Для моделирования заболеваний легких у мышей, экспериментальные агенты часто вводят через интратрахеальной инъекции. Этот подход, однако, не может выборочно целевой одного легкого, и распределение может быть асимметричным между легкими. Путем cannulating индивидуальное легкое в анестезированой мыши, мы можем в одностороннем порядке управлять экспериментальными агентами.
При модификации этот подход может использоваться на двусторонней основе, улучшая симметрию осаждения в обоих легких. Подготовка катетера, включая полировку, легкую англикуляцию и маркировку, является ключевым элементом успеха. Конечно, практика этой техники также необходима.
Демонстрацией процедуры будет Сумей Ляо, профессиональный научный сотрудник из моей лаборатории. После подтверждения отсутствия ответа на щепотку ноша, приостановить анестезирования, от восьми до 10 недель, C57-Black/6 мыши от резцы на драпированные линии шва в supine ориентации. Свободно закрепить мышь двумя-тремя кусками крючка и зациклить ленту, избегая ограничения вентиляции, и включить светоизлучающий диод волоконно-оптический иллюминатор.
Распоитить оператора за платформой, спинной к мыши. Ориентируй гусиную шею осветителя на два-три сантиметра от мыши так, чтобы она освещала область гортани через кожу. Используя стерильные типсы в доминирующей руке, вынудить язык из полости рта.
Используйте недоминантную руку и стерильный депрессор, чтобы сгладить корень языка, чтобы широко разоблачить орофаринг. Выпустив типсы, используйте доминирующую руку, чтобы инубировать расширенный катетер в трахею через полость рта. Подтвердите размещение, наблюдая ли пузырь в шприце движется вверх и вниз с каждым вдохом.
Для селективной локаратной каннюляции дистального правого легкого, после внутритрахеальной инзубации, поверните пластиковую доску на 30 градусов и направляте концентратор катетера параллельно средней линии мыши на соответствующую глубину на основе веса, как указано в таблице. Используя гель-погрузочный наконечник, доставить 20 микролитров 0,3%Evans синий краситель в катетер, а затем от одного до двух 100-микролитер aliquots воздуха стекло капельницы. Затем свямите катетер и поддерживайте мышь в положении в течение 30 секунд, прежде чем поместить животное на согревающий одеяло, с контролем до полного выздоровления.
Для селективной локарской каннюляции дистального левого легкого, после интратрахеальной инзубации, поверните пластиковую доску минус 74 градуса и аккуратно заранее заранее катетер в левый основной бронх, помещая при этом умеренное давление на 90 градусов вниз и к bookend. После cannulating левой нижней сегментов легких, поверните пластиковую доску минус 30 градусов, и доставить 40 микролитров 0,3%Evans синий краситель с гель-загрузки отзыв. Затем доставить от одного до двух 100-300-микролитер aliquots воздуха через стекло капельницы, и снять катетер, чтобы мышь, чтобы восстановить, как попродемонстрировано.
Для правильного вся администрация легких, после интратрахеальной инзубации, поверните пластиковую доску на 30 градусов и направляем катетер параллельно средней линии мыши, достигая глубин, необходимых для правосторонней дистальной канюляции лобар. Подтвердите появление знака тахипнеа и поверните мышь минус 74 градуса, чтобы дать гравитационную помощь для доставки агента. Свяжуте катетер в положение, которое соответствует взлету правого основного бронха, и убедитесь, что скошен катетера лица вниз.
Доставка 30 микролитров 0,3%Эванс синий краситель в правое легкое, а затем от одного до двух 100-300-микролитров алицитов воздуха. Затем свяйте катетер и дайте мыши восстановиться. Для левой всей администрации легких, после интратрахеальной канюляции, поверните пластиковую доску минус 74 градуса, и осторожно заранее катетер в левом mainstem бронхов при размещении скромное давление как 90 градусов вниз и к bookend.
Подтвердите отсутствие знака tachypnea, и поверните мышь 86 градусов для того чтобы позволить помощь гравитации с администрацией агента. Свяжуте катетер к левому mainstem bronchus, и поверните сровень катетера к лицу вниз. Доставка 30 микролитров 0,3%Evans синий краситель с гель-загрузки наконечник в левое легкое, а затем от одного до двух 100-300-микролитер aliquots воздуха.
Затем свяйте катетер, чтобы мышь можно было восстановиться, как это было продемонстрировано. Двусторонняя доставка FITC-декстрана как внутритрахальным, так и симметричным интрабрончальным администрированием приводит к асимметричной паронхимальной флуоресценции легких FITC с большей относительной концентрацией, отмеченной в левом легком. Это говорит о том, что асимметричная доставка легких экспериментальных агентов после внутритрахиального введения не является следствием асимметричного представления этих агентов каждому основному стволу бронхов, но что равная доставка основного тела разбавляется различиями в весе и массе легких.
Доза скорректированной интрабрончиальной администрации улучшает симметрию легких паренхимальных агентов доставки. Несмотря на эту коррекцию, однако, постоянная неоднородность по-прежнему наблюдается в различных долях правого легкого. Через 21 день после внутритрахеального блеомицина индуцированной фиброзной травмы легких, воспаление наблюдается преимущественно в левом легком, с меньшими травмами заметны в правом легком.
И наоборот, скорректированная на дозу интрабрончиальная администрация блеомицина приводит к несколько снижению травм левого легкого и увеличению травмы правого легкого, при этом наибольшая травма очевидна в средней и верхней долях. В течение всего введения легких, не забудьте снять катетер и, как правило, скошен катетер лицом вниз.
