Um modelo animal produtível é muito importante para a pesquisa de infecção óssea. No entanto, atualmente não há um modelo de coelho para o qual o estado das infecções e o número de bactérias são consistentes. Nosso modelo de coelho de infecção óssea usa uma bactéria consistente e é tratado por sulfato de cálcio carregado de vancomicina e fragmentos autógenos.
A técnica pode ser estendida para o diagnóstico de infecção óssea e terapia de não-união óssea, e na compreensão da patogênese da infecção óssea. Este método poderia fornecer insights sobre outros modelos de infecção óssea em ratos, ratos e suínos. É difícil carregar o mesmo volume de suspensão bacteriana em medula óssea.
A demonstração visual pode ajudar os pesquisadores a realizar os passos críticos de forma fácil e precisa. Para preparar a suspensão bacteriana, primeiro dissolva 0,5 miligramas de pó seco congelado S.aureus em 0,3 mililitros de meio de cultura LB. Misture bem a suspensão e estique as bactérias em placas de ágar de soja ótica para sua incubação por 16 horas a 37 graus Celsius.
Na manhã seguinte, escolha uma única unidade de formação de colônias bacterianas para cultura em tubos de caldo de soja tripptico por 24 horas a 37 graus Celsius. Quando as bactérias estiverem em fase de crescimento logarítmico médio, transfira 1 mililitro de bactérias para um tubo de 1,5 mililitro, e colete as bactérias por centrifugação. Em seguida, lave a pelota de célula bacteriana três vezes em 100 microliters de PBS por lavagem, reutilizando a bactéria em 3 mililitros de PBS fresco após a lavagem final.
Para configurar o molde de infecção óssea, confirme a falta de resposta ao beliscão de três meses de idade do coelho branco masculino da Nova Zelândia, e use um barbeador elétrico para remover o cabelo da região tibial proximal contra a direção do crescimento capilar. Desinfete a pele exposta com solução de iodo povidone, e use uma caneta e uma régua para marcar a extremidade superior da tíbia e a posição do furo de perfuração para a injeção de S.Aureus, tomando cuidado para que a posição do furo de perfuração esteja no meio horizontal do platô tibial. Em seguida, use um bisturi número 11 para fazer uma incisão na pele, seguido de uma incisão de um centímetro no peritônio.
Usando uma unidade de perfuração óssea elétrica, faça um buraco de dois milímetros de diâmetro na tíbia e pressione o orifício com um cilindro de dois milímetros de diâmetro de dois milímetros de cera óssea. Remova qualquer cera óssea sobressalente ao longo do plano horizontal do planalto tibial, e confirme que o orifício está cheio de cera óssea. Em seguida, use suturas cirúrgicas absorvíveis para costurar o peristoum e a pele em uma sutura vertical de colchão para evitar que o animal mastigue os pontos.
E use um injetor de assepsia de um mililitro para injetar lentamente uma vezes 10 às oito unidades formadoras de colônias por mililitro de solução S.Aureus no furo de perfuração. Nos dias sete, 14, 21 e 28 após a injeção, coloque os coelhos infectados em um cabides de coelho com a cabeça e a orelha fora do conterreiro, e colete amostras de sangue das veias auriculares para glóbulos brancos e análise de proteína c-reativa. Após a anestesia, use um bisturi número 11 para fazer pele tibial centítômetro e incisões peritoneais, e limpar a cera óssea.
Em seguida, use uma unidade de perfuração óssea elétrica para perfurar dois orifícios adjacentes de 4,8 milímetros de diâmetro para desbridar o osso necrosado, e usar uma colher óssea para debridar a medula óssea necrótica e o tecido de granulação. Em seguida, raspe e limpe o tecido ósseo entre os dois orifícios, e espalhe um mililitro da medula óssea desbridada em placas de ágar de sangue de ovelha para uma incubação durante a noite a 37 graus Celsius. Na manhã seguinte, selecione placas com 30 a 300 colônias, e calcule o número de unidades formadoras de colônias por animal infectado.
No 28º dia após a infecção, adicione um grama de pó de cloridrato de vancomicina a 9,5 gramas de sulfato de cálcio de grau médico, e use uma espátula para agitar a mistura com três mililitros de soro fisiológico normal por 30 a 45 segundos. Adicione o produto misto em um molde de gel de sílica flexível e deixe o produto secar à temperatura ambiente por 15 minutos. Em seguida, flexione o molde para remover o sulfato de cálcio carregado de vancomicina, ou conta VCS.
Para tratamento antibiótico e implantação do osso autógeno, primeiro, exponha a tíbia ferida antes de raspar a região da cauda, e desinfetar a pele da cauda exposta com solução de iodo povidone. Use uma tesoura cirúrgica para cortar a cauda e use suturas cirúrgicas absorvíveis para fechar a pele em uma sutura de colchão vertical para evitar que o animal mastigue os pontos. Use um bisturi número 11 para cortar a pele da cauda para revelar o osso da cauda.
Remova qualquer músculo, tecido mole e periosteum, e desprende o osso da cauda em cada articulação. Transfira os fragmentos ósseos para uma antena de plástico de 100 milímetros contendo soro fisiológico estéril. Em seguida, use uma tesoura curva para implantar quatro pedaços da conta VCS na cavidade da medula tibial, e use fórceps curvos para preencher o defeito ósseo com oito pedaços de fragmentos de cóccix autógeno.
Em seguida, feche o periosteum e as incisões da pele com suturas cirúrgicas absorvíveis de forma sutura de colchão. Proteína c-reativa e níveis de glóbulos brancos são mais elevados no grupo modelo de infecção óssea do que nos animais de controle. Duas, quatro, seis e oito semanas após o tratamento ósseo autógeno vcs ou VCS, proteína C-reativa e níveis de glóbulos brancos são significativamente reduzidos.
Imagens de reconstrução bidimensional indicam um aumento progressivo do volume ósseo durante o período de 12 semanas após o tratamento com VCS ou VCS e osso autógeno, enquanto a perda óssea é significativa no grupo modelo de infecção óssea não tratada. Para analisar os índices quantitativos de regeneração óssea, as imagens do modelo 3D podem ser reconstruídas usando dados de bitmap, e um diâmetro oval de 4,8 milímetros por uma região oval de 9,6 milímetros de comprimento pode ser selecionado em cada osso. A razão do volume ósseo para o volume tecidual no grupo modelo de infecção óssea não tratada é significativamente menor do que as medidas nos grupos vcs e vcs autogenos ósseos.
Os escores de número trabecular e espessura no grupo vcs autogenos são significativamente maiores do que os do modelo de infecção óssea não tratada e animais VCS. Além disso, os escores de separação trabecular no grupo ósseo autógeno vcs são marcadamente inferiores aos medidos no modelo de infecção óssea não tratada e nos grupos VCS. Tome cuidado para selecionar coelhos com peso corporal adequado.
Bloqueie a solução Staphylococcus aureus com cera óssea. Debrie completamente o osso necrosado, e soque os dois buracos adjacentes de 4,8 milímetros de diâmetro. Após o procedimento, outros métodos de medida diagnóstica, como ultrassom, radiologia e tomografia computadorizada podem ser realizados para monitorar os processos patológicos da infecção óssea e reparação.
Este modelo de infecção óssea melhorado e a combinação VCS e tratamento ósseo autógeno podem ser úteis no estudo do mecanismo sublinhado da infecção óssea e da regeneração óssea. Como o pó seco staphylococcus aureus é perigoso, a suspensão bacteriana deve ser sempre preparada em um laboratório bacteriano isolado.
