이 작품은 NIH 연구에 의해 지원 (A1R03AI120027 (RN)와 1R21AI20012 (RN)), 제도적 연구 그랜트 (RN), 시작 (RN) 부여, 그리고 MD 앤더슨 CIC 시드 부여 (RN).

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 텍사스 대학 MD 앤더슨 암 센터의에 의해 승인 되었습니다.
1입니다. 백신에 대 한 펩 티 드의 준비
<ol><li>인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 적절 한 농도와 30에 대 한 소용돌이와 동결 건조 된 펩 티 드를 분해 s. 참고: hgp10025-33, 최종 농도 1 mg/mL 및 OVA257-264, 최종 농도 0.5 mg/mL입니다. 주입 전에 펩타이드 reconstitute 재구성 후 저장 하지 마십시오.</li>
</ol>2입니다. 유전자 변형 마우스에서 Splenocytes의 격리
참고: 셀 별개로 비장의 살 균 방식으로 수행 되어야 합니다.
<ol><li>
승인 된 CO2 질 메서드를 사용 하 여 OT-1 유전자 변형 마우스를 안락사 하 고 비장을 제거 합니다. 참고: 적절 한 유전자 변형 마우스는 선택의 펩 티 드에 대 한 특정이 단계에서 이용 된다.<ol>
<li>그것의 오른쪽에 마우스를 놓는다. 스프레이 70% 에탄올 (EtOH) 마우스의 왼쪽. 집게를 사용 하 여 피부를 끌어와 수술가 위;를 사용 하 여 피부를 잘라 비장은 복 강 내 표시 되지 것입니다. 부드럽게 잘라 오픈 액세스 비장 하 복 막 구멍. 집게를 사용 하 여 비장을 제거 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
(1% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 PBS) 2 mL 매체 A와 페 트리 접시에 70 µ m 필터에 그것을 배치 하는 플런저의 끝으로 비장을 스매싱 하 여 비장을 세분화.
	<ol>
<li>페 트리 접시를 50 mL 원뿔 튜브에 장소는 splenocytes를 수집 합니다. 매체 수집 하는 모든 셀을 두 번 A의 5 mL를 페 트리 접시를 씻어. 매체는 최대 25 mL를 추가 하 고 셀 475 x g에 실 온에서 5 분 동안 원심.</li>
	</ol>
</li>
	<li>셀을 발음 하 고 1 ml에서 / 비장 적혈구 (RBC) 세포의 용 해 버퍼를 resuspend. 품 어 5 분에 대 한 실 온에서 매체 A의 추가 10 mL와 475 x g.에 상 온에서 원심 분리기 Resuspend 매체 A의 10 mL에 펠 릿 및 셀 서 스 펜 션 깨끗 한 50 mL 원뿔형으로 70 µ m 필터를 통해 필터링 하 여 파편을 제거.</li>
	<li>
Trypan 블루와 hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 합니다. 10의 최종 농도에 PBS에 셀 resuspend6 -6 셀/100ml. OVA257-에 대 한 특정264 106 셀/mL에서 resuspend, 및 hgp100에 대 한25-33 특정 1006 셀/mL에서 resuspend.
	<ol>
<li>스핀 475 x g.에서 5 분 동안 실내 온도에 남아 있는 세포는 상쾌한 발음 하 고 세포를 씻어 15 mL 차가운 PBS에 resuspend. 한 번 더 세척 단계를 반복 합니다. 스핀 475 x g.에서 5 분 동안 실내 온도에 세포는 상쾌한 발음 하 고 최종 볼륨 단계 2.4에서에서 결정에 따라 차가운 PBS에 resuspend.</li>
		<li>단일 세포 현 탁 액 1.5 mL microcentrifuge 튜브에 전송 하 고 받는 사람 C57/BL6 마우스에 주사까지 얼음에 계속.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3입니다. 유전자 변형 쥐에서 Splenocytes의 주입
<ol><li>등 쪽으로 restrainer에서 받는 사람 C57/BL6 마우스를 놓습니다. 스프레이 분사 꼬리 기본 영역 70% 이소프로필 알콜. 경사 면 27 G 바늘을 사용 하 여 꼬리 정 맥에 정 맥의 단일 세포 현 탁 액 (제 2) 100 µ L를 관리할 수 있습니다.</li>
</ol>4. Covax 관리
참고: 셀 오후에 주입 하는 경우 covax 해야 관리할 수 세포 주입의 18 h 이내 다음 아침.
<ol><li>1-3 %isoflurane 분명 마 취 상자에 마우스를 놓습니다. 후 마우스는 완전히 마 취, 마 취 실에서 매니폴드에 연결 된 코 콘 쥐 전송. 마우스를 등 쪽 사이드와 절제 된 유지. 참고: Anesthetization 철수 반응 elicited 하지 확인 하려면 간단한 발가락 핀치에 의해 확인 된다. 연방 법률 허가 수 의사 순서 isoflurane 사용을 제한합니다.</li>
	<li>스프레이 분사 꼬리 기본 영역 70% 이소프로필 알콜. (단면도 1)에서 펩 티 드 솔루션의 100 µ L를 피하 주사 꼬리 기본 지역 위로 향하도록 바늘 경사 쪽으로 4-5 밀리미터를 관통 하는 주사기 27 G 바늘을 사용 하 여. 참고: 쥐 꼬리10의 기지에서 피하 주사와 함께 하나의 측면에서 예방 접종.</li>
	<li>백신 주사 사이트를 100 µ L 안티-CD40 항 체 (주식 0.5 mg/mL) 측면을 주입.</li>
	<li>예방 접종 사이트에 imiquimod 크림 50 mg/마우스를 신중 하 게 적용 됩니다. 크림은 더 이상 볼 수 하 고 완전히 흡수 될 때까지 imiquimod 크림 표면에 문질러.</li>
	<li>Intraperitoneally 100000 IU/mL rhIL-2 단백질의 100 µ L를 주사 (i.p.) 더 낮은 복 부 지역에. 그들은 완전히 마 취에서 회복 후 5 분 동안 쥐를 관찰 합니다. 참고: 실험은 일시 중지이 시점에서 3 일 동안.</li>
</ol>5. 격리의 대상 Splenocytes CFSE와 라벨에 대 한
참고: 셀 별개로 비장의 살 균 방식으로 수행 되어야 합니다.
<ol><li>승인 된 CO2 질 방법 C57BL/6 마우스 안락사 2.1.1 단계에서 spleen(s)를 제거 합니다. 비장을 세분화 하 고 세척 단계 2.2.1-2.2.3에서와 같이 splenocytes. 붉은 혈액 세포 단계 2.3-2.3.2에서 lyse</li>
	<li>hemocytometer를 사용 하 여 계산에 대 한 셀을 제거 하 고6 셀/10ml CFSE 라벨 솔루션 (7 단계에서 설명)에서 세포의 최종 농도 대 한 계산. G. Aspirate 상쾌한 x 475에 5 분 동안 실내 온도에 남아 있는 세포를 스핀.</li>
</ol>6. 펩 티 드 대상 Splenocytes의 펄스
참고: 펩 티 드 펄스 살 균 방식으로 수행 합니다.
<ol><li>완전 한 미디어에 106 셀/mL에서 셀 resuspend (RPMI 1640 미디어 10 %FBS, 1 %L-글루타민 (L-Gln), 1% 페니실린/스 (펜/Strep)). 2 튜브 (15 mL conicals)로 셀을 나눕니다. 각 튜브 펄스 또는 unpulsed 레이블.</li>
	<li>
펩 티 드 라는 튜브에 펄스를 추가 합니다. OVA257-264 펄스에 대 한 1 µ g/mL을 추가 하 고 hgp10025-33 펄스, 2 µ g/mL를 추가 합니다. 참고: unpulsed 셀 펩 티 드의 추가 없이 그냥 펄스 셀 같은 외피를 받 다.<ol>
<li>셀 + 1 시간 동안 37 ° C에서 펩 티 드를 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>완전 한 미디어의 10 mL을 추가 (RPMI 1640 미디어 10 %FBS, 1 %L-글루타민 (L-Gln), 1% 페니실린/스 (펜/Strep)) 씻어 각 관 모두 펄스를 대상 셀 unpulsed. G. Aspirate 상쾌한 x 475에 5 분 동안 실내 온도에 남아 있는 세포를 스핀.</li>
</ol>7. 준비 CFSE의 대상 Splenocytes 라벨에 대 한
<ol><li>
세척 단계 6.3;에서 셀 동안 CFSE 라벨 솔루션을 준비 펄스 셀으로 CFSEloCFSE안녕 하 고는 unpulsed로 표시 됩니다. 106 셀 CFSE 라벨 솔루션의 1 mL를 준비 합니다. 참고: CFSE 빛에 민감한 이며 항상 빛 으로부터 보호 되어야 한다.<ol>
<li>CFSE안녕 준비-미디어 RPMI 1640 2%에서에서 5 µ M/mL의 최종 농도 대 한 1 uL/mL CFSE (5 m m 재고 솔루션)를 추가 하 여 라벨 미디어 FBS.</li>
		<li>CFSElo 준비-1 uL/mL CFSE (0.5 m m 재고 솔루션) 2%와 0.5 µ M/mL RPMI 미디어 1640의 최종 농도 대 한 추가 하 여 라벨 미디어 FBS.</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. 라벨링 CFSE와 대상 Splenocytes
참고: CFSE 라벨 살 균 방식으로 수행 해야 합니다.
<ol><li>106 셀/mL CFSE 라벨 미디어에서 (에서 단계 6.3) 펄스와 unpulsed 대상 셀 resuspend Resuspend 펄스 셀 준비 CFSE안녕-미디어와 함께 unpulsed 셀 라벨 준비 CFSElo-라벨 미디어.</li>
	<li>세포와 부드러운 반전 또는 소용돌이 CFSE 라벨 미디어 믹스. Vortexing에 의해 혼합 하지 마십시오. 셀을 품 어 하 고 15 분 동안 37 ° C에서 미디어 CFSE 라벨 리믹스 셀 마다 5 분.</li>
	<li>475 x g에 5 분 동안 실 온에서 각 셀 서 스 펜 션 및 스핀 세포를 완전 한 미디어의 10 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>상쾌한 발음 하 고 10 mL 차가운 PBS에 셀 resuspend. 475 x g에 5 분 동안 4 ° C에서 세포를 스핀.</li>
	<li>8.4 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>계산 셀과 믹스 펩 티 드-펄스, CFSE안녕-표시 unpulsed, CFSElo-셀 받는 쥐로 주입에 대 한 1:1 비율로 표시. 1 x 106 초기 흐름 cytometry 평가 (11 단원)를 사용 하 여 셀을 혼합 한 약 수를 유지 합니다. 참고: 주입에 대 한 최종 볼륨 마우스 당 100 µ L입니다. 마지막 셀 수 10e6 셀입니다. 주사기와 바늘에 볼륨의 손실 고려 되어야 하 고 500 µ L에서 추정 한다.</li>
</ol>9입니다. 대상 세포의 주입
참고: 계속 하기 전에 가능한 만큼 많이 주입 하는 동안 빛에서 보호 CFSE 표시 셀.
<ol><li>등 쪽으로 restrainer에서 받는 사람 C57BL/6 마우스를 놓습니다. 스프레이 분사 꼬리 기본 영역 70% 이소프로필 알콜. 관리 100 µ L 단일 세포 현 탁 액의 정 맥 꼬리 정 맥에 베벨 면이 위로 향하도록 합니다.</li>
</ol>10입니다. 다시 격리 대상 셀의
참고:이 단계의 타이밍은 중요 하 고 CTL 세포 독성과 자극에 대 한 항 원의 강도 의존. 죽이 OVA257-264 펄스 대상의 평가, 대 한 세포를 주입 후 수확된 4-6 h을 있이 필요가 있다. CFSE 표시 된 셀은 어둠 속에서 빛, 민감한 프로세스 spleens 이후.
<ol><li>승인 된 CO2 질 방법 받는 사람 C57BL/6 마우스 안락사</li>
	<li>2.1.1 단계에서 spleen(s)를 제거 합니다. 비장을 세분화 하 고 세척 단계 2.2.1-2.2.3에서와 같이 splenocytes. 붉은 혈액 세포 단계 2.3-2.3.2에서 lyse</li>
	<li>Cytometry에 의해 평가 대 한 정렬 (FACs) 버퍼 (1 %BSA + PBS) 1 mL 형광 활성화 된 세포에 세포를 resuspend.</li>
</ol>11. 제어 논리 Cytometry CTL 활동을 결정 하
<ol><li>
표준 교류 cytometry 프로토콜을 사용 하 여 CTL 활동의 평가 수행 합니다. 여기11488 nm 레이저와 교류 cytometer에 FITC 채널을 사용 하 여 셀을 획득 합니다.
	<ol>
<li>게이트 앞으로 분산형 (FSC) vs 측면 살포 (SSC) 매개 변수를 사용 하 여 라이브 세포에. CFSE 긍정적인 총인구에 대 한 라이브 림프 구 게이트 내에서 subgate. 참고: 삽입 된 CFSE 표시 셀 비장에 총 림프 톨의 작은 하위 집합을 만들 것입니다. CSFE-긍정적인 세포는 로그 눈금에 두 개의 뚜렷한 인구로 표시 되어야 합니다.</li>
		<li>히스토그램 형식을 사용 하 여 unpulsed (왼쪽된 피크, CFSElo) 및 펄스 (오른쪽 피크, CFSE안녕)의 비율을 결정 인구. CFSE안녕하세요 셀의 손실 항 원 특정 CTL 활동을 나타냅니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+quantification+of+T+cell-mediated+cytotoxicity+using+cell-permeable+fluorogenic+caspase+substrates.">Visualization and quantification of T cell-mediated cytotoxicity using cell-permeable fluorogenic caspase substrates.</a> Nat Med. 8 (2), 185-189 (2002).</li><li>Wherry, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+relationship+and+protective+immunity+of+memory+CD8+T+cell+subsets.">Lineage relationship and protective immunity of memory CD8 T cell subsets.</a> Nat Immunol. 4 (3), 225-234 (2003).</li><li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+flow+cytometry-based+cytotoxic+T-lymphocyte+assay+through+detection+of+cleaved+caspase+3+in+target+cells.">A sensitive flow cytometry-based cytotoxic T-lymphocyte assay through detection of cleaved caspase 3 in target cells.</a> J Immunol Methods. 304 (1-2), 43-59 (2005).</li><li>Barber, D. L., Wherry, E. J., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+rapid+in+vivo+killing+by+memory+CD8+T+cells.">Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells.</a> J Immunol. 171 (1), 27-31 (2003).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+fluorescent+target+arrays+for+assessment+of+T+cell+responses+in+vivo.">The use of fluorescent target arrays for assessment of T cell responses in vivo.</a> J Vis Exp. (88), e51627 (2014).</li><li>Johansson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+cell+education+in+mice+with+single+or+multiple+major+histocompatibility+complex+class+I+molecules.">Natural killer cell education in mice with single or multiple major histocompatibility complex class I molecules.</a> J Exp Med. 201 (7), 1145-1155 (2005).</li><li>Hailemichael, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+antigen+at+vaccination+sites+induces+tumor-specific+CD8(+)+T+cell+sequestration,+dysfunction+and+deletion.">Persistent antigen at vaccination sites induces tumor-specific CD8(+) T cell sequestration, dysfunction and deletion.</a> Nat Med. 19 (4), 465-472 (2013).</li><li>Overwijk, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+regression+and+autoimmunity+after+reversal+of+a+functionally+tolerant+state+of+self-reactive+CD8++T+cells.">Tumor regression and autoimmunity after reversal of a functionally tolerant state of self-reactive CD8+ T cells.</a> J Exp Med. 198 (4), 569-580 (2003).</li><li>Cho, H. I., Celis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+peptide+vaccines+eliciting+extensive+CD8+T-cell+responses+with+therapeutic+antitumor+effects.">Optimized peptide vaccines eliciting extensive CD8 T-cell responses with therapeutic antitumor effects.</a> Cancer Res. 69 (23), 9012-9019 (2009).</li><li>Ya, Z., Hailemichael, Y., Overwijk, W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+for+pre-clinical+study+of+human+cancer+immunotherapy.">Mouse model for pre-clinical study of human cancer immunotherapy.</a> Curr Protoc Immunol. 108, 21-43 (2015).</li><li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types.">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li><li>Durward, M., Harms, J., Splitter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+specific+killing+assay+using+CFSE+labeled+target+cells.">Antigen specific killing assay using CFSE labeled target cells.</a> J Vis Exp. (45), (2010).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜은 간단 하 고, 신중 하 게 수행 해야 하는 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 다음 테스트 되 고 항 원 특정 T 세포의 주입 covax 못쓰게 펄스 목표의 모든 살인을 볼 필요가 있다. 물 기반 covax 예방 접종 급성 염증 상태, 만성 염증 성 단계에 대 한 만듭니다 수 있지만 더 나은 생산할 수 있습니다 느린 원 출시 석유 기반의 접근 방식으로 단기 물에 기초를 둔 배합을 대체 결과<sup class="xref"...

CD8의 cytolytic (CTL) 잠재력을 평가 하기 위해 존재 하는 여러 프로토콜+ 또는 CD4+ T-셀. 이 평가 생체 외에서 제어 조건1,,23에서 쉽게 할 수 있습니다. 또한, 전염병 모델, LCMV, 고전적인 차동 CFSE (5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl 에스테 르) 대상 셀을 표시를 사용 하 여 CTL 기능 검사 어디는 CFSE안녕-레이블이 지정 된 셀 펩 티 드 및 CFSElo펄스-레이블이 대상 셀 남아 있다 unpulsed. 셀에 1:1 비율로 주입은 그리고는 CFSE안녕의 손실에 대 한 평가-흐름 cytometry4펄스 대상 이라고 표시 된. 백신 및 제거 모델도 비슷한 전략에 vivo에서 두 CD8 살해의 평가 대 한 사용+ 와 CD4+ T 세포 뿐만 아니라 NK 세포5,6. 이 강력한 분석 결과 이지만 대상 주입 전에 면역 시스템 프라임 전염 성 요원의 사용을 요구 한다.
이 프로토콜을 다른 한편으로, 아무 사전 감염 호스트의를 요구 하 고 대신 예방 접종 전략 대상 주입 전에 면역 체계를 이용 한다. 이 예방 접종 이라고 covax7, 수용 체 통행세 같이 7 (TLR7)의 구성 된 immunostimulatory 칵테일의 제공을 요구 하는 펩타이드 백신의 물 배합의 구성 주 작동 근 (imiquimod 크림), agonistic 안티-CD40 항 체, 그리고 interleukin-2 (일리노이-2) 펩 티 드 관련 못쓰게 하 고 강력한 면역 반응의 도출에 대 한 immunostimulatory 에이전트의 시너지 조합에 지도. 따라서,이 분석 결과 제공 CTL 함수의 빠른 판독 백신 3 일전 주입 대상 셀의 함수의 평가 대 한 셀에 함께 관리 된다. 또한, covax 못쓰게가 강하다 충분히 주입 후 4와 24 h 사이 끝났다 항 원 특정 T 세포의 살해 능력을 볼 수 있습니다.
이 프로토콜의 주요 한계는 타임 라인에서 vivo에서 항 원 및 가설 테스트에 적합 한 대상 살인의 탐지를 위한 식별 됩니다. 주의 깊은 평가 수행 해야 합니다, 유전 변경 뿐 아니라 항 원 강도에 유사로 T-세포에서 테스트 되 고 될 수 있습니다 대상 살인의 다른 타이밍 검출 필요로 하는 차동 CTL 함수. 또한, 예방 접종에 맞게 최적화 된 인간 흑색 종 항 원 glycopeptide 100 (hgp10025-33)에 대 한 펩 티 드의 적절 한 농도 동안 ovalbumin (OVA257-264)257-264 8,9 주어진된 연구에 더 적절 한 수 있습니다 다른 항 원 모델의 사용 추가 유효성 검사가 필요한 것 이다. 예상된 한 보조로는 covax와 함께에서 CTL effector 기능을 자극 하는 대상 항 용량 차이, 때문에 일리노이-2 복용량 농도 및 복용량 주파수의 최적화는 원하는 목표를 달성 하기 위해 필수적인 수 있습니다. 전반적으로,이 프로토콜 기능에서 vivo에서 살인의 빠른 평가 허용 하 고 어떤 주어진된 항 원에 적응 시킬 수 있다.

<table><tbody><tr><td>6 to 12 week old female C57BL/6 mice&amp;nbsp;</td><td>Charles River</td><td>027</td><td>C57 Black 6 mice</td></tr><tr><td>OT-1 6-12 week old female mice&amp;nbsp;</td><td>Jackson Labs</td><td>003831</td><td></td></tr><tr><td>hgp100&lt;sub&gt;25&amp;ndash;33&lt;/sub&gt;&amp;nbsp;</td><td>CPCScientific</td><td>834139</td><td>KVPRNQDWL</td></tr><tr><td>OVA &lt;sub&gt;257&amp;ndash;264&lt;/sub&gt;&amp;nbsp;</td><td>CPCScientific</td><td>MISC-012</td><td>SIINFEKL</td></tr><tr><td>Imiquimod cream 5%&amp;nbsp;</td><td>Fougera</td><td>51672-4145-6</td><td>Aldara Cream</td></tr><tr><td>CD40-specific mAb&amp;nbsp;</td><td>BioXcell</td><td>BE0016-2</td><td>clone FGK4.5</td></tr><tr><td>rhIL-2 protein&amp;nbsp;</td><td>Hoffman LaRoche Inc</td><td>136</td><td>Recombinant human IL-2 protein</td></tr><tr><td>70% isopropyl alcohol Prep&amp;nbsp;</td><td>Kendall</td><td>S-17474</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>10010-023</td><td>Phosphate Buffered Saline</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Life Technologies</td><td>26140-079</td><td>fetal bovine serum</td></tr><tr><td>RBC lysis buffer&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td>red blood cell lysis buffer</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Life Technologies</td><td>15140122</td><td>penicillin/streptomycin</td></tr><tr><td>CFSE</td><td>Life Technologies</td><td>C34554</td><td>5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester</td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma&amp;nbsp;</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL MCT graduated natural&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td>microcentrifuge tube</td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Fisher</td><td>BP8201500</td><td>EtOH</td></tr><tr><td>Trypan blue solution, 0.4%&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Hemocytometer</td><td>Fisher</td><td>267110</td><td></td></tr><tr><td>27 gauge needle</td><td>BD</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo assay for detection of antigen-specific t-cell cytolytic function using a vaccination model

항 원 특정 살인에 대 한 현재 방법은 생체 외에서 사용을 제한 또는 전염병 모델에 활용. 그러나, 감염 없이 항 원 특정 살인을 측정 하기 위한 프로토콜이 아니라 있다. 이 프로토콜은 설계 및 항 원 특정의 검출 함으로써 이러한 한계를 극복 하는 방법을 설명 합니다+ T vivo에서세포 CD8 하 여 목표 셀의 살인. 이 분석 결과 죽이고 전통적인 CFSE 표시 대상 접종 모델을 병합 하 여 수행 됩니다. 이 조합은 분석 결과 감염 또는 종양의 성장에 따라 의존 하지 않습니다 직접 그리고 신속 하 게 항 원 특정 CTL 잠재력을 평가 하는 연구원을 수 있습니다. 또한, 판독 cytometry에 기반 하 고 그래서 대부분 연구자에 게 쉽게 접근할 수 있어야. 연구의 주요 한계는 타임 라인에서 vivo에서 테스트 중인 가설에 적합 한 식별 됩니다. 항 원 강도 변화와 차동 cytolytic 함수에서 발생할 수 있는 T 세포에 돌연변이 세포 수확 및 평가 대 한 최적의 시간을 결정을 신중 하 게 평가 해야 합니다. 예방 접종에 대 한 펩 티 드의 적절 한 농도 맞게 최적화 된 hgp10025-33 , OVA257-264, 하지만 추가 유효성 검사는 주어진된 연구에 더 적절 한 수 있습니다 다른 펩 티 드에 대 한 필요할. 전반적으로,이 프로토콜 기능에서 vivo에서 살인의 빠른 평가 허용 하 고 어떤 주어진된 항 원에 적응 시킬 수 있다.

CFSE 표시 대상 셀의 주입, 전에 1:1 셀 혼합 CFSE안녕 와 CFSE소호 대상 셀의 기준 주파수를 결정 하는 흐름 cytometer에서 실행 됩니다. 그림 1 A CFSE 인구에 있는 변화를 검출 하는 제어 전략, 초기 게이트 FSC 그리고 SSC 매개 변수를 사용 하 여 이루어집니다. 이 인구는 레이블 없는 생 splenocytes에 비해 상대적으로 작은 총 CFSE 긍?...

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In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

이 프로토콜의 목표 vivo에서 의 검출에 대 한 항 원 특정 murine 모델에서 목표 셀의 살인을 허용 하는 것입니다.

Vivo에서 예방 접종 모델을 사용 하는 항 원 특정 T-셀 Cytolytic 함수의 검색에 대 한 분석 결과

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

in-vivo-assay-for-detection-antigen-specific-t-cell-cytolytic

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

9.8K 조회수.  University of Texas MD Anderson Cancer Center. 이 프로토콜의 목표 vivo에서 의 검출에 대 한 항 원 특정 murine 모델에서 목표 셀의 살인을 허용 하는 것입니다.

비디오: In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation. This labeling has classically been used to study proliferation and migration. In the method presented here, we have shortened the timeline after adoptive transfer to look at survival and killing of epitope specific CFSE labeled target cells4-6. The level of specific killing of a CD8 + T cell clone can indicate the quality of the response, as their quantity may be misleading. Specific CD8+ T cells can become functionally exhausted over time with a decline in cytokine production and killing7,8. Also, certain CD8 + T cell clones may not kill as well as others with differing TCR specificities9. For effective Cell Mediated Immunity (CMI), antigens must be identified that produce not only adequate numbers of responding T cells, but also functionally robust responding T cells. Here we assess the percent cell specific killing of two peptide specific T cell clones in BALB/c mice.

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

Many infections elicit a strong CTL response, but occasionally, the quantity of responding cells does not correlate to control of the pathogen1. One measure of CTL quality is their ability to kill specifically2. CFSE labeling of target cells can be used to investigate this CTL response quality in vivo3,4.

항원 특정 VIVO에서</emCFSE 라벨 대상 세포를 사용하여> 죽이는 분석

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The orthotopic murine model can be performed on large cohorts of immunocompetent mice simultaneously, is relatively inexpensive and preserves the cognate tissue microenvironment. The quantification of T cell infiltration and cytotoxic activity within orthotopic tumors provides a useful indicator of an antitumoral response.
This protocol describes the methodology for surgical generation of orthotopic pancreatic tumors by injection of a low number of syngeneic tumor cells resuspended in 5 &#181;L basement membrane directly into the pancreas. Mice bearing orthotopic tumors take approximately 30 days to reach endpoint, at which point tumors can be harvested and processed for characterization of tumor-infiltrating T cell activity. Rapid enzymatic digestion using collagenase and DNase allows a single-cell suspension to be extracted from tumors. The viability and cell surface markers of immune cells extracted from the tumor are preserved; therefore, it is appropriate for multiple downstream applications, including flow-assisted cell sorting of immune cells for culture or RNA extraction, flow cytometry analysis of immune cell populations. Here, we describe the ex vivo stimulation of T cell populations for intracellular cytokine quantification (IFN&#947; and TNF&#945;) and degranulation activity (CD107a) as a measure of overall cytotoxicity. Whole-tumor digests were stimulated with phorbol myristate acetate and ionomycin for 5 h, in the presence of anti-CD107a antibody in order to upregulate cytokine production and degranulation. The addition of brefeldin A and monensin for the final 4 h was performed to block extracellular transport and maximize cytokine detection. Extra- and intra-cellular staining of cells was then performed for flow cytometry analysis, where the proportion of IFN&#947;+, TNF&#945;+ and CD107a+ CD4+ and CD8+ T cells was quantified.
This method provides a starting base to perform comprehensive analysis of the tumor microenvironment.

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

This protocol describes the surgical generation of orthotopic pancreatic tumors and the rapid digestion of freshly isolated murine pancreatic tumors. Following digestion, viable immune cell populations can be used for further downstream analysis, including ex vivo stimulation of T cells for intracellular cytokine detection by flow cytometry.

종양 침투 T 세포 독성의 정형 외 췌장 종양 및 Ex 생체 특성의 생성

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...

암 연구학

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

Immunogenic cell death of tumors, caused by chemotherapy or irradiation, can trigger tumor-specific T cell responses by releasing danger-associated molecular patterns and inducing the production of type I interferon. Immunotherapies, including checkpoint inhibition, primarily rely on preexisting tumor-specific T cells to unfold a therapeutic effect. Thus, synergistic therapeutic approaches that exploit immunogenic cell death as an intrinsic anti-cancer vaccine may improve their responsiveness. However, the spectrum of immunogenic factors released by cells under therapy-induced stress remains incompletely characterized, especially regarding extracellular vesicles (EVs). EVs, nano-scale membranous particles emitted from virtually all cells, are considered to facilitate intercellular communication and, in cancer, have been shown to mediate cross-priming against tumor antigens. To assess the immunogenic effect of EVs derived from tumors under various conditions, adaptable, scalable, and valid methods are sought-for. Therefore, herein a relatively easy and robust approach is presented to assess EVs' in vivo immunogenicity. The protocol is based on flow cytometry analysis of splenic T cells after in vivo immunization of mice with EVs, isolated by precipitation-based assays from tumor cell cultures under therapy or steady-state conditions. For example, this work shows that oxaliplatin exposure of B16-OVA murine melanoma cells resulted in the release of immunogenic EVs that can mediate the activation of tumor-reactive cytotoxic T cells. Hence, screening of EVs via in vivo immunization and flow cytometry identifies conditions under which immunogenic EVs can emerge. Identifying conditions of immunogenic EV release provides an essential prerequisite to testing EVs' therapeutic efficacy against cancer and exploring the underlying molecular mechanisms to ultimately unveil new insights into EVs' role in cancer immunology.

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

This manuscript describes how to assess in vivo immunogenicity of tumor cell-derived extracellular vesicles (EVs) using flow cytometry. EVs derived from tumors undergoing treatment-induced immunogenic cell death seem particularly relevant in tumor immunosurveillance. This protocol exemplifies the assessment of oxaliplatin-induced immunostimulatory tumor EVs but can be adapted to various settings.

생체 내 비장 T 세포의 유세포 분석기에 의한 종양 유래 세포밖 소포의 면역원성 스크리닝

Immunogenic cell death of tumors, caused by chemotherapy or irradiation, can trigger tumor-specific T cell responses by releasing danger-associated ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of immunotherapies. Here we describe the use of fluorescent target array (FTA) technology, which utilizes vital dyes such as carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE), violet laser excitable dyes (CellTrace Violet: CTV) and red laser excitable dyes (Cell Proliferation Dye eFluor 670: CPD) to combinatorially label mouse lymphocytes into &#62;250 discernable fluorescent cell clusters. Cell clusters within these FTAs can be pulsed with major histocompatibility (MHC) class-I and MHC class-II binding peptides and thereby act as target cells for CD8+ and CD4+ T cells, respectively. These FTA cells remain viable and fully functional, and can therefore be administered into mice to allow assessment of CD8+ T cell-mediated killing of FTA target cells and CD4+ T cell-meditated help of FTA B cell target cells in real time in vivo by flow cytometry. Since &#62;250 target cells can be assessed at once, the technique allows the monitoring of T cell responses against several antigen epitopes at several concentrations and in multiple replicates. As such, the technique can measure T cell responses at both a quantitative (e.g.&#160;the cumulative magnitude of the response) and a qualitative (e.g.&#160;functional avidity and epitope-cross reactivity of the response) level. Herein, we describe how these FTAs are constructed and give an example of how they can be applied to assess T cell responses induced by a recombinant pox virus vaccine.

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The ability to monitor T cell responses in detail in vivo is important for the development of our understanding of the immune response. Here we describe the use of fluorescent target arrays (FTAs) in an in vivo T cell assay that assesses &#62;250 parameters simultaneously by flow cytometry.

T 세포 반응의 평가를위한 형광 대상 배열의 사용<em&gt; 생체 내</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various nanoparticle systems have been engineered to mimic features of pathogens to improve antigen delivery to draining lymph nodes and increase antigen uptake by antigen-presenting cells, leading to new vaccine formulations optimized for induction of antigen-specific CD8+ T cell responses. In this article, we describe the synthesis of a &#8220;pathogen-mimicking&#8221; nanoparticle system, termed interbilayer-crosslinked multilamellar vesicles (ICMVs) that can serve as an effective vaccine carrier for co-delivery of subunit antigens and immunostimulatory agents and elicitation of potent cytotoxic CD8+ T lymphocyte (CTL) responses. We describe methods for characterizing hydrodynamic size and surface charge of vaccine nanoparticles with dynamic light scattering and zeta potential analyzer and present a confocal microscopy-based procedure to analyze nanoparticle-mediated antigen delivery to draining lymph nodes. Furthermore, we show a new bioluminescence whole-animal imaging technique utilizing adoptive transfer of luciferase-expressing, antigen-specific CD8+ T cells into recipient mice, followed by nanoparticle vaccination, which permits non-invasive interrogation of expansion and trafficking patterns of CTLs in real time. We also describe tetramer staining and flow cytometric analysis of peripheral blood mononuclear cells for longitudinal quantification of endogenous T cell responses in mice vaccinated with nanoparticles.

We describe whole-animal imaging and flow cytometry-based techniques for monitoring expansion of antigen-specific CD8+ T cells in response to immunization with nanoparticles in a murine model of vaccination.

나노 입자 백신 접종 후 분석 항원 특이 CD8 + T 세포 반응에 대한 전체 동물 이미징 및 유세포 기술

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model offers accessibility to rare populations of antigen-specific T-cells representative of the cellular memory response as well as the cytokine microenvironment in situ.
This report describes the practical procedure of a cutaneous recall, an SB induction, and a harvest of antigen-specific T-cells. To exemplify the method, the tuberculin skin test is used for antigenic recall in individuals who, prior to this study, underwent a Bacillus Calmette-Gu&#233;rin vaccination against an infection with Mycobacterium tuberculosis. Finally, examples of multiplex and flow cytometric analyses of SB specimens are provided, illustrating high fractions of antigen-specific polyfunctional CD4+ T-cells available by this sampling method compared with cells isolated from the blood.
The method described here is safe and minimally invasive, provides a unique opportunity to study both innate and adaptive immune responses in vivo, and may be beneficial to a broad community of researchers working with cell-mediated immunity and human memory responses, in the context of vaccine development.

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Here, we provide a demonstration of the suction blister cutaneous recall model. The model allows a simple access to study human in vivo adaptive immune responses, for instance in the context of vaccine development.

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Simultaneous Quantification of Anti-vector and Anti-transgene-Specific CD8+ T Cells Via MHC I Tetramer Staining After Vaccination with a Viral Vector

Upon viral infection, antigen-specific CD8+ cytotoxic T cells (CTLs) arise and contribute to the elimination of infected cells to prevent the spread of pathogens. Therefore, the frequency of antigen-specific CTLs is indicative of the strength of the T cell response against a specific antigen. Such analysis is important in basic immunology, vaccine development, cancer immunobiology and the adaptive immunology. In the vaccine field, the CTL response directed against components of a viral vector co-determines how effective the generation of antigen-specific cells against the antigen of interest (i.e., transgene) is. Antigen-specific CTLs can either be detected by stimulation with specific peptides followed by intracellular cytokine staining or by the direct staining of antigen-specific T cell receptors (TCRs) and analysis by flow cytometry. The first method is rather time-consuming since it requires sacrificing of animals to isolate cells from organs. Also, it requires isolation of blood from small animals which is difficult to perform. The latter method is rather fast, can be easily done with small amounts of blood and is not dependent on specific effector functions, such as cytolytic activity. MHC tetramers are an ideal tool to detect antigen-specific TCRs.
Here, we describe a protocol to simultaneously detect antigen-specific CTLs for the immunodominant peptides of the viral vector VSV-GP (LCMV-GP, VSV-NP) and transgenes (OVA, HPV 16 E7, eGFP) by MHC I tetramer staining and flow cytometry. Staining is possible either directly from blood or from single cell suspensions of organs, such as spleen. Blood or single cell suspensions of organs are incubated with tetramers. After staining with antibodies against CD3 and CD8, antigen-specific CTLs are quantified by flow cytometry. Optionally, antibodies against CD43, CD44, CD62L or others can be included to determine the activation status of antigen-specific CD8+T cells and to discriminate between na&#239;ve and effector cells.

Simultaneous Quantification of Anti-vector and Anti-transgene-Specific CD8+ T Cells Via MHC I Tetramer Staining After Vaccination with a Viral Vector

Here, we present a protocol for the ex vivo qualitative detection of antigen-specific CD8+ T cells. Analysis is possible with single cell suspensions from organs or from small amounts of blood. A broad range of studies require the analysis of cytotoxic T cell responses (vaccination and cancer immunotherapy studies).

반대로 벡터 및 안티 transgene 특정 CD8의 동시 정량화+ T 세포가 MHC를 통해 내가 Tetramer 바이러스 성 벡터와 예방 접종 후 얼룩

Upon viral infection, antigen-specific CD8+ cytotoxic T cells (CTLs) arise and contribute to the elimination of infected cells to prevent the spread of ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte (CTL) responses elicited against tumor- and pathogen-derived peptides. They offer several advantages over traditional killing assays. First, they permit the monitoring of CTL-mediated cytotoxicity within architecturally intact secondary lymphoid organs, typically in the spleen. Second, they allow for mechanistic studies during the priming, effector and recall phases of CTL responses. Third, they provide useful platforms for vaccine/drug efficacy testing in a truly in vivo setting. Here, we provide an optimized protocol for the examination of concomitant CTL responses against more than one peptide epitope of a model tumor antigen (Ag), namely, simian virus 40 (SV40)-encoded large T Ag (T Ag). Like most other clinically relevant tumor proteins, T Ag harbors many potentially immunogenic peptides. However, only four such peptides induce detectable CTL responses in C57BL/6 mice. These responses are consistently arranged in a hierarchical order based on their magnitude, which forms the basis for TCD8 &#8220;immunodominance&#8221; in this powerful system. Accordingly, the bulk of the T Ag-specific TCD8 response is focused against a single immunodominant epitope while the other three epitopes are recognized and responded to only weakly. Immunodominance compromises the breadth of antitumor TCD8 responses and is, as such, considered by many as an impediment to successful vaccination against cancer. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular factors and mechanisms that dictate or shape TCD8 immunodominance. The protocol we describe here is tailored to the investigation of this phenomenon in the T Ag immunization model, but can be readily modified and extended to similar studies in other tumor models. We provide examples of how the impact of experimental immunotherapeutic interventions can be measured using in vivo cytotoxicity assays.

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

We describe here a flow cytometry-based in vivo killing assay that enables examination of immunodominance in cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses to a model tumor antigen. We provide examples of how this elegant assay may be employed for mechanistic studies and for drug efficacy testing.

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Rapid In Vivo Assessment of Adjuvant's Cytotoxic T Lymphocytes Generation Capabilities for Vaccine Development

The assessment of modern sub-unit vaccines reveals that the generation of neutralizing antibodies is important but not sufficient for adjuvant selection. Therefore, adjuvants with both humoral and cellular immuno-stimulatory capabilities that are able to promote cytotoxic T lymphocytes (CTL) responses are urgently needed. Thus, faithful monitoring of adjuvant candidates that induce cross-priming and subsequently enhance CTL generation represents a crucial step in vaccine development. In here we present an application for a method that uses SIINFEKL-specific (OT-I) T cells to monitor the cross-presentation of the model antigen ovalbumin (OVA) in vivo in the presence of different adjuvant candidates. This method represents a rapid test to select adjuvants with the best cross-priming capabilities. The proliferation of CD8+ T cells is the most valuable indication of cross-priming and it is also regarded as a correlate of adjuvant-induced cross-presentation. This feature can be evaluated in different immune organs like lymph nodes and spleen. The extent of the CTL generation can also be monitored, thereby giving insights on the nature of a local (draining lymph node mainly) or a systemic response (distant lymph nodes and/or spleen). This technique further allows multiple modifications for testing drugs that can inhibit specific cross-presentation pathways and also offers the possibility to be used in different strains of conventional and genetically modified mice. In summary, the application that we present here will be useful for vaccine laboratories in industry or academia that develop or modify chemical adjuvants for vaccine research and development.

Rapid In Vivo Assessment of Adjuvant's Cytotoxic T Lymphocytes Generation Capabilities for Vaccine Development

We present here an application for a standard immunological technique (CFSE stained OT-I proliferation) intended to rapidly monitor adjuvant-mediated cytotoxic T lymphocyte (CTL) generation in vivo. This fast estimation of CTL capacities is useful for the development of prophylactic vaccines against intracellular pathogens as well as therapeutic cancer vaccines.

급속 한 비보에 평가 보조의 세포 독성 T 림프 톨 생성 기능의 백신 개발에 대 한

The assessment of modern sub-unit vaccines reveals that the generation of neutralizing antibodies is important but not sufficient for adjuvant selection. ...

의학

An Immunological Technique to Monitor Adjuvant-Mediated Cytotoxic T Lymphocyte Generation

Source: Lirussi, D. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/57401">Rapid In Vivo&#160;Assessment of Adjuvant&#39;s Cytotoxic T Lymphocytes Generation Capabilities for Vaccine Development.</a> J. Vis. Exp. (2018)
The video demonstrates an immunological method to monitor in vivo adjuvant-induced cytotoxic T lymphocyte or CTL production. A mouse is pre-injected with genetically engineered, proliferative dye-stained donor CD8+ T lymphocytes. Subcutaneous injection of ovalbumin with adjuvants generates cytotoxic CD8+ T lymphocytes that are identified post-harvesting through immunostaining and flow cytometry.

보조 매개 세포독성 T 림프구 생성을 모니터링하기 위한 면역학적 기술

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
All mice ...

Vivo에서 예방 접종 모델을 사용 하는 항 원 특정 T-셀 Cytolytic 함수의 검색에 대 한 분석 결과

요약

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항원 특정 VIVO에서 죽이는 분석

종양 침투 T 세포 독성의 정형 외 췌장 종양 및 Ex 생체 특성의 생성

생체 내 비장 T 세포의 유세포 분석기에 의한 종양 유래 세포밖 소포의 면역원성 스크리닝

T 세포 반응의 평가를위한 형광 대상 배열의 사용

나노 입자 백신 접종 후 분석 항원 특이 CD8 + T 세포 반응에 대한 전체 동물 이미징 및 유세포 기술

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

반대로 벡터 및 안티 transgene 특정 CD8의 동시 정량화⁺ T 세포가 MHC를 통해 내가 Tetramer 바이러스 성 벡터와 예방 접종 후 얼룩

종양 특이 CD8⁺ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

급속 한 비보에 평가 보조의 세포 독성 T 림프 톨 생성 기능의 백신 개발에 대 한

보조 매개 세포독성 T 림프구 생성을 모니터링하기 위한 면역학적 기술