자기 나노 입자는 강한 자기 특성과 표면의 쉬운 기능화로 인해 분석 과학 및 나노 의학에 이상적인 도구입니다. 우리는 여기에 아미노 기능성 실리카 자기 입자와 측변 로포레 페록사민 사이의 공주물의 첫 번째 인스턴스와 포토제닉 물질의 캡처에 대한 평가를보고합니다. 사이드로포레스는 철분 참여 메커니즘에서 중요한 역할을 하는 작고 유기적인 분자이며 박테리아의 특정 외부 막 수용체에 의해 인식됩니다.
이 비디오는 자기 철 나노 입자를 준비하는 효율적인 프로토콜인 단계별 나노 입자를 표시합니다. 그런 다음 분산을 보호하고 자기 핵을 보호하기 위해 실리카로 코팅되었습니다. 결과 반응기 표면은 아민 그룹으로 기능화되었다.
발효민으로 컨쥬게이징된 자기 나노 입자의 합성. 20mL 유리 유리 바이알에 Fe(acac)30.5 그램을 추가합니다. 그런 다음 10mL의 벤질 알코올과 섞습니다.
이 혼합물을 2분간 초음파 처리합니다. 그런 다음 72 시간 동안 섭씨 180도에서 가열 블록과 열로 옮겨. 나노 입자를 96 %의 에탄올로 헹구습니다.
그리고 30 분 동안 원심 분리기. 네오디뮴 자석을 사용하여 나노 입자를 자기 어트랙션에 의해 상부에서 분리합니다. 잔류 용매를 폐기합니다.
용매가 명확해 보일 때까지 초음파 처리로 번갈아 가며 슈퍼네티드를 버리십시오. 이소프로판올 80 밀리리터에 2그램의 MNP 현탁액을 준비하고, 암모니아 21%, 증류수 7.5밀리리터, TEOS 0.56 밀리리터의 밀리리터 4개소를 추가한다. 혼합물을 섭씨 40도에서 2시간 동안 가열하고 연속 교반합니다.
그런 다음 1 시간 동안 초음파 처리하십시오. MNP를 자석으로 분리하고, 상체를 버리고, 이소프로판올의 30 밀리리터로 분산하고, 암모니아, 증류수 및 TEOS를 전과 동일한 순서로 첨가한다. 혼합물을 섭씨 40도에서 연속 교반으로 2시간 동안 가열합니다.
그런 다음 한 시간 동안 초음파 처리합니다. 모든 재료를 회수하기 위해 마그네틱 스터드 바를 편리하게 제거하고 씻으실 수 있습니다. 상체를 버리고 나노 입자를 96 %의 에탄올로 세 번 헹구고 초음파 처리로 번갈아 가며 헹구십시오.
나노 입자를 실온에서 12 시간 동안 진공 상태에서 건조시킵니다. 린스 500 MNP@SIO2 의 밀리 그램 디메틸 포르 마 미드와 이전 단계에서 얻은. 그들을 초음파 처리하고 폐기.
입자를 둥근 바닥 플라스크에서 다시 일시 중단하고 마그네틱 바로 저어서 9 밀리리터를 APTES로 추가합니다. 혼합물을 섭씨 60도에서 12시간 동안 저어줍니다. 상체를 버리고 나노 입자를 96 %의 에탄올로 세 번 헹구고 초음파 처리로 번갈아 가며 헹구십시오.
100 mg의 유보소민, 메셀레이트 소금, 53.0 밀리그램의 철 아세틸러스토네이트를 증류수 5 밀리리터에 녹입니다. 실온에서 하룻밤 동안 혼합물을 저어줍니다. 분리 깔때기에 에틸 아세테이트 20 밀리리터로 생성물을 세 번 씻으십시오.
진공 상태에서 유기 용매를 제거합니다. 발효제민과 붉은 고체를 감당하기 위해 수성 위를 동결하십시오. 추가 350 수치 anhydride의 밀리 그램의 용액에 100 페록사민의 mg 5 피리딘의 밀리리터 50 밀리리터 라운드 하단 플라스크에.
생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 저어줍니다. 감소 된 압력하에서 피리딘의 과잉을 제거합니다. 메탄올의 3 밀리리터에 반응 조를 녹입니다.
메탄올릭 용액을 LH-20 컬럼으로 전송하고 분0.5mL로 엘루트합니다. 적색 분획을 수집하고 진공 상태에서 메탄올을 제거합니다. DMF로 30 mg의 건조 아민 기능화 나노 입자를 헹구고 100 밀리리터 에를렌마이어 플라스크에서 나노 입자를 30 분 동안 초음파 처리합니다.
200 밀리그램 N-succinylferoxamine의 용액을 준비, 173 밀리그램 벤조트리아졸 1-일 옥시 트리스-포스포늄 헥사플루오로포포스페이트 BOP, 46 mg 1-하이드록시벤조트리아졸 HOBt 및 128.8 밀리그램 N, N-diisopropylethyletlamine DIPEA, DMF의 10 mL, 50 밀리리터 건조하고 산소가 없는 조건에서 초음파 처리 하에 DMF의 3 밀리리터에서 이전에 헹구었던 MNP@SiO2@NH2 중단하십시오. 아르곤 분위기를 사용하세요.
추가, 드롭 와이즈, B.Shake를 혼합하려면 A를 혼합, 궤도 셰이커를 사용하여, 하룻밤 실온에서. 생성된 컨쥬게이트를 자석을 사용하여 서스펜션과 분리합니다. Y.enterocolitica 균주를 가진 세균 성 분석은 나노 입자를 가진 병원성 박테리아의 격리 및 포착을 정량화합니다.
멸균 튜브의 1 mg/mL에서 PBS의 모든 중간 나노 입자 및 최종 컨쥬게이트의 현탁액을 준비합니다. 루리아 베르타니, LB, 국물 의 5 mL에서 Y.entorocolitica의 문화를 준비 하룻밤. 10mMM 2, 2-bipyridyl 용액의 50 마이크로 리터를 추가하여 TSB의 철 결핍 트립케이스 대두 국물 5mL를 준비합니다.
Y.enterocolitica의 하룻밤 문화의 50 마이크로 리터와 철 결핍 TSB 국물의 5 밀리 리터를 접종. 섭씨 37도에서 0.5~0.8도의 OD600에 도달할 때까지 교반을 한다. 하룻밤 문화의 100 마이크로 리터를 가지고 처음 1/10 희석을 얻기 위해 PBS의 900 마이크로 리터를 포함하는 튜브에 희석.
이어서, 동일한 절차를 이용하여 제1 희석으로부터 1/100 희석을 제조하여 10에서 세균 세포의 농도를 약 밀리리터당 6콜로니 성형 단위의 힘으로 얻을 수 있다. 1/100 박테리아 희석의 1밀리리터에 1mg/mL의 나노입자 서스펜션과 1 mg/mL를 추가합니다. MNP 박테리아 를 분리 하 여, 자석을 사용 하 여, 폐기, 신중 하 게, 상체.
분피를 사용하여 분리된 나노 입자를 1mm PBS로 두 번 헹구는다. 이전 서스펜션에서 4회 연속 1/10 희석제를 준비하여 10대까지 마이너스 4 희석의 힘을 발휘합니다. TS 천 접시에 각 희석제 의 10 마이크로 리터를 플레이트.
에피 화이트 모드에서 젤 디지털라이저로 접시를 촬영합니다. 편리한 소프트웨어를 사용하여 이미지를 처리하여 개별 콜로니 수를 계산하는 지점을 증폭시합니다. 나노입자와 사이드로포어 간의 공유 결합의 형성을 확인하기 위해, 우리는 합성을 모니터링하기 위해 FT-IR 라만 분광법을 채택하여 각 단계에서 새로운 기능그룹과 합의하여 새로운 밴드가 어떻게 나타나는지 관찰합니다.
TEM 및 SEM 현미경 검사는 형태와 입자 크기를 관찰하기 위해 사용되었다. 유기 물질의 첨가로 인한 체중 감소를 측정하는 열역학 분석. 그리고 XPS는 우리가 표면에 원자의 다른 산화 상태를 분석하고 공유 결합의 형성을 확인할 수 있습니다.
마지막으로, 우리는 바이오 센서로 자신의 특성을 확립하기 위해, 박테리아를 캡처 하는 능력을 테스트 하기 위해 최종 공조에 모든 중간체를 사용. 이 프로토콜은 자석 나노 입자의 높은 생체 적합성을 활용하도록 설계되었습니다. 실리카 코팅은 분산을 개선하고 수성 매체의 분해로부터 자기 핵을 보호합니다.
또한 카보디아미드 화학에 의해 산 변형 사이드로포어를 공유적으로 결합하는 데 필요한 아민 군과 기능화하기 위해 반응성 표면을 제공합니다. 이 경우, N-succynilferoxamine. 컨쥬게이트 박테리아 포획 능력을 테스트하였고, 그 결과 PBS 세균 현탁액에 제시된 부피가 큰 효과에 대한 특정 상호 작용으로 인해 중간체와 큰 차이가 없는 낮은 수의 콜로니가 발견되었습니다.
