O principal objetivo deste estudo é demonstrar uma metodologia detalhada de ensaios de doenças de podridão de raízes secas, como a técnica de papel manchador e a técnica de vaso doente. Essas técnicas serão úteis para estudar a interação entre planta de grão-de-bico e Rhizoctonia bataticola. Entender a interação vegetal com o patógeno fúngico Rhizoctonia bataticola é importante agrícolamente importante.
Para isso, são necessários ensaios versáteis e altamente reprodutíveis. Aqui, dois ensaios que são amplamente utilizados em nosso laboratório são demonstrados. Um deles é à base de papel, e o outro é um ensaio à base de maconha.
Para executar o ensaio de papel manchado, prepare o fungo de bataticola de Rhizoctonia, escalando da cultura inclinada para a placa de Petri e, em seguida, para a cultura líquida. Prepare o berçário do grão-de-bico, semeando sementes em uma panela grande. Desenraizar-os e colocá-los no inóculo líquido e colocá-los em papel manchador.
Observe para sintomas da doença, ou seja, necrose na raiz, podridão radicular e amarelamento da folha oito dias após a inoculação. Mostrado aqui é uma poucas palavras, os passos na técnica de papel manchado. Para executar o ensaio de panela doente, inocular a refeição de grão-de-bico com fungo.
Após a incubação a 30 graus Celsius por 15 dias, a cultura doentia é obtida. Em seguida, em pó e misture com mistura de panela. Semear sementes na panela de controle e maconha doente.
Nos dias seguintes, observe os sintomas, ou seja, necrose na raiz, podridão radicular e amarelamento de folhas nas plantas infectadas, 10 dias após a semeadura. O pote doente pode ser dimensionado e pode ser usado para triagens em larga escala. Mostrado aqui é uma poucas etapas na técnica de maconha doente.
Rhizoctonia bataticola é um patógeno em desenvolvimento. Este fungo produz hifae e microsclerotia, que atuam como inuclum primário durante a infecção vegetal. A cultura pura aplicada através do método isolativo é usada para os ensaios.
O ponto chave para esses ensaios bem sucedidos é a carga ideal do inóculo. A demonstração da técnica de papel manchado começa aqui. Para preparar o líquido Rhizoctonia bataticola inóculo, inocula o caldo de 500 ml com o plugue de ágar fúngico de três dias de cultura de placa fresca e incubar o frasco em uma incubadora a 28 graus Celsius por cinco dias.
Filtrar a micélia fúngica cinza escura com microclerotia. Suspenda em água autoclavada e remova a mídia. Mais uma vez, filtre a micélia e remova a umidade secando a micélia por alguns minutos.
Suspenda 100 gramas de inóculo fúngico em 200 ml de água autoclavada em uma garrafa de geleia e misture corretamente. Desenvolva o berçário do grão-de-bico semeando sementes esterilizadas em solerant. Desenraize as plantas oito dias após a semeadura, lave-as e enxágue-as com RO autoclaved. Pegue um papel manchado e dobre-o uma vez e coloque metade dele na bandeja.
Molhe com água autoclavada. Pegue as plantas e mergulhe no inóculo por 30 segundos com movimento intermitente para cima e para baixo. Coloque as plantas de tal forma que as raízes estejam cobertas dentro da folha e a folia fique de fora.
Dobre a outra metade e dobre o papel. Para controle, mergulhe as plantas em água autoclavada, mantenha as bandejas em uma câmara de crescimento por oito dias. Resultados. Observe os sintomas como amarelamento de folhas, podridão radicular, necrose na raiz e redução do número de raiz lateral.
A demonstração da técnica de maconha doente começa aqui. Pegue um quilo de sementes comerciais de grão-de-bico. Lave as sementes com água da torneira e lave novamente com a água RO.
Mergulhe as sementes por cinco horas. Novamente, lave as sementes com água RO adicione 300 gramas em uma garrafa de geleia. Autoclave-os em 121 LVS por 15 minutos duas vezes continuamente.
Depois de esfriar, transfira a garrafa através do fluxo laminar. Inocular as garrafas com três plugues de ágar fúngicos de aproximadamente quatro milímetros quadrados e sacudi-lo bem para misturar corretamente. Enrole as garrafas e incuba-las em uma incubadora a 30 graus Celsius por 15 dias.
Observe para as garrafas com crescimento micárquico escuro ao redor das sementes de grão-de-bico e remova as sementes. Seque-os à temperatura ambiente e em pó-los. Misture o pó de batticola de rizoctonia com solorita e mantenha-os em temperatura ambiente por cinco dias.
A superfície esteriliza as sementes GT62 e as semeia a dois centímetros de profundidade. Resultados. Observe para a mortalidade de 90% na maconha doente. 10 dias após a semeadura, observe os sintomas como necrose nas raízes e redução do número de raízes laterais e amarelamento das folhas nos dias seguintes.
Maconha doente também pode ser preparada em solo de campo. Seca e infecção por batiticola de rizoctonia. Impor estresse de seca na panela doente retendo a água.
Aqui são mostradas as plantas sujeitas ao controle, seca, patógeno e seca simultânea e estresse patógeno. Observe para os sintomas, ou seja, mais necrose, podridão radicular e redução do número de raiz lateral, e comprimento da raiz no tratamento combinado de estresse em comparação com o tratamento somente do patógeno. Conclusões. A técnica de papel de mancha pode ser realizada em condições in vitro.
A técnica do vaso doente pode ser executada em condições in Vivo. No porto doente, o estresse abiótico, ou seja, o estresse da seca, pode ser imposto juntamente com a infecção por patógenos. Usando essas técnicas, pode-se estudar o padrão de infecção por patógenos.
A maioria das alterações fisiológicas ocorrem durante a interação grão-de-bico-rizoctonia bataticola, e também tela os genótipos de grão-de-bico para resistência. O ensaio de papel manchado é muito útil para gerar amostras de qualidade para estudos de microscopia e biologia molecular. O ensaio de panela doente, que imita as condições naturais de infecção, é aplicável para a triagem do germoplasma do grão-de-bico.
