Name: olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease
Uploaded: 2014-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease at JoVE.com

This protocol follows any and all animal care and use guidelines and regulations set by IACUC at the University of Cincinnati. This work is funded by NIH/NINDS NS07722 and the Gardner Family Center for Parkinson&#8217;s Disease and Movement Disorders.

Todos os passos do protocolo de seguir a cuidados com os animais e usar directrizes e regulamentos estabelecidos pelo IACUC da Universidade de Cincinnati. 1. Considerações Gerais <ol><li> Se possível, testar os ratos em sua fase ativa do ciclo escuro. Normalmente, realizar testes em condições de pouca luz e pelo menos 1 hora no ciclo escuro. No entanto, se os testes no ciclo escuro não é viável, executar todos os três testes durante o ciclo de luz. Tenha em mente que os tempos de sniffing pode diminuir quando os ratos são testados durante o seu ciclo de sono. Nota: Embora os testes podem ser realizados durante o ciclo de sono os ratinhos podem mostrar menos interesse no sedimento enterrado, blocos, ou cartucho perfumado. </li><li> A fim de reduzir o efeito de qualquer pistas olfactivas fora, usar um par de luvas de base em todos os tempos ao longo de cada teste e, em seguida, colocar um par de luvas limpa sobre o par de base para cada rato e em cada ensaio. Como regra geral, em caso de dúvida, colocar em um jogo limpo de luvas. Ter uma caixa de luvas de lerily disponível, uma vez que vai ser alterado com freqüência. NOTA: Nós usamos luvas de borracha nitrílica para toda a manipulação animal. </li><li> Limpeza materiais de teste e de gaiolas entre indivíduos com um desinfectante / agente de esterilização é também um passo importante nesta série de testes a fim de reduzir o potencial para a propagação da doença bem como remover pistas olfactivas indesejados. </li></ol> 2. Enterrado Teste Pellet <ol><li> Pelo menos, dois dias antes do ensaio, registar o peso de cada rato e em seguida alimentar restringir a 90% do peso corporal. Antes do ensaio e durante a restrição alimentar, dão cada rato 1-2 pedaços dos peletes a ser utilizados durante o ensaio (por exemplo, um pedaço de cereal edulcorado). Não pule esta etapa porque os ratos são neofóbicas com alimentos e não podem procurar o sedimento durante o teste, caso não tenham comido as pelotas anteriormente. </li><li> Em todos os dias do teste, os ratos habituam durante 1 hora antes do teste, colocando a sua gaiola na sala de ensaio, sem a garrafa de água ou b alimentadorem. abrigá-los em sua gaiola com apenas uma tampa superior do filtro. </li><li> Durante habituação, preencher uma gaiola limpa rato ~ 3 centímetros de altura, com roupa de cama limpa assegurando a roupa de cama é distribuído uniformemente por toda a gaiola. Defina um temporizador para 5 min. </li><li> Após 1 hora de habituação, enterrar um adoçados pellet cereal 0,5 centímetros abaixo da cama de modo que não é visível. </li><li> Remover o rato de ensaio a partir da sua gaiola, colocá-lo no centro da gaiola de ensaio, colocar a tampa de topo do filtro sobre a gaiola e iniciar o temporizador. </li><li> Pare o cronômetro quando o mouse descobre a pelota e começa a comê-lo. Observe o tempo para descobrir o sedimento enterrado. </li><li> Se o mouse não encontrar a pelota dentro de 5 min, terminar o julgamento e observe uma pontuação de 300 segundos para que mouse. Mover o sedimento para o topo do leito de modo que o rato tem acesso a ele, e permitir que o rato para comer o sedimento. </li><li> Após o julgamento, o retorno do mouse para sua gaiola. </li><li> Esvazie a cama da gaiola de teste e limpar o cidade com uma solução de limpeza do quarto animal. </li><li> Repita os passos de 2,4-2,9 para cada rato, e trocar as luvas antes e depois de cada rato. </li><li> Depois de todos os ratos são testados, dar-lhes comida apenas o suficiente para mantê-los em 90% do peso corporal. </li><li> Realizar testes nos dias 2-5 da mesma forma que um dia de teste com uma exceção; enterrar o sedimento em um ponto diferente na gaiola para cada ensaio. </li><li> No teste de dia 6, realizar o julgamento de pellet superfície. </li><li> Para o ensaio da pelota da superfície, siga o mesmo procedimento para o dia do teste 1, mas em vez de enterrar a pelota sob o lugar da cama-lo em cima da cama. Anotar o tempo que o mouse para encontrar e começar a comer o sedimento. </li></ol> 3 Bloco de Teste <ol><li> Individualmente abrigar ratos em gaiolas limpas e colocar 5 blocos na gaiola (rotulado AE), mudando as luvas antes de configurar cada gaiola. </li><li> Realizar o teste 24 horas mais tarde. Mover ratinhos de teste para a área de teste, retirar a garrafa de água e alimentador de compartimento, e colocar ail 5 quadras da gaiola, juntamente com um punhado de roupas de cama em um saco plástico etiquetados com a identificação do animal. Coloque o saco plástico selado no topo da gaiola do mouse. </li><li> Habituar os animais nas suas gaiolas de origem sem a garrafa de água, alimentador de compartimento, e blocos de 1 h antes do teste. </li><li> Mudar de luvas entre cada gaiola para que os aromas não são trocados entre animais / blocos. </li><li> Alinhe as gaiolas de rato ao lado do outro em uma tabela com pelo menos 10 cm entre cada gaiola. A posição de uma câmara de vídeo de modo que a parte da frente da gaiola (não do lado longo da gaiola) é claramente à vista. </li><li> Ajustar o cronômetro para 30 seg e rotular um cartão com os detalhes importantes da experiência (data, identificação do mouse, experimentação, etc). Videotape o rótulo de 2-3 segundos. </li><li> Remova os blocos AD do saco de plástico com a identificação desse rato e colocá-los no meio da gaiola de modo que eles são claramente visíveis na câmera de vídeo. Verifique se há ~ 1 centímetro of espaço entre cada um dos blocos. Coloque a parte superior do filtro de volta na gaiola. Inicie o cronômetro e fita de vídeo durante 30 segundos. </li><li> Depois de 30 segundos, parar a gravação e remover os blocos da gaiola e colocá-los de volta para o saco plástico. </li><li> Mudar de luvas e depois passar para o próximo rato, repetindo o mesmo procedimento utilizado para o primeiro ensaio. Faça isso por um total de 6 ensaios para cada rato certificando-se de que há um intervalo inter-julgamento de ~ 5 min. </li><li> No dia 7 de julgamento, siga o mesmo procedimento para os ensaios 1-6, exceto em vez de colocar bloco D da própria gaiola do rato adicionar bloco E da jaula de um outro rato para que o mouse é exposto aos blocos A, B, e C a partir de sua gaiola própria e bloco de E a partir de uma outra gaiola do rato. Observe no livro de laboratório cujo bloco E cada rato é exposto e alternativo onde bloco E é colocado na gaiola de cada mouse (por exemplo, ABCE ou AEBC). Tome bloco de E a partir de um rato do mesmo sexo, mas não a partir de um cagemate original. Videotape durante 30 seg. </li><li> Após as sete ensaios, os animais retornam para uma nova gaiola limpa com seus cagemates originais. Limpo blocos utilizados no ensaio com água e detergente neutro e deixar secar ao ar para uso em testes posteriores. </li></ol> 4. Habituação / Dishabituation <ol><li> Realizar o teste de habituação / dishabituation de um modo semelhante ao teste de bloco, mas em vez de utilizar blocos que têm o odor de um rato, utilizar cartuchos de tecidos de algodão que prendem perfumado com diferentes pares de extractos. </li><li> Siga passos 3,1-3,4 usando um cartucho de tecido único, sem cheiro, em vez de blocos. </li><li> Habituar os ratos na sala de prova. </li><li> Prepare os cartuchos de tecido perfumado em uma sala separada. Coloque uma bola de algodão pequena em um cartucho limpo e, em seguida, adicionar 5 mL de extrato (por exemplo, extrato de amêndoa) no algodão. Encaixe a parte superior do cartucho sobre o algodão e coloque em uma caixa específica ou saco rotulado com aquele cheiro. </li><li> Faça o mesmo procedimento fou um segundo perfume (por exemplo, extracto de anis). Mudar de luvas entre a manipulação de diferentes aromas. Certifique-se que a bola de algodão é completamente envolto no cartucho de tecido. NOTA: Exposed fibras do algodão pode causar o animal ter interesse na bola de algodão para fins de assentamento, em vez de o próprio cheiro. </li><li> Em seguida, siga os passos 3,6-3,10 usando um cartucho de tecido perfumado para os primeiros seis ensaios, eo segundo cartucho tecido perfumado para o sétimo julgamento. </li></ol> 5 Análise de vídeos <ol><li> Para o bloco e os testes de habituação / dishabituation, tem um cego avaliador a condição experimental medir o tempo gasto farejando cada bloco, com sniffing definida como contato nasal com esse bloco. Se desejado, medir a outros comportamentos, tais como o tempo para se aproximar do novo bloco (P) durante o Ensaio 7 e a actividade total (o número de movimentos realizados ao longo do comprimento e largura da gaiola) durante cada ensaio. Marque o tempo gasto farejando umatempo d se aproximar do vídeo usando um cronômetro. </li><li> Do mesmo modo, para o teste de habituação / dishabituation, tem um avaliador cego para a condição experimental medir o tempo gasto cheirar o cartucho, o tempo para se aproximar do cartucho, e a actividade locomotora. </li></ol> 6. Estatísticas <ol><li> Analisar o teste de pellet enterrado usando estatísticas não paramétricas, porque a latência para encontrar a pelota pontuações tendem a mostrar a heterogeneidade de variância. Média, a latência para localizar o pellet através 3-5 dias e, em seguida, comparar entre os grupos de ratos usando um U-Mann-Whitney. Do mesmo modo, para a parte da superfície do sedimento o teste, analisar a latência para encontrar a pastilha utilizando um teste-U de Mann-Whitney para comparar os genótipos. </li><li> Para o teste bloco, analisar os dados do estudo 7 (introdução do bloco cheiro de romance). Normalmente, empregam análises não paramétricas para explicar a heterogeneidade de variância. Para analisar as diferenças de tempo gasto farejando ªe novo bloco, assim como o tempo para se aproximar dos blocos para diferentes grupos experimentais, utilizar o teste-U de Mann-Whitney. Use o teste dos postos sinalizados de Wilcoxon para comparar o tempo gasto farejando o romance bloco de tempo gasto farejando os blocos familiares. </li><li> Para o teste de habituação / dishabituation, analisa conduta paramétrico em Trials 1, 6 e 7, semelhante a estudos anteriores 20. Se os ratos apresentam pouca ou nenhuma sniffing, use análises não paramétricas. </li></ol>

<ol>
	<li>Hawkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfaction+in+neurodegenerative+disorder.">Olfaction in neurodegenerative disorder.</a> Adv. Otorhinolaryngol. 63, 133-151 (2006).</li><li>Ward, C., Hess, W., Calne, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+impairment+in+Parkinson's+disease.">Olfactory impairment in Parkinson's disease.</a> Neurology. 33, 943-946 (1983).</li><li>Doty, R., Stern, M., Pfeiffer, C., Gollomp, S., Hurtig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+olfactory+dysfunction+in+early+stage+treated+and+untreated+idiopathic+Parkinson's+disease.">Bilateral olfactory dysfunction in early stage treated and untreated idiopathic Parkinson's disease.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 55, 138-142 (1992).</li><li>Doty, R., Deems, D., Stellar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+in+parkinsonism:+a+general+deficit+unrelated+to+neurologic+signs,+disease+stage,+or+disease+duration.">Olfactory dysfunction in parkinsonism: a general deficit unrelated to neurologic signs, disease stage, or disease duration.</a> Neurology. 38, 1237-1244 (1988).</li><li>Tissingh, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+olfaction+in+de+novo+and+treated+Parkinson's+disease:+possible+implications+for+early+diagnosis.">Loss of olfaction in de novo and treated Parkinson's disease: possible implications for early diagnosis.</a> Movement Disorders. 16 (1), 41-46 (2001).</li><li>Montgomery, E., Baker, K., Lyons, K., Koller, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+performance+on+the+PD+test+battery+by+asymptomatic+first-degree+relatives.">Abnormal performance on the PD test battery by asymptomatic first-degree relatives.</a> Neurology. 52, 757-762 (1999).</li><li>Berendse, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subclinical+dopaminergic+dysfunction+in+asymptomatic+Parkinson's+disease+patients'+relatives+with+a+decreased+sense+of+smell.">Subclinical dopaminergic dysfunction in asymptomatic Parkinson's disease patients' relatives with a decreased sense of smell.</a> Ann. Neurol. 50 (1), 34-41 (2001).</li><li>Ponsen, M., Stoffers, D., Booij, J., van Eck-Smit, B., Wolters, E., Berendse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+hyposmia+as+a+preclinical+sign+of+Parkinson's+disease.">Idiopathic hyposmia as a preclinical sign of Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 56, 173-181 (2004).</li><li>Langston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Parkinson's+complex:+parkinsonism+is+just+the+tip+of+the+iceberg.">The Parkinson's complex: parkinsonism is just the tip of the iceberg.</a> Ann. Neurol. 59 (4), 591-596 (2006).</li><li>Ross, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+olfactory+dysfunction+with+risk+for+future+Parkinson's+disease.">Association of olfactory dysfunction with risk for future Parkinson's disease.</a> Ann. Neurol. 63, 167-173 (2008).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+alpha-synuclein.">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human alpha-synuclein.</a> J. Neurosci. 24, 9434-9440 (2004).</li><li>Fleming, S., Ekhator, O., Ghisays, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+sensorimotor+function+in+mouse+models+of+Parkinson's+disease.">Assessment of sensorimotor function in mouse models of Parkinson's disease.</a> J. Vis. Exp. , e50303 (2013).</li><li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+degeneration+of+DA+neurons+in+parkinsonism:+Optimizing+behavioral+assessment+of+outcome.">Intervention strategies for degeneration of DA neurons in parkinsonism: Optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Central Nervous System Diseases. , 131-151 (2000).</li><li>Whishaw, I., O'Connor, W., Dunnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contributions+of+motor+cortex,+nigrostriatal+dopamine+and+caudate-putamen+to+skilled+forelimb+use+in+the+rat.">The contributions of motor cortex, nigrostriatal dopamine and caudate-putamen to skilled forelimb use in the rat.</a> Brain. 109 (5), 805-843 (1986).</li><li>Schwarting, R., Huston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unilateral+6-hydroxydopamine+lesion+model+in+behavioral+brain+research.+Analysis+of+functional+deficits,+recovery+and+treatments.">The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments.</a> Prog Neurobiol. 49 (3), 215-266 (1996).</li><li>Glasl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pink1-deficiency+in+mice+impairs+gait,+olfaction+and+serotonergic+innervation+of+the+olfactory+bulb.">Pink1-deficiency in mice impairs gait, olfaction and serotonergic innervation of the olfactory bulb.</a> Experimental Neurology. 235, 214-227 (2012).</li><li>Kim, Y., Lussier, S., Rane, A., Choi, S., Andersen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+dopaminergic+glutathione+depletion+in+an+&#945;-synuclein+transgenic+mouse+model+results+in+age-related+olfactory+dysfunction.">Inducible dopaminergic glutathione depletion in an &#945;-synuclein transgenic mouse model results in age-related olfactory dysfunction.</a> Neuroscience. 172, 379-386 (2011).</li><li>Fleming, S., Tetreault, N., Mulligan, C., Huston, C., Masliah, E., Chesselet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+deficits+in+mice+overexpressing+human+wildtype+alpha-synuclein.">Olfactory deficits in mice overexpressing human wildtype alpha-synuclein.</a> The European Journal of Neuroscience. 28 (2), 247-256 (2008).</li><li>Nuber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+progressive+dopaminergic+phenotype+associated+with+neurotoxic+conversion+of+&#945;-synuclein+in+BAC-transgenic+rats.">A progressive dopaminergic phenotype associated with neurotoxic conversion of &#945;-synuclein in BAC-transgenic rats.</a> Brain. 136 (2), 412-432 (2013).</li><li>Macknin, J., Higuchi, M., Lee, V., Trojanowski, J., Doty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+dysfunction+occurs+in+transgenic+mice+overexpressing+human+tau+protein.">Olfactory dysfunction occurs in transgenic mice overexpressing human tau protein.</a> Brain Res. 1000, 174-178 (2004).</li><li>Lazic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+abnormalities+in+Huntington's+disease:+decreased+plasticity+in+the+primary+olfactory+cortex+of+R6/1+transgenic+mice+and+reduced+olfactory+discrimination+in+patients.">Olfactory abnormalities in Huntington's disease: decreased plasticity in the primary olfactory cortex of R6/1 transgenic mice and reduced olfactory discrimination in patients.</a> Brain Res. 1151, 219-226 (2007).</li><li>Wesson, D., Wilson, D., Nixon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+olfactory+dysfunction+be+used+as+a+biomarker+of+Alzheimer's+disease?.">Should olfactory dysfunction be used as a biomarker of Alzheimer's disease?.</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 10 (5), 633-635 (2010).</li><li>Taylor, T., Caudle, W., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VMAT2-deficient+mice+display+nigral+and+extranigral+pathology+and+motor+and+nonmotor+symptoms+of+Parkinson's+disease.">VMAT2-deficient mice display nigral and extranigral pathology and motor and nonmotor symptoms of Parkinson's disease.</a> Parkinsons Dis. 2011, 124-165 (2011).</li><li>Tillerson, J., Caudle, W., Parent, J., Gong, C., Schallert, T., Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+discrimination+deficits+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter+or+the+D2+dopamine+receptor.">Olfactory discrimination deficits in mice lacking the dopamine transporter or the D2 dopamine receptor.</a> Behav. Brain Res. 172, 97-105 (2006).</li><li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pilot+trial+of+the+microtubule-interacting+peptide+(NAP)+in+mice+overexpressing+alpha-synuclein+shows+improvement+in+motor+function+and+reduction+of+alpha-synuclein+inclusions.">A pilot trial of the microtubule-interacting peptide (NAP) in mice overexpressing alpha-synuclein shows improvement in motor function and reduction of alpha-synuclein inclusions.</a> Mol. Cell. Neurosci. 4, 597-606 (2011).</li><li>Crawley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> What's Wrong with My Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice. , (2000).</li><li>Nathan, B., Yost, J., Litherland, M., Struble, R., Switzer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+function+in+apoE+knockout+mice.">Olfactory function in apoE knockout mice.</a> Behav. Brain Res. 150, 1-7 (2004).</li><li>Spinetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol-induced+retrograde+memory+impairment+in+rats:+prevention+by+caffeine.">Alcohol-induced retrograde memory impairment in rats: prevention by caffeine.</a> Psychopharmacology. 201 (3), 361-371 (2008).</li><li>Bielsky, I., Hu, S., Szegda, K., Westphal, H., Young, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+impairment+in+social+recognition+and+reduction+in+anxiety-like+behavior+in+vasopressin+V1a+receptor+knockout+mice.">Profound impairment in social recognition and reduction in anxiety-like behavior in vasopressin V1a receptor knockout mice.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 483-493 (2004).</li></ol>

We have no conflicts of interest.

Cada um dos ensaios descritos no presente estudo medir diferentes aspectos da função olfactiva em ratinhos. O teste de pellet enterrado mede o aspecto do olfato motivação comida, testando a capacidade de fome (restrição alimentar, não alimentar privado) ratos para detectar um pedaço saboroso de cereal adoçado enterrado sob cama. O teste bloco mede mais do aspecto social da função olfativa, testando a capacidade dos ratos de discriminar entre o seu próprio perfume e que de uma mesma espécie. O teste de habituação / dishabituation avalia a capacidade do rato de discriminar entre cheiros inofensivos familiares e novos,. O uso de vários testes é importante na caracterização de um novo modelo porque anomalias na motivação comida ou medo podem contribuir para diferenças observadas nos ratos mutantes em comparação aos controles. Por exemplo, se apenas o bloco de teste é realizado, e diminuiu a cheirar do bloco que se observa o odor de outro rato, não é claro se existe uma olfactdéficit ory ou uma resposta de medo aprimorado para a mesma espécie que pode levar a evitar esse bloco. Quando vários testes são realizados e os déficits são observados em todos os testes, é fortemente favorável a uma interpretação de deficiência olfativa. No entanto, se as diferenças são observadas em apenas um teste, mas não os outros, então pode haver uma deficiência olfativa mais sutil, mas será essencial para descartar outras explicações (ou seja, maior o medo ou a redução da motivação dos alimentos). Outros fatores importantes para manter em mente ao testar camundongos função olfativa incluem a tensão de fundo e sexo dos camundongos. Diferentes estirpes de fundo genético (isto é, C57BL / 6, DBA, etc) podem ter efeitos profundos sobre o comportamento do rato, por conseguinte, recomenda-se a adaptar-se a cada protocolo em ratinhos de tipo selvagem com o mesmo plano antes de executar todo o experimento. Recomenda-se também que homens e camundongos fêmeas ser testados separadamente um do outro porque o sistema olfativo masculino é altaly sensível às fêmeas na detecção de estro e olfativa de uma fêmea em estro poderia interferir no desempenho de todos os três testes. Alguns passos são absolutamente críticos para seguir ao testar o olfato em camundongos. É importante estar ciente dos odores o experimentador está introduzindo aos animais. O uso de luvas para os procedimentos de mudança é essencial e freqüente de luvas entre os animais é necessária. É sempre uma boa prática para o experimentador não usar colônia ou perfume em dias de teste olfato. Enquanto algumas partes do procedimento são inflexíveis, existem outras partes que podem ser modificados e adaptados, sem reduzir a validade ou a sensibilidade do ensaio. Por exemplo, o número de tentativas de habituação pode ser aumentada ou diminuída, dependendo da estirpe de murganhos sendo testada e a rapidez com que se habituam ao estímulo. A principal limitação desses testes é que todos eles são conduzidos por alguma forma de motivação, seja comida ou social, fazendodifícil excluir completamente anomalias na motivação como uma explicação quando uma resposta alterada observado. Isto pode ser minimizado através da análise de parâmetros adicionais, tais como a actividade e o tempo durante o teste, para aproximar os estímulos. Uma vez dominado, os testes podem ser facilmente utilizados para examinar o fenótipo de novos modelos de rato de doença neurodegenerativa. Além disso, os testes que tem a maior potência, podem ser incluídos em estudos pré-clínicos testando potenciais agentes terapêuticos (para um exemplo, ver ref. 25).

Disfunção olfativa é ligado a um número de doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Parkinson (DP), doença de Alzheimer, e doença de Huntington 1. Na DP, deficiências olfativas incluem déficits na identificação odor, detecção e discriminação e são encontrados em até 70-95% dos pacientes 2-5. Estes déficits podem preceder os sintomas motores da DP cardeal por até 4 anos, indicando que a disfunção olfativa pode sinalizar os primeiros estágios de PD 6-10. A ocorrência precoce de déficits olfativos na DP levou a um grande interesse em disfunção olfativa e os mecanismos subjacentes envolvidos. Em estudos pré-clínicos em roedores, disfunção olfactiva pode ser uma medida do resultado sensível para prever o potencial terapêutico de novas estratégias terapêuticas. Muitos testes foram concebidos e amplamente utilizado para caracterizar deficiências sensório-motoras em modelos de roedores de PD e test o potencial terapêutico de novos tratamentos 11-15. Embora déficits olfativos estão bem documentados na DP, a função olfativa não tem sido realizada rotineiramente em muitos modelos. Essa visão está mudando, embora com a descoberta de formas genéticas de PD ea noção mais aceita que a DP é uma doença sistêmica que afeta mais do que apenas a função sensório-motor. Atualmente, existem vários estudos em modelos genéticos do rato do PD e outras doenças neurodegenerativas, que agora incluem a análise do olfato na caracterização 16-24. Dado o crescente interesse dos disfunção olfactiva em desordens neurodegenerativas, procurou-se montar uma bateria de testes olfactivos que podem ser utilizados para caracterizar novos modelos de neurodegeneração, assim como potenciais terapias modificadoras da doença de teste em estudos pré-clínicos. Os ensaios descritos no presente estudo tenham sido utilizados em ambas caracterização e os estudos pré-clínicos 18,25. Os testes highlighted neste estudo tenha sido mostrado para ser sensível para detectar disfunção olfactiva em um modelo de ratinho que sobre-expressam frequentemente utilizadas alfa-sinucleína de doença de Parkinson 18. Eles incluem o teste de sedimento enterrado 26,27, uma versão modificada do teste de bloco 23,24,28,29, e o teste de habituação / dishabituation 30. É importante notar que existem várias adaptações dos testes descritos neste estudo que são medidas sensíveis da função olfativa em camundongos, os destacados neste estudo são os testes de nosso laboratório tem mais experiência e utilizar rotineiramente.

<table><tbody><tr><td>Cap&#039;n Crunch</td><td>Quaker Oats</td><td>30000065310</td><td></td></tr><tr><td>Wooden Blocks</td><td>Lara&#039;s Crafts</td><td>10144</td><td></td></tr><tr><td>Almond Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>011110664716</td><td></td></tr><tr><td>Anise Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>011110615619</td><td></td></tr><tr><td>Banana Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>011110669919</td><td></td></tr><tr><td>Coconut Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>011110669889</td><td></td></tr><tr><td>Lemon Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>011110669957</td><td></td></tr><tr><td>Orange Flavor Extract</td><td>Kroger</td><td>0011110669964</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Cartridges</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z672122-500EA</td><td>Manufactured by Simport no: M490-2</td></tr><tr><td>Cotton Balls</td><td>Kroger</td><td>11110793119</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Cages</td><td>Ancare</td><td></td><td>19 x 29 x 12.7 cm</td></tr><tr><td>Camcorder</td><td>Sony</td><td>HDR-HC9</td><td></td></tr><tr><td>MiniDV Tapes</td><td>Sony DVC premium</td><td>27242523432</td><td>60 minute long play</td></tr></tbody></table>

olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process and may be a useful behavioral marker for early detection. Earlier detection in neurodegenerative disease is a major goal in the field because this is when neuroprotective therapies have the best potential to be effective. Therefore, in preclinical studies testing novel neuroprotective strategies in rodent models of neurodegenerative disease, olfactory assessment could be highly useful in determining therapeutic potential of compounds and translation to the clinic. In the present study we describe a battery of olfactory assays that are useful in measuring olfactory function in mice. The tests presented in this study were chosen because they measure olfaction abilities in mice related to food odors, social odors, and non-social odors. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of Parkinson&#8217;s disease as well as in testing potential disease-modifying therapies.

A pelota, bloco, e testes de habituação / dishabituation enterrados são todas as avaliações altamente vantajosas de olfato em camundongos. Usando estes testes, encontramos alterações significativas no olfato em vários modelos de mouse genética da doença de Parkinson, incluindo a superexpressão de alfa-sinucleína (Thy1-ASYN) 18 e camundongos knockout Atp13a2. Ambos Thy1-ASYN e Atp13a2 camundongos knockout levar mais tempo para encontrar o pellet enterrado do que os controles 18. Figuras 1-3 mostram os dados coletados a partir de tipo selvagem e Atp13a2 camundongos knockout. No teste de sedimento enterrado, ratinhos knockout Atp13a2 mostram um aumento de latência para encontrar a pastilha enterrado em comparação com ratinhos de controlo do tipo selvagem (Figura 1). No teste bloco, tanto do tipo selvagem e camundongos knockout Atp13a2 farejar o romance quadra da gaiola de um outro rato em comparação com os blocos de sua própria gaiola (Figura 2). Nos camundongos teste de habituação / dishabituation tipo selvagem mostrar habituação a um odor e<html> em seguida, aumentou quando cheirar um romance odor é introduzida (figura 3). <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500" /> Figura 1 enterrada sedimento teste. Latência para encontrar o sedimento em tipo selvagem (n = 10) e Atp13a2 KO (n = 14) a 20-27 m de idade. * P &lt;0,05, Mann-Whitney U. <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500" /> Figura 2 teste Bloco Tempo farejando o novo bloco (E) no teste de bloco em wildtype (n = 10) e Atp13a2 KO (n = 12) ratos do sexo feminino em 20 -. 27m de idade. ΔΔ representa p &lt;0,01 em comparação com os blocos A, B, e C do mesmo genótipo. Mann-Whitney U. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 51804 / 51804fig3highres.jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; Figura 3 teste de habituação / dishabituation. Tempo farejando um cartucho perfumado em camundongos de tipo selvagem média (9 m idade, n = 7) por 6 ensaios e da introdução de um cartucho com um novo perfume em julgamento 7.

Watch this Scientific Journal Video about Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease at JoVE.com

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Ensaios olfativas para o Rato modelos de doenças neurodegenerativas

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

olfactory-assays-for-mouse-models-of-neurodegenerative-disease

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Special Senses

SCIENTISTS IN ACTION

21.9K visualizações.  University of Cincinnati. Impairment in olfactory function is a common feature in many neurodegenerative disorders including Parkinson, Alzheimer, and Huntington diseases. In the present article, we describe a set of tests for assessing olfaction discrimination and detection in mice that can be used to measure olfactory abilities in mouse models of neurodegenerative diseases.

Vídeo: Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Assessment of Sensorimotor Function in Mouse Models of Parkinson's Disease

Sensitive and reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of potential therapeutic treatments in preclinical trials for many neurodegenerative diseases. In Parkinson's disease, sensorimotor tests sensitive to varying degrees of nigrostriatal dysfunction are fundamental for testing the efficacy of potential therapeutics. Reliable and quite elegant sensorimotor measures exist for rats, however many of these tests measure sensorimotor asymmetry within the rat and are not entirely suitable for the newer genetic mouse models of PD. We have put together a battery of sensorimotor tests inspired by the sensitive tests in rats and adapted for mice. The test battery highlighted in this study is chosen for a) its sensitivity in a wide variety of mouse models of PD, b) its ease in implementing into a study, and c) its low expense. These tests have proven useful in characterizing novel genetic mouse models of PD as well as in testing potential disease-modifying therapies.

In Parkinson's disease and movement disorders in general, sensitive and reliable behavioral assays are essential for testing novel potential therapeutics. Here, we describe a manageable battery of sensorimotor tests for mice that are sensitive to varying degrees of injury to the nigrostriatal system and useful for preclinical studies.

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Sensitive and  reliable behavioral outcome measures are essential to the evaluation of  potential therapeutic treatments in preclinical trials for many  ...

Comportamento

Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal&#8217;s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning. 
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.

This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected with aging and is a strong predictor of neurodegenerative diseases. Thus, olfaction testing is used as a non-invasive diagnostic method to detect neurological deficits early on. In order to understand the mechanisms underlying olfactory network susceptibility, olfactory research in rodents has gained momentum in the past decade.
Here, we present a very simple, time efficient and reproducible olfactory testing method of innate odor perception and sensitivity in mice without the need of any prior food or water restriction. The tests are performed in a familiar environment to the mice, require only the scents and a 2 min session of odorant exposure. The analysis is performed, post-hoc, using computer-assisted commands on ImageJ and can be, therefore, carried out from start to end by one researcher.
This protocol does not require any special hardware or setup and is indicated for any laboratory interested in testing olfactory perception and sensitivity.

We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible circuitry. In addition, this area's unique ability to generate new neurons throughout an organism's lifetime makes it an attractive system for developmental and regenerative biologists alike. Such interest necessitates a means for a quick, yet reliable assessment of olfactory function. Many tests of olfactory ability are complex, variable or not specifically designed for mice. Also, some tests are sensitive to memory deficits as well as defects in olfactory abilities, confounding obtained results.
Here, we describe a simple battery of tests designed to identify defects in olfactory sensitivity and preference. First, an initial general health assessment allows for the identification of animals suitable for further testing. Second, mice are exposed to various dilutions of scents to ascertain whether there is a threshold difference. Third, mice are presented with various scents, both attractive and aversive, that allow for the assessment of olfactory preference. These simple studies should make the initial characterization of olfactory behavior accessible for labs of varied resources and expertise.

Fundamental, yet unique properties of the rodent olfactory system have led to its increasing study among biologists. A relatively simple assessment of its function is then also needed. Here we describe sensitive tests for the characterization of mouse olfactory sensitivity and preference.

Teste Comportamental olfativo no rato adulto

The rodent olfactory system is of increasing interest to scientists, studied, in part, in systems biology because of its stereotyped, yet accessible ...

Biologia

Assessment of Social Transmission of Food Preferences Behaviors

Olfactory recognition deficits are suggested to be able to serve as clinical marker to differentiate Alzheimer&#39;s disease (AD) subjects from healthy aging groups. For example, olfactory dysfunction in AD can present as impairment in olfactory recognition, emerging during early stages of the disease and worsening while the disease progresses. The social transmission of food preferences (STFP) task is based on a rudimentary form of communication between rodents concerning distant foods dependent on the transmission of olfactory cues. Healthy wild-type mice would prefer to eat a novel, flavored food that was previously cued by a conspecific, and this food preference would be hampered in transgenic AD mice, such as the APP/PS1 model. Indeed, a strong preference for the cued food in C57Bl6/J mice of 3 months of age was found, and this was reduced in 3 months old transgenic APP/PS1 mice. In summary, STFP task could be a powerful measure to be integrated in present subclinical detection assays of AD.

This paper presents a protocol for the investigation of social transmission of food preference in mice. The advantages and possible applications for this procedure, for instance, in detecting early changes in AD mouse models, are highlighted. To conclude, interpretation of the results in light of critical details are discussed.

Avaliação da transmissão Social dos comportamentos de preferências alimentares

Olfactory recognition deficits are suggested to be able to serve as clinical marker to differentiate Alzheimer&#39;s disease (AD) subjects from healthy ...

Avaliação do comprometimento olfativo em camundongos devido a poluentes ambientais inalados

Studying the Effects of Inhaled Environmental Pollutants on Olfactory Function in Mice

Olfactory impairment is a significant public health problem and independently predicts the risk of neurodegenerative diseases. Inhaled environmental pollutants exposure may impair olfaction; thereby, there is an urgent need for methods to evaluate the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfaction. Mice are ideal models for olfactory experiments because of their highly developed olfactory system and behavioral characteristics. To assess the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfactory function in mice, a detailed buried food test and social odor discrimination experiment is provided, including the experiment preparation, the selection and construction of experimental facilities, the testing process, and indexes of time. Meanwhile, timekeeping equipment, operational details, and the experimental environment are discussed to ensure the success of the assay. Zinc sulfate is used as the treatment to demonstrate the feasibility of the experimental approach. The protocol provides a simple and clear operational process for assessing the effects of inhaled environmental pollutants on olfactory function in mice.

Autor em destaque: Avaliando os efeitos olfativos de poluentes transportados pelo ar - alimentos enterrados e testes de odor social

This paper provides a detailed description of the buried food test and social odor discrimination experiment to assess the effects of inhaled environmental pollutants exposure on olfactory function in mice.

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Olfactory impairment is a significant public health problem and independently predicts the risk of neurodegenerative diseases. Inhaled environmental ...

Ambiente

<meta charset="utf8"></head><body>Projetando um olfatômetro flexível e econômico para experimentos olfativos com roedores

Constructing an Olfactometer for Rodent Olfactory Behavior Studies

The use of olfactometers to study rodent behavior and brain activity during olfactory tasks is crucial for understanding brain circuits. These sophisticated devices allow researchers to precisely control and deliver odor stimuli, enabling the investigation of complex olfactory processes in rodents. Although commercially available olfactometers are convenient, they present challenges when technical issues arise, often requiring costly assistance and potentially disrupting research timelines. This article details the construction of a custom olfactometer specifically designed for mouse olfactory behavior experiments, providing a comprehensive list of parts and step-by-step instructions. The olfactometer is controlled through MATLAB, offering a user-friendly interface for researchers. Importantly, the open-source code allows users to modify and adapt the system, tailoring behavioral tasks to meet specific experimental needs. Building a customized olfactometer empowers users with the knowledge and capability to perform custom experimental design and troubleshooting independently, saving both time and resources. This approach not only enhances research flexibility but also fosters a deeper understanding of the equipment's functionality, ultimately leading to more robust and reliable olfactory studies in rodents.

<meta charset="utf8"></head><body>Construindo um Olfatômetro para Estudos de Comportamento Olfativo de Roedores Espectroscopia de Infravermelho Próximo Estudo de Hipervarredura em Aconselhamento Ps

This protocol describes the construction of an olfactometer for go/no-go olfactory behavior experiments. Step-by-step instructions, along with images, are provided to ensure the successful construction of the olfactometer. Information for troubleshooting issues encountered during the process is also included.

Ensaios olfativas para o Rato modelos de doenças neurodegenerativas

Resumo

Explore mais vídeos

Capítulos neste vídeo

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Teste Comportamental olfativo no rato adulto

Avaliação da transmissão Social dos comportamentos de preferências alimentares

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Construindo um olfatômetro para estudos de comportamento olfativo de roedores

Construindo um olfatômetro para estudos de comportamento olfativo de roedores