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Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

RIKEN BioResource Center

DBA/2 j &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DCA;&#x5F35;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5E83;&#x304F;&#x7528;&#x3044;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6A19;&#x6E96;&#x7814;&#x7A76;&#x5BA4;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x6B96;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x80DA;&#x79FB;&#x690D; (ET) &#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;DBA/2 j &#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x80DA;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;, 7 &#x306B; 15 &#x80DA;&#x5375;&#x7BA1;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x306E;&#x507D;&#x598A;&#x5A20;&#x306E; icr &#x7CFB;&#x96CC;&#x306B;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B50;&#x72AC;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9AD8;&#x3044;&#x6210;&#x529F;&#x7387;&#x306F; DBA/2 j &#x80DA; (&#x5973;&#x6027;/30 &#x80DA;) &#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x304C;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x80DA;&#x306E;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DBA/2 j &#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E; ET &#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DBA/2 j &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x80DA;&#x8EE2;&#x9001;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x3002;

DBA/2J &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC758;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB110;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;&#xC774; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC740;, &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACAA;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; &#xC1A1;&#xAE08; (&#xB3D9;&#xBD80;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC9C0; &#xD574;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC758;&#xB3C4; &#xC804;&#xC1A1; &#xC704;&#xD55C; DBA/2J &#xC790;&#xC190;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801; &#xBC88;&#xD638;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC2E4;&#xD5D8;, 7-15 &#xD0DC;&#xC544; &#xB780; &#xB2F9; pseudopregnant ICR &#xC554;&#xCEF7;&#xC73C;&#xB85C; &#xC62E;&#xACA8; &#xC84C;&#xB2E4;. &#xAC15;&#xC544;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xC131;&#xACF5;&#xB960; DBA/2J &#xBC30;&#xC544; (&#xC5EC;&#xC131; &#xB2F9; 30 &#xBC30;&#xC544;)&#xC758; &#xB2E4; &#xC218; &#xC804;&#xC1A1; &#xB54C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xB298;&#xB9BC;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; DBA/2J &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xC678; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DBA/2J &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC804;&#xC1A1; &#xC870;&#xAC74;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La cepa de rat&oacute;n DBA/2J es una cepa de laboratorio est&aacute;ndar que es ampliamente utilizada para la investigaci&oacute;n biom&eacute;dica. Esta variedad, sin embargo, sufre de pobre desempe&ntilde;o reproductivo. Adem&aacute;s, las condiciones para la transferencia de embriones confiable (ET) de esta cepa no ha aclarado. La intenci&oacute;n de este estudio fue determinar el n&uacute;mero &oacute;ptimo de embriones para la transferencia que permite la producci&oacute;n efectiva de DBA/2J descendencia. En el experimento, embriones de 7 a 15 por el oviducto fueron transferidos en hembras ICR seudopre&ntilde;adas. Una tasa de &eacute;xito relativamente alta para la producci&oacute;n de cr&iacute;as se observ&oacute; cuando un gran n&uacute;mero de embriones DBA/2J (30 embriones por mujer) fueron transferido. Este resultado demuestra que se puede mejorar la eficiencia de la ET de la cepa DBA/2J aumentando el n&uacute;mero de embriones transferidos.

Una condici&oacute;n de la transferencia del embri&oacute;n &oacute;ptima para la producci&oacute;n efectiva de ratones DBA/2J.

DBA/2J &#x5C0F;&#x9F20;&#x54C1;&#x7CFB;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6807;&#x51C6;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5E94;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x60A3;&#x6709;&#x751F;&#x6B96;&#x6027;&#x80FD;&#x5DEE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x672A;&#x9610;&#x660E;&#x7684;&#x8FD9;&#x682A;&#x53EF;&#x9760;&#x80DA;&#x80CE;&#x79FB;&#x690D; (ET) &#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x6700;&#x4F73;&#x7684;&#x5141;&#x8BB8;&#x6709;&#x6548;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; DBA/2J &#x540E;&#x4EE3;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x80CE;&#x6570;&#x3002;&#x5728;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8F93;&#x5375;&#x7BA1;&#x6BCF; 7 &#x81F3; 15 &#x80DA;&#x80CE;&#x88AB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x5047;&#x5B55; ICR &#x5973;&#x6027;&#x3002;Pup &#x751F;&#x4EA7;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x7387;&#x6709;&#x4EBA;&#x5F53; DBA/2J &#x80DA;&#x80CE; (&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5973;&#x6027; 30 &#x80DA;&#x80CE;) &#x5927;&#x6279;&#x88AB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; DBA/2J &#x5E94;&#x53D8;&#x7684; ET &#x6548;&#x7387;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x79FB;&#x690D;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x5F97;&#x5230;&#x6539;&#x5584;&#x3002;

&#x6709;&#x6548;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20; DBA/2J &#x6700;&#x4F18;&#x80DA;&#x80CE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

The DBA/2J mouse strain is a standard laboratory strain that is widely used for biomedical research. This strain, however, suffers from poor reproductive performance. In addition, the conditions for reliable embryo transfer (ET) of this strain have not been elucidated. The intention of this study was to determine the optimal number of embryos for transfer that allow the effective production of DBA/2J offspring. In the experiment, 7 to 15 embryos per oviduct were transferred into pseudopregnant ICR females. A relatively high success rate for pup production was observed when a large number of DBA/2J embryos (30 embryos per female) were transferred. This result shows that the ET efficiency of the DBA/2J strain can be improved by increasing the number of transferred embryos.

An optimal embryo transfer condition for the effective production of DBA/2J mice.

La souche de souris DBA/2J est une souche de laboratoire standard qui est largement utilis&eacute;e pour la recherche biom&eacute;dicale. Cette souche, cependant, souffre de la mauvaise performance de reproduction. En outre, les conditions de transfert d&#39;embryon fiable (ET) de cette souche n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; &eacute;lucid&eacute;es. Cette &eacute;tude visait &agrave; d&eacute;terminer le nombre optimal de transfert des embryons qui permettent la production effective de la prog&eacute;niture DBA/2J. Dans l&#39;exp&eacute;rience, des embryons de 7 &agrave; 15 par l&#39;oviducte ont &eacute;t&eacute; transf&eacute;r&eacute;s dans les femelles pseudo-gravides ICR. Un taux de r&eacute;ussite relativement &eacute;lev&eacute;s pour la production de nouveau-n&eacute;s a &eacute;t&eacute; observ&eacute; lorsqu&#39;un grand nombre d&#39;embryons DBA/2J (30 embryons par femelle) ont &eacute;t&eacute; transf&eacute;r&eacute;. Ce r&eacute;sultat montre que l&#39;efficacit&eacute; ET de la souche DBA/2J peut &ecirc;tre am&eacute;lior&eacute;e en augmentant le nombre d&#39;embryons transf&eacute;r&eacute;s.

Une condition de transfert d&#39;embryon optimale pour la production efficace de souris DBA/2J.

Die DBA/2J-Maus-Belastung ist eine standard Labor-Sorte, die f&uuml;r die biomedizinische Forschung verbreitet ist. Diese Sorte leidet jedoch schlechte reproduktive Leistung. Dar&uuml;ber hinaus haben die Voraussetzungen f&uuml;r zuverl&auml;ssige Embryotransfer (ET) der diese Sorte nicht gekl&auml;rt. Die Absicht dieser Studie war es, die optimale Anzahl von Embryonen f&uuml;r den Transfer zu bestimmen, die die tats&auml;chlichen Produktion DBA/2J Nachkommen zu erm&ouml;glichen. Im Experiment wurden in pseudopregnant ICR-Weibchen 7 bis 15 Embryonen pro Legedarm &uuml;bertragen. Eine relativ hohe Erfolgsquote f&uuml;r Welpen-Produktion wurde beobachtet, wenn eine gro&szlig;e Anzahl von DBA/2J Embryonen (30 Embryonen pro Weibchen) &uuml;bertragen wurden. Dieses Ergebnis zeigt, dass die ET-Effizienz der DBA/2J Belastung durch Erh&ouml;hung der Anzahl der &uuml;bertragenen Embryonen verbessert werden kann.

Eine optimale Embryo-Transfer-Voraussetzung f&uuml;r die effektive Produktion von DBA/2J M&auml;use.

Il ceppo di mouse DBA/2J &egrave; un ceppo di laboratorio standard che &egrave; ampiamente utilizzato per la ricerca biomedica. Questo ceppo, tuttavia, soffre di scarsa performance riproduttiva. Inoltre, le condizioni per affidabile embryo transfer (ET) di questo ceppo non sono state chiarite. L&#39;intenzione di questo studio era di determinare il numero ottimale di embrioni per trasferimento che permettono la produzione effettiva di DBA/2J prole. Nell&#39;esperimento, 7 a 15 embrioni per ovidotto sono stati trasferiti in pseudopregnant femmine ICR. Un relativamente alto tasso di successo per la produzione del cucciolo &egrave; stato osservato quando un gran numero di embrioni DBA/2J (30 embrioni per femmina) sono stato trasferito. Questo risultato dimostra che l&#39;efficienza ET del ceppo DBA/2J pu&ograve; essere migliorata aumentando il numero di embrioni trasferiti.

Una condizione di trasferimento degli embrioni ottimale per la produzione effettiva di DBA/2J mice.

&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#x5174;&#x5EFA;&#x4E86;&#x4E00;&#x5927;&#x6279;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x54C1;&#x7CFB;&#x3002;&#x7CBE;&#x5B50;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x5B58;&#x662F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x6709; C57BL/6 &#x9057;&#x4F20;&#x80CC;&#x666F;&#x7684;&#x6700;&#x6709;&#x6548;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6DF1;&#x4F4E;&#x6E29;&#x4FDD;&#x5B58;&#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; C57BL/6 &#x53D7;&#x7CBE;&#x6548;&#x7387;&#x662F;&#x7CBE;&#x5B50;&#x7684;&#x76F8;&#x5F53;&#x4F4E;&#x3002;&#x6DF1;&#x4F4E;&#x6E29;&#x867D;&#x7136;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x548C;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x5B58;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7CBE;&#x5B50;&#x50A8;&#x5B58;&#x6709;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5DF2;&#x4FDD;&#x5B58;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5982;&#x5B58;&#x50A8;&#x5728;&#x68C9;&#x7C7D;&#x7CD6; 18%&#x548C; 3%&#x8131;&#x8102;&#x725B;&#x5976; (R18S3)&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B0;&#x89E3;&#x51BB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x9700;&#x8981;&#x51B7;&#x51BB;&#x7684;&#x50A8;&#x5B58;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x89E3;&#x51BB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x79CD;&#x7CBE;&#x5B50;&#x548C; preincubation &#x7684;&#x4ECB;&#x8D28;&#xFF0C;&#x53EF;&#x589E;&#x5F3A;&#x7CBE;&#x5B50;&#x83B7;&#x80FD;&#x3002;&#x53EA;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x4E00;&#x9053;&#x83DC;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6536;&#x96C6;&#x6837;&#x672C;&#x9009;&#x62E9;&#x4E86;&#x79CD;&#x7CBE;&#x5B50;&#x548C;&#x7CBE;&#x5B50;&#x83B7;&#x80FD;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;-&beta;-&#x73AF;&#x7CCA;&#x7CBE;&#x3001; D-&#x9752;&#x9709;&#x80FA;&#x3001; &#x67E0;&#x6AAC;&#x9178;&#x94A0;&#x3001; &#x5DEF;&#x57FA;&#x4E59;&#x9187;&#x548C;&#x589E;&#x8865;&#x4FEE;&#x6539; Tyrode &#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7F16;&#x5236;&#x7684;&#x7CBE;&#x5B50;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x5927;&#x5927;&#x7684;&#x7CBE;&#x5B50;&#x89E3;&#x51BB;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x76F8;&#x6BD4; (63.9 vs 16.5%&#xFF0C;P &lt; 0.01&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x65B9;&#x6CD5;&#x632F;&#x5174; C57BL/6 &#x7CBE;&#x5B50;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x5B58; R18S3 &#x7684;&#x6709;&#x6548;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x4E3A;&#x786E;&#x4FDD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7CBE;&#x5B50;&#x83B7;&#x80FD;&#x7684;&#x7CBE;&#x5B50;&#x51B7;&#x51BB;&#x4FDD;&#x5B58; C57BL/6J &#x7CBE;&#x5B50;&#x6682;&#x505C;&#x4ECE;&#x5B9E;&#x9645;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

A large number of genetically modified mouse strains have been produced in recent years. Sperm cryopreservation is the most effective means of preserving these valuable strains, most of which have a C57BL/6 genetic background. However, the fertilization efficiency of sperm from several cryopreserved strains, including C57BL/6, is quite low. While new and improved methods of cryopreservation have been developed, the majority of sperm stocks have already been cryopreserved using traditional methods, such as storage in 18% raffinose and 3% skim milk (R18S3). Therefore, new thawing methods for these frozen stocks are needed. We have developed a new thawing method that involves selective collection of motile sperm and a preincubation medium that enhances capacitation. Motile sperm are selected simply by collecting a sample from the center of a dish, and capacitation is induced by the addition of methyl-beta-cyclodextrin, D-penicillamine, sodium citrate, and hypotaurine to modified Tyrode's solution. The fertilization rate of sperm prepared using this method was increased significantly compared to that of sperm thawed using the traditional method (63.9 vs 16.5%, P<0.01). These results demonstrate that this new in vitro fertilization method is an effective means of reviving C57BL/6 sperm cryopreserved in R18S3.

A practical novel method for ensuring stable capacitation of spermatozoa from cryopreserved C57BL/6J sperm suspension.

Un grand nombre de souches de souris g&#xE9;n&#xE9;tiquement modifi&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; produites ces derni&#xE8;res ann&#xE9;es. Cryoconservation du sperme est le moyen le plus efficace de pr&#xE9;server ces souches pr&#xE9;cieuses, dont la plupart ont un fond C57BL / 6 g&#xE9;n&#xE9;tique. Cependant, l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de fertilisation du sperme provenant de plusieurs souches cryoconserv&#xE9;s, y compris les C57BL / 6, est assez faible. Bien que les m&#xE9;thodes nouvelles et am&#xE9;lior&#xE9;es de cryoconservation ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;es, la majorit&#xE9; des stocks de sperme ont d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; cryoconserv&#xE9;s en utilisant des m&#xE9;thodes traditionnelles, telles que le stockage en raffinose 18% et 3% de lait &#xE9;cr&#xE9;m&#xE9; (R18S3). Par cons&#xE9;quent, de nouvelles m&#xE9;thodes de d&#xE9;cong&#xE9;lation pour ces stocks congel&#xE9;s sont n&#xE9;cessaires. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une nouvelle m&#xE9;thode de d&#xE9;cong&#xE9;lation qui implique la collecte s&#xE9;lective de spermatozo&#xEF;des mobiles et un milieu de pr&#xE9;incubation qui am&#xE9;liore la capacitation. Spermatozo&#xEF;des mobiles sont choisis simplement par pr&#xE9;l&#xE8;vement d&#x26;#39;un &#xE9;chantillon &#xE0; partir du centre d&#x26;#39;un plat, et la capacitation est induite par l&#x26;#39;addition de m&#xE9;thyl-b&#xEA;ta-cyclodextrine, la D-p&#xE9;nicillamine, le citrate de sodium, et l&#x26;#39;hypotaurine &#xE0; la solution mise &#xE0; jour de Tyrode. Le taux de f&#xE9;condation des spermatozo&#xEF;des pr&#xE9;par&#xE9;s en utilisant cette m&#xE9;thode a &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9; de mani&#xE8;re significative par rapport &#xE0; celle du sperme d&#xE9;congel&#xE9; en utilisant la m&#xE9;thode traditionnelle (63,9 vs 16,5%, P &#x26;lt;0,01). Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que cette nouvelle m&#xE9;thode de f&#xE9;condation in vitro en est un moyen efficace de faire revivre C57BL / 6 spermatozo&#xEF;des cryoconserv&#xE9;s dans R18S3.

Une nouvelle m&#xE9;thode pratique pour assurer la capacitation de spermatozo&#xEF;des &#xE0; partir stable suspension de spermatozo&#xEF;des cryoconserv&#xE9;s C57BL/6J

Eine gro&szlig;e Anzahl von genetisch ver&auml;nderten Maus-St&auml;mme sind in den letzten Jahren produziert worden. Kryokonservierung von Spermien ist das effektivste Mittel zur Erhaltung diese wertvollen Sorten, von denen meisten einen genetischen C57BL/6-Hintergrund haben. Die Befruchtung-Effizienz der Spermien aus mehreren kryokonservierten Sorten, einschlie&szlig;lich C57BL/6, ist jedoch relativ gering. W&auml;hrend neue und verbesserte Methoden der Kryokonservierung entwickelt wurden, haben die meisten Spermien Best&auml;nde bereits kryokonserviert wurden mit traditionellen Methoden, z. B. Speicherung in 18 % Raffinose und 3 % Magermilch (R18S3). Deshalb werden neue Methoden f&uuml;r diese Auftauen gefrorene Aktien ben&ouml;tigt. Wir haben eine neue Tauende Methode entwickelt, bei der selektive Sammlung von bewegliche Spermien und Vorinkubationsmethode Medium, die Kapazitation erh&ouml;ht. St&auml;bchenf&ouml;rmiges, Sperma einfach durch das Sammeln von einer Stichprobe aus der Mitte der Platte ausgew&auml;hlt sind, und Kapazitation wird durch die Zugabe von Methyl-Beta-Cyclodextrin, D-Penicillamin, Natrium-Citrat und Hypotaurine induziert, modifiziert Tyrodes-L&ouml;sung. Die Befruchtung der Spermien, die mit dieser Methode zubereitet wurde erh&ouml;ht signifikant im Vergleich zu der Spermien aufgetaut, mit der traditionelle Methode (63,9 vs. 16,5 %, P &lt; 0,01). Diese Ergebnisse zeigen, dass diese neue Methode der k&uuml;nstlichen Befruchtung als wirksames Mittel zur Wiederbelebung C57BL/6 Spermien kryokonserviert in R18S3.

Eine praktische neuartige Methode zur Gew&auml;hrleistung stabiler Kapazitation der Spermien von kryokonservierten C57BL/6J Sperma Aussetzung.

Un gran numero di ceppi del mouse geneticamente modificate &egrave; state prodotte negli ultimi anni. Crioconservazione degli spermatozoi &egrave; il mezzo pi&ugrave; efficace di preservare questi preziosi ceppi, la maggior parte delle quali hanno un background genetico C57BL/6. Tuttavia, l&#39;efficienza di fertilizzazione degli spermatozoi da diversi ceppi crioconservati, compresi C57BL/6, &egrave; abbastanza bassa. Mentre sono stati sviluppati metodi nuovi e migliorati di crioconservazione, la maggioranza degli stock di spermatozoi hanno stata crioconservata gi&agrave; usando metodi tradizionali, quali archiviazione nel 18% raffinosio e 3% latte scremato (R18S3). Quindi, scongelamento nuovi metodi per questi sono necessarie scorte congelate. Abbiamo sviluppato un nuovo metodo di scongelamento che comporta la raccolta selettiva di spermatozoi motili e un mezzo di preincubazione che migliora la capacitazione. Spermatozoi motili selezionati semplicemente raccogliendo un campione da al centro di un piatto, e la capacitazione &egrave; indotta dall&#39;aggiunta di metil-beta-ciclodestrina, D-penicillamina, citrato di sodio e ipotaurina alla soluzione di Tyrode modificata. Il tasso di fecondazione degli spermatozoi preparati usando questo metodo &egrave; stato aumentato significativamente rispetto a quella degli spermatozoi scongelati utilizzando il metodo tradizionale (63,9 vs 16,5%, P &lt; 0,01). Questi risultati dimostrano che questo nuovo metodo di fecondazione in vitro &egrave; un mezzo efficace per rilanciare C57BL/6 spermatozoi crioconservati in R18S3.

Un nuovo metodo pratico per assicurare stabili capacitazione degli spermatozoi dalla sospensione di spermatozoi crioconservati C57BL/6J.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3001;&#x8FD1;&#x5E74;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306F;&#x3001;C57BL / 6&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x83CC;&#x682A;&#x3092;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x3082;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;C57BL / 6&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x682A;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x4F4E;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306E;&#x65B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x682A;&#x5F0F;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x65E2;&#x306B;18&#xFF05;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;3&#xFF05;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E0;&#x30DF;&#x30EB;&#x30AF;&#xFF08;R18S3&#xFF09;&#x306B;&#x8A18;&#x61B6;&#x57DF;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x30B9;&#x30C8;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x89E3;&#x51CD;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x5B50;&#x3068;&#x53D7;&#x7CBE;&#x80FD;&#x7372;&#x5F97;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x57F9;&#x5730;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x53CE;&#x96C6;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x89E3;&#x51CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x76BF;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x304B;&#x3089;&#x8A66;&#x6599;&#x3092;&#x63A1;&#x53D6;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D1;&#x306F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-&#x3B2;-&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;D-&#x30DA;&#x30CB;&#x30B7;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30A4;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x306B;&#x30D2;&#x30DD;&#x30BF;&#x30A6;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x53D7;&#x7CBE;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF08;63.9&#x5BFE;16.5&#xFF05;&#x3001;P &#x26;lt;0.01&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x878D;&#x89E3;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;C57BL / R18S3&#x3067;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x7CBE;&#x5B50;6&#x3092;&#x5FA9;&#x6D3B;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306A;&#x624B;&#x6BB5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;C57BL/6J&#x7CBE;&#x5B50;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x7CBE;&#x5B50;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D1;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885;&#xC774; &#xC81C;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC790; cryopreservation &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; C57BL/6 &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBC30;&#xACBD;&#xC744; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xB2E8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; C57BL/6&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; cryopreserved &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC790;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xD6A8;&#xC728; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cryopreservation&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC815;&#xC790; &#xC8FC;&#xC2DD;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xB294; &#xC774;&#xBBF8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; cryopreserved 18 %raffinose 3% &#xD0C8;&#xC9C0; &#xC6B0;&#xC720; (R18S3) &#xC2A4;&#xD1A0;&#xB9AC;&#xC9C0;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC774;&#xB4E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xB179;&#xACE0; &#xB0C9;&#xB3D9;&#xB41C; &#xC8FC;&#xC2DD; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC815;&#xC790; capacitation &#xD5A5;&#xC0C1; preincubation &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xC9D1;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB179;&#xACE0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC815;&#xC790;&#xB97C; &#xC811;&#xC2DC;&#xC758; &#xC911;&#xC559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; capacitation Tyrode&#xC758; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC218;&#xC815; &#xBA54; &#xD2F8;-&#xBCA0;&#xD0C0;-cyclodextrin, D penicillamine, &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xC2DC;&#xD2B8;&#xB974;&#xC0B0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hypotaurine&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC900;&#xBE44; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC790;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xC728;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574; &#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC790;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; (63.9 &#xB300; 16.5%, P &lt; 0.01). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xC218;&#xC815; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xAE30; C57BL/6 &#xC815;&#xC790; r18s3&#xC5D0;&#xC11C; cryopreserved&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC218;&#xB2E8; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC815;&#xC790; cryopreserved C57BL/6J &#xC815;&#xC790; &#xD604; &#xD0C1; &#xC561;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; capacitation &#xBCF4;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC18C;&#xC124; &#xBC29;&#xBC95;.

Un gran n&#xFA;mero de cepas de rat&#xF3;n gen&#xE9;ticamente modificados se han producido en los &#xFA;ltimos a&#xF1;os. La crioconservaci&#xF3;n de esperma es el medio m&#xE1;s eficaz de preservar estos valiosos cepas, la mayor&#xED;a de los cuales tienen un fondo C57BL / 6 gen&#xE9;tica. Sin embargo, la eficiencia de la fertilizaci&#xF3;n de los espermatozoides criopreservados varias cepas, incluidos los C57BL / 6, es bastante bajo. Mientras que los m&#xE9;todos nuevos y mejorados de la criopreservaci&#xF3;n se han desarrollado, la mayor&#xED;a de las poblaciones de los espermatozoides ya han sido crioconservados con m&#xE9;todos tradicionales, tales como el almacenamiento en un 18% rafinosa y 3% de leche desnatada (R18S3). Por lo tanto, los nuevos m&#xE9;todos de descongelaci&#xF3;n de estas poblaciones congelados se necesitan. Hemos desarrollado un nuevo m&#xE9;todo de descongelaci&#xF3;n que consiste en la recogida selectiva de espermatozoides m&#xF3;viles y un medio de preincubaci&#xF3;n que mejora la capacitaci&#xF3;n. Espermatozoides m&#xF3;viles son seleccionados simplemente por recoger una muestra desde el centro de un plato, y capacitaci&#xF3;n se induce mediante la adici&#xF3;n de metil-beta-ciclodextrina, D-penicilamina, citrato de sodio, y hipotaurina a la soluci&#xF3;n de Tyrode modificada. La tasa de fertilizaci&#xF3;n de los espermatozoides preparados con este m&#xE9;todo se increment&#xF3; significativamente en comparaci&#xF3;n con la del esperma descongelado utilizando el m&#xE9;todo tradicional (63,9 vs 16,5%, P &#x26;lt;0,01). Estos resultados demuestran que este nuevo m&#xE9;todo de fertilizaci&#xF3;n in vitro es un medio eficaz para la reactivaci&#xF3;n de C57BL / 6 espermatozoides criopreservados en R18S3.

Un nuevo m&#xE9;todo pr&#xE1;ctico para la garant&#xED;a de Capacitaci&#xF3;n estable de espermatozoides criopreservados de la suspensi&#xF3;n de esperma C57BL/6J

Kyuichi Taguma

RIKEN BioResource Center

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification