Nossa pesquisa se concentra em descobrir o potencial de cicatrização de feridas de nanopartículas metálicas de bioengenharia. Nosso objetivo é entender como essas nanopartículas influenciam o processo de cicatrização e seu mecanismo de ação para abordar as principais questões sobre sua aplicação terapêutica no reparo tecidual. Desenvolvemos com sucesso vários curativos à base de nano usando polímeros naturais, demonstrando seu potencial para diversas aplicações de cicatrização de feridas e avançando em abordagens inovadoras no reparo de tecidos.
Esta pesquisa facilitará a identificação de potenciais mecanismos em modelos in vivo e contribuirá para o desenvolvimento de materiais de cicatrização de feridas que possuam propriedades biocompatíveis, aumentando sua eficácia e segurança para uso em diversas aplicações médicas. Para começar, pique a casca coletada da árvore Eucommia ulmoides em pedaços pequenos usando uma tesoura. Lave os materiais da casca picada duas vezes com água bidestilada
Em seguida, seque os pedaços de casca a 37 graus Celsius por 24 horas em condições de sombra. Transfira 20 gramas de casca seca à sombra para um frasco cônico contendo 220 mililitros de água estéril e bidestilada Em seguida, aqueça o balão a 130 graus Celsius por 20 minutos.
Observe que a cor da solução muda para amarelo claro após 10 minutos. Depois, armazene o extrato bruto contendo poliisopreno a quatro graus Celsius para uso posterior. A formação de uma estrutura semelhante a um fio indica a presença de poliisopreno nos extratos.
Adicione um nitrato de zinco molar di-hidratado a 50 mililitros de água deionizada em um balão cônico de 500 mililitros. Agitar continuamente a solução a 60 RPM utilizando um agitador magnético até que o nitrato de zinco di-hidratado se dissolva completamente. Em seguida, adicione 15 mililitros de extrato de casca de Eucommia ulmoides gota a gota a 20 mililitros de uma solução molar de nitrato de zinco di-hidratado.
Coloque a mistura de reação coberta em um agitador magnético. Ligue-o e configure-o para girar por três horas. Em seguida, adicione uma solução normal de hidróxido de sódio gota a gota à mistura de reação para ajustar o pH para nove.
Adicione hidróxido de sódio até que a solução fique branca leitosa, mantendo o pH abaixo de nove, indicando a formação de nanopartículas de óxido de zinco. Em seguida, transfira as nanopartículas sintetizadas de óxido de zinco de Eucommia ulmoides para um tubo de centrífuga de 50 mililitros e centrifugue a 100 G por cinco minutos a quatro graus Celsius. Colete as nanopartículas de óxido de zinco Eucommia ulmoides lavadas em uma placa de vidro e seque-as a 45 a 50 graus Celsius por uma hora em um forno de ar quente.
Para começar, semeie 1 vezes 10 elevado à potência de 4 células endoteliais da veia umbilical humana em cada poço de uma placa de 96 poços. Coloque a placa em uma incubadora ajustada para 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius. Para avaliação da citotoxicidade, adicione 10 microlitros de várias concentrações de nanopartículas de óxido de zinco de Eucommia ulmoides às células 90% confluentes.
Incube a placa por 24 horas a 37 graus Celsius em uma incubadora de 5% de dióxido de carbono. Após a incubação, remova cuidadosamente o meio antigo sem perturbar as células. Adicione 10 microlitros de solução CCK-8 a cada poço contendo 90 microlitros de meio DMEM fresco e incube a placa conforme mostrado anteriormente.
Em seguida, meça a absorbância das células tratadas com solução de CCK-8 a 450 nanômetros usando um espectrofotômetro. Semeie 1 vezes 10 elevado à potência de 5 células endoteliais da veia umbilical humana em placas de cultura de 12 poços contendo DMEM, suplementadas com 10% de FBS e 1% de estreptomicina de penicilina. Coloque as placas em uma incubadora ajustada a 5% de dióxido de carbono e 37 graus Celsius.
Faça um arranhão suavemente na monocamada da célula usando uma ponta de pipeta estéril de 200 microlitros para criar uma ferida representativa com uma largura de 200 micrômetros. Depois de remover o meio completo dos poços, lave a monocamada suavemente usando um mililitro de PBS para remover as células destacadas. Agora, adicione soluções de nanopartículas de óxido de zinco Eucommia ulmoides de 0, 10 e 20 microgramas por mililitro, combinadas com meio completo contendo 10% de FBS, aos poços.
Incube as placas a 37 graus Celsius em uma incubadora de 5% de dióxido de carbono. Adquira microfotografias da ferida de arranhão em zero horas e 24 horas usando um microscópio invertido. Calcule a porcentagem de fechamento da ferida usando a fórmula mostrada aqui.
As nanopartículas de óxido de zinco de Eucommia ulmoides não mostraram citotoxicidade nas células endoteliais da veia umbilical humana em concentrações de até 50 microgramas por mililitro após 24 horas. O fechamento da ferida foi significativamente aumentado nas células tratadas com 20 microgramas por mililitro de nanopartículas de óxido de zinco de Eucommia ulmoides, mostrando 81,5% de fechamento após 24 horas em comparação com 16% no grupo controle. As imagens microscópicas mostraram larguras de folga reduzidas na ferida no grupo de tratamento de 20 microgramas por mililitro em comparação com o controle após 24 horas.
