Продухотная модель животного очень важна для исследования костной инфекции. Однако, в настоящее время никакая модель кролика для которой состояние инфекций и число бактерий последовательно. Наша модель кролика костной инфекции использует последовательные бактерии и лечится ванкомицин-загруженным сульфатом кальция и аутогенными фрагментами.
Техника может быть распространена на диагностику костной инфекции и костной несоюзной терапии, а также на понимание патогенеза костной инфекции. Этот метод может дать представление о других моделях костной инфекции у крыс, мышей и свиней. Трудно загрузить тот же объем бактериальной суспензии в костный мозг.
Визуальная демонстрация может помочь исследователям легко и точно выполнить критические шаги. Чтобы подготовить бактериальную суспензию, сначала растворите 0,5 миллиграмма лиофилизированный порошок S.aureus в 0,3 миллилитров среды культуры LB. Смешайте суспензию тщательно, и полоса бактерий на триптических сое агар пластин для их инкубации в течение 16 часов при 37 градусов по Цельсию.
На следующее утро, выбрать один бактериальный колонии формирования единицы для культуры в триптическом соевом бульоне трубки в течение 24 часов при 37 градусов по Цельсию. Когда бактерии находятся в фазе среднего логарифмического роста, перенесите 1 миллилитр бактерий в 1,5 миллилитровую трубку и соберите бактерии путем центрифугации. Затем, мыть гранулы бактериальных клеток три раза в 100 микролитров PBS за стирку, resuspending бактерий в 3 миллилитров свежего PBS после окончательного мытья.
Чтобы создать форму костной инфекции, подтвердить отсутствие реакции на щепотку лапы в три месяца три килограмма мужской новозеландский белый кролик, и использовать электрическую бритву, чтобы удалить волосы из проксимальной области трибиала против направления роста волос. Дезинфицировать открытые кожи с раствором йода povidone, и использовать ручку и линейку, чтобы отметить верхний конец голени и положение бурового отверстия для инъекции S.Aureus, заботясь о том, что положение бурового отверстия находится в горизонтальной середине голени плато. Затем используйте скальпель номер 11, чтобы сделать разрез в коже, а затем один сантиметр разреза в брюшной полости.
Используя электрический блок сверла косточки, пробить отверстие диаметром 2 миллиметра в tibia, и отжимать отверстие с диаметром 2 миллиметра 2 миллиметра длиной цилиндра воска косточки. Удалите запасной костный воск вдоль горизонтальной плоскости тибиального плато и подтвердите, что отверстие полно костного воска. Затем используйте абсорбируемые хирургические швы, чтобы зашить периостеум и кожу в вертикальный шов матраса, чтобы предотвратить животное от жевания швов.
И используйте один миллилитр асепсис инжектор медленно вводить один раз 10 до восьми колоний формирования единиц на миллилитр раствора S.Aureus в отверстие сверла. На седьмой, 14, 21 и 28 день после инъекции поместите инфицированных кроликов в кролика с головой и ухом за пределами удержатель, и собирать образцы крови из ушных вен для белых кровяных телец и C-реактивного анализа белка. После анестезии используйте скальпель номер 11, чтобы сделать сантиметровую кожу и перитонеальные разрезы, а также очистить костный воск.
Затем используйте электрический блок костной дрель, чтобы пробить два смежных отверстия диаметром 4,8 миллиметра, чтобы разрыхлить некротическую кость, и использовать костную ложку, чтобы разрыхлить некротический костный мозг и гранулированную ткань. Затем соскребать и очистить костную ткань между двумя отверстиями, и распространение одного миллилитра debrided костного мозга на овец крови агар пластин для ночной инкубации при 37 градусов по Цельсию. На следующее утро выберите пластины с 30 до 300 колониями и рассчитайте количество колонийообразующих единиц на инфицированное животное.
На 28-й день после заражения добавьте один грамм гидрохлоридного порошка ванкомицина в 9,5 грамма сульфата кальция медицинского класса и используйте шпатель, чтобы перемешать смесь с тремя миллилитров нормального солевого раствора в течение 30 до 45 секунд. Добавьте смешанный продукт в гибкую форму кремнеземного геля и дайте продукту высохнуть при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем сгиб формы, чтобы удалить ванкомицин загружен сульфат кальция, или VCS шарик.
Для лечения антибиотиками и имплантации аутогенной кости, во-первых, повторно разоблачить поврежденную голень перед бритьем хвостовой области, и дезинфекции открытой хвостовой кожи с раствором повидоновой йода. Используйте хирургические ножницы, чтобы сократить хвост, и использовать абсорбируемые хирургические швы, чтобы закрыть кожу в вертикальный шов матраса, чтобы предотвратить животное от жевания швов. Используйте скальпель номер 11, чтобы сократить хвост кожи, чтобы выявить хвостовую кость.
Удалите мышцы, мягкие ткани и периостей и отсоедините копчик в каждом суставе. Перенесите фрагменты костей на 100-миллиметровую пластиковую тарелку, содержащую стерильный солевой раствор. Затем используйте изогнутые ножницы для имплантации четырех кусков шарика VCS в полость костного мозга и используйте изогнутые миппы для заполнения дефекта кости восемью кусками фрагментов копчика.
Затем закройте периостеум и разрезы кожи абсорбируемыми хирургическими швами в виде шва матраса. Уровень С-реактивного белка и белых кровяных клеток выше в группе моделей костной инфекции, чем у контрольных животных. Через две, четыре, шесть и восемь недель после аутогенного лечения vcS или VCS, Уровень C-реактивного белка и белых кровяных клеток значительно снижается.
Двухмерные изображения реконструкции указывают на постепенное увеличение объема кости в течение 12 недель после лечения VCS или VCS и аутогенной кости, в то время как потеря костной массы является значительным в группе необработанных костной инфекции модели. Для анализа количественных индексов регенерации костей можно реконструировать изображения 3D-модели с использованием данных биткарты, а в каждой кости можно выбрать овальную область длиной 4,8 миллиметра на 9,6 миллиметра. Соотношение объема костей к объему тканей в группе необработанных костных инфекций значительно ниже, чем в группах ВКС и ВКС.
Трабекулярное число и толщина в группе аутогенных костей VCS значительно выше, чем у необработанных моделей костной инфекции и животных VCS. Кроме того, результаты трабекулярного разделения в группе аутогенных костей VCS заметно ниже, чем в необработанной модели костной инфекции и группах VCS. Позаботьтесь, чтобы выбрать кроликов с соответствующей массой тела.
Заблокирйте раствор золотистого стафилококка костным воском. Debride некротической кости полностью, и удар двух смежных 4,8 миллиметра диаметром отверстия. После процедуры для мониторинга патологических процессов костной инфекции и восстановления могут быть выполнены другие методы диагностических измерений, такие как ультразвук, радиология и компьютерная томография.
Эта улучшенная модель костной инфекции и сочетание VCS и аутогенного лечения костей может быть полезным в изучении механизма подзаготовки костной инфекции и регенерации костей. Поскольку замораживаемый порошок стафилококка опасен, бактериальная суспензия всегда должна быть подготовлена в изолированной бактериальной лаборатории.
