이 프로토콜은 골격근 온도를 측정하기 위한 직접적이고 비용 효율적인 방법을 제공하기 때문에 중요합니다. 또한, 그것은 다양한 맥락에서 그리고 약리학 적 약제의 자극하에 사용될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 동시에 테스트 할 수있는 동물의 수입니다.
여기에 설명 된 최소한의 동물 교란은 적외선 열 화상 검사와 같은 첨단 방법의 필요성을 피합니다. 개인은 움직이는 동안 홈 케이지 또는 러닝 머신에서 동물의 온도를 측정하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 이것은 습관화 시험 중에 측정 기술을 연습함으로써 완화 될 수 있습니다.
장갑을 낀 손 사이에 밀폐 된 트랜스 폰더를 따뜻하게하는 것으로 시작하고 트랜스 폰더로 작업하는 동안 무균 상태를 유지하십시오. 온도 스캐너를 사용하여 온도를 측정하고 트랜스폰더가 온도 변화를 읽는지 확인합니다. 원고에 설명 된대로 마우스를 마취 한 후 수술 용 가위를 사용하여 오른쪽 뒷다리의 피부를 얕게 자릅니다.
사전 프로그래밍되고 뚜껑이 없는 멸균 트랜스폰더의 날카로운 모서리를 비복근과 평행하게 절개 부위에 놓습니다. 녹색 플런저가 위를 향하고 보이는지 확인하십시오. 트랜스폰더 어플리케이터의 입구가 더 이상 보이지 않을 때까지 트랜스폰더 어플리케이터를 절개 부위에 계속 밀어 넣습니다.
애플리케이터를 180도로 돌려 녹색 플런저가 마우스의 팔다리를 향하고 실험자에게 더 이상 보이지 않도록 합니다. 트랜스폰더 어플리케이터가 비복근에 인접하거나 부분적으로 둘러싸이면 녹색 플런저를 밀어 애플리케이터의 압력이 조사자의 손을 마우스에서 멀어지게 합니다. 집게를 사용하여 열린 피부를 함께 잡으십시오.
멸균 오토클립으로 상처 클립을 놓고 필요한 경우 구부립니다. 멸균 오토클립 전에 흡수성 봉합사를 사용하여 근막 층을 닫습니다. 트랜스폰더 리더를 사용하여 마우스 근육의 온도를 확인합니다.
마취에서 마우스를 제거한 후 가열 패드 상단의 깨끗한 홈 케이지에 넣고 홈 케이지에 무취 수건이 달린 티 볼이 포함되어 있는지 확인하여 습관을 시작하십시오. 시험실의 라이저에 위치를 할당하고 변수 혼동을 피하기 위해 서로 다른 상황별 자극을 받도록 설정된 라이저를 최소 2미터 분리합니다. 마그네틱 스트립을 사용하여 라이저를 가로질러 수술 시트를 부착하고 시각적 장벽을 만들어 실험자의 움직임에 따라 마우스 활동으로 인한 온도 변동을 최소화합니다.
통제 및 포식자 냄새 타월로 티 볼을 준비하십시오. 동물을 준비된 시험실로 옮깁니다. 동물을 라이저의 미리 지정된 위치에 놓고 습관화와 테스트 절차 사이에 라이저의 위치를 변경하지 마십시오.
마우스의 홈 케이지에서 홈 케이지 볼을 제거합니다. 천이나 수술 시트로 케이지를 회수하고 마우스가 1-2 시간 동안 테스트 공간에 적응하도록합니다. 적응이 완료되면 스캐너를 사용하여 피사체의 기준 온도를 측정하고 기록합니다.
케이지를 열고 티 볼을 홈 케이지 바닥에 놓습니다. 케이지 뚜껑과 천 덮개를 교체하십시오. 스톱워치를 시작하고 티볼 배치와 동일한 순서로 실험 대상의 온도를 측정합니다.
원하는 시점에 따라 측정의 온도와 시계 시간을 기록합니다. 테스트를 위해 러닝 머신을 준비하고 쇼커가 작동하는지 확인하십시오. 동물이 습관화 및 테스트 절차를 위해 동일한 러닝 머신을 사용하는지 확인하십시오.
마우스를 시험장으로 옮기고 홈 케이지에서 1-2 시간 동안 적응하도록합니다. 마우스를 트레드밀로 이동하기 전에 기준 온도를 측정하고 기록하십시오. 쉽게 배치하고 제거하려면 제어 또는 포식자 냄새 수건을 천장이나 러닝머신 전면 아래에 부착하십시오.
마우스를 지정된 트레드밀에 넣습니다. 트레드밀 벨트와 쇼커를 켜고 스톱워치를 시작하고 트레드밀에 설치된 것과 동일한 순서로 피험자를 측정합니다. 원하는 시점에 따라 측정의 온도와 시계 시간을 기록합니다.
테스트가 완료되면 쇼커와 트레드밀을 끄고 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다. 액체 세제와 물을 사용하여 러닝머신을 청소하고 남아 있는 포식자 냄새를 제거하십시오. 반복적 인 습관화 시험은 마우스의 근육 온도를 현저하게 감소시켜 마우스가 테스트 환경과 프로토콜에 익숙해 졌음을 보여줍니다.
시험 4의 결합 된 성별 분석은 이동 전과 기준 온도 측정간에 유의 한 차이가 없었으며, 테스트 상황에 대한 1 시간의 적응의 효과를 입증했다. 마우스에서 옥시토신을 사용한 약리학 적 자극은 30 분 후에 최대 감소와 함께 기준선에 비해 근육 온도가 감소한 것으로 나타났습니다. 근육 온도는 옥시토신 주사 후 60 분에 정상화되었습니다.
Sprague Dawley 쥐에서 문맥 자극으로 포식자 냄새를 제거한 후 근육 온도의 지속적인 증가가 관찰되었습니다. Sprague Dawley 쥐는 대조군 냄새에 비해 흰 족제비 냄새에 반응하여 강력한 온도 상승을 보였습니다. 다른 혐오스러운 냄새가있는 경우 흰 족제비 냄새는 다른 모든 조건에 비해 강력한 열 발생 변화를 생성하고 유지합니다.
이 절차를 시도하는 동안 동물을 테스트 프로토콜에 익숙하게하고 매일 1-2 시간의 적응 일정을 잡는 것이 중요합니다.
