Este protocolo descreve um método para induzir cardiomiopatia diabética combinando dieta rica em gordura e injeções de estreptozotocina. O objetivo é fornecer uma estrutura confiável para a pesquisa científica sobre cardiomiopatia diabética e explorar possíveis aplicações de tratamento clínico. Desenvolvemos um método econômico e conveniente para criar cardiomiopatia diabética em camundongos com cardiomiócitos aumentados e desorganizados, ruptura de fibras miocárdicas, dissonação, disfunção miocardioal e função cardiovascular reduzida.
Comparado a outros métodos, nosso protocolo é econômico, eficiente e mais fácil de operar, combinando uma dieta rica em gordura e injeções de estreptozotocina. O estabelecimento desse modelo nos ajudará a entender melhor os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento e progressão da cardiomiopatia diabética. Para começar, usando uma seringa de um mililitro, administre injeções intraperitoneais de 30 miligramas por quilograma de estreptozotocina, ou STZ, diariamente durante sete dias para camundongos na dieta rica em gordura, ou grupo HFD / STZ.
Para medir o nível de glicose no sangue, uma semana após a injeção final, posicione cuidadosamente o mouse em um dispositivo de contenção, garantindo que sua cauda esteja totalmente estendida para fora. Higienize completamente o local de coleta de sangue na cauda com um cotonete com álcool 70%. Em seguida, insira a agulha de ponta afiada na veia da cauda, avançando da ponta em direção à base até uma profundidade de três a quatro milímetros.
Assim que a agulha estiver posicionada, aperte suavemente a parte superior da cauda para estimular o fluxo sanguíneo. Aplique cuidadosamente o sangue em uma tira de teste, permitindo que ele seja totalmente absorvido. Aguarde até que o medidor de glicose exiba a leitura da glicose no sangue.
Para o teste oral de tolerância à glicose, ou OGTT, jejue cada camundongo durante a noite por 14 horas, permitindo acesso irrestrito à água. Prepare aproximadamente 10 mililitros de uma solução de glicose a 20%. Administre uma dose de um grama por quilograma por via oral a cada camundongo durante o TOTG.
Monitore os níveis de glicose no sangue em zero, 15, 30, 60 e 120 minutos após a administração de glicose. Os camundongos do grupo HFD / STZ mostraram um pico de peso corporal em 12 semanas, significativamente maior do que o grupo ND. Após a administração de STZ, o peso corporal do grupo HFD / STZ diminuiu, enquanto o grupo ND apresentou um aumento constante ao longo de 12 semanas.
O grupo HFD/STZ manteve níveis de glicose sanguínea aleatória significativamente mais altos do que o grupo ND durante todo o período de alimentação. A curva do TOTG foi significativamente maior para o grupo HFD/STZ do que para o grupo ND, com ambos os grupos atingindo o pico 15 minutos antes do declínio. Os níveis séricos de insulina no grupo ND foram inicialmente mais altos do que no grupo HFD nas primeiras 12 semanas, mas reverteram após a administração de STZ Para realizar avaliações ecocardiográficas, colocou o camundongo anestesiado do grupo STZ/HFD ou ND em uma almofada de aquecimento.
Prenda as garras do mouse a um eletrodo para garantir uma posição supina estável. Remova o pelo do rato do peito usando creme depilatório e, em seguida, aplique gel ultrassônico na área exposta do peito. Para obter uma visão ideal do eixo longo do ventrículo esquerdo, coloque a sonda de 50 megahertz no lado esquerdo do peito do camundongo.
Gire a sonda no sentido anti-horário entre 15 graus e 45 graus em relação à linha paraesternal esquerda, alinhando o entalhe em direção ao ombro direito. Ajuste o eixo Z e o eixo Y para garantir uma imagem nítida no modo B. Em seguida, pressione o modo M duas vezes para exibir a linha de medição.
Posicione a linha de medição ao nível do músculo papilar e, em seguida, meça pelo menos três batimentos cardíacos consecutivos para precisão e toque em salvar clipe para salvar o cineloop na série. Identifique a dimensão sistólica final na fase alinhada com a onda ECGT e a dimensão diastólica final na fase alinhada com a onda ECGR. Em seguida, incline a almofada de operação, abaixando o canto superior esquerdo e levantando o canto inferior direito.
Ajuste a sonda ao longo da direção do ápice cardíaco, paralela ao longo eixo do coração, para obter uma visão transapical de quatro câmaras. Depois de ajustar o volume e a direção da amostragem, registre as informações hemodinâmicas da valva mitral para capturar as medições das ondas E e A. Retorne o camundongo recuperado para a gaiola doméstica, alojado em um ambiente controlado com um ciclo claro-escuro de 12 horas em pontos de tempo de zero e 12 semanas.
Os corações do grupo HFD/STZ apresentaram disfunção sistólica e diastólica, com amplitude reduzida no septo interventricular e pulsação da parede posterior do ventrículo esquerdo em comparação com o grupo ND.
