Efeitos de diferentes modos de conexão da eletroacupuntura no eletrocardiograma e na descarga nervosa em ratos

Até agora, não existe um método uniforme para conexão de eletroacupuntura em pesquisas clínicas e fundamentais. Apresentamos um protocolo que tentou comparar os efeitos de diferentes métodos de conexão no eletrocardiograma (ECG) e na descarga neural em ratos para explorar a maneira mais adequada de conectar o instrumento de eletroacupuntura.

A eletroacupuntura (EA) é um dos métodos mais comumente usados na acupuntura e tem um bom efeito na dor, depressão, distúrbios do movimento sensorial e outras doenças. A eficácia do EA é influenciada por muitos fatores, como a precisão da seleção do ponto de acupuntura, a duração e o curso do tratamento com EA e os parâmetros do EA. No entanto, raramente foi discutido se os eletrodos positivos e negativos do instrumento EA com pontos de acupuntura em diferentes locais e distâncias têm efeito sobre o efeito curativo. Neste experimento, observamos os efeitos da conexão do instrumento EA a pontos de acupuntura em diferentes posições e distâncias no ECG e na descarga nervosa vaga em ratos e explicamos preliminarmente se o campo elétrico formado por diferentes modos de conexão EA tem efeito sobre a função do corpo. Os modos de conexão da EA neste experimento incluíram os mesmos pontos de acupuntura em ambos os lados do corpo, o mesmo meridiano ou meridiano diferente Os resultados mostraram que quando os pólos positivo e negativo foram conectados aos pontos de acupuntura em ambos os lados do corpo, o registro do ECG e da atividade do nervo vago foi perturbado (os mesmos membros anteriores e posteriores); quando os pontos de acupuntura foram conectados no mesmo lado do corpo, quanto menor a distância entre as duas agulhas, menor o efeito no ECG e no registro da atividade do nervo vago, e o efeito aumentou com o aumento da corrente; quando os pontos de acupuntura estavam na mesma área de acupuntura, o registro do ECG e da atividade do nervo vago não era perturbado se as duas agulhas não formassem um curto-circuito.

A eletroacupuntura (EA) é um tipo de terapia de acupuntura para o tratamento de doenças, aplicando a saída de corrente pulsada de um instrumento em pontos meridianos do corpo humano. A EA tem as vantagens de parâmetros de estimulação estáveis e ajustáveis, que podem ser quantificados, cronometrados e economizam trabalho, e tem vantagens especiais no tratamento e pesquisa científica de certas doenças, como o estudo do mecanismo de tratamento para várias neuralgias e anestesia com acupuntura, analgesia com acupuntura e assim por diante¹.

Alguns fatores influenciam a eficácia do EA, como precisão do ponto de acupuntura, duração do tratamento e parâmetros do EA, como forma de onda, intensidade do pulso e frequência. O EA clínico comumente usado é um EA bidirecional, que causa menos danos aos tecidos e interfere menos nas funções fisiológicas normais do corpo humano. Também pode prevenir e curar doenças. Os tecidos humanos são condutores de eletrólitos complexos compostos de água, sais inorgânicos e coloides carregados². Quando o EA é aplicado ao corpo humano, as partículas carregadas no campo elétrico se movem e causam mudanças na concentração e distribuição que afetam a função do corpo humano. Mudanças no movimento, concentração e distribuição de partículas são a base da terapia com EA¹.

Na última década, o número de estudos de EA aumentou para várias doenças ^1,2,3. Em relação à conexão dos eletrodos positivo e negativo da EA, poucos estudos foram realizados para esclarecer isso em detalhes. Durante a EA, os eletrodos positivo e negativo no instrumento EA devem ser conectados a duas agulhas de acupuntura para atuar como estimulação elétrica. Atualmente, os modos comuns são os seguintes: duas agulhas de cada lado do corpo estão conectadas aos mesmos pontos de acupuntura e diferentes pontos de acupuntura no mesmo lado do corpo estão conectados¹. No entanto, a eficácia desses métodos de conexão ainda não foi comprovada. Alguns cientistas estimaram que as duas agulhas de cada lado do corpo não podem ser conectadas aos pólos positivo e negativo; caso contrário, a corrente afetaria a função cardíaca, mas os dois pontos diferentes do mesmo lado do corpo podem ser conectados aos pólos positivo e negativo³. Alguns pesquisadores acreditam que as agulhas de acupuntura que conectam os eletrodos positivo e negativo devem ser usadas na área de acupuntura única para formar estimulação elétrica no ponto de acupuntura para promover a detecção do meridiano².

A eletroacupuntura em vários pontos de acupuntura pode ativar ou inibir a descarga nervosa ^4,5. Muitos estudos explicam o efeito estimulante da EA em Tsusanli (ST36) no nervo vago ^6,7,8. No entanto, esses estudos não elaboraram a conexão da EA e não explicaram as diferenças nos efeitos dos diferentes modos de conexão da EA. Dada a lacuna nesta pesquisa, este estudo usou técnicas eletrofisiológicas para explicar os efeitos de diferentes conexões de EA no ECG e na atividade nervosa. Os resultados fornecem mais evidências para a conexão correta do EA.

Este protocolo experimental foi aprovado pela Revisão Ética Padronizada de Animais de Laboratório da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Pequim e foi conduzido em total conformidade com o protocolo experimental (Código de revisão ética: BUCM-2023110901-4046).

1. Animais e agrupamento

1. Animais
   1. Obtenha 48 ratos SPF machos saudáveis (8 semanas de idade) pesando aproximadamente 200-240 g.
      NOTA: Para este estudo, os animais foram fornecidos pela Vital River Company [Número da licença: SYXK (Beijing) 2020-0033].
   2. Abrigue todos os ratos no Centro Experimental Animal da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Pequim. Durante o experimento, certifique-se de que os ratos tenham livre acesso a comida e água.
   3. Manter o ambiente de alimentação com base numa mudança de ritmo circadiano de 12 h e controlar a temperatura ambiente a 23 ± 2 °C.
   4. Mergulhe todos os instrumentos cirúrgicos em álcool 75% e autoclave. Esterilize as salas de manejo de animais com lâmpadas UV.
   5. Realize todas as cirurgias em animais sob anestesia. Anestesie o rato com injeção intraperitoneal de uretano a 20% (1 g/kg) e certifique-se de que o rato continue respirando espontaneamente.
   6. Manter a temperatura corporal do rato a 37 °C com placas termostáticas durante a cirurgia.
   7. Mantenha os olhos do rato úmidos com pomada de eritromicina durante o experimento.
   8. Decapite e mate os ratos sob anestesia no final do experimento e armazene as amostras / amostras conforme necessário.
2. Grupos
   1. Agrupe os ratos aleatoriamente de acordo com os modos de conexão. Distribua 8 ratos para cada grupo aleatoriamente.
   2. Grupo controle (sem acupuntura): Alimente o rato normalmente sem nenhum tratamento.
   3. Grupo A, ponto de acupuntura único no grupo do membro anterior esquerdo: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo ao ponto Quchi e a 3 mm do ponto Quchi, respectivamente (ver Figura 1A). Localize o ponto de Quchi (LI11) na depressão anterior lateral da articulação do cotovelo e insira a agulha perpendicularmente a uma profundidade de ~5 mm após o posicionamento.
   4. Grupo B, dois pontos de acupuntura no grupo do membro anterior esquerdo: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo aos pontos Quchi (LI11) e Waiguan (TE5), respectivamente (ver Figura 1B). Localize o ponto Waiguan (TE5) fora do ponto inferior de 1/6 de dobra do antebraço nas suturas radial e ulnar. Insira a agulha a uma profundidade de 2 mm.
   5. Grupo C, os dois pontos de acupuntura no grupo dos membros anteriores e posteriores esquerdos: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo a Quchi (LI11) e Tsusanli (ST36) (ver Figura 1C). Localize o ponto de Tsusanli (ST36) 5 mm abaixo da cabeça da fíbula e posterolateral ao joelho e insira a agulha perpendicularmente a uma profundidade de ~ 1 cm.
   6. Grupo D, os mesmos pontos de acupuntura em ambos os membros posteriores: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo com Tsusanli bilateral (ST36) (ver Figura 1D).
   7. Grupo E, os mesmos pontos de acupuntura em ambos os membros anteriores: Conecte os eletrodos EA positivo e negativo ao Quchi bilateral (ver Figura 1E).

2. Conexão de ECG

1. Contenha os ratos em decúbito dorsal após serem completamente anestesiados.
2. Insira agulhas de acupuntura de 1/2 polegada paralelas à pele do punho do membro anterior direito, membro posterior direito e membro posterior esquerdo dos ratos, evitando o músculo.
3. Conecte as alças da agulha aos eletrodos de registro: o eletrodo positivo (branco) no membro anterior direito, o eletrodo negativo (vermelho) no membro posterior esquerdo e o eletrodo de referência (preto) no membro posterior direito do rato (ver Figura 2).
4. Use um gravador de sinal fisiológico para registrar o ECG de superfície padrão da derivação II do membro de ratos em tempo real (taxa de amostragem: 1 KHz, faixa de filtragem: filtro de corte baixo, 200 Hz; filtro de corte alto, 0,8 Hz).

3. Separação do nervo vago e registro dos sinais de descarga vagal

1. Faça uma incisão de 2-4 cm ao longo da linha média do pescoço entre a laringe e o esterno após a fixação supina dos ratos anestesiados.
2. Corte o tronco do nervo vago direito em aproximadamente 1-2 cm após localizar a bainha carotídea direita (contendo a artéria carótida, o nervo vago e a cadeia simpática) (ver Figura 3A).
   NOTA: O nervo simpático está localizado lateralmente à artéria carótida e acompanha o nervo vago. O nervo simpático cervical é fino em comparação com o nervo vago.
3. Conecte o tronco nervoso com um par de eletrodos de gancho de cobre e prenda o eletrodo de referência à incisão para eliminar a interferência. Use solução salina para manter a atividade do nervo vago durante todo o experimento (ver Figura 3B).
4. Cubra a superfície da ferida com óleo mineral para manter o isolamento entre o eletrodo e o músculo.
5. Use um gravador de sinal fisiológico para registrar a descarga nervosa dos ratos em tempo real (taxa de amostragem: 5 KHz, faixa de filtragem: filtro de corte baixo, 100 Hz; filtro de corte alto, 1000 Hz).

4. Intervenção da EA

NOTA: A acupuntura dos ratos após o ECG e a descarga do nervo vago foram estáveis.

1. Conecte as duas alças da agulha separadamente aos clipes de agulha do instrumento EA.
2. Defina a estimulação EA para uma onda quadrada bidirecional com uma largura de onda de 0.3 ms. Defina a intensidade da estimulação para 0.2 mA, a frequência para 10 Hz e o tempo de estimulação para 20 min.
3. Observe as alterações no ECG e na descarga nervosa de ratos sob diferentes modos de conexão da EA em tempo real. Colete os dados por 30 s sem qualquer estimulação, 30 s antes do EA e 30 s após o EA usando o gravador de sinal fisiológico.
4. Registre as mudanças nas frequências cardíacas, formas de onda de ECG e descargas vagais dos ratos usando um software de gravação.

5. Análise estatística dos dados

1. Compare as alterações no ECG e na descarga nervosa em ratos em diferentes modos de conexão EA (antes e depois da EA).
2. Expresse todos os dados experimentais como a média ± erro padrão.
3. Execute o teste t de Student quando os dados passarem no teste de distribuição normal. Realize um teste t de amostras pareadas para comparar as alterações antes e depois da EA e considere p < 0,05 como estatisticamente significativo.

Efeitos de diferentes modos de conexão de EA no ECG em ratos
No grupo Controle, o ECG de ratos normais foi registrado (ver Figura 4A). Verificou-se que as condições basais dos ratos eram significativamente diferentes. A frequência cardíaca dos ratos variou de 258 a 473 bpm (ver Tabela Suplementar 1).

No Grupo A, os dados de ...

Neste experimento, observamos os efeitos das diferentes formas de conectar os eletrodos positivo e negativo, incluindo a frequência cardíaca, a frequência da atividade do nervo vago e a amplitude de descarga. Os resultados mostraram que quando os pólos positivo e negativo foram conectados a ambos os membros anteriores do corpo, isso afetou a emissão de bioeletricidade. Quando os pólos positivo e negativo foram conectados ao mesmo lado do corpo, quanto mais próxima a distância ent...

Os autores não têm nada a divulgar.

Esta pesquisa foi apoiada pela Disciplina Nacional de Acupuntura de Alto Nível e Administração de Moxabustão da Medicina Tradicional Chinesa (número de concessão zyyzdxk-2023254).