이 작품은 교육과 연구 (BMBF 01EO1003 및 BMBF 01EO1503)에 대 한 독일 정부에 의해 지원 되었다.

실험은 남성 쥐 나이에 라인 지방 팔 라틴 (승인 번호 23 177-07/G12-1-002 및 23 177-07/G15-1-051)에서 동물 실험 윤리 위원회의 승인 아래 오래 된 8 ~ 12 주에 실시 했다.
1. 마우스 마 취 및 수술 준비
<ol>
	<li>수술 전에 좋은 건강 및 동물의 상태를 확인 합니다. 수술 전에 체중, 음식, 및 물 소비 (모양, 자세, 자연 스러운 행동) 그들의 일반적인 조건에 대 한 2-3 일 동안 하루에 한 번씩 동물을 모니터링 합니다.</li>
	<li>준비 마스터 믹스 midazolam (5 mg/kg 체중), medetomidine (0.5 mg/kg 체중), 펜타닐 (0.05 mg/kg 몸 무게)와 마 취에 대 한 intraperitoneally (i.p.) 26 G 바늘 200 µ L/30 g 마우스 1 mL 주사기에 주입.</li>
	<li>삼 투 펌프 주입 및 IVM 실험 동물 준비 플랫폼 온난화 39 ° c는 작업 필드에 수행 됩니다. 소독 목욕에 모든 도구를 소독 하 고 소독 온난화 플랫폼.</li>
	<li>절차 동안 눈 연 고와 동물 눈을 보호 합니다. 삼 투 펌프 주입 전에 면도기와 모피를 제거 합니다. 제 모 크림, 면봉을 사용 하 여 년 및 jugular 카 테 테 르 주입 IVM 실험에서의 격리에 대 한. 2 피부 소독 제를 사용 하 여 동물의 피부를 소독: 한 살 균 및 살 균 제 povidone 요오드와 한을 포함 하 피부 살 균 포함 octenidine 알코올 기반 솔루션.</li>
	<li>반대 flumazenil (0.01 mg/kgbody 중량), atipamezol (0.05 mg/kg 체중)와 마 취 ("antisedan") 믹스 마스터 믹스를 준비 하 고 피하 것 26 G 바늘 200 µ L/마우스 1 mL 주사기에 준비 (사우스 캐롤라이나) 주입.</li>
</ol>
2. 삼 투 펌프 준비 및 이식
참고: 삼 투 펌프를 사용 하 여 피하 AngII 주입 Lu 그 외 여러분 에 의해 상세히에서 기술 되었다 17
<ol>
	<li>멸 균 식 염 수와 동결 건조 된 분말을 재구성 하 여는 AngII를 준비 하 고 농도 동물 무게와 펌프의 배달 속도 조정. 플라스틱 튜브 (유리 튜브를 사용 하지 마십시오.)에서 재구성 된 AngII를 유지.</li>
	<li>7 일 동안 1 mg/(kg·d)를 제공 하는 AngII 솔루션으로 펌프를 채우십시오. 준비 후에, 펌프에서에서 계속 4-6 h에 대 한 살 균 염 분 최소 37 ° c.</li>
	<li>후면 마 취 혼합의 사출 반사 발 고 따뜻한 작업 필드에는 마우스의 완벽 한 마 취를 테스트 합니다. 마 취 유도 10-15 분 소요 하 고 동물 어두운 환경에서 배치 하는 경우 더 잘 작동 합니다.</li>
	<li>마우스 뒷면 하단을 면도 하 고 알콜 피부 살 균 소독.</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 척추에 수직인 1 cm 절 개를 확인 합니다. 해협 hemostat를 사용 하 여 펌프에 대 한 주머니를 만들고 펌프를 삽입 (먼저 사회자 흐름). 주머니 없는 압력 상처에 펌프의 자유 운동을 허용 해야 합니다.</li>
	<li>염증; 제한 하기 위하여 하지 클립, 봉합와 상처를 닫습니다 그런 다음 피부 살 균 소독.</li>
	<li>Antisedan 믹스의 200 µ L의 사우스 캐롤라이나 주사로 마 취를 반대 하 고 그것의 감 금 소를 마우스를 반환 합니다.</li>
	<li>수술 후 진통 buprenorphine와 수행 (0.075 m g/k g 사우스 캐롤라이나) 한 번 수술 후 및 동물의 행동에 따라 수요에.</li>
</ol>
3. jugular 카 테 테 르 주입 및 년 준비
<ol>
	<li>마우스의 완벽 한 마 취 주입 마 취의 후면 음식 반사와 혼합 하 고 온도 유지 하 고 연 고를 두고 직장 프로브와 39 ° C에 수술 등 recumbence에서 마 취 동물을 배치 후 테스트 절차 동안 그들을 보호 하기 위해 눈입니다.</li>
	<li>제 모 크림을 사용 하 여 목 머리카락을 제거 합니다. 면봉을 사용 하 여 확산 하 고 머리카락 밖으로을 시작 될 때까지 2 분 동안 크림을 문 지 르 세요. 추가 2 분 후 주걱으로 크림과 머리카락을 제거 하 고 알콜 피부 살 균으로 피부를 소독 합니다.</li>
	<li>아래는 stereomicroscope 수술을 수행 합니다. 경도 목, 기관지 옆 1 cm에서 피부에 1-1.5 cm 긴 절 개를 확인 합니다. 첫 번째 절 두 사지에 수직으로 다른 두 절을 확인 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 피부 옆 조직 제거 하 고 피부 왼쪽된 경 정 맥 및 기도의 조각을 제거.</li>
	<li>조심 스럽게 분리 귀 밑 샘; 2 곡선된 겸 자에 대 한 관심의 영역에서 설 하 고 submaxillary 땀 샘. 하지 절단 또는 동맥 손상, 경 정 맥에는 년 최고의 액세스할 수 있도록 그들 장소.</li>
	<li>경 정 맥을, 얇은 집게를 사용 하 고 천천히 열고 주변 조직에서 혈관을 부드럽게 닫습니다. 일단 정 맥이 완전히 깨끗 한는 겸 그릇 아래 놓고 아래 각 10 cm의 2 개의 7-0 봉합을 배치.</li>
	<li>두 개의 매듭을 가진 머리에 인접 봉합을 닫습니다. 다른 봉합에 한 매듭을 준비 하지만 그것을 닫지 마십시오.</li>
	<li>잡고 한 손으로 집게와 37 ° C 살 균 염 분 가득한 테 (안쪽 직경, 0.61 m m 외부 직경 0.28 m m) 다른 한편으로는, 함께 하는 동안 얇은 위 또는 곡선된 26 G 바늘 그릇에 작은 절 개를 확인 합니다. 그런 다음 경 정 맥에 카 테 터를 삽입 하 고 두 번 매듭을 닫습니다. 완전 한 동원 정지를 위해 카 테 터를 통해 머리에 인접 봉합을 닫습니다.</li>
	<li>격리 하 고 경 동맥을 준비, 얇은 곡선된 겸 자 사용 하 여 기관지를 덮고 영역 해 부.</li>
	<li>일단 고 년 조직 주변에서 자유롭다, 선박에서 미주 신경 (흰색 라인은 경 동맥에 인접 한 모양)를 제거 (하지만 그것을 잘라 하지 않습니다). 얇은 포 셉 폐쇄 하 고 천천히 부드럽게 신경을 동원을 열 수 있습니다.</li>
	<li>두 동맥은 완전히 깨끗 한, 일단 아래 첫 번째 경 동맥 겸 자 놓고 작은 블랙 3 m m x 폭 2.5 c m 길이 플라스틱 조각 그릇 아래에 배치 합니다. 그것은 매우 중요 한 선박을 overstretch 하지 고 혈액의 흐름은 선박 소유자 배치 되 면 존재 확인. 두 번째 동맥 선박 소유자를 놓습니다. 마우스는 현미경의 밑에 직접 배치 되지 않습니다, 기도에 땀 샘을 다시 넣어 고 37 ° C 살 균 염 분 지 대의 건조 방지를 적용.</li>
</ol>
4. 압 연 및 백혈구 준수 평가 / LysM + IVM와 세포
<ol>
	<li>-20 ° C에 저장 하는 2 mg/mL 재고 솔루션에서 오렌지 acridine 준비 하 고 그것에 게 1:4 1 mL 주사기에 멸 균 식 염 수 (최종 농도 0.5 mg/mL)에 희석.</li></ol>빛에서 주사기를 보호 하 고 하나의 마우스 당 200 µ L를 사용 하 여.<ol>
		<li>다른 조건을 테스트: acridine jugular 테;와 오렌지의 (1) 주입 (2) 주입 acridine 오렌지 직접 꼬리 옆 정 맥 (이 조건으로 아무 jugular 테 이식 했다); (3) 측정 acridine 오렌지 형광 LysMCre+IRG+ 를 사용 하 여 마우스 (여기 다시 아무 jugular 테 이식 했다) 없이.</li>
	</ol>
	
	<li>일단 테 장소 이며 2 년은, 현미경 마우스를 놓습니다. 장거리 콘덴서와 X 10을 사용 하 여 고속 넓은 필드 형광 현미경으로 측정을 수행 (NA 0.3)는 단색, 빔 스플리터와 전 하 결합 소자 카메라 물 침수 목표. 이미지 수집 및 실시간 이미징 시스템 분석을 수행 합니다.</li>
	<li>경 동맥 내 피 표면에 중간 현미경 목표 초점. 천천히 주사 50 µ L의 acridine 오렌지 (0.5 mg/mL) (고려 첫 번째 주입을 위해 카 테 터의 죽은 볼륨). 이미지 당 120 밀리초의 노출 시간 100 이미지 기록 소프트웨어를 설정 합니다.</li>
	<li>각 비디오에 대 한 동맥에 다른 위치에서 경 동맥 (왼쪽 및 오른쪽) 당 4 개의 동영상을 확인 합니다. 형광 신호 감소, acridine 오렌지의 또 다른 50 µ L을 주입.</li>
	<li>모든 동영상을 녹화 후 자 궁 경부 전위에 의해 동물을 안락사.</li>
	<li>초당 10 이미지 비디오 속도 설정 하 고 각 비디오에 대 한 선박 중앙 배치 200 µ m x 250 µ m 사각형 보기에서 롤링 및 부착 세포 계량. 롤링 및 부착 셀; 부착 세포 이동 하지 않거나 10 s 비디오 내 피에서 분리 된 셀으로 정의 됩니다. 정량화를 단순화 하기 위해 빨간 형광으로 채널을 제거 하 고 롤링 및 접착 셀만 녹색 형광을 사용 합니다.</li>
	<li>실험 acridine 오렌지를 사용 하 여, 내 피 세포에 의해 만들어진 배경을 제거 하기 위해 형광의 수동 임계값을 확인 합니다.</li>

<ol>
	<li>Lewington, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-specific+relevance+of+usual+blood+pressure+to+vascular+mortality:+a+meta-analysis+of+individual+data+for+one+million+adults+in+61+prospective+studies.">Age-specific relevance of usual blood pressure to vascular mortality: a meta-analysis of individual data for one million adults in 61 prospective studies.</a> Lancet. 360, 1903-1913 (2002).</li><li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mosaic+theory+revisited:+common+molecular+mechanisms+coordinating+diverse+organ+and+cellular+events+in+hypertension.">The mosaic theory revisited: common molecular mechanisms coordinating diverse organ and cellular events in hypertension.</a> J Am Soc Hypertens. 7, 68-74 (2013).</li><li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+T+cell+in+the+genesis+of+angiotensin+II+induced+hypertension+and+vascular+dysfunction.">Role of the T cell in the genesis of angiotensin II induced hypertension and vascular dysfunction.</a> J Exp Med. 204, 2449-2460 (2007).</li><li>De Ciuceis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+vascular+remodeling,+endothelial+dysfunction,+and+oxidative+stress+in+resistance+arteries+of+angiotensin+II-infused+macrophage+colony-stimulating+factor-deficient+mice:+evidence+for+a+role+in+inflammation+in+angiotensin-induced+vascular+injury.">Reduced vascular remodeling, endothelial dysfunction, and oxidative stress in resistance arteries of angiotensin II-infused macrophage colony-stimulating factor-deficient mice: evidence for a role in inflammation in angiotensin-induced vascular injury.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 2106-2113 (2005).</li><li>Wenzel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysozyme+M-positive+monocytes+mediate+angiotensin+II-induced+arterial+hypertension+and+vascular+dysfunction.">Lysozyme M-positive monocytes mediate angiotensin II-induced arterial hypertension and vascular dysfunction.</a> Circulation. 124, 1370-1381 (2011).</li><li>Kossmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-localized+FXI+promotes+a+vascular+coagulation-inflammatory+circuit+in+arterial+hypertension.">Platelet-localized FXI promotes a vascular coagulation-inflammatory circuit in arterial hypertension.</a> Sci Transl Med. 9, (2017).</li><li>Rodriguez-Iturbe, B., Pons, H., Johnson, R. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+suppress+monocyte+activation+through+secretion+of+extracellular+vesicles+containing+antiinflammatory+microRNAs.">Endothelial cells suppress monocyte activation through secretion of extracellular vesicles containing antiinflammatory microRNAs.</a> Blood. 125, 3202-3212 (2015).</li><li>Colognato, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+and+regulation+of+protease-activated+receptors+in+human+peripheral+monocytes+and+monocyte-derived+antigen-presenting+cells.">Differential expression and regulation of protease-activated receptors in human peripheral monocytes and monocyte-derived antigen-presenting cells.</a> Blood. 102, 2645-2652 (2003).</li><li>Schaffner, A., Rhyn, P., Schoedon, G., Schaer, D. 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저자 공개할 게 없다

LysM+ monocytes 이전 고혈압5의 개발에 연루를 표시 했다. 여기 우리가 LysM+ 면역 세포 롤 및 내 피 레이어 AngII 주입에 대 한 응답에서을 보여줍니다. 이 LysMCre+IRG+ 를 사용 하 여 얻은 acridine 오렌지6,10의 주입으로 백혈구를 시각화 하 여 비보에 고혈압에 면역 세포의 역할을 탐구 하는 우리의 이전 연구에서 생쥐. 따라서, 준수 하는 내 피 세포 유형의 차별 수 없었습니다.
IVM 혈관 연구 그리고 vivo에서 , 맥 관 구조에 직접 셀의 관찰에 대 한 매우 유용한 도구입니다 하지만 고혈압의 염증 성 맥락에서 수술로 삽입 된 카 테 터의 도움으로 염료를 주입의 영향 알 수 없는 남아 있습니다. 카 테 터와 acridine 오렌지의 잠재적 효과 평가 하기 위해 주입 우리 이용 했다 LysMCre++ IRG 쥐. AngII 주입 증가 수 있는 피에 LysM+ 세포의. 경 정 맥에 카 테 터의 삽입 효과 증폭 하 고 더 롤링 하 고 붙는 백혈구 테 임 플 란 트 없이 마우스에 비해 카 테 터와 기구 AngII-주입 마우스에서 발견 되었습니다. 이 이식 조직의 염증 반응의 맥락에서 상처 고혈압18에서 면역 반응으로 오버레이 치유 경 카 테 터 원인의 나타냅니다. 또한, 경 동맥을 경 정 맥의 근접 때문 추가 면역 활성화 수 생겼다 경 정 맥에 영향을 미치는 여. 이 효과 없는 꼬리 정 맥에 직접 주사 되었다 때, 이후 우리 효과 예정 이었습니다 추측할 수 있는 염료에 아닙니다 그러나 카 테 터를 삽입 하는 절차. 우리 여기 실험 동안 vivo에서 프로세스와 방해 하지에 형광 단백질을 표현 하는 유전자 변형 기자 마우스의 중요성을 설명 했다. 또한, 형광 추적기의 꼬리 정 맥 주입 jugular 테 주사 가능한 대안을 수 있습니다.
절차의 하나의 중요 한 단계는 AngII 주입 이다. 혈압의 꼬리 팔목 평가 펌프 AngII 전달의 효과 제어 하기 위해 만들 수 있습니다. 주입의 2−3 일 후 혈압 증가 한다. 제한 하려면 LysM+ 세포 활성화에 영향을 미칠 수 있는 염증, 펌프는 이식 절 개의 폐쇄 클립 대신 봉합 여야 한다. 꼬리 정 맥 주입에 대 한 한 가지 한계를 지적 한다: 각 경 최고의 가능한 데이터 수집을 하려면 4 동영상 촬영 일반적으로. 형광 신호 감소, acridine 오렌지의 50 µ L 주입 하지만 꼬리 주사로 더 어렵습니다 여러 주사는 년 현미경 목표 아래 안정적으로 유지 하 고. 경 정 맥에 카 테 터의 존재의 기간 때문에 혈소판이 풍부한 혈장 카 테 테 르 주입19후 4 h 준비에 응고 활성화에 영향을 미치는 면역 세포 활성화를 조절 또한 수도 있습니다. 카 테 테 르 주입의이 부분 추가 조사가 필요합니다.
마지막으로, 우리가 감사 jugular 카 테 테 르 주입 AngII 주입 후 LysM+ 세포 활성화에 미치는 영향, 경우에 우리 수 없습니다 완전히 견적 준비, 피부 제거, 및 잠재적인 LysM+ 셀에 경 격리의 역할 활성화입니다. 우리는 그 형광 기자 마우스를 사용 하 여 같은 결론 LysMCre++ IRG 마우스 vivo에서 화상 진 찰에 대 한 동물 준비 중 선박 무결성의 혼란을 피하기 위해 좋습니다.

동맥 고혈압 심혈 관 질환과 죽음의 위험을 증가 하 고 동맥 경화 증, 관상 동맥 심장 병 및 동맥 또는 정 맥 thromboembolisms1의 개발을 촉진. 고혈압의 개발 환경, 유전, 내 분 비과 hemodynamic 요인의 상호 작용에 따라 달라 집니다. 현재, 면역과 관련 된 염증 고혈압2의 병 인에 중요 한 역할을 감사 합니다.
면역 세포 중 T 림프 톨, monocytes 그리고 대 식 세포는 AngII 유도 혈관 염증과 고혈압, 반응성 산소 종3하 그들의 능력에 관련 부분에 원인이 되 관련 된 것을 발견 했다. 대 식 세포 콜로 니 자극 인자 결핍 마우스 혈압 증가 및 혈관 염증4AngII 감소 반응을 보였다. 이전 작품에서 우리는 LysM + monocytes 드라이브 AngII 유발 고혈압5에 염증과 혈관 장애는 표시할 수 있습니다. 더 최근에, 우리는 새로운 통로 응고에 요소 사이 협력 혈소판 및 트 롬 빈-종속 혈관 염증6유도 하 혈관 벽 설명. 고혈압에 면역 시스템의 역할에 대 한 현재의 지식은 요약 최근 되었고 로드 리 게 스-Iturbe 외의 검토. 7
때문에 고혈압의 개발에 면역 세포의 관련 되었다 분명, 모델 및 선박 및 면역 세포 간의 상호 작용을 공부 하는 기술을 필요한 되었다. 혈관의 Epifluorescence IVM vivo에서 순환 하는 혈액 세포와 내 피8,,910간의 상호작용을 관찰 하는 유용한 도구입니다. 이 기술로 염료 (acridine orange) 같은 dna intercalating의 주입 nucleated 세포 순환 뿐만 아니라 (endothelium에서)을 시각화할 수 있습니다. Ex vivo rhodamin-6 G와 격리 된 혈소판 스테인드 또는 dichlorofluorescein (DCF) 동맥 또는 정 맥 손상 모델에서 혈소판이 풍부한 혈전을 시각화를 주입 할 수 있습니다.
경 정 맥 카 테 터를 추적기를 삽입 하는 데 사용 하 또는 표시 하는 일반적으로, 혈소판. Endothelium의 변경 및 응고 캐스케이드의 후속 활성화 모두 monocyte 활성화에 효과를 알려져 있습니다. 내 피 부상 즉시 이끌어 낸다 혈소판 활성화 subendothelial 매트릭스 분자를 통해 이어지는 monocyte 매력 및 활성화11조직 인감. 그와 반대로, 그대로 피는 항 응 혈 약 속성 (예를 들어, 직물 요인 통로 억제 물 또는 thrombomodulin)12 과 직접 금지 monocyte, 예를 들면,의 분 비를 통해에 알려져 microRNAs13를 포함 하는 extracellular 소포. Monocytes 조직 요인, 특급 프로 테아 제-활성화 수용 체 (동위) 트 롬 빈에 의해 활성화 될 수 있다 monocyte 활성화14,15에에서 참여 하 고 응고 캐스케이드의 외부 활성 제를 생산 알려져 있습니다. . 따라서, 어떤 활성화 혈소판 또는 응고 캐스케이드 혈관 부상으로 인해 있을 수 있습니다 monocyte 활성화에 대 한 예기치 않은 효과 관찰된 현상 방해. IRG 유전자 변형 LysM Cre 유전자 변형 생쥐, 더블-형광 Cre 기자 마우스 (LysMCre+IRG+)의 도움으로, 우리는 LysM+ 에 카 테 터와 대안 방법으로 주사의 효과 자세히 연구 제안 동맥 고혈압16의 마우스 모델에서 myelomonocytic 셀.

<table><tbody><tr><td>Midazolam</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td></td><td>Anesthesia mix</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Pfizer Deutschland GmbH</td><td></td><td>Anesthesia mix</td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>Janssen-Cilag GmbH</td><td></td><td>Anesthesia mix</td></tr><tr><td>Alzane</td><td>Zoetis</td><td></td><td>Antisedan mix</td></tr><tr><td>Flumazenil</td><td>Hikma pharma</td><td></td><td>Antisedan mix</td></tr><tr><td>Braunol</td><td>B Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octeniderm</td><td>Sch&amp;uuml;lke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osmotic pumps</td><td>Alzet</td><td>1007D</td><td>Osmotic pump implantation</td></tr><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Osmotic pump implantation</td></tr><tr><td>7-0 prolene suture</td><td>Ethicon</td><td></td><td>Osmotic pump implantation</td></tr><tr><td>Acridine orange</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Catheter</td><td>Smiths Medical Deutschland GmbH</td><td></td><td>Inside diameter, 0.28 mm; outer diameter, 0.61 mm</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Olympus</td><td>BX51WI fluorescence microscope</td><td></td></tr><tr><td>Beam Splitter</td><td>Photometrics</td><td>CMR-DV2-SYS - DualView2 MicroImager</td><td></td></tr><tr><td>Objective</td><td>Olympus</td><td>UMPLFLN10X</td><td>Water immersion objective with a monochromator</td></tr><tr><td>Camera</td><td>Hamamatsu Photonics</td><td>ORCA-R2</td><td></td></tr><tr><td>Image acquisition and analysis software</td><td>Olympus</td><td>Realtime Imaging System eXcellence RT</td><td></td></tr><tr><td>Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>Jax 008705</td><td>B6.Cg-Tg(CAG-DsRed,-EGFP)5Gae/J</td></tr><tr><td>Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>Jax 004781</td><td>LysM Cre (B6.129P2-&lt;em&gt;Lyz2&lt;sup&gt;tm1(cre)Ifo&lt;/sup&gt;&lt;/em&gt;/J )</td></tr></tbody></table>

visualizing leukocyte rolling and adhesion in angiotensin ii-infused mice: techniques and pitfalls

혈관의 Epifluorescence intravital 비디오 현미경 (IVM) 면역 세포의 활성화 및 역할에 그들의 능력을 평가 하 고 내 피 층에 고착 하는 설정된 방법입니다. 형광 염료의 fluorophore 결합 항 체를 주입 하 여 세포를 순환의 일반적으로 사용 됩니다. 또는, 형광 기자 마우스 사용할 수 있습니다. + (LysM+) 특정 lysozyme M에서에서 백혈구의 상호작용 monocytes, 혈관 벽과 혈관 장애 및 동맥 고혈압에 중추적인 역할. 우리는 여기 시각화 하 고 압 연 하는 백혈구 및 접착 angiotensin II (AngII)에 있는 경 동맥에서 계량 기법 제시-IVM에 의해 쥐에서 고혈압을 유발.
카 테 터의 이식 혈관 벽을 손상 하 고 바꾸 인된 혈액 세포 응답에 연결 됩니다. 우리 다른 주입 기술 및 LysMCre++ IRG에서에서 백혈구를 시각화 하기 위해 관리 경로 비교 붉은 형광 단백질의 광범위 한 표현 및 LysM에 있는 녹색 형광 단백질의 조건식 마우스 + 세포. LysM+ 세포 활성화, 연구를 사용 하는 AngII 마우스 주입 압 연 및 접착 endothelium에 백혈구의 증가. 우리 역시 acridine 오렌지는 경을 사용 하 여 카 테 터를 주입 또는 직접 꼬리 정 맥 하 고 비교의 양을 압 연 및 준수 세포. 우리는 jugular 카 테 테 르 주입 당 회전의 수를 증가에 붙는 LysM+ 세포 가짜 주입 LysMCre++ IRG 마우스 컨트롤에 비해 발견. 이 활성화는 AngII 주입 마우스에서 증강 되었다. 흥미롭게도, acridine 오렌지 직접 꼬리를 통해 정 맥 증가 하지 않았다 LysM+ 세포 접착을 주입 또는 가짜 주입 마우스에서 압 연. 우리는 그로 인하여 실험 동안 vivo에서 프로세스와 방해 하지에 형광 단백질을 표현 하는 유전자 변형 기자 마우스의 중요성을 설명 했다. 또한, 형광 추적기의 꼬리 정 맥 주입 jugular 테 주사 가능한 대안을 수 있습니다.

년 LysMCre++ IRG의 쥐 AngII 주입 IVM를 사용 하 여 관찰 했다. Acridine 오렌지 jugular 카 테 터를 사용 하 여 주입 했다. 우리가 모든 nucleated 순환 세포 (배와 상호 작용 하는 셀 형식의 차별 남아 오픈 이후 선박 상호 작용 또한 수에 비해 혈관 벽 접촉 LysM+ 세포의 비율을 보면 목적 우리의 이전 작품에서 질문)입니다. 기준선에 jugular 카 테 터의 존재는 LysM+ 세포 (그림 2A, D)의 접착을 발생합니다. 오렌지 acridine 주입 후 동일한 세포 형광, 되었지만 또한 내 피 세포 형광 (그림 2B, E). 내 피를 제한 하려면 배경 감소 관련 형광, 후 데이터 나타냅니다 모든 nucleated 고집 셀 LysM+ (그림 2C, F); 이러한 결과 우리의 이전 결과 확인 하 고 LysMCre++ IRG는 LysM+ 세포 활성화에 AngII의 효과 관찰 하기 좋은 모델을 보여주는 AngII 주입 후 사실 만요.
우리 평가 acridine LysM+ AngII LysMCre++IRG에에서 주입 후 세포 활성화에 오렌지의 관리 노선의 역할. AngII 주입, 백혈구 endothelium 상호 작용의 1 주 후 LysMCre++ IRG의 경 동맥에 마우스 몇 군데 있었고 jugular 카 테 터를 통해 또는 꼬리 정 맥을 통해 오렌지 acridine 주입 없이 IVM에 의해 시각. 카 테 터 나 주입, 없이 LysM+ 세포의 롤링 크게 증가 되었다 AngII 주입 치료 쥐 및 접착에 비해 증가 (그림 3)를 보여준 후. Acridine jugular 테 증가 접착 및 AngII에서 오렌지의 주사 카 테 터 (그림 3) 없이 쥐와 비교 된 더 큰 정도로 쥐 취급. 과 비슷한 접착 acridine 꼬리 정 맥에 주황색의 사출 리드 acridine 오렌지 (그림 3)의 주입에는 영향을 받지 않은 쥐에 비해 압 연.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig1.jpg"> 
그림 1입니다. Angiotensin II 주입 및 LysM+ 의 평가 제도 압 연 및 쥐에 접착 세포. LysMCre++ IRG 마우스 AngII 7 일 주입 했다 하 고는 년 동안 셀 acridine jugular 카 테 터를 통해 또는 꼬리 정 맥에 의해 오렌지의 주입 없이 계량 했다 준수로 LysM+ 압 연 사출입니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig2.jpg"> 
그림 2입니다. LysM+ 세포 접착 및 IRG+ 마우스 LysMCre+의 경 동맥에서 압 연의 평가. 접착의 LysM+ LysMCre+(A, D) 전에 IRG+ 마우스 세포 (B, E) acridine 주입 jugular 카 테 터를 통해 후. 빨간색과 녹색 형광 기록 했다, (녹색)에서 LysM+ 세포 및 평활 근 세포 (빨간색)으로 표시 했다. Acridine 오렌지의 주입, 후 내 피 세포도 그린에서 볼 수 있지만 셀 시각화 (C, F) nucleated만 순환 수 배경 형광을 제거. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig3.jpg"> 
그림 3입니다. Angiotensin II에에서 형광 염료의 관리 노선 평가 LysMCre+IRG+ 쥐를 주입. 압 연 (A)와 (B) LysM+ 준수의 정량화 세포 가짜 운영 또는 AngII 생긴 동물 및 또는 없이 acridine 오렌지 jugular 카 테 터를 사용 하 여 또는 꼬리 정 맥 주입 하 여 주입. 다른 조건 (C)의 대표 사진. 결과 평균 ± 표준 오차의 의미. 2-방법은 ANOVA 수행한 Bonferroni의 임시 게시물 테스트, n = 3-12/그룹; p &#60; 0.05. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

이 원고 설명 기자 유전자 변형 마우스의 사용 및 다른 관리 경로 angiotensin II 유발 고혈압 면역 세포의 활성화를 평가 하기 위해 혈관의 intravital 비디오 현미경을 사용 하 여 형광 염료의 그들의 롤 및 endothelium에 고착 하는 능력.

백혈구 롤링 Angiotensin II-주입 마우스에서 접착 시각화: 기술 및 함정

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...

visualizing-leukocyte-rolling-adhesion-angiotensin-ii-infused-mice

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

8.6K 조회수.  University Medical Center Mainz. 이 원고 설명 기자 유전자 변형 마우스의 사용 및 다른 관리 경로 angiotensin II 유발 고혈압 면역 세포의 활성화를 평가 하기 위해 혈관의 intravital 비디오 현미경을 사용 하 여 형광 염료의 그들의 롤 및 endothelium에 고착 하는 능력.

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Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

Worldwide, hypertension is reported to be in approximately a quarter of the population and is the leading biomedical risk factor for mortality worldwide. In the vasculature hypertension is associated with endothelial dysfunction and increased inflammation leading to atherosclerosis and various disease states such as chronic kidney disease2, stroke3 and heart failure4. An initial step in vascular inflammation leading to atherogenesis is the adhesion cascade which involves the rolling, tethering, adherence and subsequent transmigration of leukocytes through the endothelium. Recruitment and accumulation of leukocytes to the endothelium is mediated by an upregulation of adhesion molecules such as vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), intracellular cell adhesion molecule-1 (ICAM-1) and E-selectin as well as increases in cytokine and chemokine release and an upregulation of reactive oxygen species5. In vitro methods such as static adhesion assays help to determine mechanisms involved in cell-to-cell adhesion as well as the analysis of cell adhesion molecules. Methods employed in previous in vitro studies have demonstrated that acute increases in pressure on the endothelium can lead to monocyte adhesion, an upregulation of adhesion molecules and inflammatory markers6 however, similar to many in vitro assays, these findings have not been performed in real time under physiological flow conditions, nor with whole blood. Therefore, in vivo assays are increasingly utilised in animal models to demonstrate vascular inflammation and plaque development. Intravital microscopy is now widely used to assess leukocyte adhesion, rolling, migration and transmigration7-9. When combining the effects of pressure on leukocyte to endothelial adhesion the in vivo studies are less extensive. One such study examines the real time effects of flow and shear on arterial growth and remodelling but inflammatory markers were only assessed via immunohistochemistry10. Here we present a model for recording leukocyte adhesion in real time in intact pressurised blood vessels using whole blood perfusion. The methodology is a modification of an ex vivo vessel chamber perfusion model9 which enables real-time analysis of leukocyte -endothelial adhesive interactions in intact vessels. Our modification enables the manipulation of the intraluminal pressure up to 200 mmHg allowing for study not only under physiological flow conditions but also pressure conditions. While pressure myography systems have been previously demonstrated to observe vessel wall and lumen diameter11 as well as vessel contraction this is the first time demonstrating leukocyte-endothelial interactions in real time. Here we demonstrate the technique using carotid arteries harvested from rats and cannulated to a custom-made flow chamber coupled to a fluorescent microscope. The vessel chamber is equipped with a large bottom coverglass allowing a large diameter objective lens with short working distance to image the vessel. Furthermore, selected agonist and/or antagonists can be utilized to further investigate the mechanisms controlling cell adhesion. Advantages of this method over intravital microscopy include no involvement of invasive surgery and therefore a higher throughput can be obtained. This method also enables the use of localised inhibitor treatment to the desired vessel whereas intravital only enables systemic inhibitor treatment.

This is a method to visualise leukocyte adhesion to the endothelium in harvested pressurised vessels. The technique enables studying vascular adhesion under shear flow with differing intraluminal pressures up to 200 mmHg thus mimic-ing the pathophysiological conditions of high blood pressure.

하이 Intraluminal 압력에서 혈관 내피에 이미징 백혈구의 접착

Worldwide, hypertension is reported to be in approximately a quarter of the population and is the leading biomedical risk factor for mortality worldwide. ...

연구

면역학 및 감염병학

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the development of fibrosis and progression to cirrhosis. Understanding the molecular mechanisms that mediate leucocyte recruitment to the liver could identify important therapeutic targets for liver disease. The key interaction during leucocyte recruitment is that of inflammatory cells with endothelium under conditions of shear stress. Recruitment to the liver occurs within the low shear channels of the hepatic sinusoids which are lined by hepatic sinusoidal endothelial cells (HSEC). The conditions within the hepatic sinusoids can be recapitulated by perfusing leucocytes through channels lined by human HSEC monolayers at specific flow rates. In these conditions leucocytes undergo a brief tethering step followed by activation and firm adhesion, followed by a crawling step and subsequent transmigration across the endothelial layer. Using phase contrast microscopy, each step of this &#39;adhesion cascade&#39; can be visualized and recorded followed by offline analysis. Endothelial cells or leucocytes can be pretreated with inhibitors to determine the role of specific molecules during this process.

Leucocyte recruitment to the liver occurs within the specialized channels of the hepatic sinusoids which are lined by unique hepatic sinusoidal endothelial cells. Phase contrast microscopy of leucocyte recruitment across human hepatic sinusoidal endothelium under conditions of physiological shear stress can facilitate the elucidation of the molecular mechanisms which underlie this process.

전단 응력의 인간 간 사인 내피에서 조건에 백혈구 모집을 연구하는 흐름 접착 분석

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this protocol, we describe intravital microscopy of mesentery veins. This can be performed in a short period of time with reproducible results showing leukocyte-endothelial interactions in vivo. We describe an inflammatory setting after LPS challenge of the endothelium. But in this model one can apply many different types of inflammatory conditions, like bacterial, chemical or biological and investigate the administration of drugs and their direct effects on the living animal and its impact on leukocyte recruitment. This protocol has been applied successfully to a number of different treatments of mice and their effects on inflammatory response in vessels. Herein, we describe the visualization of leukocytes and platelets by fluorescently labeling these with rhodamine 6G. Additionally, any specific imaging can be performed using targeted fluorescently labeled molecules.

This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.

마우스의 Mesenterial 혈관에서의 생체 내에 현미경 백혈구 - 내피 세포와 혈소판 - 백혈구 상호 작용

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in vivo is crucial for understanding the molecular basis of leukocyte transendothelial migration and interaction with vascular endothelium. One powerful approach involves intravital microscopy on transgenic mice expressing fluorescent proteins in cells of interest.
Here we present a protocol for imaging monocytes and neutrophils in the CX3CR1gfp/wt mouse i.v. injected with orange dye-labeled neutrophils with an inverted confocal microscope. Time-lapse movies gathered from 30 min&#160;to several hours of imaging allow the analysis of leukocyte behavior in mesenteric veins under both steady state and inflammatory conditions. We also describe the steps to locally induce blood vessel inflammation with TLR2/TLR1 agonist Pam3SK4 and monitor the subsequent recruitment of neutrophils and monocytes.
The presented technique can also be used to monitor other populations of leukocytes and investigate molecules implicated in leukocyte recruitment or trafficking using other stimuli or transgenic mice.

We detail a protocol to monitor the behavior of neutrophils and monocytes in mesenteric veins under steady state and inflammatory conditions using intravital confocal microscopy on anaesthetized mice.

실시간으로 마취 마우스에 생체 내에 현미경으로 장간막 혈관에서 호중구와 단핵구 이미징

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Laminar Flow-based Assays to Investigate Leukocyte Recruitment on Cultured Vascular Cells and Adherent Platelets

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted in the concept of the leukocyte adhesion cascade. However, the exact molecular mechanisms involved in leukocyte recruitment have not yet been fully identified. Since leukocyte recruitment remains an important subject in the field of infection, inflammation, and (auto-) immune research, we present a straightforward laminar flow-based assay to study underlying mechanisms of the adhesion, de-adhesion, and transmigration of leukocytes under venous and arterial flow regimes. The in vitro assay can be used to study the molecular mechanisms that underlie the interactions between leukocytes and their cellular partners in different models of vascular inflammation. This protocol describes a laminar flow-based assay using a parallel-flow chamber and an inverted phase contrast microscope connected to a camera to study the interactions of leukocytes and endothelial cells or platelets, which can be visualized and recorded then analyzed offline. Endothelial cells, platelets, or leukocytes can be pretreated with inhibitors or antibodies to determine the role of specific molecules during this process. Shear conditions, i.e. arterial or venous shear stress, can be easily adapted by the viscosity and flow rate of the perfused fluids and the height of the channel.

Leukocytes avidly interact with vascular cells and platelets after vessel wall injury or during inflammation. Here, we describe a straightforward laminar flow-based assay to characterize the molecular mechanisms that underlie the interactions between leukocytes and their cellular partners.

교양된 혈관 세포에 부착 혈소판 백혈구 신규 모집 조사 하 층 플로우 기반 분석

The recruitment of leukocytes upon injury or inflammation to sites of injury or tissue damage has been investigated during recent decades and has resulted ...

A Microphysiological System to Study Leukocyte-Endothelial Cell Interaction during Inflammation

Leukocyte-endothelial cell interactions play an important role in inflammatory diseases such as sepsis. During inflammation, excessive migration of activated leukocytes across the vascular endothelium into key organs can lead to organ failure. A physiologically relevant biomimetic microfluidic assay (bMFA) has been developed and validated using several experimental and computational techniques, which can reproduce the entire leukocyte rolling/adhesion/migration cascade to study leukocyte-endothelial cell interactions. Microvascular networks obtained from in vivo images in rodents were digitized using a Geographic Information System (GIS) approach and microfabricated with polydimethylsiloxane (PDMS) on a microscope slide. To study the effect of shear rate and vascular topology on leukocyte-endothelial cell interactions, a Computational Fluid Dynamics (CFD) model was developed to generate a corresponding map of shear rates and velocities throughout the network. The bMFA enables the quantification of leukocyte-endothelial cells interactions, including rolling velocity, number of adhered leukocytes in response to different shear rates, number of migrated leukocytes, endothelial cell permeability, adhesion molecule expression and other important variables. Furthermore, by using human-related samples, such as human endothelial cells and leukocytes, bMFA provides a tool for rapid screening of potential therapeutics to increase their clinical translatability.

In this protocol, a biomimetic microfluid assay, which can reproduce a physiologically relevant microvascular environment and reproduce the entire leukocyte adhesion/migration cascade, is employed to study leukocyte-endothelial cell interactions in inflammatory disease.

염증 중 백혈구-내피 세포 상호작용을 연구하는 미생리학적 시스템

Leukocyte-endothelial cell interactions play an important role in inflammatory diseases such as sepsis. During inflammation, excessive migration of ...

생체공학

Leukocyte Infiltration of Cremaster Muscle in Mice Assessed by Intravital Microscopy

Intravital microscopy (IVM) is widely used to monitor physiological and pathophysiological processes within the leukocyte recruitment cascade in vivo. The current protocol represents a practical and reproducible method to visualize the leukocyte endothelium interaction leading to leukocyte recruitment in skeletal muscle derived tissue within the intact organism of the mouse. The model is applicable to all fields of research that focus on granulocyte activation and their role in disease.
We provide a step by step protocol to guide through the method and to highlight potential pitfalls and technical difficulties. The protocol covers the following aspects: experimental settings and required material, anesthesia of the mouse, dissection of the cremaster muscle as well as tracheal and carotid cannulation, IVM recordings and offline analysis. Data formats like adherent leukocytes, rolling flux (RF) and rolling flux fraction (RFF) are explained in detail and appropriate applications are discussed. Representative results from dystrophin deficient mdx mice are provided in the results section.
IVM is a powerful tool to assess leukocyte recruitment in an in vivo setting; however, delineating for example endothelial and leukocyte function may require a combination with ex vivo setups like flow chamber experiments. Furthermore, the genetic background of animals of interest may greatly influence baseline recruitment, requiring individual fine tuning of the protocol provided. Despite its limitations, IVM may serve as a platform to readily translate in vitro findings into a living vertebrate organism.

Here, we show how to perform intravital microscopy on post-capillary venules of the mouse cremaster muscle. Commonly applied to different models of inflammation and sepsis, particularly those induced by chemokines and cytokines, we highlight its relevance in the study of muscolopathies involving exaggerated muscular leukocyte infiltration.

Intravital 현미경 검사법에 의해 평가된 마우스에 있는 Cremaster 근육의 백혈구 침투

Intravital microscopy (IVM) is widely used to monitor physiological and pathophysiological processes within the leukocyte recruitment cascade in vivo. The ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

접착 발자국 분석에 의한 세포 압연의 이미징 분자 접착

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

생물학

Quantification of Diabetes-induced Adherent Leukocytes in Retinal Vasculature

Leukostasis refers to the attachment of leukocytes to the luminal wall of the vasculature. This interaction of leukocytes with the wall of blood vessels is characteristic of inflammation and has been causally linked to capillary occlusion in a variety of tissues and diseases, including diabetic retinopathy. 
Leukostasis has been reported for years as a life-threatening complication of hyperleukocytosis and can only be diagnosed clinically. Given the importance of the phenomenon, intensive research has been done to understand the potential mechanism(s) that lead to its manifestation; however, there is no gold-standard technique in laboratory settings to visualize and quantify the severity of the event.
In the method summarized below, the vasculature is initially perfused with a buffer to remove blood, and then, concanavalin A is perfused into the vasculature where it binds to all exposed cell walls and causes especially bright staining of leukocytes. If the perfusion to remove all unbound blood cells was successful, the remaining fluorescently labeled leukocytes are bound to the vasculature, and they can be manually quantified using any available fluorescence microscope.

We demonstrate a method to label the walls of the retinal vasculature and adherent leukocytes. These adherent leukocytes can then be counted under a fluorescence microscope as a parameter of inflammation or the response of that inflammation to therapies.

망막 혈관 구조에서 당뇨병 유발 부착 백혈구의 정량화

Leukostasis refers to the attachment of leukocytes to the luminal wall of the vasculature. This interaction of leukocytes with the wall of blood vessels ...

의학

Intravital Microscopy to Analyze Blood Cell-Endothelial Interactions in an Inflammation Mouse Model

Source: Herr, N. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/53077">Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate the real-time visualization of blood cell-endothelial interactions in the mesenterial veins of a mouse model injected intraperitoneally with lipopolysaccharide.

염증 마우스 모델에서 혈액 세포-내피 상호 작용을 분석하기 위한 생체 내 현미경 검사

Source: Herr, N. et al., Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice. J. Vis. Exp. ...