이 프로젝트에 자신의 노력에 대한 다이애나 이카 - Culaki, 크리스탈 샘슨과 신학 Theologia Karagiorgis 감사합니다.

이 실험 프로토콜은 모든 주제 및 절차는 국가 관리를위한 건강 가이드의 연구소 및 실험 동물의 사용을 준수하고 있음을 인증 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 주제 <ol><li> 구매 및 / 또는 번식 수컷 흰쥐 (260~300g). </li><li> 개별적으로 와이어 메쉬 케이지 하우스 쥐. 쥐 차우와 물 사용 가능한 광고 무제한와 12시 12분 시간 빛 / 어둠주기를 유지한다. </li><li> 적절한 샘플 크기를 지정 (예를 들어, N ≈ 6-8) 무작위로 그룹으로. </li></ol> 2. 시험 장치 및 접수 절차 <ol><li> 고무 마개 보정 원심 관을 사용하여 45 ° 각도 금속 sipper 튜브 제시된 용액 (0.1 ml를 ±) 정확한 측정을 제공한다. 교정의 가시성을 허용하는 팽팽 금속 스프링에 의해 홈 케이지에 고정합니다. </li><li> ~ (식량 배급을 제한쥐의 15 / g / 일)는 해결책을 소비하는 의욕을 높일 원래 체중의 85 %의 무게를 감소시킨다. 참고 : 체중 감소는 3 사이에해야 - 오일. </li><li> 쥐가 짧은 (1 미만인 분) 대기 시간 후의 시험 용액을 샘플링 할 가능성을 최대화하기 위해 1 시간 세션 위에 4 일 동안 0.2 % 사카린 사전 훈련 용액 (10 ㎖)을 제공한다. </li><li> 몇 방울을 흘리고하여 원심 분리 관을 통해 흐름을 확인합니다. </li><li> 섭취량 측정을 획득하기 전에 각 세션 후 튜브의 무게를. </li><li> A) 물, b)는 새로운 맛 (0.05 % 체리 맛) 0.2 % 사카린, C) 8 % 과당, D) 8 : 흡기 여섯 솔루션 중 하나를 수신 하위 그룹의 다섯 번째 날에 시험 (10 ㎖, 1 시간)을 수행 % 글루코스, 예) 0.3 % 잔탄 검에 현탁하고 3.5 % 옥수수 오일, 및 F) 0.3 % 잔탄 검. </li><li> 영양 솔루션 isocaloric 있는지 확인; 따라서, 3.5 % 옥수수 오일 농도가 8 % 설탕 솔루션 isocaloric이다. </li><li> 일 확인짧은 대기 시간 (이하 1 분)와 쥐 샘플 솔루션에서. 이 요건이 충족되지 않으면, 연구 주제를 버린다. </li></ol> 3. 조직 준비 <ol><li> 각 시험 용액 초기 노출 후 90 분 펜토 바르 비탈의 복강 내 주사에 의해 각 동물을 마취. 동물이 제대로 동물이 더 이상 깊은 날개 자극에 떨고 직접 각막 압력 또는 머리를 다음 깜박 발 핀치에 철수 등의 반사에 응답임을 입증되지 의해 마취되어 있는지 확인합니다. </li><li> 이전 69 설명 된대로로 transcardially 각 동물을 관류. <ol><li> 나트륨 펜 토바 비탈 (65 ㎎ / ㎏)의 과다 복용으로 쥐를 마취, 흉곽을 제거하고 심장 (69)에 무료로 액세스를 위해 가슴을 노출. </li><li> 왼쪽 심장 판막의 정점에 바늘을 배치하고, 대정맥을 잘라. 인산염 완충 정착액 CO 다음 인산염 완충액 (PBS, ~ 180 ml)에 관리4 % 파라 포름 알데히드 (~ 180 ml)에 ntaining. </li><li> 동물이 실제로 액체는 코, 입, 생식기 영역과 같은 다른 공동을 떠나는 여부를 검사하여 올바르게 관류되고 있는지 확인합니다. 참고 : 파라 포름 알데히드와 적절한 고정은 큰 근육 운동을 동반한다. 이 발생하지 않으면, 반응이 일어날 때까지 바늘을 다시 조정한다. </li></ol></li><li> 빨리 떨어져 두개골에서 모피와 피부를 절단하여 두개골에서 뇌를 제거합니다. 균열 및 후면에서 전면으로 이동 뇌에서 뼈를 제거하는 rongeurs을 사용합니다. rongeur은 뼈와 수막 피아 교인 사이에 보장 아래와 소뇌 뒤에 지역에서 처음 작업. 두개골 상부 및 측면이 제거되고 나면,베이스의 뇌 리프트 작은 주걱을 사용하고, 작은 가위 뇌신경을 자르지. 뼈를 제거하는 동안 뇌 손상되지 않도록주의하십시오. </li><li> 밤새 4 ° C에서 4 % 파라 포름 알데히드 용액에 머리를 고정합니다.이들이 용기의 바닥에 침전 될 때까지 실온에서 30 % 수크로오스 / 70 % PBS 용액에 뇌를 놓는다. </li><li> 뇌 차단 <ol><li> 후각 망울에 횡 방향으로 꼬리를 절단 뇌의 주동이의 부분을 제거합니다. </li><li> 소뇌와 뇌교의 수준에서 횡 방향으로 절단 뇌의 꼬리 부분을 제거합니다. </li></ol></li><li> mPFC을 통해 슬라이딩 마이크로톰의 무대에 고정 된 꼬리 부분 coronally 뇌를 탑재, 절단 관상 섹션 (40 μm의) (2.86 - 브레 그마에 2.20 mm의 주동이)는 NAC 코어와 쉘과 등쪽 선조체 (+ 1.76-1.60 mm의 브레 그마에 주동이)는 AMY (-2.12 - 브레 그마에 -2.92 mm의 꼬리) 및 VTA (-5.20 - -5.60 mm의 꼬리 정수리하기). 지침은 쥐의 뇌지도 책 (70)를 사용합니다. </li><li> 최종 면역 조직 화학 분석 (71)에 대한 PBS로 가득 찬 24 웰 플레이트의 각 웰에 무료 부동 섹션을 수집합니다. 24 우리를 밀봉 파라 필름을 사용하여LL 플레이트는 PBS가 컨테이너에 증발 뇌를 건조하지 않도록합니다. 4 ° C가 뇌 조직을 저장합니다. </li></ol> 4. C-FOS 프로 시저 (71에서 적응) <ol><li> 5 % 정상 염소 혈청 5 ml의 0.2 % 트리톤 X-100을 PBS에 1 시간 동안 각 섹션을 처리합니다. </li><li> PBS 1 ㎖를 함유하는 웰에서 36 시간 동안 39 ° C에서 : 일차 항체로 처리 섹션 (5000 토끼 항 - C-FOS 1) 부화. </li><li> 린스 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배. </li><li> 이차 항체와 인큐베이션 (오티 닐화 염소 항 - 토끼, 1 : 200)을 RT에서 2 시간 동안 PBS 1 ㎖를 함유하는 웰. </li><li> 10 분 각각 PBS의 각 섹션의 3 배 (5 ㎖)을 씻어. </li><li> PBS 5ml에 Avadin DH (100 μL) 및 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 바이오틴 H (100 μL)로 이루어진 세트에 제공 시판의 아비딘 - 고추 냉이 퍼 옥시 다제의 혼합물을 2 시간 세정 섹션을 인큐베이션. </li><li> 다시 씻어 ​​섹션은 PB에 3 배S 10 분마다 (5 mL)을 첨가 하였다. </li><li> DAB 용액 5 ㎖를 함유하는 웰에서의 조직의 반응성에 따라, 10 분 - 5 0.0015 %의 H 2 O (2)의 존재하에 0.05 %의 디아 미노 벤지딘 (DAB)가있는 부분을 반응한다. </li><li> 두 번에 라벨 VTA 섹션. 밤새 4 ° C에서 PBS (5 ㎖) : 티로신 수산화 (TH) 항체 (2,000 토끼 항 - 쥐 TH, 1)으로 그들을 품어. </li><li> 헹구고 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배. </li><li> 이차 항체와 인큐베이션 (오티 닐화 염소 항 - 토끼, 1 : 200) PBS (5 ㎖)을 실온에서 2 시간 동안. </li><li> 헹구고 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배. </li><li> 이차 항체 - 퍼 옥시 다제 복합체를 사용하여 항체를 시각화합니다. DAB / NiCl 용액 5 ㎖를 함유하는 웰에서의 조직의 반응에 따라, 10 분 - 5 0.05 % DAB의 조합 및 0.3 %의 황산 니켈 수용액으로 반응한다. </li><li> DAB 솔루션은 그것에서 컬러 우유 빛 녹색인지 확인0.3 %의 니켈과 황산의 반응. 용액이 너무 녹색 인 경우, 반응이 너무 어두운 것. </li><li> 젤라틴 코팅 슬라이드 상에 모든 섹션을 탑재합니다. 톨루엔 기반 솔루션 (TBS)의 몇 방울과 미끄럼 방지를 커버 한 다음 그들에게 건조 하룻밤을 보자,하고. </li><li> 실험 조건은 관찰자에 알 수 있도록 코드 슬라이드. </li></ol> C-FOS 5. 결​​정은 면역이 카운트 <ol><li> prelimbic mPFC, infralimbic mPFC, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY 핵, 중앙 cortico-중간 AMY, 등쪽 선조체 및 VTA : 관심이 영역 (ROI)에에 Fos 양성 신경 세포를 계산하는 공정한 관찰자의 쌍을 지정합니다. . C-에 Fos 면역이 TH +와 VTA에서 TH-세포의 존재 여부를 묘사 한 현미경에서 NAC의 화면 캡처 사진을 제공 그림. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53897/53897fig1.jpg" /> <stroNG&gt; C-FOS 카운트가 제작되어있는 그리드에 의해 윤곽이 관심 그림 1. 핵 중격 의지의 대표 제 (NAC) 표시 지역은. NAC 쉘은 NAC 코어에 내측 및 복부 발견된다. NAC 코어는 전방 접합면 둘러싼 (전방 통신을.). 측면 뇌실 (측면 통풍구.)의 복부 정도 볼 수 있습니다. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/53897/53897fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol start="2"><li> 시험의 모든 조건에서 모든 동물에 공통적으로 사이트 당 적어도 세 개의 대표 조각을 분석합니다. </li><li> 개요 (도 1)를 추적하여 각 ROI 영역에 대한 전체를 분석하는 소프트웨어, 광학 현미경을 사용한다. <ol><li> 특정 사이트의 경우, 응용 프로그램을 열고 인수 드롭 다운 메뉴를 클릭하고 &quot;라이브 이미지&quot;를 클릭합니다. 포커스로 ROI를 가져와 기준점을 설정하는 화면을 클릭. 그런 다음 TR가이드로 격자를 사용하여 선택된 뇌 영역 에이스. 추적이 완료되면, 세포를 (- 5.3.1.3 5.3.1.1 단계) 계산합니다. <ol><li> 소프트웨어 아이콘을 두 번 클릭합니다. &quot;취득&quot;다음 &quot;라이브 이미지&quot;를 클릭, 메뉴 표시 줄로 이동합니다. 포커스로 ROI를 가져와 기준점을 설정하는 화면을 클릭. </li><li> 그리드 도구 모음에 가서는 &quot;그리드&quot;과 &quot;사용 그리드 라벨&quot;을 클릭합니다. 소정의 추적과 ROI를 설명합니다. </li><li> C-FOS 세포의 수를 유지하기 위해 왼쪽 사이드 바에서 &quot;+&quot;를 선택, 각각의 투자 수익 (ROI) 지역에 세포를 계산합니다. 카운트를 등록 단독으로 각 셀을 클릭합니다. 정의 된 어두운 빨간색 원은 (그림 1) 관찰 될 때 C-FOS에 대한 긍정적 인 셀을 고려하십시오. </li></ol></li><li> 각 사이트에 대해이 과정을 반복합니다. </li><li> 레코드는 실험실 노트북 및 향후 분석을 위해 컴퓨터에서 계산합니다. 추적 및 수를 저장하기 위해 &quot;저장 데이터 파일&quot; &quot;파일&quot;을 클릭, 메뉴 표시 줄로 이동합니다. </li></올&gt; </li><li> 각 ROI의 각 섹션에 대해 두받지 평가자의 (계수의 상관 관계를 이용하여) 그 간 평가자의 신뢰성을 확인 항상 0.8를 초과합니다. </li></ol> 6. 통계 <ol><li> 일 1, 2, 3, 4 (69)의 당질 섭취를 비교 한 회 반복 측정을 변동 (ANOVA)의 1 방향 분석을 사용하여 처음 네 일 기준 사카린 섭취를 평가한다. </li><li> 무작위 블록 2 웨이 ANOVA 69를 사용하여 여섯 그룹의 테스트 섭취 (5 일)과 사카린 섭취량 (4 일)를 비교합니다. </li><li> 개별 심각한 영향 69을 결정하기 위해 Tukey에 비교 하였다 (p &lt;0.05)를 사용합니다. </li><li> 간 평가자의 신뢰성을 결정하고 공통 관찰자의 카운트를 사용한다. </li><li> 각 사이트 69 세 대표 조각의 평균 C-FOS 계산됩니다. <ol><li> 여섯 용액 (3.5 % 옥수수 오일, 8 % 글루코스, 과당 8 %, 0.2 %, 맛 사카린, XA의 섭취에 의해 유도 된 C-FOS 활성화의 1 웨이 ANOVA를 수행윤부 주위의 mPFC 69 nthan 껌 제어 및 물). </li><li> infralimbic mPFC, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY, 중앙 cortico-중간 AMY, VTA와 등쪽 선조체의 여섯 그룹의 반복 병렬 분석. 개별 심각한 영향 69을 나타 내기 위해 Tukey에 비교 하였다 (p &lt;0.05)를 사용합니다. </li></ol></li><li> 그 현탁 제의 물 섭취량 및 섭취, 산탄 검 모두 옥수수 기름 섭취를 비교합니다. 물 섭취와 비 영양 감미료, 사카린의 섭취 모두 과당과 포도당 섭취를 비교합니다. </li><li> 사이트의 각 솔루션 섭취와 C-FOS 활성화 사이에 상당한 관계가 페로 니 r에 상관 관계 (P &lt;0.05)을 사용하여 관찰되었다 여부를 설정합니다. <ol><li> 체계적으로 3.5 % 옥수수 기름 그룹의 각 동물에 대한 윤부 주위와 infralimbic 사전 전두엽 피질에서 C-FOS 수를 비교합니다. </li><li> 여섯 사이트의 각 쌍의 체계적 병렬 분석을 반복 (VTA, 등쪽 선조체, infralimBIC mPFC, 윤부 주위의 mPFC 3.5 % 옥수수 기름, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY, 중앙 cortico-중간 AMY). </li><li> 다른 다섯 실험 흡입 조건 (8 % 포도당, 8 % 과당, 0.2 % 맛 사카린, 산탄 검 제어 및 물)에 대한이 여섯 사이트 체계적으로 병렬 분석을 반복합니다. </li></ol></li><li> 용액 상태 내에 동일 동물 솔루션간에 및 페로 니를 사용하여 각 용액에서 C-FOS 활성화 사이에 상당한 관계를 결정하여 전체 사이트를 평가 하였다는 사실을 활용은 상관 관계 (p &lt;0.05) r에. </li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없습니다.

이 연구의 목적은 소스 (VTA)과 전뇌 투사 대상 DA 보상 관련 뉴런의 (NAC, AMY, mPFC)을 동시에 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 활성화 된 경우 휴대 C-FOS 기술을 사용하여 결정하는 것이 었습니다 . 본 연구는 이전에 발표 된 연구 (69)의 프로토콜에 대한 상세한 설명이다. 그것은 VTA에서, prelimbic 및 infralimbic mPFC의 NAC의 핵심과 쉘과 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY뿐만 아니라 등쪽 선조체에 주요 투...

뇌의 도파민 (DA)를 통해 맛이 설탕의 섭취 중앙 응답에 관련 된 제안 쾌락 1, 2, 3, 노력과 관련된 3과 행동의 4,5 메커니즘을 습관 기반. 이러한 효과에 연루 차 DA 경로는 복부 피개 영역 (VTA)에서 유래하고, 핵 중격 의지 (NAC) 코어와 쉘의 기저 및 중앙 cortico-내측 편도 (AMY) 및 prelimbic 및 infralimbic 중간에 프로젝트 전두엽 피질 (mPFC) (리뷰 6,7 참조). VTA는 자당 섭취 8,9에 연루되었으며, DA 릴리스는 NAC 10-15, AMY 16, 17 및 mPFC 18 ~ 20에 다음과 설탕 섭취를 관찰된다. 지방 섭취는 또한 DA NAC (21)를 해제 자극하고, 등쪽 선조체 (미상 - 피질)에 또 다른 DA-풍부한 투사 영역은 DA-매개 22, 23 먹이와 연결되었습니다. 켈리 24-27이 여러 프로젝트 제안이 DA-중재 시스템의 이온 영역은 광범위하고 친밀한 상호 28-34을 통해 통합과 상호 작용하는 분산 두뇌 네트워크를 형성했다. 당 35-37과 지방 38-40의 섭취를 줄일 DA D1 및 D2 수용체 길항 물질의 능력에 더하여, DA 시그널링은 당 및 조건부 맛 선호도를 생성하기 위해 지방 (CFP)의 기능을 매개에 관여 한 41- 46. NAC, AMY 또는 mPFC 47-49로 DA D1 수용체 길항제의 Microinjections는 위장 내 포도당에 의해 유도 CFP 취득을 제거한다. mPFC에 DA D1이나 D2 중 하나 수용체 길항제의 microinjections은 과당 CFP (50)의 획득을 제거하는 반면, 인수 및 과당 CFP의 발현은 차등 NAC 및 AMY (51, 52)의 DA 길항제에 의해 차단된다. 는 C-FOS 기술 (53, 54)는 신경 activatio을 조사하기 위해 사용되어왔다n은 맛 섭취와 신경 활성화에 의해 유도. 용어 &quot;C-FOS 활성화&quot;원고 전반에 걸쳐 사용되며, 운영 체제는 신경 세포의 탈분극 동안 C-FOS를 증가 전사에 의해 정의된다. 자당 섭취는 NAC 55-57 중, VTA뿐만 아니라 쉘 아니라 코어 중앙 AMY 핵에 FOS 같은 면역 (FLI)를 증가. 가짜 먹이 쥐에서 자당 섭취하는 반면 크게 AMY와 NAC에 FLI 증가가 아닌 VTA (58), 위장 자당이나 포도당 주입 크게 NAC 및 AMY 59, 60의 중앙 및 기저 핵에 FLI 증가했다. 예약 차우 액세스 자당의 반복 첨가는 NAC 쉘 및 코어 (61)뿐만 아니라 mPFC에 FLI 증가했다. 수크로오스 농도 시프트 패러다임 가장 FLI 증가는 기저 AMY과 NAC 발생 밝혀 아닌 VTA 62. 다음은 에어컨, 설탕 관련 자연 rewa의 소멸번째 행동은 기저 AMY와 NAC (63)에 FLI 증가했다. 또한, 톤 페어링 설탕 여부는 이후 기저 AMY 64 FLI 수준을 증가 톤의 결과. 높은 지방 섭취는 NAC 및 mPFC 사이트 65-67에서 FLI 증가했다. 이전에 인용 된 연구의 대부분은 보상 관련 분산 뇌 네트워크 24-27의 식별에 대한 정보를 제공하지 않는 하나의 사이트에서 C-FOS 활성화에 설탕과 지방이 효과를 조사 하였다. 또한, 연구의 대부분은 또한 상대 (기저 및 중앙 cortico-중간) NAC (코어와 쉘), 에이미와 mPFC의 하위 영역의 기여를 서술하지 않았다 (prelimbic 및 infralimbic) 잠재적으로 검사 할 수있는 C-68에 Fos 매핑 우수한 공간적 단일 세포 분석을 이용. 우리의 실험실 (69)는 최근 VTA DA 경로와 그 프로에서 C-FOS 활성화와 동시에 측정 변경을 사용이 켜졌 영역 (NAC, AMY 및 mPFC) 쥐의 지방과 당분의 소설 섭취 후. 본 연구는 동시에 차등 NAC, AMY의 하위 영역에 FLI을 활성화할지 여부 급성 여섯 가지 솔루션에 노출 (옥수수 기름, 포도당, 과당, 사카린, 물, 지방 유제 제어) 분석 절차 및 방법 론적 단계에 대해 설명합니다, mPFC뿐만 아니라 등쪽 선조체. 차이점이 동시 검출에 각 사이트 및 결정에 FLI에 심각한 영향의 확인을 허용할지 여부함으로써 분산 뇌 네트워크 24-27에 대한 지원을 제공하는 관련 사이트의 변화와 상관 하나의 특정 사이트의 변화. 시험이 절차는 VTA의 prelimbic 및 infralimbic mPFC의 NAC의 핵심과 쉘, 그리고 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY)뿐만 아니라 등쪽 선조체 여부를 조정 디스플레이 것이고, 구강, 무조건 섭취 후 동시 FLI 활성화 글루코스 (8 %), 과당 (8 %), 옥수수 기름 (3.5 %) 및 ​​사카린 (0.2 %) 용액.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:273px;">Equipment</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:19px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>CD-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wire Mesh Cages</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>30-Cage rack</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat Chow</td>
			<td>PMI Nutrition International</td>
			<td>5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taut Metal Spring</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat Weighing Scale</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nalgene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>10-0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber Stopper</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal Sippers</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saccharin</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>82385-42-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kool-Aid, Cherry</td>
			<td>Kool-Aid</td>
			<td>Commerical</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kool-Aid, Grape</td>
			<td>Kool-Aid</td>
			<td>Commercial</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fructose</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corn Oil</td>
			<td>Mazzola</td>
			<td>Commerical</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xanthan Gum</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>11138-66-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sliding Microtome</td>
			<td>Microm International</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neurolucida Camera</td>
			<td>MBF Bioscience</td>
			<td colspan="2">Software application</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gelatin-coated Slides</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>12-550-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover glass</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>12-545-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Golden Nylon Brushes</td>
			<td>Loew-Cornell&#160;</td>
			<td>2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Natural Hair Sable&#160;</td>
			<td>Loew-Cornell&#160;</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 Well Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 Well Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1L Pyrex bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1395-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue insert (tissue strainer)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E10 for 1-10ul&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E100 for 20-100ul</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E200 for 50-200ul</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td colspan="2">E1000 for 100-1000ul</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td colspan="2">E5000 for 1000-5000ul&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips .1-10ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips 5-200ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips 500-5000ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blade Vibroslice 100</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>BLADE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPX Mounting Medium&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy&#160;</td>
			<td>13510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15mL centrifuge tubes</td>
			<td>Biologix Research Co.</td>
			<td>10-0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Slide Boxes</td>
			<td>Biologix Research Co.</td>
			<td>41-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Orbital Shaker&#160;</td>
			<td>Madell Corporation&#160;&#160;</td>
			<td>ZD-9556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">weigh boats&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">5mL disposable pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-5AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Stereo Investigator Software</td>
			<td>Micro Bright Field</td>
			<td colspan="2">Software application</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Granular</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phophate Monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S468-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate Diphasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrogen Peroxide&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H324-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SafeClear II&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-044-192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal Goat Serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ABC Kit Peroxidase Standard</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-cFos (Ab-5) Rabbit</td>
			<td>EMD chem/Cal Biochem</td>
			<td>PC38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X 100</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>X-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3,3&#39; diaminobenzidine tetra hydrochloride&#160;</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D5905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Primary TH anti body</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Euthosol</td>
			<td>Virbac AH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous detection of c-fos activation from mesolimbic and mesocortical dopamine reward sites following naive sugar and fat ingestion in rats

이 연구는 쥐의 뇌의 도파민 (DA) 경로에 지방과 설탕의 소설 섭취의 효과를 평가하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용합니다. 당분과 지방의 섭취는 타고난 매력뿐만 아니라 학습 환경에 의해 매개된다. 뇌의 도파민, 특히 메조 - 변연계와 복부 피개 영역 (VTA)에서 메조 - 대뇌 피질 돌기,이 무식하고 배운 응답 모두에 관여하고있다. 여러 사이트와 송신기 / 펩티드 시스템 상호 뇌 상기 분산 네트워크의 개념은 기호성 식사량을 매개하는 것이 제안되었지만, 그러한 실험적 작업을 보여주는 제한된 증거가있다. 따라서, 설탕 섭취는 DA 출시 및 증가 C-FOS와 같은 핵 중격 의지 (NAC), 편도체 (AMY)를 포함하여 개인 VTA DA 투영 영역에서 면역 (FLI)과 전두엽 피질 (mPFC)뿐만 아니라 등쪽 선조체을 내측을 이끌어. 이 사이트에 선택적 DA 수용체 길항제 또한, 중앙 관리설탕이나 지방에 의해 유도 조절 맛을 환경 설정의 수집 및 발현을 감소 차등이야. 에 의해 하나의 방법이 사이트는 평가를 동시에하는 것입니다 설탕이나 지방 섭취에 대한 응답으로 분산 두뇌 네트워크로 상호 작용 여부를 결정하는 여부 VTA 및 주요 mesotelencephalic의 DA 투사 영역 (prelimbic와 NAC의 infralimbic mPFC, 코어와 쉘, 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY)뿐만 아니라 등쪽 선조체는 조정 디스플레이 것이며, 옥수수 기름 (3.5 %), 포도당 (8 %), 과당 (8 %)과 사카린의 경구, 무조건 섭취 후 동시 FLI 활성화 (0.2 %) 솔루션을 제공합니다. 이 방법은 설치류의 맛이 음식의 섭취에 보상 관련 학습을 연구하기 위해 관련 뇌 사이트에서 동시에 휴대 C-FOS 활성화를 사용하는 가능성을 식별 성공적으로 첫 번째 단계입니다.

아래에 설명 된 모든 대표적인 결과는 이전에 69를 발표되었으며,이 기술의 효과를 나타내는에서 &quot;개념의 증거&quot;를 지원하기 위해 여기에 다시 표시됩니다. 솔루션 섭취 기준 사카린 섭취에 유의 한 차이는 모든 동물 (F (3,108) = 57.27, P &lt;0.001) 섭취와 (주 1 처음 네 일 동안 관찰되었다 : 1.3 (0.2 ±...

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Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats

이 연구의 목적은 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 도파민 경로 및 터미널 사이트에서 동시에 변화를 측정하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용하여 신뢰할 수있는 면역 조직 기술을 서술하여 보상 관련 분산 뇌 네트워크를 식별하는 것입니다.

흰쥐의 나이브 설탕과 지방 섭취에 따라 변연계와 Mesocortical 도파민 보상 사이트에서 C-에 Fos 활성화의 동시 검출

This study uses cellular c-fos activation to assess effects of novel ingestion of fat and sugar on brain dopamine (DA) pathways in rats. Intakes of sugars ...

simultaneous-detection-c-fos-activation-from-mesolimbic-mesocortical

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.0K 조회수.  CUNY, New York, NY.  이 연구의 목적은 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 도파민 경로 및 터미널 사이트에서 동시에 변화를 측정하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용하여 신뢰할 수있는 면역 조직 기술을 서술하여 보상 관련 분산 뇌 네트워크를 식별하는 것입니다. 

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Simultaneous fMRI and Electrophysiology in the Rodent Brain

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in which functional MRI data and in vivo intracortical recording can be performed simultaneously. The combination of MRI and electrical recording is technically challenging because the electrodes used for recording distort the MRI images and the MRI acquisition induces noise in the electrical recording. To minimize the mutual interference of the two modalities, glass microelectrodes were used rather than metal and a noise removal algorithm was implemented for the electrophysiology data. In our studies, two microelectrodes were separately implanted in bilateral primary somatosensory cortices (SI) of the rat and fixed in place. One coronal slice covering the electrode tips was selected for functional MRI. Electrode shafts and fixation positions were not included in the image slice to avoid imaging artifacts. The removed scalp was replaced with toothpaste to reduce susceptibility mismatch and prevent Gibbs ringing artifacts in the images. The artifact structure induced in the electrical recordings by the rapidly-switching magnetic fields during image acquisition was characterized by averaging all cycles of scans for each run. The noise structure during imaging was then subtracted from original recordings. The denoised time courses were then used for further analysis in combination with the fMRI data. As an example, the simultaneous acquisition was used to determine the relationship between spontaneous fMRI BOLD signals and band-limited intracortical electrical activity. Simultaneous fMRI and electrophysiological recording in the rodent will provide a platform for many exciting applications in neuroscience in addition to elucidating the relationship between the fMRI BOLD signal and neuronal activity.

We have developed a method for simultaneous functional magnetic resonance imaging and electrophysiological recording in the rodent brain, providing a platform for the investigation of the relationship between neural activity and the blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signal.

쥐 두뇌에 동시 fMRI와 전기 생리학

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in ...

연구

신경과학

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after injury (Teng et al., 2006). It is recognized that transcriptional programs essential for neurite and axonal outgrowth are 
reactivated upon injury in the PNS (Makwana et al., 2005). However the tools available to analyze neuronal gene regulation in vivo are limited and 
often challenging.
The dorsal root ganglia (DRG) offer an excellent injury model system because both the CNS and PNS are innervated by a 
bifurcated axon originating from the same soma. The ganglia represent a discrete collection of cell bodies where all transcriptional events occur, 
and thus provide a clearly defined region of transcriptional activity that can be easily and reproducibly removed from the animal. Injury of nerve 
fibers in the PNS (e.g. sciatic nerve), where axonal regeneration does occur, should reveal a set of transcriptional programs that are distinct from 
those responding to a similar injury in the CNS, where regeneration does not take place (e.g. spinal cord). Sites for transcription factor binding, 
histone and DNA modification resulting from injury to either PNS or CNS can be characterized using chromatin immunoprecipitation (ChIP). 
Here, we describe a ChIP protocol using fixed mouse DRG tissue following axonal injury. This powerful combination provides a means for characterizing the pro-regeneration chromatin environment necessary for promoting axonal regeneration.

We present a method for chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury. The approach can be used to identify specific transcription factor binding sites and epigenetic modification of histone and DNA important for the regeneration of injured axons in both the peripheral and central nervous system.

Axonal 상해 다음 도설 루트 신경 조직에서 염색질의 Immunoprecipitation

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated. Thus, simultaneous recordings of neuronal activity and behavior are essential to correlate brain activity to behavior. For such behavioral analyses, the fruit fly, Drosophila melanogaster, allows us to incorporate genetically encoded calcium indicators such as GCaMP1, to monitor neuronal activity, and to use sophisticated genetic manipulations for optogenetic or thermogenetic techniques to specifically activate identified neurons2-5. Use of a thermogenetic technique has led us to find critical neurons for feeding behavior (Flood et al., under revision). As a main part of feeding behavior, a Drosophila adult extends its proboscis for feeding6 (proboscis extension response; PER), responding to a sweet stimulus from sensory cells on its proboscis or tarsi. Combining the protocol for PER7 with a calcium imaging technique8 using GCaMP3.01, 9, I have established an experimental system, where we can monitor activity of neurons in the feeding center &#x2013; the suboesophageal ganglion (SOG), simultaneously with behavioral observation of the proboscis. I have designed an apparatus ("Fly brain Live Imaging and Electrophysiology Stage": "FLIES") to accommodate a Drosophila adult, allowing its proboscis to freely move while its brain is exposed to the bath for Ca2+ imaging through a water immersion lens. The FLIES is also appropriate for many types of live experiments on fly brains such as electrophysiological recording or time lapse imaging of synaptic morphology. Because the results from live imaging can be directly correlated with the simultaneous PER behavior, this methodology can provide an excellent experimental system to study information processing of neuronal networks, and how this cellular activity is coupled to plastic processes and memory.

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, extends its proboscis for feeding, responding to a sugar stimulus from its proboscis or tarsus. I have combined observations of the proboscis extension response (PER) with a calcium imaging technique, allowing us to monitor the activity of neurons in the brain, simultaneously with behavioral observation.

확인된 뉴런과 먹이 행동에서 칼슘 신호의 동시 녹화 Drosophila melanogaster</em

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated.  Thus, ...

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can produce a rewarding effect that strengthens action-outcome associations and reinforces future behavior directed at obtaining these foods. Increasing evidence that the rewarding effects of energy-dense foods play a profound role in overeating and the development of obesity has heightened interest in studying the genes, molecules and neural circuitry that modulate food reward1,2. The rewarding impact of different stimuli can be studied by measuring the willingness to work to obtain them, such as in operant conditioning tasks3. Operant models of food reward measure acquired and voluntary behavioral responses that are directed at obtaining food. A commonly used measure of reward strength is an operant procedure known as the progressive ratio (PR) schedule of reinforcement.4,5 In the PR task, the subject is required to make an increasing number of operant responses for each successive reward. The pioneering study of Hodos (1961) demonstrated that the number of responses made to obtain the last reward, termed the breakpoint, serves as an index of reward strength4. While operant procedures that measure changes in response rate alone cannot separate changes in reward strength from alterations in performance capacity, the breakpoint derived from the PR schedule is a well-validated measure of the rewarding effects of food. The PR task has been used extensively to assess the rewarding impact of drugs of abuse and food in rats (e.g.,6-8), but to a lesser extent in mice9. The increased use of genetically engineered mice and diet-induced obese mouse models has heightened demands for behavioral measures of food reward in mice. In the present article we detail the materials and procedures used to train mice to respond (lever-press) for a high-fat and high-sugar food pellets on a PR schedule of reinforcement. We show that breakpoint response thresholds increase following acute food deprivation and decrease with peripheral administration of the anorectic hormone leptin and thereby validate the use of this food-operant paradigm in mice.

The present report details the protocol employed to measure the rewarding effects of high-fat food in mice using a progressive ratio operant conditioning task.

프로 그레시브 - 비율 쥐의 Palatable 높은 지방과 높은 설탕 음식에 대한 응답

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

Single Cell Measurement of Dopamine Release with Simultaneous Voltage-clamp and Amperometry

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is terminated by diffusion2-3, extracellular enzymes4, and membrane transporters5. The dopamine transporter, located in the peri-synaptic cleft of dopamine neurons clears the released amines through an inward dopamine flux (uptake). The dopamine transporter can also work in reverse direction to release amines from inside to outside in a process called outward transport or efflux of dopamine5. More than 20 years ago Sulzer et al. reported the dopamine transporter can operate in two modes of activity: forward (uptake) and reverse (efflux)5. The neurotransmitter released via efflux through the transporter can move a large amount of dopamine to the extracellular space, and has been shown to play a major regulatory role in extracellular dopamine homeostasis6. Here we describe how simultaneous patch clamp and amperometry recording can be used to measure released dopamine via the efflux mechanism with millisecond time resolution when the membrane potential is controlled. For this, whole-cell current and oxidative (amperometric) signals are measured simultaneously using an Axopatch 200B amplifier (Molecular Devices, with a low-pass Bessel filter set at 1,000 Hz for whole-cell current recording). For amperometry recording a carbon fiber electrode is connected to a second amplifier (Axopatch 200B) and is placed adjacent to the plasma membrane and held at +700 mV. The whole-cell and oxidative (amperometric) currents can be recorded and the current-voltage relationship can be generated using a voltage step protocol. Unlike the usual amperometric calibration, which requires conversion to concentration, the current is reported directly without considering the effective volume7. Thus, the resulting data represent a lower limit to dopamine efflux because some transmitter is lost to the bulk solution.

The amperometric technique measures dopamine release from a single cell by detecting the oxidative current produced by spontaneous dopamine oxidization. Simultaneous voltage clamp and amperometry methodology reveal the mechanistic relationship between the overall "activity" of dopamine transporter and the regulatory role of this activity on the reverse transport of dopamine.

동시 전압 클램프 및 Amperometry과 도파민 릴리스의 단일 세포 측정

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is ...

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five decades of inquiry into the molecular deficiencies associated with dopamine regulation. The majority of these inquiries of dopamine regulation in the brain focus upon the molecular basis for its regulation in the terminal field regions of the nigrostriatal and mesoaccumbens pathways; striatum and nucleus accumbens. Furthermore, such studies have concentrated on analysis of dopamine tissue content with normalization to only wet tissue weight. Investigation of the proteins that regulate dopamine, such as tyrosine hydroxylase (TH) protein, TH phosphorylation, dopamine transporter (DAT), and vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) protein often do not include analysis of dopamine tissue content in the same sample. The ability to analyze both dopamine tissue content and its regulating proteins (including post-translational modifications) not only gives inherent power to interpreting the relationship of dopamine with the protein level and function of TH, DAT, or VMAT2, but also extends sample economy. This translates into less cost, and yet produces insights into the molecular regulation of dopamine in virtually any paradigm of the investigators' choice.
We focus the analyses in the midbrain. Although the SN and VTA are typically neglected in most studies of dopamine regulation, these nuclei are easily dissected with practice. A comprehensive readout of dopamine tissue content and TH, DAT, or VMAT2 can be conducted. There is burgeoning literature on the impact of dopamine function in the SN and VTA on behavior, and the impingements of exogenous substances or disease processes therein 1-5. Furthermore, compounds such as growth factors have a profound effect on dopamine and dopamine-regulating proteins, to a comparatively greater extent in the SN or VTA 6-8. Therefore, this methodology is presented for reference to laboratories that want to extend their inquiries on how specific treatments modulate behaviour and dopamine regulation. Here, a multi-step method is presented for the analyses of dopamine tissue content, the protein levels of TH, DAT, or VMAT2, and TH phosphorylation from the substantia nigra and VTA from rodent midbrain. The analysis of TH phosphorylation can yield significant insights into not only how TH activity is regulated, but also the signaling cascades affected in the somatodendritic nuclei in a given paradigm.
We will illustrate the dissection technique to segregate these two nuclei and the sample processing of dissected tissue that produces a profile revealing molecular mechanisms of dopamine regulation in vivo, specific for each nuclei (Figure 1).

Dopamine is distinctly regulated in the midbrain nuclei, which contain the cell bodies and dendrites of the dopamine neurons. Here we describe a dissection and sample-handling approach to maximize results, and thus conclusions and insights, on dopamine regulation in the midbrain nuclei of the substantia nigra (SN) and ventral tegmental area (VTA) in rodents.

Substantia Nigra 및 복부 Tegmental 지역의 도파민 규정의 종합적인 프로파일

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

동시<em&gt; 생체</em두 망막의&gt; 기능 테스트로<em&gt; 생체</em&gt; 전위도 시스템

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the electrical responses of the retina to light stimulation, while the VEP measures the corresponding functional integrity of the visual pathways from the retina to the primary visual cortex following the same light event. The ERG waveform can be broken down into components that reflect responses from different retinal neuronal and glial cell classes. The early components of the VEP waveform represent the integrity of the optic nerve and higher cortical centers. These recordings can be conducted in isolation or together, depending on the application. The methodology described in this paper allows simultaneous assessment of retinal and cortical visual evoked electrophysiology from both eyes and both hemispheres. This is a useful way to more comprehensively assess retinal function and the upstream effects that changes in retinal function can have on visual evoked cortical function.

This protocol describes simultaneous measurement of electroretinogram and visual evoked potentials in anesthetized rats.

전위도의 동시 녹화 및 마취 된 흰쥐의 비주얼 사건 관련 전위

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) neurotransmission is strongly associated with several central nervous system-associated diseases such as Parkinson&#39;s disease, attention-deficit-hyperactivity disorder and drug addiction1,2,3,4. Delineating disease mechanisms involving DA imbalance is critically dependent on animal models to mimic aspects of the diseases, and thus protocols that assess specific parts of the DA homeostasis are important to provide novel insights and possible therapeutic targets for these diseases.
Here, we present two useful experimental protocols that when combined provide a functional read-out of the DAergic system in mice. Biochemical and functional parameters on DA homeostasis are obtained through assessment of DA levels and dopamine transporter (DAT) functionality5. When investigating the DA system, the ability to reliably measure endogenous levels of DA from adult brain is essential. Therefore, we present how to perform high-performance liquid chromatography (HPLC) on brain tissue from mice to determine levels of DA. We perform the experiment on tissue from dorsal striatum (dStr) and nucleus accumbens (NAc), but the method is also suitable for other DA-innervated brain areas.
DAT is essential for reuptake of DA into the presynaptic terminal, thereby controlling the temporal and spatial activity of released DA. Knowing the levels and functionality of DAT in the striatum is of major importance when assessing DA homeostasis. Here, we provide a protocol that allows to simultaneously deduce information on surface levels and function using a synaptosomal6 DA uptake assay.
Current methods combined with standard immunoblotting protocols provide the researcher with relevant tools to characterize the DAergic system.

Synaptosomal dopamine uptake and high-performance liquid chromatography analysis represent experimental tools to investigate dopamine homeostasis in mice by assessing the function of the dopamine transporter and levels of dopamine in striatal tissue, respectively. Here we present protocols to measure dopamine tissue content and assess the functionality of the dopamine transporter.

고성능 액체 크로마토그래피 분석 및 Synaptosomal 도파민 통풍 관의 사용에 의해 쥐에서 Dopaminergic 항상성의 평가

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...