자연에 있는 대부분의 식물은 mycorrhizal 균류에게 불린 공생 뿌리 에 사는 곰팡이에 의해 상호 연결될 가능성이 높습니다. 이 방법은 일반적인 골류 네트워크가 식물 상호 작용과 후속 생태 학적 결과에 미치는 영향을 명시적으로 검사합니다. 이 방법을 통해, 우리는 명시적으로 모든 식물이 곰팡이에 의해 식민지화 될 수 있도록하면서 일반적인 mycorrhizal 네트워크의 역할을 검사 할 수 있습니다, 제대로 성장 식물의 결과 곰팡이를 제외하는 것이 아니라.
유연한 플라스틱으로 상업용 튜브 묘목 용기를 수정하려면 드릴 프레스를 사용하여 드릴 프레스의 울타리에 컨테이너를 잡고 드릴 프레스의 울타리에 컨테이너를 고정하고 드릴링 하는 동안 제자리에 고정하는 데 도움이되는 짧은 다웰로 정지하십시오. 그런 다음 두 개의 구멍을 뚫고, 하나는 컨테이너의 측면에 하나씩, 구멍이 약 1센티미터 떨어져 있도록 합니다. 구멍 사이에 남아있는 얇은 플라스틱 조각을 잘라 하나의 긴 개구부, 약 2 센티미터 너비, 5 센티미터 길이를 만듭니다.
용기의 반대편에 있는 이 길쭉한 개구부를 반복해서 절단합니다. 나일론 메쉬로 슬롯을 덮기 위해 40 마이크로미터 모공 메쉬를 용기가있는 것처럼 9.5 센티미터로 잘라냅니다. 그런 다음, 고강도 산업용 핫 접착제를 사용하여 나일론 메쉬를 용기에 외부로 고정하여 두 개구부를 덮고 직물에 약간의 겹침을 가합니다.
용기의 개구부 주변에 뜨거운 접착제를 바르고 나일론 메쉬의 긴 가장자리를 따라 컨테이너를 나일론 메쉬에 넣고 사용시 소수성 멤브레인에 굴려 손가락을 태우지 않도록하십시오. 메쉬 가장자리가 겹치는 패브릭 가장자리를 따라 접착제 레이어를 추가하고 가장자리를 일부 판지에 눌러 단단히 밀봉합니다. 접착제가 냉각되면 유연한 테이프를 사용하여 직물의 상단과 하단 끝을 용기에 부착하여 느슨한 가장자리와 리핑을 방지하십시오.
동일한 테이프를 사용하여 용기의 뿌리 가성장을 방지하기 위해 각 용기의 원적 끝 측면에 있는 작은 구멍을 덮어 용기의 나머지 부분으로 루트 성장을 방지합니다. 배수를 제공하면서 토양 손실을 방지하기 위해 각 용기의 바닥에 유리 대리석을 배치한 다음 원고에 설명 된 대로 냄비를 조립합니다. CMN이 식물 사이에 형성될 가능성을 포함하지 않는 제어 처리를 위해 고체, 수정되지 않은 용기를 사용합니다.
1.2센티미터 길이의 다진 뿌리 조각을 토양과 균일하게 혼합하여 토양에 AM 곰팡이 접종을 추가하십시오. 불모실리카 모래 또는 유리 구슬과 혼합된 원하는 토양을 선택하여 식물에 사용할 수 있는 미네랄 영양소의 농도를 줄입니다. 채워진 용기를 이전에 제작된 드릴폼에 냄비에 배치합니다.
영양이 부족한 실리카 모래를 적절한 배수의 혼합물로 만들기 위해 중간 입자 크기의 모래와 작은 입자 크기의 모래를 시멘트 믹서에 섞습니다. 작은 공간을 채우는 데 도움이 깔때기를 사용하여이 혼합물로 중간 공간을 채웁니다. 다음으로, 바람직한 종의 이식 전처리 또는 소위 간호사 식물을 각 용기에 이식하여 AM 균류를 유지하며, 이는 용기 들 사이에서 확산되고 일반적인 진피 네트워크를 확립할 것입니다.
CMN 설립을 허용하기 위해 온실에서 약 24섭씨에서 2~3개월 동안 식물을 재배합니다. 용기에 씨를 뿌리고 실험 식물을 바느질합니다. 모든 용기가 모종을 발아한 후 전처리 간호사 식물을 제거하여 촬영을 클리핑하여 기다립니다.
CMN 치료를 설정하려면 실험 기간 동안 일부 컨테이너가 이동되지 않도록 둡니다. 수정된 용기 들 사이에서 연장되는 최면을 물리적으로 끊으려면, 매주 일부 용기를 회전하여 한 번의 전체 회전을 통해 의도치 않게 지상 상호 작용을 변경하지 않도록 하십시오. 회전 직후, 모든 냄비에 물을 주어 중간 기판과 용기의 측면 사이의 접촉을 재확립합니다.
일반적인 골류 네트워크를 분리한 후 모든 냄비를 물로 담그면 용기와 간질 기판 사이의 접촉을 재확립하여 용기의 의도하지 않은 식기를 방지하는 것이 중요합니다. 주변 식물을 0.5%의 질소 15농축 된 질산칼륨과 염화 암모늄으로 비옥하게 합니다. 질소 14 비료를 동등한 농도의 비료로 대상 개인을 비옥하게 한다.
실험 의 과정을 통해 냄비의 위치를 다시 무작위, 적어도 매월. 가장 긴 잎 길이를 측정하여 매주 성장을 측정하고, 성장이 느려지기 시작할 때를 모니터링하여 식물이 뿌리에 묶이기 전에 수확해야 합니다. 수확하려면, 모든 지상 조직을 잘라, 자신의 치료, 냄비, 위치로 표시된 봉투에 개별 식물을 배치합니다.
그런 다음 강제 공기 건조 오븐에서 섭씨 60도에서 지상 조직을 건조하고 일정한 무게로 말린 다음 각 식물 조직의 건조 중량을 측정합니다. 토양이 용기를 제거하고 뿌리를 수확하기 전에 2 ~ 3 일 건조할 수 있도록하십시오. 수확 후 루트 시스템에서 가능한 한 많은 토양을 부드럽게 브러시합니다.
뿌리 손실을 피하기 위해 250 미크론 모공 크기로 체에 뿌리를 씻으셔. 뿌리가 건조하게 한 후 전체 루트 시스템의 무게를 측정합니다. 루트 시스템을 무작위로 잘라내고 조각을 50%에탄올에 넣습니다.
남은 루트 시스템의 무게를 재측정하고 라벨이 부착된 종이 봉투에 보관하여 건조 중량 평가를 위해 섭씨 60도에서 건조시. 대상 식물 실험에서 Andropogon gerardii Vitman을 성장 할 때, 단절 또는 CMN을 방지 대상의 지상 건조 무게를 감소, 그대로 CMN은 식물 성장을 촉진 제안. 절단 된 CMN을 가진 식물과 없음 CmN은 그들의 처리에 유사하게 반응했습니다.
한 개인의 성장이 다른 인근 개인의 성장을 억제하는 경쟁은, 손상되지 않은 CMN 치료에서 검출되었지만, 절단되거나 CMN 치료에서는 검출되지 않았다. 망간의 식물 크기 전용 농도에 비해 다양한 미네랄 영양소 잎 조직 농도를 철저히 비교한 것은 모든 치료법에 비해 지상 건조 중량의 표적 식물과 긍정적으로 연관되었다. 표적 식물 조직은 이웃의 용기에만 질소 15 라벨을 추가한 후 잎 조직 대 식물 크기에서 질소 15를 평가하였다.
손상되지 않은 CMN을 가진 표적 식물은 다른 두 치료법에 비해 질소 15 농도가 더 높았다. 손상되지 않은 CMN은 절단된 CMNs 처리의 질소 량의 강하게 긍정적이고 현저하게 다른 경사를 가졌으며, 대형 식물이 작은 표적 개인보다 이웃 용기에 도달하는 CMNs로부터 더 많은 질소를 얻었다는 것을 시사합니다. PVC 파이프로 만들어진 회전 코어를 사용한 현장 실험에서 파이프 를 넘어 초라한 균사체는 13 개월 간의 실험 중에 비누 베리의 성장에 거의 영향을 미치지 못했습니다.
그러나, 파이프의 회전에 의해 그것을 끊는 것은 실질적으로 클로로틱 식물에 의해 표시된 엽록질소, 인 및 구리 농도를 감소시키는 것을 감소시다. 직물이 각 용기에 붙어있는 것과 동일한 방향으로 용기를 회전하여 직물의 찢어짐을 피하고 360도 회전하여 식물의 지상 변화를 줄입니다. 이 절차는 뿌리 식민지에서 외래 균사체의 역할과 영양 섭취에 미치는 영향을 검사하기 위해 멸균 토양으로 채워진 변형 된 PVC 파이프와 현장에서 사용할 수 있습니다.
이 기술은 일반적인 mycorrhizal 네트워크와 식물의 비교를 허용, 네트워크에 의해 상호 연결되지 않은 mycorrhizal 식물에, 대신 mycorrhizas없이 작은 식물에, 가장 자주 수행.
