Этот метод может быть использован для ответа на ключевые вопросы о роли микро-среды костного мозга и выживании опухолей миеломы. Основным преимуществом этой процедуры является то, что она может быть применена к продольным антимедикаментозным исследованиям и использоваться для анализа нескольких биохимических путей неинвазивным способом. В день эксперимента сначала мыть 8226 Luciferase трансфактируемых клеток три раза в ледяной PBS на 200 RCF в течение пяти минут центрифугации и повторно гранулы в свежем ледяном PBS в пять раз десять до шестой клетки на 200 микролитров ледяной PBS на мышь.
Далее подтвердите отсутствие ответа на щепотку ноша в анестезированной четырех-шестинедельной мыши NOG и нанесите офтальмологическую мазь на глаза животного. Загрузите клетки в одноми миллилитровый инсулиновый шприц, оснащенный иглой 26 калибра. Ввимить весь объем клеток в хвостовую вену животного, прежде чем вернуть мышь в ее клетку, если не будут полностью высовытку.
От десяти до двадцати дней после вызова, вводить каждый engrafted животных с 200 микролитров in vivo класса D-люциферин субстрат в стерильных солевой интраперитонеи. Поместите анестезированные животные в положение на спине в небольшой системе визуализации животных в течение 5-10 минут после инъекции. Измерьте среднее сияние в отдельных областях, представляющих интерес в соответствующем программном обеспечении для визуализации.
Для целенаправленной терапии 8226 опухолей Люциферазы, После измерения базовой биолюминесценции в каждом животном, как только что продемонстрировано, рандомизировать животных в группы лечения и лечения каждой мыши с серией 200 микролитера IP инъекции Temsirolimus или солевой контроль. Измерьте активность Люциферазы два раза в неделю и сотмите изменения в биолюминесценции с течением времени. Для измерения изменений в метаболизме опухоли, сначала удалить пищу из домашней клетки мышей в течение 24 часов, чтобы избежать избытка неспецифических радиозаклейм fludeoxyglucose поглощения.
На следующий день разбавить от 500 до 100 микрокурей из 18 фтора радиолацелин fludeoxyglucose зонд в стерильных солевой раствор до конечного объема 100 микролитров на мышь и записывать время и активность зондов с калибровкой дозы. Когда зонды будут готовы разместить первое обезболивающее животное на грелке с головой лицом прочь и использовать защищенный один миллилитр инсулина шприц оснащен 26 калибровочных иглы для введения 100 микролитров зонда в хвостовой вены. Измерьте остаточную радиоактивность иглы и шприца с помощью калибровки дозы и обратите внимание на активность и время.
Затем измерьте активность радиозаклейной флудеоксиглукозы в отдельных областях, представляющих интерес, которые соответствуют приразливленным опухолям в системе визуализации ПЭТ-томографии небольшого животного. Успешное engraftment опухоли костного мозга может быть подтверждено биолюминесценции изображений, как попродемонстрировано. Серийная визуализация нескольких животных может быть использована для визуализации распределения костного мозга привязаных опухолей множественной миеломы.
Кроме того, оптический рентгеновский анализ показывает быстрое и неинвазивное определение точного местоположения и распределения опухолей множественной миеломы в скелете мыши. Биолюминесценция, производимая этими притяжательными опухолевыми клетками, может быть последовательно и неинвазивно измерена для оценки изменений в росте опухоли. Кроме того, выживаемость мышей, обработанных ингибитором mTOR Temsirolimus можно контролировать и позитронного излучения и компьютерной томографии анализ опухоли радиолабелированный Fludeoxyglucose поглощения могут быть использованы для демонстрации Темсиролимуса опосредованное изменение метаболизма глюкозы.
При выполнении этой процедуры важно вводить клетки IEV. Мы обнаружили, что неспособность вводить клетки в вену приводит к образованию не-костного мозга приразвленных опухолевых клеток вблизи места инъекции. После этой процедуры, другие методы, такие как иммуногистохимия и микро-КТ могут быть использованы для решения вопросов о воздействии опухолей на архитектуру костей и неохуморных клеточных и молекулярных компонентов костной среды.
