조직 공학 응용 분야를 위한 크기 조절 및 무유제 키토산-제니핀 마이크로젤 제조

이 프로토콜은 다양한 조직 공학 및 약물 전달 응용 분야에 사용할 수있는 독성 용매없이 키토산 마이크로 젤을 편리하게 제조 할 수 있습니다. 이 기술은 특별한 장비나 훈련이 필요하지 않으며 독성 에멀젼 기술이나 용매 헹굼이 필요하지 않으므로 생체 적합성이 높고 임상 환경으로 번역 할 수 있습니다. 우리는이 기술을 성장 플레이트 부상을 치료하기위한 생체 재료 전략으로 적용했습니다.

그러나 우리는이 기술이 다른 재생 의학 응용 분야에서도 유용 할 것이라고 믿습니다. 이 기술은 지속적인 약물 방출 가능성을 가진 주사 가능, 생분해성, 생체 재료 스캐폴드 시스템의 이점을 누릴 수있는 다른 재생 의학 응용 분야에 적용될 수 있습니다. 아세트산과 정제된 키토산을 10 밀리리터 루어락 주사기에 첨가하여 시작하여 6% 중량 부피 키토산 용액을 형성하였다.

여성 여성 Luer 잠금 커넥터를 사용하여 두 개의 Luer 잠금 주사기를 연결 한 다음 키토산이 금욕 산에 완전히 용해 될 때까지 용액을 앞뒤로 혼합하십시오. 이제 100 마이크로 리터의 제니핀 용액을 키토산 함유 주사기에 넣고 주사기 사이에서 30 초 동안 앞뒤로 섞은 다음 주사기에서 혼합물을 35 밀리미터 페트리 접시로 배출하십시오. 페트리 접시를 파라핀 필름으로 덮고 가습 된 분위기에서 하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 배양하십시오.

주걱을 사용하여 하이드로 젤을 더 작은 조각으로 쪼개고 원하는 메쉬 크기의 필터를 깨끗한 10 밀리리터 주사기 뒷면에 넣으십시오. 깨진 젤 조각을 필터가 장착 된 주사기로 옮기고 6 밀리리터의 이중 증류수를 첨가하십시오. Luer 잠금 커넥터를 통해 주사기를 다른 깨끗한 10mm 주사기에 연결하십시오.

필터로 주사기를 통해 젤과 물 혼합물을 강제로 밀어 마이크로 젤을 만듭니다. 첫 번째 여과 후, 필터가 들어있는 주사기를 열고 혼합물을 다시 이 주사기에 첨가한다. 혼합물을 필터를 통해 다시 강제하십시오.

이제 여과 된 겔 혼합물을 50 밀리리터 원뿔형 튜브로 옮기고 이중 증류수를 첨가하여 부피를 20 밀리리터로 가져옵니다. 균질 한 해결책을 얻기 위해 용액을 소용돌이 치십시오. 마이크로겔을 실온에서 5분 동안 100회 g에서 원심분리한다.

원심분리 후, 상부 성상을 제거하고 마이크로겔을 70% 에탄올 10밀리리터에 재현탁시킨 다음, 마이크로겔을 와류시키고 이를 1시간 동안 UV 광 하에 두어 멸균시킨다. 이제, 마이크로겔을 실온에서 5분 동안 1000배 g에서 원심분리한다. 에탄올을 버리고 이중 증류수로 3 번 헹구십시오.

마이크로겔 펠릿을 동일한 부피의 이중 증류수에 재현탁시킨다. pH의 증가에 따라, 마이크로겔은 페레트 직경의 변화에 의해 묘사된 바와 같이 팽윤의 감소를 나타내었다. 또한, 마이크로겔 입자의 크기는 사용된 필터의 기공 크기에 의존한다.

200 메쉬는 작은 입자를 생성했지만 100 메쉬는 큰 입자를 생성했습니다. 부상당한 부위에 마이크로 젤이 존재하면 연골 재생이 촉진되었습니다. 알시안 블루 헤마톡실린 염색은 손상된 조직에 주입된 마이크로겔이 초기 뼈 바 형성을 방지하고 생리활성 제제 SDF-1a 및 TGF-B3가 로딩된 마이크로겔이 연골 형성을 촉진한다는 것을 보여주었다.

효과적인 필터링이 이루어질 수 있도록 와이어 메쉬 필터가 주사기에 올바르게 배치되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 마이크로겔 크기의 균질한 분포를 보장하기 위해 여과를 몇 번 반복하는 것도 중요하다. 이들 마이크로겔은 치료제의 지속 방출 가능성을 갖는 생체재료 스캐폴드 기질을 필요로 하는 매우 다양한 조직공학 응용에 적용될 수 있다.