설치류의 머리에서 정의된 가속도를 생성하기 위한 수동 머리 움직임의 적용

우리의 프로토콜은 신체 운동이 유기체 항상성을 지원하는 방법에 대한 질문에 답하는 데 도움이됩니다. 이 시스템을 통해 걷기 및 조깅과 같은 신체 활동의 복잡한 결과로부터 뇌에 대한 직접적인 기계적 영향을 해부 할 수있었습니다. 시작하려면 수술 용 테이프를 사용하여 쥐의 머리 위에 가속도계를 고정하십시오.

마취에서 완전히 회복 된 후, 쥐를 러닝 머신 기계에 넣으십시오. 런닝 머신을 분당 20 미터의 적당한 속도로 조정하십시오. 응용 소프트웨어를 사용하여 쥐가 트레드밀을 작동할 때 X, Y 및 Z축을 따라 수직 가속도의 크기를 측정합니다.

소프트웨어에서 얻은 값을 PHM 시스템의 수직 가속 주파수 크기와 일치시킵니다. 플랫폼의 진동 진폭과 프로펠러 모양의 캠의 회전 속도를 미리 설정합니다. 그런 다음 마우스를 엎드린 위치에 놓고 헤드는 발진기에 있고 나머지 몸체는 정적 플랫폼에 놓습니다.

모터를 켜서 플랫폼을 수직으로 진동시키고 PHM을 마우스에 적용합니다. 투명한 플라스틱 케이스에 비디오 카메라를 24FPS의 프레임 속도로 설정하여 전체 공간을 녹화합니다. 다음으로, 마우스에 5 개의 하이드 록시 트립토판을 복강 내 투여한다.

마우스를 투명 케이지에 넣고 30 분 동안 녹화를 시작하십시오. 녹화 된 비디오를 0.5x 속도로 검토하고 수동으로 머리 경련을 계산합니다. 슬라이드 상자에서 마우스 뇌의 냉동 절개를 검색합니다.

샘플이 완전히 탈수될 때까지 슬라이드를 실온에서 깨끗한 물티슈에 그대로 두십시오. 액체 차단제 펜을 사용하여 냉동 절단 조직 주위에 원을 그립니다. 그런 다음 TBS-T 솔루션을 추가하십시오.

트레이 바닥에 젖은 물티슈를 놓아 슬라이드를 위한 촉촉한 환경을 만듭니다. TBS-T로 투과 제거한 후 차단을 위해 4 % 당나귀 혈청을 넣고 실온에서 1 시간 동안 배양합니다. TBS-T에 5 분 동안 담가 슬라이드를 한 번 헹굽니다.

그런 다음 각 슬라이드에 적절하게 희석된 1차 항체와 dappy 믹스 100마이크로리터를 적용합니다. 트레이를 덮고 실온에서 밤새 배양하십시오. 배양 후 TBS-T로 각각 5 분 동안 세 번 헹굽니다.

적절하게 희석된 종 일치 형광 2차 항체 100 마이크로리터를 적용하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. TBS-T로 각각 5분 동안 3회 헹군 후 장착 매체로 슬라이드를 장착하고 커버 슬립으로 슬라이드를 덮습니다. 장착 후 형광 현미경으로 샘플을 봅니다.

PHM 시스템은 러닝 머신 달리기 동안 쥐의 머리와 동등한 약 1.0 배 G에서 수직 가속 피크를 생성하도록 조정되었습니다. 마우스에 PHM을 적용하면 전두엽 피질 뉴런에서 5-HT2A 수용체 신호 전달에 대한 PHM의 억제 효과를 나타내는 대조군 마우스와 비교하여 머리 경련 반응이 크게 약화되었습니다. PHM에서 실행되는 러닝 머신은 5-HT2A 수용체 내재화 및 마우스 전두엽 피질 뉴런을 크게 향상 시켰습니다.

내재화 및 막 관련 5-HT2A 수용체 양성 영역의 정량화는 새로운 양성 영역에 비해 이러한 관찰을 확인하였다. 5-HT2A 수용체 양성 뉴런에서 c-Fos 발현의 면역염색 및 정량화는 PHM에서 실행되는 트레드밀이 5-HTP 유도 c-Fos 발현을 하향조절한다는 것을 보여주었다. 이것은 5-HT2A 수용체 활성화 및 마우스 PFC 뉴런의 하류 세포 이벤트입니다.

운동 효과의 기계적 측면을 조사하기 위해 머리 이외의 신체 부위에 기계적 개입을 적용할 수 있습니다.