Este método pode ajudar a responder perguntas-chave sobre induzir e avaliar miopia induzida por lentes em camundongos. Como estabilizar as lentes. O principal estágio número um desta técnica é que todas as etapas foram otimizadas e padronizadas permitindo a aquisição de resultados precisos, reprodutíveis e comparáveis em laboratórios.
Geralmente, as pessoas novas neste método é a luta, pois é muito difícil colar os óculos nas cabeças do rato sem qualquer prática. Para cada rato, prepare o seguinte. Uma vara de nylon montada na cabeça.
Um quadro de titânio mais alto e um inferior. Duas lentes com os poderes apropriados de acordo com o propósito do experimento. Um parafuso de 10 mm de comprimento M1.4 tamanho.
Uma porca para o parafuso tamanho M1.4. 1 lavadora simples para o parafuso tamanho M1.4 de 0,3 milímetros de espessura. E duas pontas de unha artificial.
Para montar a moldura dos óculos direito, organize uma ponta de unha para enfrentar a direção externa para obter o melhor efeito protetor. E, ajuste o ângulo entre a ponta da unha e o quadro para cerca de 130 graus para evitar mascarar o campo de visão do rato. Usando o adesivo de cianoacrilato, adere a ponta artificial da unha ao quadro e deixe o adesivo de 12 horas secar completamente.
Use cortadores de unha para aparar a ponta da unha totalmente aderida a cerca de um centímetro de forma e coloque a lente sobre a moldura. Injete o adesivo de cianoacrilato da borda da lente e deixe o adesivo se espalhar pela tensão superficial. Quando o adesivo estiver seco, aperte o parafuso na vara de nylon junto com a arruela do lado plano da vara.
Em seguida, prepare a moldura esquerda da mesma forma com a ponta dos dedos inclinada na direção oposta da ponta da moldura direita. Para a medição da linha de base da refração no comprimento axial, aplique uma gota de agente midriático, contendo cinco miligramas por mililitro de trópico e cinco miligramas por cloridrato de fenilefrita mililitro em cada lado do globo ocular para dilatar a pupila. Aguarde pelo menos cinco minutos antes da anestesia geral e ajuste a direção de um dos olhos dentro do visor de um refratário de fotos infravermelha para posicionar a primeira imagem purkinje no centro da pupila e medir a refração ao longo do eixo óptico.
Depois de medir o outro olho da mesma maneira, coloque o mouse no sistema de tomografia óptica de coerência óptica de domínio espectral e defina o comprimento axial como a distância do vórtice da córnea até o limite mais brilhante perto do nervo óptico. Para fixar o quadro de óculos previamente preparado no mouse, primeiro aplique uma gota de 0,1% de levelírio de sódio purificado para cada olho e coloque o queixo do rato anestesiado sobre uma superfície inclinada para que o plano frontal do crânio seja horizontal. Use um cotonete encharcado com 70% de etanol para esterilizar o cabelo e o couro cabeludo, entre as orelhas e os olhos, e faça uma incisão de 0,8 cm quadrados na pele, entre as orelhas e os olhos, para expor o crânio.
Use líquido de gravura dental em um cotonete para remover o periósteo e use um par de quadros sem lentes para ajudar a fixar a vara na posição direita, ajustando cuidadosamente a posição dos quadros para garantir que ambos os olhos estejam no meio dos quadros vazios. Use um sistema de adesivo dentário de autocuidado para fixar a vara na cabeça do mouse e esperar cerca de cinco minutos antes de remover cuidadosamente o quadro e a porca sem alterar a posição da vara. Em seguida, injete 0,75 miligramas por quilograma de cloridrato de atipamazole intraperitoneally para ajudar o rato a se recuperar da anestesia mais rapidamente e colocar o rato em uma gaiola individual até que esteja totalmente recuperado.
24 horas após a cirurgia, segure a vara e coloque as molduras com lentes sobre o animal para iniciar a indução da miopia. Em seguida, coloque uma rede entre o mouse e o fundo da gaiola para filtrar os restos de alimentos e monitorar o peso corporal e o comportamento bruto diariamente, comparando os camundongos míopes com os mesmos camundongos envelhecidos e intocados durante todo o processo experimental. Retire a armação e limpe as lentes e a ponta das unhas com cotonetes de algodão pelo menos duas vezes por semana para manter a transparência das lentes.
Aqui, um conjunto de óculos completos é mostrado. O ângulo entre os dois quadros pode ser ajustado para caber ratos de diferentes idades. Depois de colocar os óculos na moldura como demonstrado, os dois pedaços de óculos devem ser bastante simétricos.
Para esta medição de refração em um olho de rato induzido por uma lente 30 dioptre negativa por três semanas, a partir do pós-natal dia 21, o olhar foi controlado perto de zero graus no eixo x e y, indicando que o mouse estava vendo bem na frente da câmera. Toda essa imagem ocular, tirada por um sistema de tomografia óptica de coerência óptica de domínio espectral, sintonizada para ratos, permite que cada parte do olho seja definida. Neste experimento representativo, 30 lentes de diómetro negativos induziram uma forte mudança míope nas medidas de refração e comprimento axial, em comparação com as lentes de dicótra zero.
A mudança na refração atingiu o pico na primeira semana e permaneceu plana durante as duas semanas seguintes, enquanto a diferença entre a mudança dos comprimentos míopes dos olhos e do olho de controle foi significativa desde a primeira semana e tornou-se maior e maior nas duas semanas seguintes. Ao tentar o procedimento, é importante lembrar-se de seguir de perto a instrução para medir a refração e a lente axial, para permitir que o resultado seja comparável entre os laboratórios experimentais. Após seu desenvolvimento, a técnica abre caminho para pesquisadores do campo da miopia explorarem mecanismos patogênicos em camundongos comuns, mas também em camundongos geneticamente modificados.
