identification-characterization-protein-glycosylation-using-specific

Identification and Characterization of Protein Glycosylation using Specific Endo- and Exoglycosidases

Glycosylation, the addition of covalently linked sugars, is a major post-translational modification of proteins that can significantly affect processes ...

New England BioLabs

&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; endoglucanases &#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x7C9F;&#x9152;&#x88C2;&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x6210;&#x5206;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x9694;&#x79BB;&#x4E0E;&#x70ED;&#x78B1;&#x53CA;&#x5176;&#x7EC4;&#x4EF6; &#xFF08;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x3001; 3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x3001; beta1&#x3001; 3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x548C;&#x5206;&#x652F;&#x7684; &beta;-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#xFF09; &#x540E;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6309;&#x987A;&#x5E8F;&#x5220;&#x9664;&#x591A;&#x7CD6;&#x4E0E;&#x8FDC;&#x85E4;-beta1&#xFF0C;&#x6D88;&#x5316; 3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x548C; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x65B0;&#x578B;&#x8FDC;&#x85E4;-&#x53CA;&#x5176;&#xFF0C;3-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176; &#xFF08;mutanase&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6E29;&#x548C;&#x9694;&#x79BB;&#x540E;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#xFF0C;&#x5206;&#x652F;&#x7684; beta1 3-beta1&#xFF0C;6-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x662F;&#x6BD4;&#x524D;&#x9762;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x66F4;&#x4E3A;&#x4E30;&#x5BCC;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6269;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x65B0;&#x7684;&#x534F;&#x8BAE;&#x6211;&#x4EEC;&#x7F16;&#x5199;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x9AD8;&#x652F;&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x547D;&#x540D;&#x6B64;&#x9AD8;&#x652F;&#x7684; &beta;-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6; diglucan&#xFF0C;&#x53CD;&#x6620;&#x51FA;&#x5176;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x5DF2;&#x9009;&#x5B9A;&#x94FE;&#x63A5; 1&#xFF0C;3 &#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7D20;&#x8010;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E00;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4E49; S.&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x8425;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5899;&#x4F53;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC1;&#x660E;&#x5176;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x6210;&#x5206;&#x3002;

&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x9176;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x998F;&#x5141;&#x8BB8;&#x91CD;&#x65B0;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7C9F;&#x9152;&#x88C2;&#x6B96;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x6210;&#x5206;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x8F6C;&#x8BA9;&#x7684; diglucan&#x3002;

Purified endoglucanases have been used to determine the composition of Schizosaccharomyces pombe cell wall. This structure has been traditionally studied after isolating its components (mannoproteins, alpha1,3-glucan, beta1,3-glucan, and a branched beta-glucan) with hot alkali. Instead, we sequentially removed the polysaccharides by digesting with endo-beta1,3-glucanase and with a novel endo-alpha1,3-glucanase (mutanase). After this gentle isolation we observed that a branched beta1,3-beta1,6-glucan is much more abundant than previously described. By scaling-up the new protocol we prepared large amounts of the highly branched glucan and determined its structural features. We have named this highly branched beta-glucan diglucan, reflecting its two types of beta linkages. We have also identified an insoluble endoglucanase-resistant type of 1,3-linked glucan present in S. pombe cell walls. We redefined the wall composition of S. pombe vegetative cells by this new method. Finally, to demonstrate its application, we determined the cell wall composition of known mutant strains.

A glucanase-driven fractionation allows redefinition of Schizosaccharomyces pombe cell wall composition and structure: assignment of diglucan.

Endoglucanases purifi&eacute;es ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour d&eacute;terminer la composition de la paroi cellulaire de Schizosaccharomyces pombe. Cette structure a &eacute;t&eacute; traditionnellement &eacute;tudi&eacute;e apr&egrave;s avoir d&eacute;branch&eacute; ses composants (mannoprot&eacute;ines alpha1, 3-glucane, beta1, 3-glucane et un b&ecirc;ta-glucane ramifi&eacute;) avec de l&#39;alcali chaud. Au lieu de cela, nous avons supprim&eacute; s&eacute;quentiellement les polysaccharides par digestion avec endo-beta1, 3-glucanase et avec un roman endo-alpha1, 3-glucanase (mutanase). Apr&egrave;s cet isolement doux, nous avons observ&eacute; qu&#39;un beta1 ramifi&eacute;s, beta1-3, 6-glucane est beaucoup plus abondante que celle d&eacute;crite pr&eacute;c&eacute;demment. De mise &agrave; niveau du nouveau protocole nous pr&eacute;par&eacute; de grandes quantit&eacute;s du glucan hautement ramifi&eacute; et d&eacute;termin&eacute; ses caract&eacute;ristiques structurales. Nous avons nomm&eacute; cette diglucan de b&ecirc;ta-glucan hautement ramifi&eacute;s, refl&eacute;tant ses deux types de liaisons b&ecirc;ta. Nous avons &eacute;galement identifi&eacute; un type r&eacute;sistant &agrave; l&#39;endoglucanase insoluble des glucanes 1,3-linked pr&eacute;sents dans les parois cellulaires de S. pombe. Nous avons red&eacute;fini la composition de la paroi des cellules v&eacute;g&eacute;tatives de S. pombe par cette nouvelle m&eacute;thode. Enfin, pour illustrer son application, nous avons d&eacute;termin&eacute; la composition de la paroi cellulaire des souches mutantes connues.

Un fractionnement par glucanase permet de red&eacute;finition de la structure et composition de la paroi de la cellule Schizosaccharomyces pombe : cession de diglucan.

Ein Glucanase-gesteuerte Fraktionierung erm&#xF6;glicht Neudefinition von Schizosaccharomyces pombe Zellwand Zusammensetzung und Struktur: Zuordnung von diglucan.

Endoglucanases purificati sono stati utilizzati per determinare la composizione della parete cellulare di Schizosaccharomyces pombe. Questa struttura &egrave; stata tradizionalmente studiata dopo aver isolato i suoi componenti (mannoproteine, alfa1, 3-glucano, beta1, 3-glucano e un beta-glucano ramificato) con alcali caldo. Invece, abbiamo rimosso in modo sequenziale i polisaccaridi digerendo con endo-beta1, 3-glucanasi e con un romanzo endo-alpha1, 3-glucanasi (mutanase). Dopo questo delicato isolamento abbiamo osservato che un beta1 diramato, beta1-3, 6-glucano &egrave; molto pi&ugrave; abbondante di quanto descritto in precedenza. Da scaling-up il nuovo protocollo abbiamo preparato grandi quantit&agrave; del glucano altamente ramificato e determinato le sue caratteristiche strutturali. Abbiamo chiamato questa diglucan di beta-glucano altamente ramificato, che riflette i suoi due tipi di legami beta. Abbiamo anche individuato un insolubile tipo endoglucanase-resistente del glucano 1,3-linked presente nelle pareti cellulari di S. pombe. Abbiamo ridefinito la composizione della parete delle cellule vegetative S. pombe da questo nuovo metodo. Infine, per dimostrare la sua applicazione, abbiamo determinato la composizione della parete cellulare di ceppi mutanti conosciuti.

Un frazionamento glucanasi-driven permette di ridefinizione del Schizosaccharomyces pombe parete cellulare composizione e struttura: assegnazione di diglucan.

&#x7CBE;&#x88FD;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306B;&#x71B1;&#x3044;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; (&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x3001;&alpha; 1 3-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3001;beta1, 3-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3001;&#x5206;&#x5C90;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;) &#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x591A;&#x7CD6;&#x985E;&#x9060;&#x85E4; beta1 &#x3092;&#x6D88;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x524A;&#x9664; 3-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; &alpha; &#x306F;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x9060;&#x85E4;-1, 3-&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (&#x30E0;&#x30BF;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;)&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7A4F;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x5F8C;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306B;&#x5206;&#x5C90;&#x3057;&#x305F; beta1 3 &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; 1, 6 &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30FB; &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044;&#x5206;&#x5C90;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3;&#x3092;&#x5927;&#x91CF;&#x306B;&#x6E96;&#x5099;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248;&#x306E;&#x9023;&#x643A;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x5206;&#x5C90;&#x3057;&#x305F; &beta; &#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3; diglucan &#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8010;&#x6027;&#x306E;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30F3; S. &#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306B;&#x5B58;&#x5728; 1, 3&#xFF0C; &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; S. &#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6804;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x518D;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x7D44;&#x6210;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B0;&#x30EB;&#x30AB;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x99C6;&#x52D5;&#x5206;&#x5225;&#x5206;&#x88C2;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x518D;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A; diglucan &#x306E;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3002;

&#xC21C;&#xD654; endoglucanases Schizosaccharomyces pombe &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB728;&#xAC70;&#xC6B4; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; (mannoproteins, alpha1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;, beta1, 3-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; &#xBC0F; &#xBD84;&#xAE30; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;)&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD55C; &#xD6C4; &#xACF5;&#xBD80; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB300;&#xC2E0; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5D4;&#xB3C4; beta1&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4; &#xB2F9; &#xB958;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70; 3-glucanase &#xACE0; &#xC18C;&#xC124; &#xC5D4;&#xB3C4;-alpha1, 3-glucanase (mutanase). &#xC774; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xBD84;&#xAE30; beta1 3 beta1, 6-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;&#xC740; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C;. &#xC0C8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD655;&#xC7A5;-&#xCD5C;&#xB300;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB192;&#xC740; &#xBD84;&#xAE30; &#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78;&#xC758; &#xB300;&#xB7C9; &#xC900;&#xBE44; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC5F0;&#xACC4;&#xC758; &#xB450; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xBC18;&#xC601;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xBD84;&#xAE30; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xAE00; &#xB8E8; &#xCE78; diglucan&#xC744; &#xB77C;&#xB294; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xAE00; &#xB8E8; 1, 3 &#xC5F0;&#xACB0; &#xCE78;&#xC5D0; S. pombe &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC758; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; endoglucanase &#xAC15;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; S. pombe &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xAD6C;&#xC131; &#xC7AC;&#xC815;&#xC758;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC785;&#xC99D;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xAD6C;&#xC131; &#xACB0;&#xC815;.

Glucanase &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xB958; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Schizosaccharomyces pombe &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD; &#xC870;&#xC131;&#xACFC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xC7AC;&#xC815;&#xC758;: diglucan&#xC5D0; &#xD560;&#xB2F9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Endoglucanases purificadas se han utilizado para determinar la composici&oacute;n de la pared celular de Schizosaccharomyces pombe. Esta estructura se ha estudiado tradicionalmente despu&eacute;s de aislar sus componentes (manoprote&iacute;nas, alpha1, 3-glucano, beta1, 3-glucano y un beta-glucano ramificado) con &aacute;lcali caliente. En cambio, hemos eliminado secuencialmente los polisac&aacute;ridos digiriendo con endo-beta1, 3-glucanasa y con una novela endo-alpha1, 3-glucanasa (mutanase). Despu&eacute;s de este aislamiento suave que observamos una ramificada beta1, 3-beta1, 6-glucano es mucho m&aacute;s abundante que se ha descrito anteriormente. Por el nuevo protocolo escalado preparamos grandes cantidades del glucano muy ramificado y determinar sus caracter&iacute;sticas estructurales. Hemos nombrado a este diglucan beta-glucano muy ramificada, reflejando sus dos tipos de v&iacute;nculos de beta. Tambi&eacute;n hemos identificado un tipo resistente a permitan insoluble de vinculados con 1,3 glucano presente en la pared celular de S. pombe. Hemos redefinido la composici&oacute;n de la pared de las c&eacute;lulas vegetativas de S. pombe por este nuevo m&eacute;todo. Finalmente, para demostrar su aplicaci&oacute;n, se determin&oacute; la composici&oacute;n de la pared celular de estirpes mutantes conocidos.

Un fraccionamiento basadas en glucanasa permite la redefinici&oacute;n de la estructura y composici&oacute;n de la pared celular de Schizosaccharomyces pombe: asignaci&oacute;n de diglucan.

&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x6027;&#x75E2;&#x75BE;&#x548C;&#x809D;&#x8113;&#x80BF;&#xFF0C;&#x662F;&#x7532;&#x58F3;&#x7D20;&#x58C1;&#x56CA;&#x80BF;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F20;&#x64AD;&#x7684;&#x3002;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x56CA;&#x80BF;&#x58C1;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; encystation&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x7684;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; EiJacob1&#x3002;EiJacob1 &#x6709;&#x4E94;&#x4E2A;&#x4E32;&#x8054;&#x9635;&#x5217;&#xFF0C;&#x516D;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x4F4E;&#x590D;&#x6742;&#x5EA6; Ser &#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;-&#x5BCC;&#x9694;&#x677F;&#x9694;&#x5F00;&#x3002;E.&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4;&#x4E5F;&#x6709;&#x65E0;&#x6570;&#x7684;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x71D5;&#x9884;&#x6D4B;&#x548C;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x3001; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x516B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE; E.invadens &#x56CA;&#x80BF;&#x58C1;&#x5B8C;&#x5168;&#x7531;&#x516D;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x516B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x542B;&#x6709;&#x7CD6;&#x5206;&#x3002;E.invadens &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x9884;&#x6D4B;&#x4E03;&#x96C5;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x3001; &#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x71D5;&#x4E94;&#x548C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#x3002;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55; PCR &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x867D;&#x7136;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x56CA;&#x80BF;&#x58C1;&#x7531;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801; Jacobs&#x3001; Jessies &#x548C;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x589E;&#x52A0;&#x671F;&#x95F4; E.invadens encystation &#x5927;&#x7EA6;&#x7814;&#x53D1;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x96C5;&#x5404;&#x5E03;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20; (&#x4EA4;&#x8054;&#x86CB;&#x767D;) &#x548C;&#x71D5;&#x548C;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20; (&#x53EF;&#x80FD;&#x9176;)&#x3002;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x96C5;&#x5404;&#x4E09;&#x88AB;&#x4E4B;&#x524D;&#x5B88;&#x6052;&#x7AD9;&#x70B9; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;TPSVDK&#xFF09; Lys Ser &#x5BCC;&#x548C;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x6491;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5206;&#x89E3;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x80BD;&#x662F;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5730;&#x70B9;&#x7684;&#x6728;&#x74DC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C; E.invadens Cys &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x540E;&#x8005;&#x5207;&#x5272;&#x96C5;&#x5404;&#x5E03;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x4F53;&#x5185;&#x5207;&#x5272;&#x7684;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x96C5;&#x5404;&#x5E03;&#x51DD;&#x96C6;&#x4E86;&#x6FB3;&#x5E26;&#x94FE;&#x63A5;&#x7684;&#x78B3;&#x6C34;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E8E;&#x4E00;&#x81F3;&#x4E03;&#x5DF1;&#x7CD6;&#x957F;&#x4E86; deoxysugars &#x5728;&#x51CF;&#x5C11;&#x7ED3;&#x675F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x675F;&#x4E86;&#x6240;&#x6709;&#x7684; E.invadens &#x56CA;&#x80BF;&#x58C1;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x5305;&#x542B;&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x57DF; (&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x9176;&#x3001; &#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x71D5;&#x548C;&#x96C5;&#x5404;&#x5E03;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;) &#x548C;&#x96C5;&#x5404;&#x5E03;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x5DEE;&#x5F02;&#x6539;&#x6027;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; Cys &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x548C;&#x6FB3;&#x5E26;&#x94FE;&#x63A5;&#x7684;&#x7CD6;&#x3002;

&#x51E0;&#x4E01;&#x8D28;&#x7ED3;&#x5408;&#x51DD;&#x96C6;&#x7D20;&#x7684;&#x963F;&#x7C73;&#x5DF4; invadens &#x56CA;&#x80BF;&#x58C1;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x540E;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;

Entamoeba histolytica, which causes amebic dysentery and liver abscesses, is spread via chitin-walled cysts. The most abundant protein in the cyst wall of Entamoeba invadens, a model for amebic encystation, is a lectin called EiJacob1. EiJacob1 has five tandemly arrayed, six-Cys chitin-binding domains separated by low-complexity Ser- and Thr-rich spacers. E. histolytica also has numerous predicted Jessie lectins and chitinases, which contain a single, N-terminal eight-Cys chitin-binding domain. We hypothesized that E. invadens cyst walls are composed entirely of proteins with six-Cys or eight-Cys chitin-binding domains and that some of these proteins contain sugars. E. invadens genomic sequences predicted seven Jacob lectins, five Jessie lectins, and three chitinases. Reverse transcription-PCR analysis showed that mRNAs encoding Jacobs, Jessies, and chitinases are increased during E. invadens encystation, while mass spectrometry showed that the cyst wall is composed of an approximately 30:70 mix of Jacob lectins (cross-linking proteins) and Jessie and chitinase lectins (possible enzymes). Three Jacob lectins were cleaved prior to Lys at conserved sites (e.g., TPSVDK) in the Ser- and Thr-rich spacers between chitin-binding domains. A model peptide was cleaved at the same site by papain and E. invadens Cys proteases, suggesting that the latter cleave Jacob lectins in vivo. Some Jacob lectins had O-phosphodiester-linked carbohydrates, which were one to seven hexoses long and had deoxysugars at reducing ends. We concluded that the major protein components of the E. invadens cyst wall all contain chitin-binding domains (chitinases, Jessie lectins, and Jacob lectins) and that the Jacob lectins are differentially modified by site-specific Cys proteases and O-phosphodiester-linked glycans.

Unique posttranslational modifications of chitin-binding lectins of Entamoeba invadens cyst walls.

Entamoeba histolytica, ce qui provoque la dysenterie amibienne et abc&egrave;s du foie, se propage par les kystes &agrave; paroi de chitine. La prot&eacute;ine la plus abondante dans la paroi du kyste d&#39;Entamoeba invadens, un mod&egrave;le pour encystation amibien, est une lectine appel&eacute;e EiJacob1. EiJacob1 a cinq domaines de liaison chitine six-Cys en tandem rayonnant, s&eacute;par&eacute;es par des entretoises de faible complexit&eacute; Ser et Thr-riche. E. histolytica a aussi nombreux pr&eacute;dits des lectines de Jessie et chitinases, qui contiennent un single, un domaine de liaison &agrave; la chitine de huit-Cys N-terminale. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se qu&#39;e. invadens kyste murs sont compos&eacute;es exclusivement de prot&eacute;ines avec six-Cys ou domaines de chitine-liaison de huit-Cys et que certaines de ces prot&eacute;ines contiennent des sucres. E. invadens g&eacute;nomique des s&eacute;quences pr&eacute;dites lectines de Jacob sept, cinq lectines de Jessie et trois chitinases. Analyse reverse transcription-PCR ont montr&eacute; que les ARNm codant Jacobs et Jessies chitinases est augment&eacute; pendant invadens E. encystation, tandis que la spectrom&eacute;trie de masse a montr&eacute; que la paroi du kyste est compos&eacute;e d&#39;un environ 30: 70 m&eacute;lange de lectines de Jacob (prot&eacute;ines de r&eacute;ticulation) et Jessie et chitinase lectines (enzymes possibles). Trois lectines de Jacob ont &eacute;t&eacute; cliv&eacute;s avant Lys sites conserv&eacute;s (par exemple, TPSVDK) dans les espaceurs de riches Ser et Thr entre domaines de liaison de chitine. Un peptide de mod&egrave;le a &eacute;t&eacute; coup&eacute; sur le m&ecirc;me site par la papa&iuml;ne et E. invadens Cys prot&eacute;ases, sugg&eacute;rant que ce dernier clivage lectines Jacob in vivo. Certaines lectines Jacob avaient li&eacute; &agrave; O-phosphodiester glucides, qui &eacute;taient longues d&#39;un &agrave; sept hexoses et d&eacute;soxysucres &agrave; r&eacute;duire les extr&eacute;mit&eacute;s. Nous avons conclu que les composants de la prot&eacute;ine majeure de la paroi du kyste E. invadens tous contiennent des domaines de liaison de chitine (chitinases, lectines Jessie et lectines de Jacob) et que les lectines de Jacob sont diff&eacute;rentiellement modifi&eacute;s par des prot&eacute;ases Cys et O-phosphodiester-glycanes.

Modifications post-traductionnelles uniques des lectines liant la chitine des murs de Entamoeba invadens kyste.

Entamoeba Histolytica, wodurch Amebic Dysenterie und Leber-Abszessen, breitet sich &uuml;ber Chitin-von Mauern umgebene Zysten. Das am h&auml;ufigsten vorkommende Protein in der Wand der Zyste von Entamoeba Invadens, ein Modell f&uuml;r amebic Encystation, ist ein Lektin, genannt EiJacob1. EiJacob1 hat f&uuml;nf tandemly hierdurch, sechs-Cys Chitin bindenden Dom&auml;nen durch Low-Complexity Ser Thr reichen und Abstandshalter voneinander getrennt. E. Histolytica hat auch zahlreiche vorhergesagten Jessie Lektine und Chitinases, die ein Single, der N-terminalen acht-Cys Chitin-bindende Dom&auml;ne enthalten. Wir die Hypothese, dass E. Invadens Zyste W&auml;nde ausschlie&szlig;lich aus Proteinen mit sechs-Cys bestehen oder acht-Cys Chitin bindenden Dom&auml;nen und, dass einige dieser Proteine Zucker enthalten. E. Invadens genomische Sequenzen vorhergesagten sieben Jacob Lektine, f&uuml;nf Jessie Lektine und drei Chitinases. Reverse Transkription-PCR-Analyse zeigte, dass mRNAs codieren, Jacobs, Jessies und Chitinases bei E. Invadens Encystation, erh&ouml;ht werden, w&auml;hrend Massenspektrometrie zeigte, dass die Zyste-Wand besteht aus einer etwa 30:70 Mischung von Jacob Lektine (Vernetzung Proteine) und Jessie und Chitinase Lektine (m&ouml;gliche Enzyme). Drei Jacob Lektine wurden vor Lys an konservierten Standorten (z. B. TPSVDK) in die Ser reichen und Thr-Abstandshalter zwischen Chitin bindenden Dom&auml;nen zerspaltet. Ein Modell-Peptid wurde am gleichen Standort von Papain und E. Invadens Cys Proteasen, was darauf hindeutet, dass letztere Jacob Lektine in-vivo-cleave zerspaltet. Einige Lektine Jacob hatte O Phosphodiester-gebundene Kohlenhydrate, die waren eins bis sieben Hexosen lange und Deoxysugars zur Verringerung der enden. Wir festgestellt, dass die gro&szlig;en Proteinkomponenten der E. Invadens Zyste Mauer alle Chitin bindenden Dom&auml;nen (Chitinases, Jessie Lektine und Jacob Lektine) enthalten und die Jacob-Lektine differentiell durch standortspezifische Cys-Proteasen und O-Phosphodiester--chromosomale Glykane ge&auml;ndert werden.

Einzigartige posttranslationale Modifikationen von Chitin-Bindung Lektine Entamoeba Invadens Zyste W&auml;nde.

Entamoeba histolytica, che provoca la dissenteria amebica e ascessi epatici, &egrave; diffuso attraverso le cisti a parete chitina. La proteina pi&ugrave; abbondante della parete di cisti di Entamoeba invadens, un modello per encystation amebica, &egrave; una lectina chiamato EiJacob1. EiJacob1 ha cinque tandemly allinearono, sei-Cys chitina-associazione domini separati da distanziatori di bassa complessit&agrave; Ser e Thr-ricchi. E. histolytica ha anche numerosi predetta Jessie lectine e chitinases, che contengono un singolo, il dominio N-terminale otto-Cys chitina-associazione. Abbiamo ipotizzato che invadens E. cisti pareti sono composte interamente da proteine con Cys-sei o otto-Cys chitina-associazione domini e che alcune di queste proteine contengono zuccheri. E. invadens genomiche sequenze previste sette Jacob lectine, cinque lectine Jessie e tre chitinases. Trascrizione inversa-PCR analisi ha mostrato che mRNAs encoding Jacobs, Jessies e chitinases sono aumentato durante invadens E. encystation, mentre la spettrometria di massa ha mostrato che la parete della cisti &egrave; composto da un circa 30:70 mix di Jacob lectine (cross-linking proteine) e Jessie e chitinasi lectine (enzimi possibili). Tre le lectine Jacob furono scissi prima Lys presso siti conservati (per esempio, TPSVDK) nei distanziali Ser e Thr ricchi tra i domini di chitina-associazione. Un peptide modello era scisso nello stesso sito di papaina ed E. invadens Cys proteasi, suggerendo che quest&#39;ultimo fendere le lectine Jacob in vivo. Alcune lectine Jacob erano legata all&#39;O-fosfodiestere carboidrati, che sono stati uno di sette esosi lunghi e avevano deoxysugars a ridurre le punte. Abbiamo concluso che i componenti principali proteine della parete cistica E. invadens tutti contengono chitina-associazione domini (chitinases, lectine Jessie e lectine Jacob) e che le lectine Jacob differenzialmente vengono modificate da proteasi Cys site-specifiche e legata all&#39;O-fosfodiestere glicani.

Modifiche di posttranslational uniche di chitina-binding lectine di pareti cisti di Entamoeba invadens.

&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x6027;&#x8D64;&#x75E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x809D;&#x81BF;&#x760D;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3001;&#x8D64;&#x75E2;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0; &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x56A2;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5E83;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x56A2;&#x80DE;&#x58C1;&#x8D64;&#x75E2; invadens&#x3001;&#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306E; encystation &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E; EiJacob1 &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;EiJacob1 &#x4F4E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055; Ser &#x304A;&#x3088;&#x3073; Thr &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; &#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F; 5 &#x3064;&#x306E;&#x7E26;&#x5217;&#x914D;&#x5217;&#x3057;&#x305F; 6 Cys &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E. &#x30A2;&#x30E1;&#x30FC;&#x30D0;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B7;&#x30FC; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x3001;N &#x672B;&#x7AEF; 8 Cys &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E. invadens &#x56A2;&#x80DE;&#x58C1;&#x306F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 6 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F; 8 Cys &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7CD6;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;E. invadens &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x4E88;&#x6E2C; 7 &#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;, 5 &#x306E;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B7;&#x30FC; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x8EE2;&#x5199; PCR &#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x6CD5;&#x306F;&#x56A2;&#x80DE;&#x58C1;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x3057;&#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6;&#x30B9;&#x3001;Jessies&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; Mrna E. invadens encystation &#x4E2D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092; 30:70 &#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x67B6;&#x6A4B;&#xFF09; &#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B7;&#x30FC;&#x3068;&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#xFF09; &#x306E;&#x7D04;&#x3002;3 &#x3064;&#x306E;&#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; Lys &#x4FDD;&#x5B58;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;TPSVDK&#xFF09; &#x3067;&#x524D; Ser &#x304A;&#x3088;&#x3073; Thr &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; &#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC; &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x3067;&#x88C2;&#x304B;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x30D1;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; e. invadens&#x3001;&#x5F8C;&#x8005;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D6; &#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x88C2;&#x304B;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6;&#x306E;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306F; 1 &#x301C; 7 &#x30D8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x9577;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E21;&#x7AEF;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3067; deoxysugars &#x3044;&#x305F; O &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x70AD;&#x6C34;&#x5316;&#x7269;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;E. invadens &#x56A2;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8; &#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (&#x30AD;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;, &#x30B8;&#x30A7;&#x30B7;&#x30FC; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;) &#x306B;&#x542B;&#x3080;&#x3057;&#x3001;&#x30B8;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D6; &#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; O &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x7CD6;&#x9396;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3002;

&#x4E00;&#x610F;&#x306E;&#x4FEE;&#x98FE;&#x8D64;&#x75E2; invadens &#x56A2;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3002;

Amebic&#xC774; &#xC9C8; &#xC6D0;&#xC778;&#xACFC; &#xAC04; &#xB18D; &#xC591;, entamoeba histolytica cysts &#xD2F4; &#xBCBD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC5FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Entamoeba invadens, amebic encystation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xB0AD;&#xC885; &#xBCBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; EiJacob1 &#xB77C;&#xB294; lectin &#xC774;&#xB2E4;. EiJacob1 &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131; Ser&#xC640; Thr &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD398;&#xC774;&#xC11C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xBD84; &#xB41C; 5 &#xAC1C; tandemly &#xAE30;&#xC900;&#xC810;&#xACFC; 6 Cys &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. E. histolytica &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xC81C;&#xC2DC; lectins &#xBC0F; chitinases, &#xB2E8;&#xC77C;, N &#xB2E8;&#xC790; 8 Cys &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. E. invadens &#xB0AD;&#xC885; &#xBCBD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 6 Cys&#xC744; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; 8 Cys &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC77C;&#xBD80; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3EC;&#xD568; &#xC124;&#xD0D5; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. E. invadens &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; 7 &#xC57C; &#xACF1; lectins, lectins, &#xC81C;&#xC2DC; 5 &#xBC0F; 3 chitinases. &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC804;&#xC0AC;-PCR &#xBD84;&#xC11D; mRNAs &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC81C;&#xC774;&#xCF65;&#xC2A4;, Jessies, &#xBC0F; chitinases&#xC774; E. invadens encystation &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xAC00; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xB0AD;&#xC885; &#xBCBD;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;&#xB294; &#xC57C; &#xACF1; lectins (&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;)&#xC640; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC640; chitinase lectins (&#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;)&#xC758; &#xC57D; 30:70 &#xBBF9;&#xC2A4;. 3 &#xC57C; &#xACF1; lectins &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; Ser&#xC640; Thr &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC2A4;&#xD398;&#xC774;&#xC11C;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (&#xC608;: TPSVDK)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC804;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5B4; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; papain &#xBC0F; E. invadens Cys &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;, &#xD6C4;&#xC790; &#xC57C; &#xACF1; lectins vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xCABC;&#xAC1C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBD99;&#xC5B4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBD80; &#xC57C; &#xACF1; lectins O phosphodiester &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD0C4;&#xC218;&#xD654;&#xBB3C; 1-7 hexoses &#xAE34; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xB05D;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xB294; deoxysugars &#xD588;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; E. invadens &#xB0AD;&#xC885; &#xBCBD;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (chitinases, &#xC81C;&#xC2DC; lectins, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57C; &#xACF1; lectins) &#xC81C;&#xC774;&#xCF65; lectins &#xCC28;&#xB3D9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; Cys &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544;&#xC640; glycans O phosphodiester &#xC5F0;&#xACB0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860;&#xC744; &#xB0B4;&#xB838;&#xB2E4;.

Entamoeba invadens &#xB0AD;&#xC885; &#xBCBD;&#xC758; &#xD2F4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; lectins&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; posttranslational &#xC218;&#xC815;.

Entamoeba histolytica, que causa la disenter&iacute;a amebiana y abscesos hep&aacute;ticos, se propaga a trav&eacute;s de quistes de paredes de quitina. La prote&iacute;na m&aacute;s abundante en la pared del quiste de Entamoeba invadens, un modelo para encystation amebiano, es una lectina llamado EiJacob1. EiJacob1 tiene cinco t&aacute;ndem vestida, seis-Cys quitina-dominios obligatorios separados por espaciadores de Ser de baja complejidad - y Thr-Rico. E. histolytica tiene tambi&eacute;n numerosas lectinas predichas de Jessie y quitinasas, que contienen una sola de dominio de quitina-obligatorio de ocho-Cys N-terminal. Presumimos que las paredes de quiste de E. invadens se componen enteramente de prote&iacute;nas con seis-Cys o dominios de ocho-Cys quitina-obligatorios y algunas de estas prote&iacute;nas contienen az&uacute;cares. E. invadens gen&oacute;mica secuencias predijo siete lectinas de Jacob, cinco lectinas de Jessie y tres quitinasas. An&aacute;lisis de la transcripci&oacute;n reversa-PCR demostr&oacute; que mRNAs codificaci&oacute;n Jacobs, Jessies y quitinasas est&aacute;n elevados durante el encystation de E. invadens, mientras espectrometr&iacute;a demostr&oacute; que la pared del quiste se compone de una mezcla de aproximadamente 30: 70 de lectinas de Jacob (cross-linking de prote&iacute;nas) y lectinas Jessie y chitinase (enzimas posibles). Tres lectinas de Jacob fueron troceados antes de Lys en sitios conservados (por ejemplo, TPSVDK) en los espaciadores de Ser rico y Thr entre dominios de uni&oacute;n a quitina. Un p&eacute;ptido de modelo fue hendido en el mismo sitio por papa&iacute;na y E. invadens Cys proteasas, sugiriendo que esta &uacute;ltima hiende lectinas de Jacob en vivo. Algunas lectinas de Jacob ten&iacute;an carbohidratos O-fosfodi&eacute;ster-ligado, hexosas de uno a siete largos y deoxysugars reducir los extremos. Llegamos a la conclusi&oacute;n que los componentes de la prote&iacute;na principal de la pared del quiste de E. invadens todos contienen dominios de uni&oacute;n a quitina (quitinasas, lectinas de Jessie y lectinas de Jacob) y que las lectinas de Jacob se modifican diferencialmente por proteasas espec&iacute;ficas de Cys y glicanos O-fosfodi&eacute;ster-ligado.

Paula E. Magnelli

New England BioLabs

Identification and Characterization of Protein Glycosylation using Specific Endo- and Exoglycosidases