얼룩말피에서 척추동물 세분화를 연구하는 3-D 꼬리 이식 문화

3-D 제브라피쉬 꼬리 이식은 우리가 소미트 발달과 척추 동물 분할 동안 제브라피시 배아의 투명성을 최대한 활용합시다. 물고기 시스템 물로 빈 짝짓기 탱크를 채웁니다. 시스템 물로 여과기를 청소하십시오.

짝짓기 쌍 사이의 장벽을 올립니다. 생선 쌍을 담수 탱크로 선택적으로 이동합니다. 빈 탱크로 물 전달을 통해 여과기에서 배아를 수집합니다.

물고기 시스템 물로 배아를 수거한 헹구고 페트리 접시를 뒤집습니다. 에탄올 유약 해부 도구. 슬라이드에서 두 개의 테이프 레이어를 만듭니다.

깊은 챔버의 수평 측면을 잘라. 수직 측면으로 완벽한 챔버 컷. 챔버 표면에서 테이프를 벗깁니다.

튜브에 세포 배양 매체를 붓습니다. 염화 칼슘 2.8 밀리몰라 최종 농도를 혼합합니다. 항생제 솔루션을 추가합니다.

별도의 튜브에 알리 쿼트 미디어. 조직 배양 배지를 만들기 위해 태아 소 혈청을 칭찬하십시오. 바늘을 가진 피상화 배아.

배아를 담수 접시에 헹구고 파기하기 위해 배아를 모으라. 바늘로 배아를 안정시키고 요킹을 시작합니다. 남은 조직을 잘라내립니다.

덮개 슬립에 굴절을 전송합니다. 조직을 평평하게하고 파이펫으로 과잉 미디어를 빨아. 슬라이드 챔버를 포함하는 성장 매체에 커버 슬립을 넣습니다.

조직 닦아에 각성 조직을 넣어. 목표에 침수 오일을 적용합니다. 현미경에 슬라이드 챔버를 마운트합니다.

이미지 수집을 위해 레이저 채널을 조정합니다. 샘플의 z 레이어 제한을 확인합니다. 설정 시간 이미징 및 z-레이어.

3-D 꼬리 각질 시스템은 전체 배아처럼 꼬리 싹과 과도한 신장에 세포 통합을 유지합니다. 또한 1형 콜라겐으로 표면을 화학적으로 활성화시켜 과잉 신장을 중지할 수도 있다. 3D 제브라피쉬 꼬리 이식 시스템은 우리가 고해상도와 거의 객관적인 현미경 이미지를 취할 수 있도록함으로써 제브라피시 배아의 투명성을 악용 할 수 있습니다.

게다가, 그것은 우리가 모르포겐 신호에서 신장의 과잉을 분리하고 또한 간단한 해부 방법으로 모르포겐 신호 원을 제어 할 수 있습니다.