형광 매크로법을 사용하여 그대로 마우스 두개골을 통해 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징

살아있는 마우스의 손상되지 않은 두개골을 통해 플로레스센트 CSF 추적의 실시간 중시경 이미징을위한이 새로운 기술은 글리프파틱 수송을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 주요 장점은 이 기법이 다른 이미징 양식의 비용의 일부에서 생체 내 인종 차별 추적자의 동적 측정을 가능하게 한다는 것입니다. 시스테나 마그나 캐뉼라에 헤드 플레이트를 배치하는 데 필요한 절차는 간단하고 최소침습적이지만 올바르게 수행되어야하는 연습이 필요합니다.

이 방법의 중요한 단계의 시각적 데모는 이미지 품질을 극대화하고 다른 마우스와 실험 그룹 간의 재현 가능한 비교를 가능하게하는 데 필요합니다. 발가락에 대한 반응의 부족을 확인 한 후 발가락 핀치는 목과 머리를 멸균물로 적시고 촉촉한 털을 면도합니다. 노출된 피부를 알코올 면봉으로 닦아 잔류 모발을 제거하고 온도를 조절하는 패드 위에 마우스를 고정 프레임에 놓습니다.

동물의 눈에 연고를 바르고 클로레히시딘 면봉으로 노출된 피부를 청소합니다. 2 분 후 알코올 닦아 클로렉시딘을 제거하고 요오드 솔루션을 적용합니다. 요오드가 건조되면 두개골과 목 의 상단에 피하 진통을 주입합니다.

목 껍질을 덮는 목 부분에서 시작하여 오버리 스킨에서 중간 선을 자르면 궤도 선을 향해 장엄하게 계속됩니다. 절개를 측면으로 테두리로 확장하여 측두근육이 두개골에 삽입하고 퍼지폼 절개의 모든 피부를 제거하여 전두엽과 정수리 뼈를 모두 노출시합니다. 두개골을 멸균식식염수로 관개하고 면봉을 사용하여 이물질과 머리카락이 없는 때까지 표면을 청소합니다.

시스테나 마그나 캐뉼라를 삽입한 후 치과 시멘트와 시아노아크라일트 접착제를 테두리 주변의 헤드 플레이트의 복부 측에 바친다. 플레이트의 전방 경계가 비강 뼈의 후방 끝과 정렬되도록 두개골에 머리 판을 배치하고 후방 테두리는 경상부 봉합사가 창에 비해 중심적이고 직선적되도록 중간 골반의 전방 측면과 정렬되도록합니다. 헤드 플레이트가 고정되어 있고 시스테나 마그나 캐니옹의 시야를 방해하지 않도록 하는 것이 중요합니다.

접착제 가속기 몇 방울을 사용하여 헤드 플레이트의 위치를 수정하고 시멘트 혼합물로 남은 간격을 채웁니다. 시스테르나 마그나 캐뉼라를 헤드 플레이트에 붙이고 헤드 플레이트를 사용하여 마우스를 고정된 위치에 머리 홀더에 넣습니다. 조심스럽게 마우스와 주입 펌프를 카트에 부착하여 거시스코프로 운반하고 머리 홀더를 거시스코프 의 무대에 놓습니다.

주사기 펌프에서 시스테나 마그나 캐뉼라에 이르는 라인이 팽팽하지 않고 꼬임이 없는지 확인하십시오. 점액막의 호흡률과 분홍색 착색을 관찰하여 양호한 산소화를 확인한다. 거시스코프 카메라와 발광 다이오드를 켜고 라이브 모드를 시작합니다.

화상 진찰 필드의 배율을 조정하여 필드의 상단에 있는 nasofrontal 봉합사 및 하단에 있는 lambdoid 봉합사가 명확하게 시각화될 수 있도록 합니다. 일단 제자리에 테이프로 머리 홀더를 거시스코프 스테이지에 표시하고 초점 평면이 정수리 뼈 후방의 측면부에 관상 봉합사에 위치 할 때까지 노출 된 두개골에 매크로 코프를 집중시합니다. CSF 트레이서 주입의 경우 주입 펌프를 적절한 속도와 부피로 설정하고 각 채널에 대한 트레이서에 대한 적절한 흥분 파장 및 노출 시간을 설정합니다.

그런 다음 추적기 주입 및 이미징을 동시에 시작하기 전에 거시스코프의 트리거링 기능이 올바른지 확인합니다. 나소 정면, 처상, 관상 및 람도이드 봉합사를 이미징하는 동안 쉽게 식별 할 수 있습니다. CSF 트레이서가 시스테나 마그나에 주입되면 트레이서 형광은 올리티오프탈 시스테른과 송과휴소 근처의 사분간 시스테른의 수막 CSF의 큰 풀에서 처음 관찰되고 결국 중간 뇌동맥을 둘러싸게 된다.

CSF 추적자는 그 때 중간 대뇌 동맥의 피질 화줌 분기의 peri 혈관 공간을 따라 그들의 두뇌를 입력합니다. 외상성 뇌 손상 후 CSF 수송 화상 진찰은 olfactofrontal cistern에서 처음에 추적자를 제시하지만 피질 인식 공간을 따라 심혈 유입은 부상의 측면에 완전히 폐지된다. 생체 내 이미지에서의 정량적 분석은 ipsilateral 유입 영역이 반구에 비해 거의 3분의 1 감소한다는 것을 보여줍니다.

모션 아티팩트와 초점 평면의 변화를 피하려면 헤드 플레이트와 헤드 플레이트 홀더를 올바르게 고정하고 동물의 마취 수준을 확인하는 것을 기억합니다. 실험 후 생체 내 이미징 결과는 실제 이 기술을 사용하여 트레이서 침투를 정량화함으로써 더욱 검증될 수 있으며, 생리적이고 최소침습적인 방식으로 글리프파틱 시스템의 연구를 허용하고 건강과 질병의 CSF 유체역학에 대한 향후 질문을 해결하는 데 도움이 될 수 있다.