Name: micro-dissection of enamel organ from mandibular incisor of rats exposed to environmental toxicants
Uploaded: 2018-03-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants at JoVE.com

이 작품 Odontological 연구 (IFRO) 대학 파리 디드로, 프랑스 국립 건강 연구소 및 의료 연구 (INSERM), 그리고 프랑스 연구소에 의해 투자 되었다.

현재 연구에 사용 된 모든 동물 관리 및 농업 (A-75-06-12)의 프랑스 내각에서 실험 동물의 사용에 대 한 지침에 따라 유지 되었다.
1. 동물 유독 노출
<ol><li>이 프로토콜을 수행 하기 전에 필요한 기관 승인을 하 고 모든 동물 보호 지침을 준수 해야 합니다.</li>
	<li>Ameloblast 분 비 단계 및 ameloblast 성숙 단계에 조사 하는 molecule(s)의 영향을 테스트 하기 위해 다른 실험 그룹의 헌법을 수 있도록 연구 프로토콜의 디자인을 적용 합니다. 여기, 남성 Wistar 쥐의 4 개 그룹 불 (NaF) 조합에서 또는 하지 BPA (그림 1A)2에 그들의 노출에 따라 구성 되었다. 모든 동물 관찰 하 고 하루 65 (그림 1B)에 해 부 했다.</li>
</ol>2. Hemi-Mandibles 성인 쥐에서의 해 부
<ol><li>CO2 질, 선택적으로 시체의 나머지 부분에서 별도 머리를 잘린 다음으로 쥐를 안락사. CO2 전용된 상자16에서 5 분에 쥐를 노출 합니다.</li>
	<li>#11 메스를 사용 하 여 더 낮은 앞 니에 쉽게 접근할 낮은 입술에서 모든 피부를 제거 합니다.</li>
	<li>같은 메스와 약간의 압력 두 더 낮은 앞 니 사이 절 개 하 고는 mandible 두 개의 반쪽으로 분할 됩니다.</li>
	<li>턱, 분리를 메스로 일시적인 악의 공동 잘라내어 hemi mandible 정밀한 핀셋으로 잡고.</li>
	<li>메스와 주변 부드러운 조직 고 모든 근육, 힘 줄, 인 대는 뼈가 완전히 깨끗 한 때까지 스 크레이 퍼를 사용 하 여 제거.</li>
</ol>3. 니17,18 의 격리
<ol><li>신중 하 게 블레이드는 니의 주요 종 축에 평행 하 게 배치 하 여 뼈 떨어져 면도. 자 궁 경부 루프 근처 니 끝까지 니 (근 끝)의 끝 근처 뼈 능선에서 시작 합니다. 절 개 모션 원심 방향에 인접에서 진행 됩니다.</li>
	<li>에 게 첫 번째 컷 distally hemi mandible의 gonion를 제거 하 고 쉽게 자 궁 경부 루프 또는 ameloblasts ( 그림 2에서 레드 라인)의 분 비 단계 손상 없이 니 이륙 허가를 메스로 자 궁 경관 루프.</li>
	<li>어 금 니, 두 번째 아래 두 번째 컷을 확인 하 고 뼈와 고 니의 중간 표면 사이 메스를 삽입. 모든 기저 뼈를 들어올리면는 니 바깥쪽으로 회전 하 고에 나 멜을 피하기 위해 그것을 신중 하 게 벗어 기관 조직 손상 정밀한 핀셋을 사용 하 여.</li>
</ol>4. 마이크로-의 해 부 눈 렌즈 아래에 나 멜 기관
<ol><li>피 펫을 사용 하 여 니에 염 인산 염 버퍼 (PBS 1x)의 200 µ L을 드롭. 고급 핀셋으로 니 위로 향하도록 입술 표면 가져가 라. 메스는 무색 조직의 주황색 부분 사이 표시를 확인 합니다. 이 마크는 나중에 볼 (그림 2)는 기본 백색 반점에 해당 합니다.</li>
	<li>굴 삭 기 또는 해당 도구와 분 비 단계 (무색) ameloblasts, 그리고 성숙 단계 (오렌지) ameloblasts 대 니의 끝을 메스 마크에서에 해당 하는 꼭대기 끝을 메스 마크에서 세포 표면을 다쳤어요.</li>
	<li>이전 설명된19로 전환 단계로 해당 2 mm 조직을 제거 합니다. 사기 질 기관 절 개는 mesenchyme 하 여 오염을 방지 하는 동안에 고 니를 열지 마십시오.</li>
	<li>앞에서 설명한20로 니 (그림 2)의 꼭대기 부분에 바로 위치한 자 궁 경부 루프를 잘라.</li>
	<li>추가 조사 ( 재료의 표참조)에 대 한 10% 포 르 말린 또는 세포 솔루션에 그것을 수집 합니다.</li>
</ol>5. 추가 조사에 대 한 분리 된 사기 질 기관 직물의 수집
<ol><li>200 µ L PBS 1 X 버퍼는 니에 드롭.</li>
	<li>#11 메스 블레이드, 신중 하 게 분리, 버퍼에 점차적으로 치과 상피 세포 별도로 이전 메스 마크의 도움으로 각 단계에 대 한.</li>
	<li>셀 RNA 및 단백질 추출, 단백질 및 RNAs ( 재료의 표참조)의 적 출을 허용 하는 세포 해결책을 사용 하 여 조직을 넣어. 참고: 조직-굴 삭 기는 튜브에 하 고 다음 셀 균질 혼합물을 얻기까지 연 삭 하 여 고품질 RNAs를 준비 합니다. 혼합물은 앞에서 설명한2,,817제조업체의 절차에 따라 RNA 및 단백질 추출에 대 한 준비. 일반적으로, 약 5-10 µ g 총 RNAs 및 150 µ g 총 단백질 각 준비를 획득 했다.</li>
	<li>조직학 분석에 대 한 immunohistochemistry (IHC), 그리고 현장에서 교 잡 (ISH)는 2 h, 그 후에 PBS 1 X에서에서 4 ° C에서 저장소에 대 한 10% 포 르 말린에 셀 레이어를 넣어. 조직 수 포함할 수 왁 스/파라핀 또는 조직에 10 월 냉동된 섹션에 대 한.</li>
	<li>EMP 기사는 니 고급 핀셋으로 걸릴. 공기 (약간의 탈수)에 짧은 노출 후 하얀 점이 사기 질 강화 작용의 개시를 나타내는 니 입술의 가운데 부분 주위에 표시 됩니다. 이 백색 반점 / 해당 하는 전환-초기 성숙 단계의 ameloblasts, 그래서 그것을 사용 표시기로 EMPs21의 추출.</li>
</ol>

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저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

변경 된 ameloblast 활동 또는 방해 ameloblast 확산, 차별화, 그리고 성숙 프로세스 리드 돌이킬 수 없는 사기 질 결함을, 차례로,에 나 멜 결함의 특성은 변경의 이해 도움이 될 수 있습니다. amelogenesis 중 ameloblast 활동입니다. 따라서, 고립 된 사기 질 기관에 학문은 사기 질 결점 든 그들의 근원, 환경 또는 유전을 선도 병 적인 이벤트를 명료 하 게 하는 결정.
이 기술은 원래 Hiller <em...

많은 발달에 나 멜 결함 환경 유독 또는 부적 절 한 생활 스타일1,2,,34에서 발생할 수 있습니다. 이벤트 및 현재 설명한 절차를 사용 하 여 amelogenesis의 분자의 여러 유독 노출의 조기 표식으로 결과 나 멜 결함의 사용을 촉진 것입니다 그리고 건강의 역사를 다시 구성 하는 데 도움이 될 수 있습니다. 때에 나 멜은 synthetized1,2주 기간 동안 각 환자. 에 나 멜 합성 ameloblast 활동5에 따라 네 가지 주요 단계로 나눌 수 있습니다. 첫 번째 단계 regroups 전조 세포 및 pre-ameloblast 확산. 두 번째 단계 동안 차별화 된 ameloblasts에 나 멜 매트릭스 단백질 (EMPs), 주로 amelogenin, enamelin 및 ameloblastin, 마지막에 나 멜의 두께 결정 하는 분 비. 따라서, EMP 합성의 중단에 나 멜의 정량적 결함 이끌어 낸다. 전체에 나 멜 두께의 증 착 후 성숙 단계는 시작 됩니다. 이 단계 동안, 인회석 crystallite 성장 폭과 두께에 최대 96% 무게에 의해 생물 학적 조직에 높은 강화 비율을 도달 하는 나 멜을 수 있습니다. 질적 성숙 단계 이어질 동안 발생 하는 방해 이벤트 결함 사기 질. 마지막으로, ameloblasts 설치류, 염색 라고도 후 성숙의 단계를 입력 하 고 돌이킬 수 없는, 돌이킬 수 없는 (있을 경우)에 나 멜 결함을 만드는 치아 분화 동안 apoptosis를 받 다, 따라서 결함의 잠재적인 회고전 기록 제공 ameloblast 고 강조입니다. 설치류, amelogenesis 그들 amelogenesis의 일반적인 과정을 공부 하기 적합 한 모델을 만드는 그들의 앞 니는 지속적으로 성장 하 고, 까다로움과 이벤트의 유사한 순서를 따른다. 따라서, amelogenesis의 중단에 나 멜 품질 및 수량, 방해 이벤트의 기간에 따라 변경 발생합니다. 그런 의미에서 다이옥신, 납, 그리고 내 분 비 방해 화학 물질 (EDCs) 비스 페 놀 A (BPA), genistein, vinclozolin, 등에 노출에 나 멜 hypomineralizations,12,3 생성 하기 위해 표시 되었습니다. ,6,,78. 비대칭 흰색 불투명 반점이 쥐 태아 기간 출생1후 첫 달 동안 낮은 복용량 BPA 복용량에 노출의 앞 니에 확인 되었다. 이 나 멜 결함 쥐, 그리고 인간 어 금 니 니 hypomineralization (MIH)의 그에 유사한 임상, 구조, 및 생 화 확 적인 특성을 공유합니다. MIH는 최근 설명된 치과 나 멜 병 병 인 아직도 남아 있는 많은 인과 요인에도 불구 하 고 불분명9,10 에9,10,11 가상 데 ,12.
환경 요인으로 인해 또 다른 중요 한에 나 멜 hypomineralization 병리학은 치과 fluorosis (DF), 과도 한 불 소 흡수의 결과 이다 (> 0.1 m g/k g/일)13,14. 불 소의 주요 소스는 식 수를 보충 하거나 자연스럽 게 불 소 강화입니다. 불 소는 또한 종종 치과 카 리에 스를 방지 하기 위해 처방 이지만 예방 복용량만 50% 보다 낮은 독성 하나 (0.05 mg/kg/day). MIH와 DF, 환경 요인에 노출에서 결과로 두 자주 pathologies EDCs2 등 다른 유독 함께 하는 불 소의 hypomineralizing 효과의 potentiation 인해 특성화 하는 데 필요한 공통 기능을 제공할 수 있습니다. 또는 amoxicillin15.
쥐 사기 질 기관의 ameloblasts 다른 분화 단계에서 포함 된 마이크로 해 부는 ameloblast 활동을 방해 하 고에 나 멜 치아 분화 후 진단 결함을 일으킬 수 있는 분자의 행동의 메커니즘을 이해 하는 데 도움이 됩니다. 즉,에 나 멜 진 식과에 나 멜 매트릭스 구성 환경 유독 때문의 변화 특성에 유독, 노출의 역사의 재구성 있으며 공개에 대 한 환경 안전 모니터링을 용이 하 게 건강입니다.

<table><tbody><tr><td>Bisphenol A</td><td>Sigma Aldrich, Saint Louis MO</td><td>239658</td><td></td></tr><tr><td>formalin 10%</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>HT5012</td><td></td></tr><tr><td>Tri-Reagent</td><td>Euromedex, France</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>RLT buffer</td><td>Qiagen, Les Ulis, France</td><td>74126</td><td>RNeasy Protect Mini Kit</td></tr><tr><td>Androgen receptor antibody</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)</td><td>sc-816</td><td>rabbit polyclonal antibody</td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>EUOMEDEX</td><td>ET330.A</td><td></td></tr><tr><td>Sodium fluoride (NaF)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>S-1504</td><td></td></tr><tr><td>paraplast regular</td><td>Leica microsystems, Nanterre cedex,&amp;nbsp;France</td><td>39601006</td><td>called was/parafin in the text</td></tr><tr><td>tissue OCT</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, France</td><td>411243</td><td></td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Scissors - Straight/8.5 cm</td><td>PHYMEP , Paris, France</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Handle for Scalpel Blades - 12.5 cm</td><td>PHYMEP, Paris, France</td><td>10035-12</td><td></td></tr><tr><td>Curved Scalpel Blade</td><td>PHYMEP , Paris, France</td><td>10035-20</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Knife - Fine/Straight Tip</td><td>PHYMEP , Paris, France</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Circle Knife</td><td>PHYMEP, Paris, France</td><td>10059-15</td><td></td></tr><tr><td>scalpel blades n&amp;deg;11 Swann-Morton</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, France</td><td>233-0024</td><td></td></tr><tr><td>binocular lens</td><td>Leica biosystems, Nanterre cedex,&amp;nbsp;France</td><td>MZFLIII</td><td></td></tr></tbody></table>

micro-dissection of enamel organ from mandibular incisor of rats exposed to environmental toxicants

환경 상태와 생활의 방법에서 발생 하는 나 멜 결함은 그들의 높은 보급 때문에 공중 보건 우려. 이러한 결함 세포 라는 ameloblasts, 사기 질 기관에에 나 멜 합성에 대 한 책임의 변경 된 활동에서 발생할. Amelogenesis, 동안 ameloblasts 확산, 차별화, 그리고 죽음의 이벤트의 구체적이 고 정확한 시퀀스를 따릅니다. 지속적으로 성장 하는 앞 니 쥐 생리 및 병 적인 조건에 ameloblast 활동 및 분화 단계를 공부 하 적당 한 실험 모델입니다. 여기, 마이크로 해 부 이용과 환경에 노출 된 쥐의 사기 질 기관에 안정적이 고 일관 된 방법을 설명 합니다. 마이크로 해 부 치과 epithelia 포함 분 비 및 성숙 단계 ameloblasts 질적 실험 immunohistochemistry 분석 등 현장에서 교 잡, 뿐만 아니라와 같은 정량 분석에 대 한 사용할 수 있는 실시간 정량 Pcr, RNA-seq, 그리고 서 부 럽.

많은 치과 fluorosis12,13, 과도 한 불 소 흡수 때문 환경 조건에서 발생할 수 있습니다 또는 사기 질 hypomineralization와 유사한 MIH 일부 EDCs1, 에 노출 때문에 결함에 나 멜 7,22. 이러한 발달에 나 멜 결함 쥐 (그림 1)1,<...

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Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

에 나 멜 형성과 가능한 변경 이해 ameloblast 활동의 연구가 필요 합니다. 여기, 마이크로 해 부 분 비 및 성숙 단계 ameloblasts 추가 양적 및 질적 실험 절차에 대 한 사용할 수 있는 포함 하는 나 멜 장기 하는 안정적이 고 일관 된 방법을 설명 합니다.

사기 질 기관 이용과 환경에 노출 된 쥐의 악의 니에서의 마이크로 해 부

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

micro-dissection-enamel-organ-from-mandibular-incisor-rats-exposed-to

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

10.0K 조회수.  Cordeliers Research Centre. 에 나 멜 형성과 가능한 변경 이해 ameloblast 활동의 연구가 필요 합니다. 여기, 마이크로 해 부 분 비 및 성숙 단계 ameloblasts 추가 양적 및 질적 실험 절차에 대 한 사용할 수 있는 포함 하는 나 멜 장기 하는 안정적이 고 일관 된 방법을 설명 합니다.

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Ecotoxicological Methodologies to Evaluate Biomarkers at Different Scales in Neotropical Anurans

The new questions in ecotoxicology highlight the importance of applying a battery of biomarkers, as this results in ecotoxicological predictions that improve not only the interpretation of the effects of environmental stressors on organisms but also the determination of their possible impact. It is well known that the use of ecotoxicological biomarkers at different levels of organization allows for the prediction of the biological responses of organisms to environmental stressors, which is useful in environmental risk assessment. 
Nevertheless, it is necessary to consider the optimization of basic procedures, to generate historical data in control groups, and to employ specific bioassays to evaluate responses in organs and tissues in order to elucidate the nature and variation of the effects observed. Therefore, the present work aims to describe several ecotoxicological methodologies employed in all stages of neotropical anurans at different ecological levels and to validate them as useful biomarkers to be used both in wildlife and in laboratory conditions. In this work, these biomarkers were applied at the individual/organismic level (body condition index), histological/physiological level (histopathology, histometric, and pigmentary analyses), biochemical level (oxidative stress enzymes), and genetic level (direct and oxidative damage in DNA by comet assay). 
Although these methodologies have small variations or modifications depending on the species, these techniques provide effective biomarkers for evaluating the effect of xenobiotics on anurans, which possess certain characteristics that make them useful indicator species of aquatic and terrestrial ecosystems. In conclusion, the battery of biomarkers employed in the present study has proven to be adequate for estimating toxic responses in Neotropical anurans and can be further recommended as bioindicators for identifying the impact of pollutants on the aquatic ecosystems of the region. Finally, it is recommended to achieve the standardization of these important biomarkers for anurans in specific regions as well as to possibly include them in risk assessments and decision-making.

<meta charset="utf8"></head><body>신열대성 아누란에서 다양한 규모의 바이오마커를 평가하기 위한 생태독성학적 방법론

In this paper, standardized ecotoxicological methods for the evaluation of biomarkers in neotropical anuran species are presented. Specifically, this paper details several methodologies at different scales of ecotoxicological evaluation, such as the genetic, cellular-histological, biochemical, morphological, and individual levels.

신열대성 아누란에서 다양한 규모의 바이오마커를 평가하기 위한 생태독성학적 방법론

The new questions in ecotoxicology highlight the importance of applying a battery of biomarkers, as this results in ecotoxicological predictions that ...

연구

환경과학

Use of Trowell-Type Organ Culture to Study Regulation of Dental Stem Cells

Organ development, function, and regeneration depend on stem cells, which reside within discrete anatomical spaces called stem cell niches. The continuously growing mouse incisor provides an excellent model to study tissue-specific stem cells. The epithelial tissue-specific stem cells of the incisor are located at the proximal end of the tooth in a niche called the cervical loop. They provide a continuous influx of cells to counterbalance the constant abrasion of the self-sharpening tip of the tooth. Presented here is a detailed protocol for the isolation and culture of the proximal end of the mouse incisor that houses stem cells and their niche. This is a modified Trowell-type organ culture protocol that enables in vitro culture of tissue pieces (explants), as well as the thick tissue slices at the liquid/air interface on a filter supported by a metal grid. The organ culture protocol described here enables tissue manipulations not feasible in vivo, and when combined with the use of a fluorescent reporter(s), it provides a platform for the identification and tracking of discrete cell populations in live tissues over time, including stem cells. Various regulatory molecules and pharmacological compounds can be tested in this system for their effect on stem cells and their niches. This ultimately provides a valuable tool to study stem cell regulation and maintenance.

The Trowell-type organ culture method has been used to unravel complex signaling networks that govern tooth development and, more recently, for studying regulation involved in stem cells of the continuously growing mouse incisor. Fluorescent-reporter animal models and live-imaging methods facilitate in-depth analyses of dental stem cells and their specific niche microenvironment.

치아 줄기 세포의 조절 연구를 위한 트로웰형 장기 배양 사용

Organ development, function, and regeneration depend on stem cells, which reside within discrete anatomical spaces called stem cell niches. The ...

발생학

Rapid Isolation of Single Cells from Mouse and Human Teeth

Mouse and human teeth represent challenging organs for quick and efficient cell isolation for single-cell transcriptomic or other applications. The dental pulp tissue, rich in the extracellular matrix, requires a long and tedious dissociation process that is typically beyond the reasonable time for single-cell transcriptomics. For avoiding artificial changes in gene expression, the time elapsed from euthanizing an animal until the analysis of single cells needs to be minimized. This work presents a fast protocol enabling to obtain single-cell suspension from mouse and human teeth in an excellent quality suitable for scRNA-seq (single-cell RNA-sequencing). This protocol is based on accelerated tissue isolation steps, enzymatic digestion, and subsequent preparation of final single-cell suspension. This enables fast and gentle processing of tissues and allows using more animal or human samples for obtaining cell suspensions with high viability and minimal transcriptional changes. It is anticipated that this protocol might guide researchers interested in performing the scRNA-seq not only on the mouse or human teeth but also on other extracellular matrix-rich tissues, including cartilage, dense connective tissue, and dermis.

The current protocol presents a fast, efficient, and gentle method for isolating single cells suitable for single-cell RNA-seq analysis from a continuously growing mouse incisor, mouse molar, and human teeth.

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

Mouse and human teeth represent challenging organs for quick and efficient cell isolation for single-cell transcriptomic or other applications. The dental ...

Establishing Organoids from Human Tooth as a Powerful Tool Toward Mechanistic Research and Regenerative Therapy

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development and biology is scarce. In particular, not much is known about the tooth's epithelial stem cells and their function. We succeeded in developing a novel organoid model starting from human tooth tissue (i.e., dental follicle, isolated from extracted wisdom teeth). The organoids are robustly and long-term expandable and recapitulate the proposed human tooth epithelial stem cell compartment in terms of marker expression as well as functional activity. In particular, the organoids are capable to unfold an ameloblast differentiation process as occurring in vivo during amelogenesis. This unique organoid model will provide a powerful tool to study not only human tooth development but also dental pathology, and may pave the way toward tooth-regenerative therapy. Replacing lost teeth with a biological tooth based on this new organoid model could be an appealing alternative to the current standard implantation of synthetic materials.

We present a protocol to develop epithelial organoid cultures starting from human tooth. The organoids are robustly expandable and recapitulate the tooth's epithelial stem cells, including their ameloblast differentiation capacity. The unique organoid model provides a promising tool to study human dental (stem cell) biology with perspectives for tooth-regenerative approaches.

기계론적 연구 및 재생 요법을 향한 강력한 도구로 인간의 치아에서 오가노이드를 확립

Teeth are of key importance in life not only for food mastication and speech but also for psychological well-being. Knowledge on human tooth development ...

Two-Photon Microscopy를 통한 치아 세포의 실시간 추적

Using Ex Vivo Live Imaging to Investigate Cell Divisions and Movements During Mouse Dental Renewal

The continuously growing mouse incisor is emerging as a highly tractable model system to investigate the regulation of adult epithelial and mesenchymal stem cells and tooth regeneration. These progenitor populations actively divide, move, and differentiate to maintain tissue homeostasis and regenerate lost cells in a responsive manner. However, traditional analyses using fixed tissue sections could not capture the dynamic processes of cellular movements and interactions, limiting our ability to study their regulations. This paper describes a protocol to maintain whole mouse incisors in an explant culture system and live-track dental epithelial cells using multiphoton timelapse microscopy. This technique adds to our existing toolbox for dental research and allows investigators to acquire spatiotemporal information on cell behaviors and organizations in a living tissue. We anticipate that this methodology will help researchers further explore mechanisms that control the dynamic cellular processes taking place during both dental renewal and regeneration.

저자 스포트라이트: Understanding Dynamic Cellular Behaviors in Adult Mouse Dental Tissue Renewal and Repairment(성인 마우스 치아 조직 재생 및 수리에서 동적 세포 행동 이해) 

Ex vivo live imaging is a powerful technique for studying the dynamic processes of cellular movements and interactions in living tissues. Here, we present a protocol that implements two-photon microscopy to live track dental epithelial cells in cultured whole adult mouse incisors.

Ex vivo Live Imaging을 사용하여 마우스 치아 재생 중 세포 분열 및 움직임 조사

The continuously growing mouse incisor is emerging as a highly tractable model system to investigate the regulation of adult epithelial and mesenchymal ...

Propagation of Dental and Respiratory Cells and Organs in Microgravity

Gravity is one of the key determinants of human cell function, proliferation, cytoskeletal architecture and orientation. Rotary bioreactor systems (RCCSs) mimic the loss of gravity as it occurs in space and instead provide a microgravity environment through continuous rotation of cultured cells or tissues. These RCCSs ensure an un-interrupted supply of nutrients, growth and transcription factors, and oxygen, and address some of the shortcomings of gravitational forces in motionless 2D (two dimensional) cell or organ culture dishes. In the present study we have used RCCSs to co-culture cervical loop cells and dental pulp cells to become ameloblasts, to characterize periodontal progenitor/scaffold interactions, and to determine the effect of inflammation on lung alveoli. The RCCS environments facilitated growth of ameloblast-like cells, promoted periodontal progenitor proliferation in response to scaffold coatings, and allowed for an assessment of the effects of inflammatory changes on cultured lung alveoli. This manuscript summarizes the environmental conditions, materials, and steps along the way and highlights critical aspects and experimental details. In conclusion, RCCSs are innovative tools to master the culture and 3D (three dimensional) growth of cells in vitro and to allow for the study of cellular systems or interactions not amenable to classic 2D culture environments.

This protocol presents a method for the culture and 3D growth of ameloblast-like cells in microgravity to maintain their elongated and polarized shape as well as enamel-specific protein expression. Culture conditions for the culture of periodontal engineering constructs and lung organs in microgravity are also described.

미세중력에서 치과 및 호흡기 세포와 장기의 전파

Gravity is one of the key determinants of human cell function, proliferation, cytoskeletal architecture and orientation. Rotary bioreactor systems (RCCSs) ...

생체공학

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse incisor provides a model for these processes. This remarkable organ grows continuously throughout the animal&#39;s life and generates all the necessary cell types from active pools of adult stem cells housed in the labial (toward the lip) and lingual (toward the tongue) cervical loop (CL) regions. Only the dental stem cells from the labial CL give rise to ameloblasts that generate enamel, the outer covering of teeth, on the labial surface. This asymmetric enamel formation allows abrasion at the incisor tip, and progenitors and stem cells in the proximal incisor ensure that the dental tissues are constantly replenished. The ability to isolate and grow these progenitor or stem cells in vitro allows their expansion and opens doors to numerous experiments not achievable in vivo, such as high throughput testing of potential stem cell regulatory factors. Here, we describe and demonstrate a reliable and consistent method to culture cells from the labial CL of the mouse incisor.

The continuously growing mouse incisor provides a model for studying renewal of dental tissues from dental epithelial stem cells (DESCs). A robust system for consistently and reliably obtaining these cells from the incisor and expanding them in vitro is reported here.

성인 마우스 앞니의 치아 상피 줄기 세포의 분리 및 문화

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

사기 질 기관 이용과 환경에 노출 된 쥐의 악의 니에서의 마이크로 해 부

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신열대성 아누란에서 다양한 규모의 바이오마커를 평가하기 위한 생태독성학적 방법론

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치아 줄기 세포의 조절 연구를 위한 트로웰형 장기 배양 사용

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

기계론적 연구 및 재생 요법을 향한 강력한 도구로 인간의 치아에서 오가노이드를 확립

Ex vivo Live Imaging을 사용하여 마우스 치아 재생 중 세포 분열 및 움직임 조사

Ex vivo Live Imaging을 사용하여 마우스 치아 재생 중 세포 분열 및 움직임 조사

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미세중력에서 치과 및 호흡기 세포와 장기의 전파

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