The work was funded by a CHIR operating grant (DJB).

다음 실험 프로토콜은 기관의 동물 관리위원회에 의해 승인되었다. 여성 쥐 1. 니모 <ol><li> 예비 <ol><li> 약 200g 하에서 3 % 이소 플루 란 마취를 계량 암컷 스프 라그 - 돌리 쥐를 배치 동물 체중 및 면도 요오드 수술 스크럽을 사용해 prepubic 영역을 3 회 소독한다. </li><li> 다운 가열 패드, 테이프 뒷다리와 꼬리 또한 부드럽게 미끄럼 방지하기 위해서 녹화 된 20 게이지 angiocatheter과 방광 카테 테르를 꽂다. </li></ol></li><li> 해부 <ol><li> 요도쪽으로 만져 치골에서 8mm 길이 방향 피부 절개를 수행하기 위해 메스를 사용합니다. 나중에 상처 봉합을 촉진하기 위해 양쪽에있는 피부를 들어 올립니다. </li><li> 세로 미세 가위로 확산하여 스텐트 요도를 식별하는 데 퉁명스럽게 해부하다. 노출을 향상시키기 위해 미세 자기 유지 피부 후크를 배치요도. </li><li> 수행 약간 부드러운 길이 요도 및 질의 평면을 개발하는 곡선 위의 요도 지느러미하여 확산. 그런 다음, 퉁명스럽게 요도 뒤에 4-0 실크 봉합사를 통과하고 외과 의사의 매듭의 이중 던져 준비합니다. </li></ol></li><li> 부분 요도 폐색 <ol><li> 상기 angiocatheter 제거 요도에 0.9 mm 금속봉 병렬 배치하고, 후자는 여전히 그 후 쉽게 미끄러지도록 한 다음, 요도 및 금속 막대 주위에 매듭을 조인다. </li><li> 3 이상의로드를 제거하기 전에 완만 장력을 사용하여 드로우 매듭을 고정. 봉합사는 길이 약 3mm 또는 폐쇄 이후 릴리스 실험의 일부인 경우 4mm 단부 잘랐다. </li></ol></li><li> 상처 폐쇄 <ol><li> 흡수 꼰 봉합 4-0의 매장 단일 스티치를 사용하여 paraurethral 분비 대략적인. </li><li> 같은 흡수 SUT를 사용하여 매장 수평 매트리스 스티치로 피부를 닫습니다URE. 참고 : 피부 관통 스티치에 대한 흡수성 봉합사를 사용하는 틀에 얽매이지 않는 것처럼 보일 수 있지만, 우리는 상처 감염 등의 합병증이 발생하지 않았고, 봉합사 제거는 피할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 치료 후 <ol><li> 주입 부 프레 노르 핀 0.1 ㎎ / ㎏ 피하 회복 케이지 래트를 배치하기 전에. </li><li> 단일 보관되어 쥐에 처음 24 시간 동안 일부 소프트 복구 다이어트를 제공합니다. 이 기간 후, 절차 이전과 동일 쌍에 다시 집 동물은 잘 같은 치료 그룹에 속한다 제공. </li><li> 방광의 크기 및 일반 복지를위한 매일 쥐를 확인; 적어도 매주 자신의 체중을 기록합니다. </li></ol></li></ol> 여성 마우스 2. 니모 <ol><li> 예비 <ol><li> 약 18g 무게 암컷 C57BL / 6 마우스를 놓고 1.1.1에서 상세한 진행. </li><li> 24 게이지의 중앙을 사용한 것 이외는, 단계 1.1.2의 상세한 진행iocatheter. </li></ol></li><li> 해부 <ol><li> 요도쪽으로 만져 치골에서 6mm 길이 방향 피부 절개를 수행하기 위해 메스를 사용합니다. </li><li> 세로 미세 가위로 확산하여 스텐트 요도를 식별하는 데 퉁명스럽게 해부하다. 유사 무딘 박리하여 요도에 복부 실행하는 신경 혈관 다발을 들어 올립니다. </li><li> 수행 약간 부드러운 길이 요도 및 질의 평면을 개발하는 곡선 위의 요도 지느러미하여 확산. 그런 다음, 퉁명스럽게 요도 뒤에 5-0으로 비 흡수성 꼰 봉합을 통과하고 외과 의사의 매듭의 이중 던져 준비합니다. </li></ol></li><li> 부분 요도 폐색 <ol><li> 1 ml 주사기로 angiocatheter 연결 방광에 생리 식염수를 0.1 mL의 주입. </li><li> 요도에 26 게이지 캐뉼라 병렬 배치. angioca를 뒤로 당기면서 부드럽게 요도 및 정맥 주위의 매듭을 조여일. </li><li> 3 이상이 정맥을 제거하기 전에 부드러운 긴장을 사용하여 던졌습니다으로 매듭을 고정합니다. </li><li> 동물의 방광에 부드러운 압력시 (外耳道)에 나타나는 소변 테스트; 소변을 표현 할 수없는 경우에는 넥타이를 푸십시오. 그렇지 않으면, 봉합사는 약 3 맹 롱 끝나는 잘라. </li></ol></li><li> 상처 폐쇄 <ol><li> 5-0 꼰 흡수성 봉합사를 사용하여 매장 수평 매트리스 스티치로 피부를 닫습니다. </li></ol></li><li> 치료 후 <ol><li> 회복 케이지 마우스를 배치하기 전에, 0.1 ㎎ / ㎏을 피하 주사 부 프레 노르 핀. </li><li> 단일 보관되어 마우스로 처음 48 시간 동안 일부 소프트 복구 다이어트를 제공합니다. 이 기간 후, 절차 이전과 동일 그룹에 다시 집 동물은 잘 같은 치료 그룹에 속한다 제공. 참고 : 오버 막혀 처리 할 때 무효화하지 않습니다과 n에서 죽을 것이다 시술 후 만져서 팽창 방광 24 시간와 마우스은 방해 합자의 제거를위한 마취 다시 촬영 이일하지 않는 한 - 1 내선. </li><li> 방광의 크기 및 일반 복지를위한 매일 쥐를 확인; 적어도 매주 자신의 체중을 기록합니다. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Storage+and+voiding+symptoms%3A+pathophysiologic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects.</a> Urology. 62 (5), 3-10 (2003).</li>
<li>Boyle, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+in+men+and+women+in+four+centres.+The+UrEpik+study%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study.</a> BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).</li>
<li>Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+burden+of+urgency+urinary+incontinence+in+the+United+States%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Manag+Care+Pharm%22%5BJournal%5D)">Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review.</a> J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).</li>
<li>Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bladder+outlet+obstruction+and+molecular+insights+into+the+basis+for+the+development+of+bladder+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction.</a> Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).</li>
<li>Mattiasson, A., Uvelius, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+contractile+properties+in+hypertrophic+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder.</a> J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).</li>
<li>Chang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+PKC-mediated+signaling+pathway+for+smooth+muscle+contraction+in+obstruction-induced+hypertrophy+of+the+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder.</a> Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).</li>
<li>Moore, J. A., Brading, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+bladder+outlet+obstruction+incorporating+radio-telemetered+cystometry%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry.</a> BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).</li>
<li>Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sildenafil+citrate+on+bladder+outlet+obstruction%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Inte%22%5BJournal%5D)">The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model.</a> BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).</li>
<li>Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+evaluation+of+bladder+function+in+non-anesthetized+mice+with+and+without+bladder+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction.</a> J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).</li>
<li>Kang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Sequential+Changes+in+Bladder+Function+after+Partial+Bladder+Outlet+Obstruction+in+Awake+Sprague-Dawley+Rats%3A+Focus+on+the+Decompensated+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder.</a> Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+an+oral+endothelin+converting+enzyme+inhibitor+on+rat+detrusor+function+after+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction.</a> J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).</li>
<li>Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. <a target="_blank" href="http://www.jurology.com/article/S0022-5347(16)01357-4/abstract">"sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment.</a> J Urol. 195 (4), e379(2016).</li>
<li>Jin, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+detrusor+overactivity+in+rats+after+relief+of+partial+urethral+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

동물의 사망률은 많은 보고서 10, 11, 13을 15 % 이상에서 근위부 요도에서 pBOO의 전통적인 모델의 주요 관심사 중 하나입니다. 니모는 암컷 쥐에 적용 할 때 최소한의 사망률을 보인다. 생쥐의 근위부 요도 폐쇄는 기술적으로 더 도전 쥐에 비해 때문에 더 많은 경향이 합병증이다. 우리 중반 요도 접근 방식에 대한 자...

일부 방광 출구 폐색 (pBOO)의 높은 유병률을 갖는다 심한 방광 장애 1 초래할 수있다; 스펙트럼은 양성 전립선 비대증으로 취득한 요도 협착 등 위에 후부 요도 밸브 또는 요도 밑 열림 증과 같은 선천성 기형 내지. 남성 육십년의 30 % 이상 및 2 세에 영향을 미치는 후자. 큰 환자 부담 및 pBOO과 관련된 엄청난 의료 비용이 증가 유출 저항 3에 대한 응답으로 공부 방광 리모델링에 투입 상당한 연구 노력을 보증합니다. 2006에서 2015까지 (220)를 통해 PubMed의 기사가 방광에 pBOO의 효과에 관한 발표되었다 색인. pBOO에 대한 동물 모델은 같은 쥐 (5), 토끼 (6), 돼지 7 및 MOUS 등 여러 종 4에 고안되었지만전자 8, 9, 그러나 근위부 요도의 부분적인 방해를받은 암컷 쥐입니다 틀림없이 가장 일반적으로 사용되는 동물 모델; 방광 목 동물의 복부에 접근, 방광의 exteriorizing 및 해부 전통 근위부 요도 폐색 기술과 피할 수 있습니다. 장애물과 동물의 사망률 정도의 변동성 만 (11)이 프로 시저 (10)과 관련된 문제의 일부; 우리는 가짜 운영 동물, 근위부 요도 주위 절개는 방광 경부 (12)에서 신경 섬유의 손실과 상관 관계 생리적 변화에 이르게 것으로 나타났다. 이 발견은 여성 설치류에서 근위부 요도를 액세스 포함 가장 일반적으로 사용되는 pBOO 동물 모델이 영향을 미치는, 방광의 관련 구조 및 기능 변화와 탈 신경 손상에 이르게 것을 나타냅니다가짜와 방해 동물. 따라서, 다른 접근 방식 피 탈 신경 손상이 필요했다. 우리의 실험실 개발 및 가짜 운영 동물이 작동이되지 제어 동물과 구별했다 반면, 같은 기관의 질량과 잔뇨의 증가로 방광에서 예상되는 장애물 관련된 변화를 유도에 효과적인 신경을 살려주는 중간 요도 폐색을 (네모) 접근 방식을 평가 . 그 박리의 수준에 근접하게 놓여으로 또한 선 형상 요도 괄약근는 그대로 남아 있었다. 또한, 방광 폐색 질량 - 유도 증가 변동 전통적인 근위 요도 협착보다 낮았다 동물 사망률은 제로였다. 지금까지 설명 마우스에 대한 모든 pBOO 모델이 50 % 주변의 사망률을하는 동안 우리는 또한 성공적으로 방해 동물의 10 % 미만 사망률과 여성 쥐에서 니모를 적용했다. 마우스에 pBOO의 맥락에서 방광 리모델링을 공부하는 것은 applicabil 도움이됩니다유전자 변형의 전체 스펙트럼 성만. 여성 설치류 중반 요도 주위를 해부하면 기존의 근위부 폐쇄 모델에서 관찰 된 방광에서 바람직하지 혼란 구조적 또는 기능적 변화를 유도하지 않습니다. 그럼에도 불구하고, 중간 요도 수준에서 부분적인 폐쇄를 유도하는 것은 여전히 ​​방광 비대를 유도하고 pBOO에 대한 동물 모델에서 예상대로, 잔뇨 증가했다. 중요한 것은, 마우스에서 NEMO을 수행하는 단계를 더 설치류 사실상 불가능하다 형질 전환 방법에 pBOO 방광 개조 조사를 연다.

<table><tbody><tr><td>Female rat&amp;nbsp;</td><td>Charles-River Canada</td><td>Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400</td><td>about 200 g</td></tr><tr><td>Isoflorane vaporizer</td><td>Benson medical industries inc.</td><td>TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isoflorane</td><td>Fresenius Kabi Animal Health</td><td>Isoflorane; product code CP0406V2</td><td>&amp;nbsp;250 mL bottle</td></tr><tr><td>Disposable scalpel</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>#15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S</td><td></td></tr><tr><td>Microscopy forceps</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443</td><td></td></tr><tr><td>Adson forceps</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9</td><td></td></tr><tr><td>Curved surgical scissors</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376</td><td></td></tr><tr><td>0.9 mm inox metal rod</td><td>goodfellow.com</td><td>Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>Skin hooks - self made from inox steel</td><td>goodfellow.com</td><td>Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Silk suture</td><td>esutures.com</td><td>4-0 Sofsilk black 98&quot; strand; product number LS640</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicry suture</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Vicryl undyed 27&quot; RB-1 taper; product number J213H</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Medsupplier.com</td><td>Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder - 5 1/2&quot;; product code SKU NEE4484-8-40TC&lt;br/&gt; SKU NEE4484-8-40TC&lt;br/&gt; SKU NEE4484-8-40TC&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (Buprenorphine)</td><td>first veterinary supply</td><td>Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701</td><td></td></tr><tr><td>1 mL syringe with 27 G needle</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&amp;nbsp;Tuberculin Syringe, BD 309623</td><td></td></tr><tr><td>20 G Angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Andwin Scientific&amp;nbsp;ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906</td><td></td></tr><tr><td>Recovery diet</td><td>clearh2o</td><td>DietGel 31M; 72-08-5022</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 female mice</td><td>Charles-River Canada</td><td>C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027</td><td>about 18 g</td></tr><tr><td>24 G angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc.&amp;nbsp;IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Ethibond</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Ethibond green 30&quot; RB-1 taper; product number X550H</td><td></td></tr><tr><td>26 G syringe needle</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Baxter</td><td>0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043</td><td></td></tr></tbody></table>

nerve-sparing mid-urethral obstruction (nemo) in female small rodents

일부 방광 출구 폐색 (pBOO)은 높은 유병률이 유의 한 환자 부담과 엄청난 의료 비용이 발생합니다. pBOO에서 방광 리모델링을 조사하는 가장 일반적인 동물 모델은 근위부 요도에 부분적인 방해를 받고 여성 설치류이다. 장애물과 동물의 사망률 정도의 변동성은 근위부 폐쇄와 주요 관심사이다. 또한, 근위부 요도 및 방광 목 해부하는 것은 방광 신경 분포를 위태롭게. 우리는 기존 모델의 단점을 피할 수 pBOO에 대한 신경을 살려주는 중간 요도 폐색 (네모) 모델을 개발했다. 우리는 개복 수술뿐만 아니라이 지역의 해부에 대한 필요성을 없어진다 치골 치골, 단지 열등 요도 접근; 또한, 선 형상 요도 괄약근은 그대로 남아 있었다. 우리는 여성 흰쥐에서 (12 개 장애물, 6 가짜 동물)뿐만 아니라 여성 C57 / BL6 마우스를 니모를 수행 (20 장애물의 18 가짜 동물). 이주 후, 우리는 방광 기능, 방광 질량, 신체 질량을 평가 하였다. 우리는 obstructed- 또는 가짜 운영 암컷 쥐들 사이에 사망률이 없었다; 전통적인 근위 pBOO-방법에서 기술 한 바와 같이, 우리는 근위 요도 주위의 봉합을 연결하고, 일시적으로 0.9 mm의 금속봉을 두었다. NEMO 2 주 후 방광 질량의 85 % 증가를 야기 평균 잔뇨량은 0.03 mL의 모의 동안 동물에 부분적으로 가려 래트 0.4 mL를가 하였다. 생쥐에서는 봉합 매 때 요도를 따라 배치 된 캐 뉼러 3 개 크기를 시험했다. 우리는 27 게이지 캐 뉼러를 사용하여 50 %의 사망률을 통해 동물 결과 것으로; 증가 방광 질량 원하는 응답을 생성하지 않았다 25 게이지 뉼러를 배치하는 단계; 26 게이지 캐 뉼러를 이용하여 최소한의 동물 사망률 (1/8) 아직 방광 질량 크게 2 배의 증가로 양호한 결과를 얻었다.

여성 쥐에서 신경을 살려주는 중간 요도 폐색 (네모) 인류 우리는 지금까지 40여 암컷 쥐에 중간 요도 폐색을 수행하고 더 치사 없었다. 방광 질량 차단 된 래트가...

Watch this Scientific Journal Video about Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents at JoVE.com

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

설치류 부분 방광 출구 폐색 전통적인 모델은 동물의 사망을 내포한다. 근위부 요도 및 방광 목 해부에서 탈 신경 손상의 주요 관심사이기도하다. 우리는 기존 모델의 단점을 피하고, 개발하고 안전하고 신뢰할 수있는 중간 요도 폐색 모델을 평가 하였다.

여성 작은 설치류에 신경을 살려주는 중간 요도 폐색 (네모)

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

nerve-sparing-mid-urethral-obstruction-nemo-in-female-small-rodents

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

9.6K 조회수.  The Hospital for Sick Children.  설치류 부분 방광 출구 폐색 전통적인 모델은 동물의 사망을 내포한다. 근위부 요도 및 방광 목 해부에서 탈 신경 손상의 주요 관심사이기도하다. 우리는 기존 모델의 단점을 피하고, 개발하고 안전하고 신뢰할 수있는 중간 요도 폐색 모델을 평가 하였다. 

비디오: Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

마우스 요로 감염의 Transurethral 유도

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

연구

면역학 및 감염병학

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

의학

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

작은 동물 모델에서 요로 감염: 남성 및 여성 쥐의 Transurethral 도관 법

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive nephropathy induced by unilateral ureteric obstruction (UUO), which can either be irreversible (UUO) or reversible (R-UUO). In the irreversible UUO model, the ureter may be obstructed for variable periods of time in order to induce increasingly severe renal inflammation and interstitial fibrotic scarring. In the reversible R-UUO model the ureter is obstructed to induce hydronephrosis, tubular dilation and inflammation. After a suitable period of time the ureteric obstruction is then surgically reversed by anastomosis of the severed previously obstructed ureter to the bladder in order to allow complete decompression of the kidney and restoration of urinary flow to the bladder. The irreversible UUO model has been used to investigate various aspects of renal inflammation and scarring including the pathogenesis of disease and the testing of potential anti-inflammatory or anti-fibrotic therapies. The more challenging model of R-UUO has been used by some investigators and does offer significant research potential as it allows the study of inflammatory and immune processes and tissue remodeling in an injured and scarred kidney following the removal of the injurious stimulus. As a result, the R-UUO model offers investigators the opportunity to explore the resolution of kidney inflammation together with key aspects of tissue repair. These experimental models are of relevance to human disease as patients often present with obstruction of the renal tract that requires decompression and are commonly left with significant residual kidney impairment that has no current treatment options and may lead to eventual end stage kidney failure.

The murine model of irreversible unilateral ureteric obstruction (UUO) is presented together with the model of reversible UUO in which the ureteric obstruction is relieved by anastomosis of the severed ureter into the bladder. These models enable the study of renal inflammation and scarring as well as tissue remodeling.

돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

ATP, released from the urothelium in response to bladder distension, is thought to play a significant sensory role in the control of micturition. Therefore, accurate measurement of urothelial ATP release in a physiological setting is an important first step in studying the mechanisms that control purinergic signaling in the urinary bladder. Existing techniques to study mechanically evoked urothelial ATP release utilize cultured cells plated on flexible supports or bladder tissue pinned into Ussing chambers; however, each of these techniques does not fully emulate conditions in the intact bladder. Therefore, an experimental setup was developed to directly measure ATP concentrations in the lumen of the rodent urinary bladder.
In this setup, the bladders of anesthetized rodents are perfused through catheters in both the dome of the bladder and via the external urethral orifice. Pressure in the bladder is increased by capping the urethral catheter while perfusing sterile fluid into the bladder through the dome. Measurement of intravesical pressure is achieved using a pressure transducer attached to the bladder dome catheter, akin to the setup used for cystometry. Once the desired pressure is reached, the urethral catheter's cap is removed, and fluid collected for ATP quantification by luciferin-luciferase assay. Through this experimental setup, the mechanisms controlling both mechanical and chemical stimulation of urothelial ATP release can be interrogated by including various agonists or antagonists into the perfusate or by comparing results between wildtype and genetically modified animals.

In Vivo Luminal Measurement of Distension-Evoked Urothelial ATP Release in Rodents

This protocol describes the procedure for measuring ATP concentrations in the lumen of the bladder in an anesthetized rodent.

생체 내 설치류에서 팽창 유발 요로 상피 ATP 방출의 내강 측정

ATP, released from the urothelium in response to bladder distension, is thought to play a significant sensory role in the control of micturition. ...

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately 10%-20% of women undergo pelvic floor repair surgery to treat prolapse in the United States. PFD cases result in an overall $26.3 billion annual cost in the United States alone. This multifactorial condition has a negative impact on the quality of life and yet the treatment options have only dwindled in the recent past. One common surgical option is uterosacral ligament suspension (USLS), which is typically performed by affixing the vaginal vault to the uterosacral ligament in the pelvis. This repair has a lower incidence of complications compared to those with mesh augmentation, but is notable for a relatively high failure rate of up to 40%. Considering the lack of standard animal models to study pelvic floor dysfunction, there is an urgent clinical need for innovation in this field with a focus on developing cost-effective and accessible animal models. In this manuscript, we describe a rat model of USLS involving a complete hysterectomy followed by fixation of the remaining vaginal vault to the uterosacral ligament. The goal of this model is to mimic the procedure performed on women to be able to use the model to then investigate reparative strategies that improve the mechanical integrity of the ligament attachment. Importantly, we also describe the development of an in situ tensile testing procedure to characterize interface integrity at chosen time points following surgical intervention. Overall, this model will be a useful tool for future studies that investigate treatment options for POP repair via USLS.

Pelvic organ prolapse affects millions of women worldwide and yet some common surgical interventions have failure rates as high as 40%. The lack of standard animal models to investigate this condition impedes progress. We propose the following protocol as a model for uterosacral ligament suspension and in vivo tensile testing.

자궁천골 인대 서스펜션 쥐 모델 개발

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Urethral Stricture Induction Followed by Buccal Mucosa Graft Urethroplasty in a Rat Model

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is necessary, although in some cases, it is inappropriate or needs to be optimized to repair a given stricture. Therefore, developing innovative procedures and evaluating their putative success in experimental models is crucial to fit the clinical need. With this goal, this study describes a protocol in which urethral stricture was induced by electrocautery in Wistar rats. Urethral reconstruction was performed 1 week later with a buccal mucosa graft, harvested from the lower lip, and placed in a ventral onlay fashion. A retrograde urethrogram showed a significant improvement in urethral diameter after urethroplasty compared to the respective value after stricture induction. Additionally, the graft placement was assessed by blood perfusion analysis using laser Doppler. As expected, a dark blue area corresponded to the non-vascularized buccal mucosa graft. This procedure can successfully simulate the normal pathophysiological process of urethral injury and tissue modulation, as well as urethral reconstruction using a buccal mucosa graft in a reproducible manner, and serve as the basis for future research based on tissue engineering or urethral grafts.

In the present protocol, a urethral stricture induction was developed in Wistar rats, followed by urethral reconstruction with a buccal mucosa graft. A retrograde urethrogram and laser Doppler assessment were performed, validating urethral reconstruction (after stricture formation) and graft placement.

쥐 모델에서 협측 점막 이식편 요도 성형술에 이은 요도 협착 유도

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is ...

<meta charset="utf8"></head><body>요도 협착을 위한 효율적인 쥐 모델: 전기 칼 방법

Iatrogenic Injury Recapitulated: Electroexcision Technique for Urethral Stricture Modeling in Rats

Urethral stricture (US) is a common clinical condition in urology, characterized by high prevalence and morbidity across all ages. Current treatments for US, such as urethral dilatation and internal urethrotomy, fail to fully resolve the condition and are associated with high rates of recurrence and complications. 
Additionally, the pathogenesis of US is not well understood. To explore the pathogenesis of US and develop new therapeutic strategies, it is crucial to establish a standardized rat model that accurately reflects the clinical manifestations. This study outlines a straightforward and repeatable method for inducing US in rats using a high-frequency electric knife. The method involves making a longitudinal incision with the electric knife set to a unipolar mixed cutting mode at 4 W, which inflicts significant urethral damage. Histopathological analysis shows thickening of the urothelium, inflammatory infiltration, and disorganized collagen fibers. This model effectively replicates iatrogenic injury through electroexcision in the rat urethra. In summary, this study successfully establishes a new, efficient, and stable rat model of US that closely mimics the clinical scenario, providing a valuable tool for further research into the mechanisms and novel treatments for US.

<meta charset="utf8"></head><body>의인성 손상 요약: 쥐의 요도 협착 모델링을 위한 전기 절제 기술

In this study, we present a novel, efficient, and stable rat model of urethral stricture created through electroexcision of the rat urethra, which effectively simulates iatrogenic injury observed in clinical settings.

의인성 손상 요약: 쥐의 요도 협착 모델링을 위한 전기 절제 기술

Urethral stricture (US) is a common clinical condition in urology, characterized by high prevalence and morbidity across all ages. Current treatments for ...

여성 작은 설치류에 신경을 살려주는 중간 요도 폐색 (네모)

요약

더 많은 비디오 탐색

마우스 요로 감염의 Transurethral 유도

작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구

작은 동물 모델에서 요로 감염: 남성 및 여성 쥐의 Transurethral 도관 법

돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델

생체 내 설치류에서 팽창 유발 요로 상피 ATP 방출의 내강 측정

자궁천골 인대 서스펜션 쥐 모델 개발

쥐 모델에서 협측 점막 이식편 요도 성형술에 이은 요도 협착 유도

의인성 손상 요약: 쥐의 요도 협착 모델링을 위한 전기 절제 기술

의인성 손상 요약: 쥐의 요도 협착 모델링을 위한 전기 절제 기술

의인성 손상 요약: 쥐의 요도 협착 모델링을 위한 전기 절제 기술