이 작품은 대학 병원의 리 (추 리)에 의해 지원 되었다. 우리는 비디오 제작에 대 한 "순간 프로덕션" 인정합니다. 우리는 또한 세 드 릭 프랑수아, 영화에 등장 하는 환자를 인정 합니다.

이 섹션에 설명 된 모든 방법을 리 대학 병원의 윤리 위원회에 의해 승인 되 고 모든 건강 한 과목 참여에 대 한 서 면된 동의 주었다.
1. 선 유도
<ol>
	<li>사전 및 사후 bronchodilator spirometry
	<ol>
		<li>spirometry 수행 (강제로 내쉬는 숨의 볼륨 1 초 [FEV1] 및 강제 중요 한 용량 [FVC] 책략) 미국 흉부 학회 (ATS)에 따르면 / 유럽 호흡기 학회 (ERS) 표준 기준12.</li>
		<li>스페이서 장치를 통해 흡입된 salbutamol의 400 µ g metered 복용량 흡입기 (MDI)에서 관리 합니다. 참고: 성인에서 salbutamol 흡입된의 부작용 떨림 및 심 박 급진13포함.</li>
		<li>반복 spirometry (FEV1 과 FVC 책략) 15 분 후,12의 ATS/ERS 표준 기준 따라 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>초음파 분무기의 준비 참고:는 분무기 해야 합니다 철저 하 게 청소 되며, 제조업체의 지침에 따라 각 사용 하기 전에 소독.<ol>
		<li>권장된 수준까지 증류수로 분무기 챔버를 채우십시오.</li>
		<li>분무기 챔버에 깨끗 한 컵을 넣습니다.</li>
		<li>적절 한 뚜껑 컵 커버.</li>
		<li>후 bronchodilator FEV1 환자에 대 한 고 식 염 수 (5%)의 중 50 mL 컵 채우기 &#62; 65% 예측 또는 예측 후 bronchodilator FEV1≤65 %는 환자에 대 한 isotonic 식 염 수 (0.9%)의 50 mL.</li>
		<li>Salbutamol 황산 솔루션 (5 mg/mL)의 1.75 mL 컵을 추가 합니다.</li>
		<li>튜브와 밸브 제조업체의 지침에 따라 연결 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Nebulization 및가 래 컬렉션 참고: 의료 감독 기법을 수행 합니다.<ol>
		<li>환자에 게 절차를 설명 합니다.</li>
		<li>코 클립을 사용 하 여 환자를 부탁 드립니다.</li>
		<li>는 분무기를 돌려 고 졸 및 팬 설정의 최저 수준을 선택 합니다.</li>
		<li>5 분 간만 호흡과 입 조각을 통해에 어로 졸을 흡입 환자를 부탁 드립니다. 참고:에 어로 졸 및 팬 설정 환자의 허용 오차에 따라 증가 수 있습니다.<ol>
			<li>참을 수 없는 기침 또는 구역 질, 절차를 중단 하 고 1.3.5 단계로 이동 합니다.</li>
			<li>가슴 답 답, 호흡 불편 경우 1.3.8 단계로 이동 합니다.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>분무기를 해제 합니다.</li>
		<li>코 클립을 제거, 그의 입을 물으로 헹 구 고 싱크대에 그것을 삭제 하기 전에 두 번 양치질을 환자를 부탁 드립니다. 참고: 타 액 셀이 래 샘플을 오염 하 고 사용할 샘플 이어질 수 있습니다.</li>
		<li>플라스틱 용기에가 래를 기침 환자를 부탁 드립니다.</li>
		<li>FEV1측정 spirometry (강제로 내쉬는 숨 작전)을 수행 합니다.</li>
		<li>FEV1 가 다음과 같이 평가: (FEV1 단계 3.8 [mL]에서 측정)-(후 bronchodilator FEV1 단계 1.3 [mL]에서 측정) / (후 bronchodilator FEV1 측정 단계 1.3 [mL]) * 100.<ol>
			<li>FEV1 사후 bronchodilator 값에서 20% 이상 떨어지면, 절차를 중단 합니다. FEV1 다시 10 분 후 측정 합니다. 만약 FEV1 nebulized ipratropium 브 로마 이드 (0.25 mg/2 mL)를 관리 하 고 유지 의료 관찰 아래 환자를 의사에 게 20% 이상 떨어진다. 1.3.10 단계로 이동 합니다.</li>
			<li>FEV1 사후 bronchodilator 값에서 20% 이상 떨어지지 않는다, 반복 단계 3.2 3.9 1 ~ 3 배 10 ~ 20 분의 총 nebulization 시간에 도달. 참고: 총 nebulization 시간 품질 (플러그 또는 점성 부품의 존재)와 래 샘플의 수량에 따라 달라 집니다. 경우 샘플 품질 또는 수량 가난한 nebulization의 10 분 후, 15 ~ 20 분의 총 nebulization 시간 도달 하 절차를 확장 합니다.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>가 래 샘플을 처리까지 냉장 하십시오.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2.가 래 처리
참고: 최적의 세포 생존 능력에 대 한 샘플링의 3 시간 안에가 래를 처리 합니다.
주의: 연구실 코트, 보호 장갑 및 고글을 착용.
<ol>
	<li>사전 준비
	<ol>
		<li>제조업체의 지침에 따라 6.5 m m 솔루션의 10 mL를 무 균 증류수와 집중된 dithiothreitol 솔루션 (mucolytic 에이전트)의 10 희석을 확인 합니다. 참고: 방지 하기 위해 주변 공기를 혼합 하는 집중된 dithiothreitol 솔루션, 솔루션에서에서 철수 유리병 멸 균 주사기와 바늘. 일단, 집중된 솔루션 유리병은 실 온에서 보관 고 5 일 이내에 사용 해야 합니다. 희석된의 솔루션은 매일 준비 하 고 있다. 주의: 눈과 피부 자극 위험 때문에 보호 장비 (의류, 장갑, 고글) 착용.</li>
		<li>Trypan 블루 솔루션 (0.4%)의 5 희석와 Dulbecco의 Phosphate-Buffered 염 분 (DPBS) 0.08% 솔루션을 확인 합니다. 실 온에서이 희석된 솔루션을 유지 하 고 2 주 이내 사용. 주의: 발암 위험 때문에 보호 장비 (의류, 장갑, 고글) 착용.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>가 래 상쾌한의 컬렉션
	<ol>
		<li>50 mL 원뿔 하단 플라스틱 튜브에 전체 선 전송 및 샘플 무게.</li>
		<li>DPBS 솔루션의 3 무게를 추가 합니다.</li>
		<li>천천히 소용돌이 샘플 30 s.</li>
		<li>원심 분리기 800 x g와 4 ° C 10 분.</li>
		<li>멸 균 거 즈의 2 단일 레이어를 통해 샘플을 필터링 하 고 상쾌한 50 mL 원뿔 바닥에 플라스틱 튜브에서를 수집.</li>
		<li>Aliquot 2 mL 플라스틱에서 상쾌한 튜브 및-80 ° c.에서 그들을 저장합니다 참고: 표면에 뜨는 샘플은가 래 액체 단계 구성 요소 시험에 유용.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>가 래 Mucolysis
	<ol>
		<li>필요한 경우, 세포 현 탁 액 5 ml의 총 볼륨에 연결할 셀 펠 릿을 DPBS를 추가 합니다.</li>
		<li>6.5 m m dithiothreitol의 1 볼륨 세포 현 탁 액을 희석. 벤치 로커를 사용 하 여 실 온에서 20 분 동안 세포 현 탁 액을 바위.<ol>
			<li>DPBS와 3 번 이상 반복 합니다.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>G와 10 분 동안 4 ° C x 550에 희석된 세포 현 탁 액 원심</li></ol></li></ol>폐기는 상쾌한.
		<li>약 1 ml DPBS의 셀 펠 릿을 resuspend.</li>
	
	
	<li>Hemocytometer 수가 래 샘플 (셀 농도 편평 세포 오염, Trypan 블루 제외 방법으로 생존)의 질적 속성의 평가
	<ol>
		<li>평가 하 고 셀 서 스 펜 션의 정확한 볼륨을 기록.</li>
		<li>0.08 %trypan 블루 솔루션의 50 µ L에 세포 현 탁 액의 50 µ L을 추가 하 고 균질.</li>
		<li>Hemocytometer (Thoma 챔버)의 coverslip 아래 샘플을 넣어 하 고 광학 현미경 (400 X) 두십시오.</li>
		<li>계산 편평 세포, 생활 비 편평 상피 세포 (질된 세포), 그리고 죽은 비 편평 상피 세포 (블루 색 셀). 참고: 너무 낮게 또는 너무 높은 세포 밀도 경우 집중 또는 세포 현 탁 액을 희석 하 고 반복 단계 2.4.1-2.4.3.</li>
		<li>정지, 편평 세포의 비율 및 비 편평 세포의 생존 능력의 비율의 세포 농도 평가 합니다. 참고: 계산가 래의 총 비 편평 세포 수/g: 세포 현 탁 액 (단계 5.4)의 농도 * 볼륨 세포 현 탁 액 (단계 4.8)의 * 비 편평 세포의 % 무게 /가 래 샘플 (2.2.1 단계)의.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>필요한 경우 세포 현 탁 액 및 잔여 세포의 저장과 준비의 얼룩진된 cytospin 슬라이드 참고: 세포 현 탁 액 포함 80% 이상이 편평 세포, 샘플 간주 됩니다 가난한 품질과 cytospin 슬라이드14를 위해 부적 한. 이 경우, 처리를 중단 하 고이 샘플 실패 고려.<ol>
		<li>500, 000 셀/mL에 세포 현 탁 액의 적어도 350 µ L를 DPBS와 세포 현 탁 액의 약 수를 희석.</li>
		<li>조립 셀 집중 장치 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>이 세포 현 탁 액의 100 µ L 셀 집중의 3 구획의 각각을 채우십시오.</li>
		<li>Cytocentrifuge에서 150 x g 및 실 온에서 2 분 동안 회전. supernatants 삭제 합니다.</li>
		<li>제조업체의 지침에 따라 셀 집중 분해.</li>
		<li>건조 공기를 허용 합니다. 참고:이 단계에서 잔여 세포 저장할 수 있습니다 적절 한 버퍼에 추가 실험을 위해 필요한 경우.</li>
		<li>얼룩 상업 얼룩과 슬라이드 키트 ( 테이블의 자료를 참조), 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>적합 한 장착 매체와 커버 슬립 슬라이드를 탑재 합니다.</li>
		<li>기름 침수와 광학 현미경 (600 X) 슬라이드를 놓습니다.</li>
		<li>적어도 500 편평 비 셀: 호 중구, 호 산 구는, 대 식 세포, 림프 톨, 그리고 상피 세포. 참고: 차동 세포 수는 일반적으로 단 하나에 의해 수행 또는 2 전용 interobserver 불일치를 제한 하는 관찰자 훈련.</li>
		<li>레코드의 절대 값 및 각 셀의 비율을 입력합니다.</li>
	</ol>
	</li>

<ol>
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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+technical+factors+influencing+the+induction+of+sputum+for+cell+analysis).">Some technical factors influencing the induction of sputum for cell analysis).</a> European Respiratory Journal. 8 (4), 559-565 (1995).</li><li>Holz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+sputum+composition+between+two+inductions+performed+on+consecutive+days.">Changes in sputum composition between two inductions performed on consecutive days.</a> Thorax. 53 (2), 83-86 (1998).</li><li>Louis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+processing+on+inflammatory+markers+in+induced+sputum.">The effect of processing on inflammatory markers in induced sputum.</a> European Respiratory Journal. 13 (3), 660-667 (1999).</li><li>Fahy, J. V., Liu, J., Wong, H., Boushey, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Biochemical+Analysis+of+Induced+Sputum+from+Asthmatic+and+from+Healthy+Subjects.">Cellular and Biochemical Analysis of Induced Sputum from Asthmatic and from Healthy Subjects.</a> American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1126-1131 (1993).</li><li>Pizzichini, E., Pizzichini, M. M., Efthimiadis, A., Hargreave, F. E., Dolovich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+inflammatory+indices+in+induced+sputum:+effects+of+selection+of+sputum+to+minimize+salivary+contamination.">Measurement of inflammatory indices in induced sputum: effects of selection of sputum to minimize salivary contamination.</a> The European Respiratory Journal. 9 (6), 1174-1180 (1996).</li></ol>

저자는 공개 없다.

유도 선 방법은 기도 구획을 공부 하는 유용한 도구입니다. 이 기술의 몇 가지 가능한 응용 프로그램을 확인 하 고 있습니다. 첫째, 그것은 면역 세포와 다양 한 호흡기 질환에 관련 된 메커니즘에 대 한 지식을 높일 수 있습니다. 예를 들어,이 기술은 환자의 큰 동료에서 기도 염증의 조사를 허용 했다 그리고 천식 환자의 절반 정도는 비정상적인 기도 감염은 염증15, 특징은 보여왔다 16 , 17, COPD 환자는 일반적으로 올려진된 선 neutrophil 전시 하는 동안18세. 이 기술은 특 발성 폐 섬유 증 환자에서 기도 염증의 더 나은 특성 및 증거 중재자가 병19에 기여할 수에 기여 했다. 둘째, 유도 된가 래의 기술 치료 반응 예측을 유용할 수 있습니다. 예를 들어가 래 호 산 구는의 비정상적인 비율의 존재 코르 티 코 스테로이드 반응성11,18의 예측 마커 되도록 표시 되었습니다. 천식 및 COPD가 래 호 산 구는의 비율을 정상화 코르 티 코 스테로이드의 복용량을 조정 표시 했다11 현재 임상 지침에 따라 치료 조정 보다 exacerbations의 수를 감소에 더 효과적 ,,2021. 셋째, 선 분석 표적으로 한 치료를 개발 하는 데 도움이 있습니다. 예를 들어가 래 COPD와 일부 천식 환자에서 호 중구의 비정상적인 수의 존재 antineutrophilic 치료11의 개발을 주도하 고 있다. 넷째, 기술 진단에 한 역할을 재생할 수 있습니다. 예를 들어가 래 eosinophilia의 존재 비 천식 감염은 기관지염11의 진단을 만들 필요가 있다.
차동 셀 개수 구하기, 외 선 유도의 기술 또한 표면에 뜨는 래 또는 래 세포를 공부 하 여 많은 추가 분석의 성능 수 있습니다. 표면에 뜨는 래와 예로 중재자8,,1922 의 분석 및 호 산 구는22에 대 한 샘플의 혈 활동의 평가 있습니다. 가 래 세포에서 RNA를 추출 수 및 예측에 관한 사용 또는 유전자 발현 분석19,23 . 가 래 셀 흐름 cytometry9,23 사람들과 immunophenotyping 및 셀 정렬 허용 하 여 분석할 수 있습니다. 또한,가 래 세포 배양된10, 수 그리고 그들의 중재자 생산 측정 된 생체 외에서24를 수 있습니다. 이 경우에 지적 가치가 있다, 중재자 콘텐츠는 무엇에서 찾을 수 있습니다 선 표면에 뜨는 다릅니다. 실제로, 표면에 뜨는 래에 중재자 기도 주민 세포에서 분 비 물에 의해 및 플라즈마 나옴가 래 세포 문화 모델24반대에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 마지막으로, immunocytochemistry와 제자리에서 교 잡도 수행할 수 있습니다가 래 세포7를 사용 하 여.
유도 선 기술에는 몇 가지 제한이 있습니다. 감 응 작용은 의료 감독 하에 수행 되어야 합니다. 또한 환자에 게 철저 한 지침 연산자에 대 한 필수적 이다. 호흡 노력 필요에 따라 다른 한계는 협력 및 환자의 건강 상태를 포함 합니다. 아이 들에 있는이 기술의 타당성에 관한 여러 연구 결과 그것이 성공적이 고 6 세25이상의 어린이 안전 보고 있다. 자식에는 데이터 &#60; 나이의 6 년25, 부족 하지만 선 유도 그 아이 들14에서 수행 하기 어려운. 기술은 현재 연구 서비스 및 전문된 센터 때문에 기술적으로 까다로운, 시간이 걸리는, 그것은 훈련된 한 직원1필요 제한 됩니다. 또 다른 한계 선 유도 및 분석의 기술 항상 성공, 읽을 수 있는 cytospin는 항상26을 취득 하지 의미 하지는 않다는 것입니다. 그러나, 성공률은 일반적으로 80% 환자4,26,27,,2829의 다른 동료에 약. 마지막으로, 환자의 래 셀 수30,31영향을 같이 했다 나이 일치에 관한 다른 동료를 비교할 때 주의 촬영 해야 합니다. 마찬가지로, 성별 및 담배 습관 같은 다른 매개 변수 또한가 래 셀 수29,32방해할 수로 일치 해야 합니다. 환자 일치 하는 것은 불가능 하다, 나이, 성별, 흡연 상태 고려해 야 하는 또 다른 방법은 이러한 특성에 대 한 통계 분석을 조정입니다.
생체 검사와 bronchoalveolar lavages, 같은 항공에서 세포를 수집을 허용 하는 다른 기술에 비해 유도 선 방법 간단한, 잘 용납, 안전, 재현성, 비용, 및 비-침략 적 되 고의 이점이 있다. 이러한 장점을 수행 할 큰 규모에서 반복적으로 시간이 지남에, 유도 선 기술을 허용 하 고 기도 샘플링에 대 한 선택의 대안. Bronchosorption 기도 중재자33평가 점 막 내벽 액체의 수집을 허용 하는 다른 기술입니다. 이 기술은 (필요한 상계) 유도 래 보다 더 많은 침략 하는 동안 타 액과 어떤 오염 든 지 고 bronchoalveolar 게33보다 중재자의 높은 농도 얻기의 이점이 있다.
중요 한 단계는 프로토콜에 주의가 필요합니다. 첫째, 주의 이러한 두 개의 매개 변수는 결과 영향을 미칠 수 있기 때문에 그러므로 표준화 된34,35를 해야 염 분 농도 유도 시간에 관한 촬영 해야 합니다. 둘째, DTT와 mucolysis는 처리의 중요 한 단계 이다. PBS, 비교 DTT가 래 셀7, cytopsin 슬라이드 품질을 향상 하 고 재현할 수 셀 카운트2필수적입니다 더 나은 분산 표시 했다. 그러나, mucolytic 에이전트는 생 화 확 적인 부품의 측정을 방해할 수 있습니다.급상승 실험 다음 수행 되어야 한다 새로운 생 화 확 적인 화합물36를 측정 하는 경우. 마지막으로, 프로시저의 또 다른 중요 한 단계는 안정적이 고 해석할 결과 숙련 된 기술자에 의해 수행 해야 단계를 계산 하는 셀입니다.
전체 선 대신가 래 플러그 (점성 또는 밀도 부품)를 사용 하 여 다른 방법 또한 문학7에 설명 되어 있습니다. 두 방식 모두 장단점이 있다. 전체 선 기술은 더 빠른7, 처리 수 수 하지만 자주 타 액 샘플을 dilutes cytospins2,7의 품질을 줄일 수 있으며 오염 된. 플러그 선택 기법으로 타 액 오염 감소, 즉 그 샘플 들은 액체 단계 중재자의 복용량에 대 한 고 cytospin 슬라이드7에 대 한 더 나은 품질의. 그러나 처리는 더 이상7 하 고 선택한 플러그 전체 샘플37의 대표 되지 않을 수 있습니다. 그것은 또한 모든 샘플 제한 될 수 있습니다 플러그 포함 지적 가치입니다. 두 방법 모두는 검증 되 고 재현, 그리고 현재는 이러한 두 방법에서 얻은 차동 셀 카운트는 다른14,38증거.
미래에, 유도 선 조사, 진단, 및 염증 성 호흡기 질환의 모든 종류의 관리에 대 한 바이오 마커를 제공 하기 위해 임상 도구로 사용 될 수 있습니다.

여러 가지 방법을 조사 기도 염증에 사용 됩니다: 직접 측정 (예: 기관지 생 검 또는 bronchoalveolar lavages)와 간접 방법 (증상 평가, 같은 혈액 샘플 분석 및 폐 기능 검사)1. 직접 기술을 안정적으로 평가 하는 기도 염증의 이점이 있다 하지만 그들은 침략과 가능 하지에 대규모 환자 불편 때문에 고 위험 발생1. 간접적인 방법에 관해서는 그들은 제대로 기도 염증1의 직접 평가와 연관.
가 래 컬렉션 기도에서 샘플 셀에 다른 방법 이며, 기도 염증의 직접적인 평가 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 자발적으로 래를 생산 품질의 샘플을 이어질 수 있습니다 그리고 모든 환자2불가능. 가 래 생산2유도 하 초음파 nebulized 마 식 염 수를 사용 하 여이 문제를 극복 되었습니다 했다. 이 메서드와 Pneumocystis carinii 폐 렴3 의 진단을 위한 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV) 감염 환자에서 처음 사용 되었다 건강 한 과목과 19924천식에 대 한 적응 했다. 가 래 유도 또한 isotonic 식 염 수5를 사용 하 여 더 심한 환자에서 가능 합니다. 비록 일반적으로 잘 용납 하 고, 염 분의 흡입 hyperresponsive 항공5환자의 bronchospasm을 발생할 수 있습니다. 따라서, 절차1전에 짧은 행동 beta 주 작동 근을 관리 하는 것이 좋습니다. 또한, 우리는 이전 것이 위험6감소 더 salbutamol 초음파 분무기에 소금물을 추가 보여주었다. 선 유도의 장점 그것은 비 침략 적2 5촬영 때 적절 한 안전 예방 조치 이다.
가 래 샘플 처리에 대 한 두 가지 방법에서에서 현재 사용 문학: 전체 선 기술과 플러그 선택7. 우리의 실험실에서 전체 선 기술 수행 됩니다. 선 처리의 기본 목적은 염증 기도 루멘에의 종류 공부 차동 세포 수를 얻을 것입니다. 그러나, 많은 추가 분석 추가 선 표면에 뜨는8 에서 중재자를 공부 하거나가 래 셀에 자세한 조사를 수행 하 여 염증 성 프로세스와 면역 메커니즘을 조사 수 있습니다 (예: , flow cytometry9, 셀 문화10, 유전체학10, proteomics10, immunocytochemistry7, 제자리 교 잡7, 등)
선 유도 및 분석의 기법 때문에 기술적으로 까다로운, 시간이 걸리는, 훈련된 직원1필요 서비스 및 임상 연습에서 전문화 된 센터를 현재 제한 됩니다. 기도 염증과 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 만성 기침, 또는 특 발성 폐 섬유 증11같은 다양 한 호흡기 질환에 대 한이 방법으로 조사 될 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1223">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Spirometer - Spirobank</td>
			<td style="width:265px;">MIR France</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:305px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salbutamol MDI - Ventolin</td>
			<td>GLAXOSMITHKLINE</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 0135-913</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Nebulizer UltraNeb</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td>UltraNeb U3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Devilbiss UltraNeb Disposable Cups &#38; Lids</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td>100HD-647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeVilbiss Bacterial Filter For UltraNeb Nebulisers</td>
			<td style="width:265px;">DeVilbiss Healthcare USA</td>
			<td style="width:140px;">1001005879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">One-way Valves</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">One-way Valves</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Aerosol T-connector&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Hudson RCI USA</td>
			<td style="width:140px;">41077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Ventilation circuit monobranch corrugated</td>
			<td style="width:265px;">Int&#39;Air Medical France</td>
			<td style="width:140px;">TA30A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl 5 %&#160;</td>
			<td style="width:265px;">/</td>
			<td style="width:140px;">/</td>
			<td style="width:305px;">Produced by our hospital pharmacy</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;">Mini-Plasco NaCl 0.9%</td>
			<td style="width:265px;">B.Braun Medical&#160; Diegem Belgium</td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Salbutamol sulfate 5 mg/mL - Ventolin</td>
			<td>GLAXOSMITHKLINE</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 0094-987</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ipratropium bromide 0.25 mg/2 mL - Atrovent</td>
			<td style="width:265px;">Boehringer Ingelheim Germany</td>
			<td style="width:140px;">CNK: 1543-305</td>
			<td>See drug available in the country</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td style="width:265px;">LONZA Belgium</td>
			<td style="width:140px;">BE17512F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Sputolysin reagent</td>
			<td style="width:265px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:140px;">56000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Trypan blue 0.4% solution 100 mL</td>
			<td style="width:265px;">LONZA Bio Whittaker Belgium</td>
			<td style="width:140px;">17-942E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer - Thoma chamber</td>
			<td style="width:265px;">Labor Optik Lancing UK</td>
			<td style="width:140px;">1500000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Hemacolor Stainig set</td>
			<td style="width:265px;">Merck Belgium</td>
			<td style="width:140px;">1116610001</td>
			<td style="width:305px;">Alternative product&#160; : Diff Quik Staining Set 
			&#160;Medion Diagnostic&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mounting medium - Entellan</td>
			<td style="width:265px;">Merck Belgium</td>
			<td style="width:140px;">107960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:513px;">Statspin Cytofuge 12&#160;</td>
			<td style="width:265px;">Beckman Coulter Belgium</td>
			<td>X00-003066-001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methodology for sputum induction and laboratory processing

선 유도 및 처리의 기술 수집 및 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 같은 다양 한 호흡기 질환에 흥미 롭 기도에서 세포의 분석을 수 있도록 인식된 비-침략 적 방법입니다. 만성 기침, 또는 특 발성 폐 섬유 증입니다. 이 기술은 잘 용납 하 고, 안전 하 고 비-침략 적, 하지만 현재 연구 서비스 및 전문된 센터 임상 연습에서 기술적으로 까다로운, 소모, 그리고 숙련 된 직원을 필요로 하기 때문에. 선 유도 및 분석의 성공률은 약 80%.
여기, 우리는 래 샘플의 유도 및 실험실 처리를 설명합니다. 가 래는 salbutamol와 마 또는 isotonic 식 염 수의 흡입에 의해 유발 됩니다. 처리를 위해 전체 선 기술을 사용 하 고. Dithiothreitol (DTT)는가 래 샘플의 mucolysis를 허용 하는 데 사용 됩니다. 가 래 처리의 기본 목적은 기도 루멘에 셀 유형을 공부 하 차동 세포 수를 얻을 것입니다. 추가 분석은 또한 표면에 뜨는 래과가 래 세포, 염증 성 프로세스와 면역 메커니즘에 대 한 조사를 더 수 수행할 수 있습니다. 예로 표면에 뜨는 래에 중재자를 공부 하 고 cytometry, genomics, proteomics 등가 래 세포에 분석의 큰 스펙트럼을 수행 있습니다.
마지막으로, 건강 한 컨트롤, 천식, COPD 환자에 선 분석의 대표적인 결과 표시 됩니다.

Hemocytometer 일반적인 이미지는 hemocytometer를 사용 하 여 현미경으로 시각화는 그림 1 에 표시 됩니다. 편평 세포는 쉽게 식별 합니다, 그들은 비 편평 세포 보다 훨씬 더 큰. 이 편평 상피 세포는 상피 세포는 입에서 나오는. 두 종류의 세포는 Trypan 블루 때 죽은 물 들 다. 주의 효 모, 박테리아 및 스크랩 방지로 이동 해야 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig1.jpg"> 
그림 1 : 죽은 비 편평 상피 세포, 그리고 (C)는 편평 상피 세포 (A) 생계 비 편평 상피 세포, (B)를 보여주는 Hemocytometer 그림. 눈금 막대 = 50 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
Cytospin 슬라이드: 그림 2 는 선 처리 후 얻은 cytospin 슬라이드의 대표 이미지. 다른 세포 유형 (호 중구, 호 산 구는, 대 식 세포, 림프 톨, 그리고 상피 세포) 그들의 형태학 및 채색에 의해 분화 될 수 있다. 경우에 따라 편평 상피 세포에 의해 오염 중요 한 있을 수 있습니다 그리고, 편평 세포의 비율 80% 보다 큰 경우, 샘플 실패 (그림 3) 것으로 간주 됩니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig2.jpg"> 
그림 2 : Cytospin 슬라이드 그림 표시 (A) neutrophil, (B)는 대 식 세포, (C)는 eosinophil (D)는 림프 구 및 (E)는 상피 세포. 눈금 막대 = 20 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig3.jpg"> 
그림 3 : 와 품질 cytospin 슬라이드의 예 &#62; 편평 세포의 80%. 눈금 막대 = 20 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
성공률 우리 부서에서 (성공적인 유도 및 읽을 수 있는 cytospin 결합) 절차의 1,129 환자 (건강 한 과목 이나 천식, COPD 환자)의 샘플에 따라, 82% (924/1,129). 환자의 유형에 따라 하위 분석에서 성공률 이며 건강 한 과목에서 75% (57/76), 82% (827/1,004) 천식, COPD 환자의 82% (40/49).
건강 한 과목에 결과 우리 부서, 중앙값 (interquartile 범위)에서 289 건강 한 과목의 일련의 회 고 분석에 선 무게 3.72 g (2.46 g-5.54 g의 interquartile 범위) 이었고,가 래의 메디아 총 비 편평 세포 수/g x 106 (0.59 0.37 x 10의 interquartile 범위6 -1.29 x 106).
그 건강 한 주제에서 편평 세포의 비율이 19% (10%-34%)에 낮은 이며 생존은 66% (54-78%)에서 높은. 다른 세포 유형의 비율에 대 한 결과 그림 4A에서 요약 된다. 우리는 대 식 세포 (49% [31-68%])의 백분율은 동안 세포 (2% [1-3%])의 비율 (34% [14%-60%]), 호 중구의 비율 보다 높은, 호 산 구는 (0% 0%-0%)과 상피 세포 (4% [2-11%])는 낮은 볼 수 있습니다. 이러한 결과 비슷한 데이터 절대 값 (그림 4B)에서 표시 됩니다 때.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig4.jpg"> 
그림 4 : 건강 한 과목에서 차동 세포 수의 대표적인 결과 절대 값 (A) 백분율 또는 (B)로 표현 합니다. 결과 중간 (interquartile 범위)로 표시 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그것은 또한 환자의 나이 고려 하는 것이 중요입니다. 실제로, 강한 상관 관계는가 래 샘플 (그림 5)에 환자의 나이 및 호 중구의 비율 사이 존재. 마찬가지로, 10 년 나이 그룹 (그림 6)에 따라 환자를 분류 하는 경우 연령 증가 함께 호 중구 백분율에 상당한 증가 관찰 합니다. 따라서, 다른 동료에서 결과 비교할 때이 변수를 고려 한다 그리고 과목의 일치에 주의 이동 해야 합니다.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig5.jpg"> 
그림 5: 나이 및가 래 호 중구 백분율 사이 상관 관계 상관 관계 계산 Spearman 테스트와 함께. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig6.jpg"> 
그림 6: 나이 카테고리에 따라 호 중구 백분율의 진화. ANOVA의 p-값이 &#60; 0.0001 호 중구 백분율 나이 클래스 간의 비교에 대 한. 여러 비교 던의 여러 비교 테스트 했다. P-값은 다음과 같이 표시 됩니다: * p &#60; 0.05, * * p &#60; 0.01, 그리고 * * * p &#60; 0.001. 결과 중간 (interquartile 범위)로 표시 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
호흡기 질환으로 고통 받아 환자에 있는 결과 유도 된가 래의 기술 주로 천식 환자에서 염증 성 셀 프로 파일을 평가 하기 위해 사용 됩니다.이 기술은 또한 COPD, 다른 염증 성 호흡기 질환으로 고통 받아 환자에 적용할 수 있습니다. 비교할 때 건강 한 과목, 천식, COPD 환자 (나이, 성별, 그리고 담배 습관에 대 한 일치 되는 3 그룹), 염증 성 셀 프로 파일은이 동료 (그림 7) 사이 아주 다른 관찰 합니다. 실제로, 천식 환자는 보통 특징 제기 래 호 산 구는가 래 호 중구의 비율은 COPD 환자의 건강 한 컨트롤에 비해 일반적으로 더 높은 질병 심각도에 연결 되는.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig7.jpg"> 
그림 7 : 건강 한 과목의가 래 염증 셀 프로 파일 (n = 45), 천식 환자 (n = 108), 및 COPD 환자 (n = 54). 3 그룹은 성별, 나이, 및 담배 습관에 대 한 일치 했다. ANOVA의 p-값 &#60; 0.05, &#60; 0.0001, 및 &#60; 0.0001 호 중구, 호 산 구는, 및 세포 그룹 간의 비교에 대 한 각각. 여러 비교 던의 여러 비교 테스트 했다. P-값은 다음과 같이 표시 됩니다: * p &#60; 0.05와 * * * p &#60; 0.001. 결과 중간 (interquartile 범위)로 표시 됩니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

선 유도 및 실험실 방법론

여기는 선 유도의 기술에 설명합니다. 이 프로토콜도 선 차동 세포 수를 수행 하 고 표면에 뜨는 래를 수집 처리 및 추가 분석에 대 한 셀을 설명 합니다.

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

27.3K 조회수.  University of Liege. 여기는 선 유도의 기술에 설명합니다. 이 프로토콜도 선 차동 세포 수를 수행 하 고 표면에 뜨는 래를 수집 처리 및 추가 분석에 대 한 셀을 설명 합니다.

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Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis. Since the clinical presentation of this disease is so variable and non-specific, the associated risks of these biopsies are too great for the diagnostic yield. Other sites that have a lower biopsy risk, such as skin or gingival, are also relatively invasive and expensive. In addition, these biopsies may not always have sufficient amyloid deposits to establish a diagnosis. Fat pad aspiration has demonstrated good clinical correlation with low cost and minimal morbidity. However, there are no standardized protocols for performing this procedure or processing the aspirated specimen, which leads to variable and nonreproducible results. The most frequently utilized modality for detecting amyloid in tissue is an apple-green birefringence on Congo red stained sections using a polarizing microscope. This technique requires cell block preparation of aspirated material. Unfortunately, patients presenting in early stage of amyloidosis have minimal amounts of amyloid which greatly reduces the sensitivity of Congo red stained cell block sections of fat pad aspirates. Therefore, ultrastructural evaluation of fat pad aspirates by electron microscopy should be utilized, given its increased sensitivity for amyloid detection. This article demonstrates a simple and reproducible procedure for performing anterior fat pad aspiration for the detection of amyloid utilizing both Congo red staining of cell block sections and electron microscopy for ultrastructural identification.

Fat pad aspiration is a preferred, minimally invasive, and low cost approach as compared to other methods to detect amyloid for diagnosis of systemic amyloidosis. This video article demonstrates a procedural outline for performing fat pad aspiration with appropriate processing of the specimen for the optimal diagnostic outcome.

아밀로이드에 대한 앞쪽에 지방 패드의 FNA 공연 및 처리

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

연구

의학

How to Measure Cortical Folding from MR Images: a Step-by-Step Tutorial to Compute Local Gyrification Index

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will be identifiable at any age. As recently reviewed by Mangin and colleagues2, several methods exist to quantify different characteristics of gyrification. For instance, sulcal morphometry can be used to measure shape descriptors such as the depth, length or indices of inter-hemispheric asymmetry3. These geometrical properties have the advantage of being easy to interpret. However, sulcal morphometry tightly relies on the accurate identification of a given set of sulci and hence provides a fragmented description of gyrification. A more fine-grained quantification of gyrification can be achieved with curvature-based measurements, where smoothed absolute mean curvature is typically computed at thousands of points over the cortical surface4. The curvature is however not straightforward to comprehend, as it remains unclear if there is any direct relationship between the curvedness and a biologically meaningful correlate such as cortical volume or surface. To address the diverse issues raised by the measurement of cortical folding, we previously developed an algorithm to quantify local gyrification with an exquisite spatial resolution and of simple interpretation. Our method is inspired of the Gyrification Index5, a method originally used in comparative neuroanatomy to evaluate the cortical folding differences across species. In our implementation, which we name local Gyrification Index (lGI1), we measure the amount of cortex buried within the sulcal folds as compared with the amount of visible cortex in circular regions of interest. Given that the cortex grows primarily through radial expansion6, our method was specifically designed to identify early defects of cortical development.
In this article, we detail the computation of local Gyrification Index, which is now freely distributed as a part of the FreeSurfer Software (<a href="http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/">http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/</a>, Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital). FreeSurfer provides a set of automated reconstruction tools of the brain's cortical surface from structural MRI data. The cortical surface extracted in the native space of the images with sub-millimeter accuracy is then further used for the creation of an outer surface, which will serve as a basis for the lGI calculation. A circular region of interest is then delineated on the outer surface, and its corresponding region of interest on the cortical surface is identified using a matching algorithm as described in our validation study1. This process is repeatedly iterated with largely overlapping regions of interest, resulting in cortical maps of gyrification for subsequent statistical comparisons (Fig. 1). Of note, another measurement of local gyrification with a similar inspiration was proposed by Toro and colleagues7, where the folding index at each point is computed as the ratio of the cortical area contained in a sphere divided by the area of a disc with the same radius. The two implementations differ in that the one by Toro et al. is based on Euclidian distances and thus considers discontinuous patches of cortical area, whereas ours uses a strict geodesic algorithm and include only the continuous patch of cortical area opening at the brain surface in a circular region of interest.

Measuring gyrification (cortical folding) at any age represents a window into early brain development. Hence, we previously developed an algorithm to measure local gyrification at thousands of points over the hemisphere1. In this paper, we detail the computation of this local gyrification index.

지역 Gyrification 인덱스를 계산하기위한 단계별 자습서 : MR 이미지에서 두피 접기를 측정하는 방법

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction of cells in the tumor with stem cell properties, termed brain tumor initiating cells (BTICs), possess an ability to differentiate along multiple lineages, self-renew, and initiate tumors in vivo. We applied culture conditions originally used for normal neural stem cells (NSCs) to a variety of human brain tumors and found that this culture method specifically selects for stem-like populations. Serum-free medium (NSC) allows for the maintenance of an undifferentiated stem cell state, and the addition of bFGF and EGF allows for the proliferation of multi-potent, self-renewing, and expandable tumorspheres.
To further characterize each tumor's BTIC population, we evaluate cell surface markers by flow cytometry. We may also sort populations of interest for more specific characterization. Self-renewal assays are performed on single BTICs sorted into 96 well plates; the formation of tumorspheres following incubation at 37 &deg;C indicates the presence of a stem or progenitor cell. Multiple cell numbers of a particular population can also be sorted in different wells for limiting dilution analysis, to analyze self-renewal capacity. We can also study differential gene expression within a particular cell population by using single cell RT-PCR.
The following protocols describe our procedures for the dissociation and culturing of primary human samples to enrich for BTIC populations, as well as the dissociation of tumorspheres. Also included are protocols for staining for flow cytometry analysis or sorting, self-renewal assays, and single cell RT-PCR.

The identification of brain tumor initiating cells (BTICs), the rare cells within a heterogeneous tumor possessing stem cell properties, provides new insights into human brain tumor pathogenesis. We have refined specific culture conditions to enrich for BTICs, and we routinely use flow cytometry to further enrich these populations. Self-renewal assays and transcript analysis by single cell RT-PCR can subsequently be performed on these isolated cells.

정렬 줄기 세포 Assays 및 흐름에 대한 기본 뇌 종양 조직의 처리

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

세포 배양을위한 인간 감소 Mammoplasty과 유방 절제술의 조직의 처리

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy and/or cytotoxic chemotherapy. To induce bladder cancer, C57BL/6 mice (MUC1.Tg and wild type) were treated orally with the carcinogen N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine (OH-BBN) at 3.0 mg/day, 5 days/week for 12 weeks. To assess the effects of OH-BBN on serum cytokine profile during tumor development, whole blood was collected via submandibular bleeds prior to treatment and every four weeks. In addition, a MUC1-targeted peptide vaccine and placebo were administered to groups of mice weekly for eight weeks. Multiplex fluorometric microbead immunoanalyses of serum cytokines during tumor development and following vaccination were performed. At termination, interferon gamma (IFN-&#947;)/interleukin-4 (IL-4) ELISpot analysis for MUC1 specific T-cell immune response and histopathological evaluations of tumor type and grade were performed. The results showed that: (1) the incidence of bladder cancer in both MUC1.Tg and wild type mice was 67%; (2) transitional cell carcinomas (TCC) developed at a 2:1 ratio compared to squamous cell carcinomas (SCC); (3) inflammatory cytokines increased with time during tumor development; and (4) administration of the peptide vaccine induces a Th1-polarized serum cytokine profile and a MUC1 specific T-cell response. All tumors in MUC1.Tg mice were positive for MUC1 expression, and half of all tumors in MUC1.Tg and wild type mice were invasive. In conclusion, using a team approach through the coordination of the efforts of pharmacologists, immunologists, pathologists and molecular biologists, we have developed an immune intact transgenic mouse model of bladder cancer that expresses hMUC1.

An N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine-induced bladder cancer model was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic mice for the purpose of testing MUC1-directed immunotherapy. After administering a MUC1-targeted peptide vaccine, a cytotoxic T lymphocyte response to MUC1 was confirmed by measuring serum cytokine levels and T-cell specific activity.

면역 본래대로 사람 MUC1 유전자 변형 마우스의 침략 과도 셀 방광 암의 유도 : 면역 요법 개발을위한 모델

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the human respiratory tract. NA is a non-invasive technique which absorbs fluid from the inferior turbinate, and causes minimal discomfort. NA has yielded reproducible results with the ability to frequently repeat sampling of the upper airway. 
By comparison, alternative methods of sampling the respiratory mucosa, such as nasopharyngeal aspiration (NPA) and conventional swabbing, are more invasive and may result in greater data variability. Other methods have limitations, for instance, biopsies and bronchial procedures are invasive, sputum contains many dead and dying cells and requires liquefaction, exhaled breath condensate (EBC) contains water and saliva, and lavage samples are dilute and variable.
BA can be performed through the working channel of a bronchoscope in clinic. Sampling is well tolerated and can be conducted at multiple sites in the airway. BA results in MLF samples being less dilute than bronchoalveolar lavage (BAL) samples.
This article demonstrates the techniques of NA and BA, as well as the laboratory processing of the resulting samples, which can be tailored to the desired downstream biomarker being measured. These absorption techniques are useful alternatives to the conventional sampling techniques used in clinical respiratory research.

This manuscript describes the use of nasal and bronchial absorption techniques, specifically using synthetic absorptive matrices (SAM) to sample the mucosal lining fluid (MLF) of the upper and lower airway. These methods provide better standardization and tolerability than existing respiratory sampling techniques.

비 강 및 기관지 체액의 흡수: 인간의 호흡기 점 막 및 실험실 처리 샘플의 정밀 샘플링

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Retinal Organoid Induction System for Derivation of 3D Retinal Tissues from Human Pluripotent Stem Cells

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to differentiate into all types of retinal cells, even mini-retinal tissues, hold huge promises for patients with these diseases and many opportunities in disease modeling and drug screening. However, the induction process from hPSCs to retinal cells is complicated and time-consuming. Here, we describe an optimized retinal induction protocol to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency, suitable for various human pluripotent stem cells. This protocol is performed without the addition of retinoic acid, which benefits the enrichment of cone photoreceptors. The advantage of this protocol is the quantification of EB size and plating density to significantly enhance the efficiency and repeatability of retinal induction. With this method, all major retinal cells sequentially appear and recapitulate the main steps of retinal development. It will facilitate downstream applications, such as disease modeling and cell therapy.

Here we describe an optimized retinal organoid induction system, which is suitable for various human pluripotent stem cell lines to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency.

인간 다능성 줄기 세포에서 3D 망막 조직의 파생을 위한 망막 오르간로이드 유도 시스템

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to ...