели, отрегулируйте факторы GDA G и RG, чтобы модель не предсказала чрезмерное рассеяние на низком уровне, и используйте подходящий ПБ между макросами курсоров для получения первоначального предположения для этих параметров. Что касается форм-фактора, выполните нелинейный, пригодный для модели единого уровня.
Если пик дифракции присутствует, добавьте третью модель для пика дифракции в диапазоне интересов. После того, как приблизительные значения подходят получены для отдельных популяций рассеяния, включите все три вместе и оптимизировать комбинированный подходят. Наконец, убедитесь, что каждое значение остается физически разумным и сохранить припадок, выбрав магазин в папке.
Результатом этой процедуры должна стать композитная модель, описывающая данные о рассеянии малых углов в широком диапазоне шкал размеров. Этот протокол был использован для проектирования, сборки и характеристики нуклеиновой кислоты полиэлектролита сложных micelles или PCMs. Micelle размер ядра в первую очередь определяется длиной заряженного блока блока copolymer и в значительной степени не зависит от длины гомополимера.
Динамические данные рассеяния света были получены для сферических PCMs, образованных из относительно длинных блоков кополимеров в коротких одножилочных олигонуклеотидов. Функция автокорреляции распалась до плоского значения с одной шкалой времени, что привело к одному пику размера в распределении размера repIS. Сложные небольшие рентгеновские рассеяния ангела или спектры интенсивности SAXS могут быть точно подходят путем объединения моделей для нескольких пространственных корреляций, которые присутствуют и многогранного рассеяния света могут быть использованы для расширения рассеяния измерений в более длинных масштабах длины.
ПХМ различной морфологии также могут быть изображены с помощью электронной микроскопии, чтобы убедиться, что радиусы ядра и форма соответствуют значениям, полученным в результате установки данных SAXS. При установке данных SAXS важно учитывать каждую функцию рассеяния и использовать бесплатные методы, такие как TEM, чтобы убедиться, что вы используете правильный форм-фактор.
