이 작품은 존 G. 마리 스텔라 케네디 기념 재단 (보조금 # 0727033)과 흑색 종 연구 얼라이언스의 자선 기부금에 의해 지원되었다. 저자는 박사 이그나시오 Wistuba 박사 빅터 Prieto의 MD 앤더슨 암 센터의 부서뿐만 아니라, 조직 분포 및 수집을 조정 및 중개 연구를 용이하게하기 위해 텍사스 MD 앤더슨 암 센터 기관 조직 은행 (ITB)의 대학 감사드립니다 병리학 및 흑색 종 달 총 프로그램. 마지막으로, 저자는 흑색 종에 의해 영향을받는 모든 환자와 가족을 인정하고 싶습니다.

윤리 문 :이 프로토콜은 텍사스 MD 앤더슨 암 센터의 대학에 의해 승인됩니다. 1. 표본 조달 <ol><li> 잉여 종양 및 관련 정상 조직 10-12에서 연구 조직 샘플을 수집합니다. 젖은 얼음에 보관 검체는자가 분해를 방지 할 수 있습니다. </li><li> 병리학 적 진단을 용이하게하기 위해 모든 조직, 의료 기기 및 필요한 검사에 대한 병리학 부서 수술 중 제거 이물질을 보냅니다. </li><li> 적용 할 수있는 연구 조직 은행의 정책 및 절차에 따라 연구에 할당 된 조직을 처리합니다. 참고 : Biospecimen 컬렉션 병리학의 조정을 포함, 병리학 &#39;조수, histotechnologists 및 조직 조달 전문가. </li></ol> 2. 병리학 품질 보증 (QA) <ol><li> 완료하고 초기 품질 보증 조치로 환자 기록을 확인하고 진단 PA를 검토 병리학에 문의tient 레코드 (병리학 리포트, 조직 슬라이드 등) 및 조직 샘플. 등이 biorepository 모범 사례 10-12에 따른다 등 종양의 비율, 괴사, 조직 종양 인터페이스, 같은 관심의 형태 학적 특성에 대한 판사의 조직 샘플. </li><li> 초기 검토 후, biospecimen의 숙박의 전체 길이 중 biorepository 데이터와 연구 샘플의주기적인 검토를 수행. </li><li> 샘플 및 기타 병리학 적 조사 결과로부터 링크와 주석 및 biorepository 독점 소프트웨어 시스템을 통해 연구원이 데이터를 제공한다. 주 : QA 프로세스 biorepository 동작 임상 기술적 측면 모두의 무결성을 보장한다. </li><li> 확인하고 임상 사용을 위해 샘플을 특징 짓는 유전 및 분자 테스트를 수행합니다. </li><li> 수집 및 실험실 실험 샘플을 사용하고 연구자의 의견을 기반으로 데이터를 분석 할 수 있습니다. 선로바코드 기술을 사용하여 샘​​플. 이 전자 추적 시스템은 biorespository 모범 사례 10-12에서 주장한다. </li></ol> 3. 표본 / 조직 처리 <ol><li> 항상 그것의 자연 환경으로부터 조직 샘플의 추출에 의해 유도 된 변화를 제한하기 위해, 가능한 한 빨리 신선한 조직 젖은 얼음 표본, 및 프로세스를 저장한다. 종양 정상적인 프로세스 정합 및 종양 조직 샘플을 별도의 교차 오염을 방지하기 위해. 주 : 연구 프로토콜에 근거는 biospecimen 처리 매체의 하나 이상의 유형에 시험편의 컬렉션을 포함 할 수있다. </li><li> 프로세스를 시작하기 전에, 멸균 페트리 배양 접시, 메스뿐만 아니라, 조직 처리 용 바늘 또는 집게를 준비한다. 튜브가 준비 표지 및 샘플 처리 (그림 2)의 시간을 제한하기 위해 배치되어 있는지 확인합니다. </li><li> 이러한 환자 이름, 번호, 치료, 날짜 등 모든 관련 조직 정보,수술 및 연구에 적합한 수있는 바와 같이, 다른 관련 정보는, 기관 조직 데이터베이스에 용이하게 접근해야한다. 제한된 환자 정보는 종이 또는 스프레드 시트 형태로 실험실에서 개최한다. 참고 :. 만 연구 즉의 성격과 관련 biospecimen 정보를 수집, 질병 별 정보 등 기본적인 생물 의학 연구, 임상 연구, 중개 연구는 biorepository 직원은 현재 문학이 필요하다고 인정하는 데이터를 관리하는 조직을 수집해야 적절한 진단과 의미있는 연구를 보장합니다. 하지만, 여기에는 종양 등급과 암 스테이징 정보에 한정되지 않는다. </li><li> 각 유형의 분석뿐만 아니라, 절개의 위치에 대해 요구되는 조직 절편의 크기를 결정하기 위해, 미리 원하는 모든 후속 실험을 계획한다. 불가능 비록 이상적으로, 모든 분석은 조직 heterogenei을 고려하기 위해 전체 조직 절편을 대표한다타이 및 다운 스트림 분석의 한계 바이어스. 그림 2에 도시 된 바와 같이 사전에 필요한 모든 항목을 배치합니다. </li><li> 표면에 평평하게 열려있는 페트리 배양 접시에서 조직 표본을 놓습니다. 참고 : 만 확인 된 샘플을 처리하고 확인 된 건강 데이터를 검토 할 수 biorepository 직원에게 권한을 부여 할 수 있습니다. 연구자는 IRB에 의해 규제로 서명 된 정보를 동의에 의해 허용하고 만 환자 식별자에 액세스해야합니다. 모든 시편은 적절하게 표시해야하며, 최소한의 고유 한 조직 식별 번호 및 조직 유형에 포함해야한다. HIPAA 규정에 따라, 라벨의 모든 건강 정보를 포함하지 마십시오. </li><li> 그 구조 및 치수의 더 나은 이해를 얻기 위해, 모든 각도에서 샘플을 검사한다. 바늘 접시의 바닥에 샘플을 핀과 최대 규모의 가장 대표적인 축을 따라 조직을 양분로 진행합니다. </li><li> 조직의 작은 조각을 잘라 멸균 1.5 ml의 MICR에 배치RNA 안정화 용액 1ml를을 포함 ocentrifuge 튜브. 이 샘플은 프로세스의 나머지 얼음에두고 필요할 때까지 4 ℃에서 저장 될 수있다. 참고 : RNA로 작업 할 때 장갑을 항상 착용해야하고, RNAse가없는 필터 팁 저하와 RNA 오염의 기회를 제한하는 데 사용되어야한다. </li><li> 페트리 배양 접시의 뚜껑을 열고 미리 라벨링 생검 카세트를 배치합니다. 3-5mm보다 더 두꺼운 조직의 조각을 잘라 카세트로 전송. 72 시간의 최소 10 %에서 카세트 중성 포르말린 (NBF)를 놓습니다. 파라핀 매립하기 전에 장기간 저장을 위해 70 % 에탄올에 카세트를 옮긴다. 참고 : 카세트 라벨은 연필 또는 다른 라벨을 지워집니다 처리 중 자일 렌의 사용을 권장 마커로 수행되어야한다. </li><li> 조직의 조각을 잘라 및 조직 금형에 넣습니다. 최적 절단 온도 (OCT) 화합물에 조직 절편을 커버하고, 즉시 동결냉동 절편을 위해 -20 ° C에서. 이러한 조직 절편은 저온 절편 위해 준비 될 때까지 -20 ℃에서 저장 될 수있다. </li><li> 하나 잘라 또는 조직의 많은 조각 및 MACS 완충액을 함유하는 50 ㎖ 튜브 (1X 인산 완충 생리 식염수 (PBS), 0.5 % 소 태아 혈청 (FBS), 2 mM의 에틸렌 디아민 산 (EDTA)) 세포 계측법 분석 후속 유동로 전송할 . 유동 세포 계측법에 필요한 경우 세포가 종양 탈퇴, 세포의 고정과 투과성으로시 손실 될 수 있으므로, 큰 샘플은 바람직 할 수있다. 일반적으로,이 섹션은 단부에서 취할 수 있고, 일단 다른 모든 부분이 처리되어있다. 남은 대표적 종양 샘플을 유동 세포 계측법에 사용될 수있다. 선택적으로,이 관은 4 ° CO 저장 / N 또는 세포 현탁액 (단계 4 참조 - 유세포 염색)로 유세포 염색 직후 분해에 사용될 수있다. </li><li> 0.5 mm X 0.5 mm의 최대 크기보다 조각 크지로 조직의 나머지 부분을 잘라 극저온로 전송액체 질소에 즉시 냉동을위한 유리 병. 미래 분석 및 공동 목적을 위해 이러한 스냅 냉동 샘플을 사용할 수있다. 참고 : 직접 접촉은 심각한 부상을 입을 수있는 액체 질소로 작업 할 때 여분의주의를 기울여야합니다. 눈은 측면 방패 또는 얼굴 가리개와 안전 안경을 보호해야합니다. 극저온 장갑도 튀는 직접 접촉에 의한 액체 질소 화상으로부터 보호하기 위해 착용한다. 장갑은 잘 맞지하지만 그들로 빨리해야 액체 질소 시작을 제거 할 수있을만큼 느슨하게해야한다. </li></ol> 4. 유세포 염색 <ol><li> 조직의 균질화 <ol><li> DMEM (40 ㎖)의 DNase I (50 U / ml) 및 콜라게나 제 I (2 ㎎ / ㎖)와 소화 매체를 준비한다. 페트리 접시의 뚜껑에 MACS 버퍼에 신선한 또는 O / N 저장된 종양을 배치하고 소화 매체 잠수함. 주 :. 다른 소화 방법은, 각각의 장점이 존재 (즉, 세포 표면 단백질 EXPression의, 생존). 당신이 원하는 다운 스트림 응용 프로그램에 대한 적절한 방법이 있는지 확인하십시오. </li><li> 종양이 붙여 넣기 같은 질감을 가질 때까지 외부에서 바늘 접시의 바닥 및 절단에 핀 종양, 메스 중심합니다. 누수를 방지하기 위해 플라스틱 백에 50 ㎖ 튜브, 및 시일 장소 종양 믹스 옮긴다. 인큐베이터에 튜브를 전송하고, 225 RPM, 37 ℃, 1 시간에 회전. </li><li> 70μm 셀 스트레이너를 통해 종양 세포 현탁액을 필터. 250 XG, 4 ° C, 5 분 원심 분리기 세포 현탁액. 1 ML의 외과 버퍼 (500 ml의 PBS 1 ml의 0.5 M 재고 EDTA, 10 ML의 FCS 또는 FBS)에 재현 탁 세포 펠렛. </li><li> 혈구를 사용하여 세포를 계수하고 1 × 107 세포 / ml의 농도로 다시 중단. 전송 염색에 대한 96 웰 둥근 바닥 플레이트에 웰 당 100 μL (10 6 세포). </li></ol></li><li> 생존 및 항체 염색법 <ol><li> 각 생존 얼룩 솔루션의 200 μL를 잘 추가하고 섞는다. Incu어둠 속에서 4 ° C에서 30 분, 대한​​ BATE. 250 XG, 4 ° C, 5 분, 그리고 대기음 뜨는에서 세포를 스핀 다운. </li><li> FACS 완충액 200 μL의 표면 항원에 대한 (업체 당) 추천 / 적정 농도로 항체 혼합물을 추가합니다. 어둠 속에서, 4 ° C를 30 분에서 세포를 품어. 250 XG, 4 ° C, 5 분, 그리고 대기음 뜨는에서 세포를 스핀 다운. </li><li> , 외과 버퍼의 200 μL로 세척 250 XG, 4 ° C, 5 분, 그리고 대기음 뜨는에서 세포를 스핀 다운. FACS 완충액 200 μL의 세포를 재현 탁하고 수집 및 분석에 대한 흐름 cytometer로 진행합니다. 참고 : 세포 내 유동 세포 계측법 염색을 수행하는 경우, 단계 4.2.2과 4.2.3 사이의 고정과 투과성으로 단계 및 세포 내 염색을 수행합니다. 사이토 카인 염색법을 수행하는 경우, 셀은 권장 미리 활성화 선행되어야 염색, 모 넨신 및 세포 내 단백질 수송 및 분비 억제제로 활성화 중에 표기수용성 요소의 유지를 보장합니다. 고정 된 세포는 유세포에 어두운 이전에 획득을 4 ° C에서 단기 (일주일)에 저장 될 수있다. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Biology.+Fixing+problems+with+cell+lines.">Cell Biology. Fixing problems with cell lines.</a> Science. 346, 1452-1453 (2014).</li><li>van der Worp, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+animal+models+of+disease+reliably+inform+human+studies.">Can animal models of disease reliably inform human studies.</a> , (2010).</li><li>McCabe, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+disease.">Animal models of disease.</a> Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).</li><li>Woolf, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meaning+of+translational+research+and+why+it+matters.">The meaning of translational research and why it matters.</a> JAMA. 299, 211-213 (2008).</li><li>Brockbank, K. G., Taylor, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Preservation.">Tissue Preservation.</a> Advances in Biopreservation. , 157-159 (2006).</li><li>Bulmer, M., Gilbert, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ethics+of+social+research.">The ethics of social research.</a> Researching social life. , 45-57 (2001).</li><li>Penslar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IRB guidebook. , (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures. 3, (2009).</li><li>Ruffell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+composition+of+human+breast+cancer.">Leukocyte composition of human breast cancer.</a> Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).</li><li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical flow cytometry. , (2005).</li><li>Baker, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+phosphoprotein+as+a+biological+marker+of+tumor+signaling.">Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling.</a> Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).</li><li>Jacobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+processing+considerations+for+detecting+copy+number+changes+in+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).</li><li>Chung, J. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in+tissue+handling+and+processing+that+impact+RNA+obtained+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+procedure+for+protein+extraction+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+for+reverse+phase+protein+arrays.">An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays.</a> Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).</li><li>Feldman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+mRNA+amplification+for+microarray+analysis.">Advantages of mRNA amplification for microarray analysis.</a> Biotechniques. 33, 906-914 (2002).</li><li>Francino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+real-time+PCR+assay+for+diagnosis+and+monitoring+of+canine+leishmaniosis.">Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis.</a> Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).</li><li>Grunberg-Manago, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNA+stability+and+its+role+in+control+of+gene+expression+in+bacteria+and+phages.">Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages.</a> Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).</li><li>Lesnik, E. A., Freier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+thermodynamic+stability+of+DNA,+RNA,+and+DNA:RNA+hybrid+duplexes:+relationship+with+base+composition+and+structure.">Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure.</a> Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).</li><li>MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+and+proteomics.">Protein microarrays and proteomics.</a> Nat Genet. 32, 526-532 (2002).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

궁극적으로, 처리의 방법은 원하는 가설에 의해 결정 (그림 1)을 수행 할 기술적 분석을 예상해야합니다. 다음 섹션에서는 조직 섹션에서 수행 할 수있는 잠재적 인 분석을 설명하는 개요 역할을한다. 그것은 결코 완전한 개요를 의미하지만, 기술을 설명하고 자신의 강점과 약점을 나열하여 가이드 샘플 처리 방법 및 다운 스트림 분석의 선택에 도움을주기위한 것입니다으로하지 않?...

의학 연구는 인간 세포주 및 동물 모델 모두 연구 막대한 이득이다. 세포주 나은 시스템의 구성 요소의 제어뿐만 아니라, 적절한 유기체의 세포의 사용을 허용한다. 세포주는 응답 (1)에 영향을 미칠 수있는 다른 세포, 기질 구성 요소 및 기관의 영향을 요점을 되풀이하지 않을 수 있기 때문에, 더 대표하면서, 건강과 질병에 대한 책임을 질 수 있습니다 메커니즘을 획기적으로 단순화 된 스냅 샷을 제공, 인간 세포에 대한 작업. 반면에, 동물 모델은 인간의 질병 및 유전 적 이질성 재생 전적으로 정확하지 않지만, 대부분의 모델 동물 2,3-에서 전체 시스템의 입력을 허용함으로써 추가 통찰력을 제공. 단점은 제쳐 놓고, 두 방법은 자신의 장점을 가지고 상호 보완 적이다. 그러나, 주요 목표는 전신, 멀티 기관 시스템에서 인간의 세포와 기관, 연구 남아있다. 따라서, 중개 연구는 탁을 가지고더 나은 메커니즘을 기저 질환을 파악하기 위해, 인간의 기관 및 환자에서 추출한 조직의 연구를 촉진 장족의 발전 갖추고 있습니다. 중개 연구함으로써, 몸 전체에서 적절한 세포에서 치료 및 질환의 연구 결과와 동물 세포 일 (4) 사이 모두의 장점을 제공하는 이점을 제공한다. 중개 연구는 결함없이도 없습니다. 인간의 환자에서 수확 표본, 호스트로부터 제거시 즉시 허혈하고 그렇지 않으면 보호 될 수있는 다른 외부 요인을 실시한다. 이 스트레스 유발 분자 유전 학적 변화가 발생하고, 이후의 연구에서 편견의 원인이 될 수 있습니다. 따라서, 많은 노력이 가장 하류 연구 5 장기 및 세포의 무결성을 유지하기 위해 엄격한 방법으로 조직을 추출하고 처리에 투입되었다. 방법 (을)를 선택했을 때 중요한 것은, 미래의 응용 프로그램은 밀접하게 고려되어야한다F 특정 방법은 세포 성분에 유해 할 수 있으므로, 인간의 샘플을 처리하고 다른 사람을 살려주는 동안 신호 전달 경로. 인체 조직을 포함하는 모든 연구, 규제 문제를 해결해야합니다. 터스 키기과 벨몬트 보고서 이후, 생물 의학 연구는 고유의 위험은 종종 피할 수없는 윤리적 딜레마 (6)의 결과와 관련되었다는 사실의 성장 수용이 있었다. 국가 표준의 필요성을 인식하고, 연방 정부는 벨몬트 보고서의 원칙을 유지 (명, 선행, 정의에 대한 존중)하는 수단으로 임상 시험 심사 보드 (IRBs를) 만들었습니다. 모든 기관의 IRB는 연구 참가자를 보호 할 책임이 있습니다 의사, 연구자 및 지역 사회 구성원의위원회이다. 그것은 자발적 동의는 생물 의학 연구의 모든 연구 참가자를 얻을 수 있어야하고,이 동의는 동의 FO에 설명하는 것이<html> RM. 동의서 프로세스 정보 결정은 연구에 등록 또는 가입 상태를 유지할지 여부에 제조 될 수 있도록 참가자에게 적절한 정보를 제공하는 것을 목적으로한다. 이와 관련, 동의서 문서는 좋은 가독성이 있어야 쉽게 표적 집단에 의해 (6 일 ~ 8 학년 읽기 수준) 이해 될 수있다 언어로 작성되어야한다. 강압 또는 부당한 영향의 가능성을 최소화 할 수 있어야하고, 피사체가 참여를 고려할 충분한 시간이 주어져야한다. 참가자는 처벌하지 않고 연구의 과정에서 모든 단계에서 동의를 철회 할 수있는 권리를 행사할 수 있어야합니다. 자발적인 동의서는 연구 주체의 참여를위한 필수 전제 조건이며 또한 7 법적으로 유효하다. 인간의 보호를위한 규정에 따라 과목 21 CFR 50.25 (/45cfr46.html&quot;&gt;http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8), 연구 참가자는 연구의 목적을 통보해야하며, 연구에 참여 절차 참여에 대한 대안, 사회에 대한 가능성이 개인에게 연구의 모든 예측 가능한 위험과 불편 (뿐만 아니라 신체적 상해뿐만 아니라 수, 심리적, 사회적, 경제적 피해, 불편 함, 또는 불편 포함), 혜택, 피사체가 참여 할 것으로 예상되는 시간의 길이, 사람은 참여가 자발적임을 나타내는 문, 질문에 대한 또는 연구 관련 부상이나 응급 상황에 대한 답을 문의하고 참여하는 것을 거부는 정기적으로 임상 치료에 타협으로 어떤 결과 또는 혜택을 상실하지 않습니다 참가자가 다른 권리가 있음을 기밀성과에서 철수하는 오른쪽에있는 피사체의 권리에 관한 마지막으로 문을 그 / 그녀의 진단의 결과로 수신하고어떤 결과없이 언제든지 연구. 연구의 과정에서 동의를 철회 참가자의 조직 표본 뱅크해서는 안 즉시 소진해야합니다. 동의서의 하나 또는 그 이상의 요소의 면제는 실질적으로 필요한 요소 또는 필수 요소가 적용되지 않습니다 연구에 대한 변경없이 할 수없는 몇 가지 연구 프로젝트에 대한 IRB에서 얻을 수있다. 큰 관심은 데이터의 기밀성을 보장하기 위해주의해야합니다. 건강 보험 양도 및 책임에 관한 법률 (HIPAA)을 사용하거나 참가자의 서면 동의없이 &quot;보호 된 건강 정보&quot;(PHI)를 공개 방지 연방법입니다. PHI 포함하지만 의료 정보 전송되거나 유지 어떠한 형태 또는 매체와 9 개인을 식별하는 데 사용될 수있는 필드들에 한정되지 않는다. 이 작품을 통해 우리는 tissu 과정에서 지켜야하는 프로토콜을 간략하게 설명하는 것을 목표로전자 처리 - 조달을 포함하고, 저장하고 조직 추출시에받는 응력으로 인해 발생할 수 편향을 최소화하기 위하여 이러한 엄격한 가이드 라인을 다음의 중요성을 강조한다. 독자가 무엇을 분석 (들)에 가장 적합한 자신의 요구에 자격을 갖춘 판단을 할 수 있도록 우리는 또한 다운 스트림 분석 또는 표본에 대해 수행 할 수있는 분석 (그림 1)에 대한 간략한 개요를 제공하기 위해 노력하고 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Needles</td><td>BD</td><td>305167</td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel disposable scalpels</td><td>Miltex</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>Tissue culture dish</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy Cassettes</td><td>Thermo Fisher</td><td>58931</td><td></td></tr><tr><td>RNA-stabilizing solution</td><td>Ambion</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tubes</td><td>Phenix</td><td>MAX-815</td><td></td></tr><tr><td>50 ml tubes</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>10% Neutral Buffered Formalin</td><td>StatLab Medical Products</td><td>28600-5</td><td></td></tr><tr><td>Formalin Containers</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-032-059</td><td></td></tr><tr><td>Optimal cutting temperature solution (OCT)</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura Finetek</td><td>4557</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase I</td><td>Roche</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>70&amp;mu;m cell strainers</td><td>BD Bioscience</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>96 well round bottom plates</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead stain solution</td><td>Life Technologies</td><td>L34957</td><td></td></tr></tbody></table>

working with human tissues for translational cancer research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

<html> 아래에 표시된 결과는 처리 흑색 종 종양에 대한 광범위한 면역 표현형 유동 세포 계측법 게이팅 전략을 도시한다. 염색의 날, 조직 샘플은 225 RPM의 회전하에 37 ℃에서, 소화 I 콜라게나 제 및 60 분간의 DNase I 인큐베이션 균질화 하였다. 소화 후, 세포 현탁액은 파편을 제거하기 위해 70 μm의 세포 여과기를 통해 여과하고, 세포를 면역 세포 계측법 표현형에 대한 항체의 형광 표지 된 흐름으로 ...

Watch this Scientific Journal Video about Working with Human Tissues for Translational Cancer Research at JoVE.com

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

번역 상 암 연구를위한 인체 조직에 대한 작업

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

working-with-human-tissues-for-translational-cancer-research

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

9.8K 조회수.  University of Texas MD Anderson Cancer Center. Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

비디오: Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard subcutaneous flank models include procedural ease and the ability to monitor tumor progression and response without invasive imaging. Such models are often inconsistent in translational clinical trials and have limited biologically relevant characteristics with low proclivity to produce metastasis, as there is a lack of a native microenvironment. In comparison, orthotopic xenograft models at native tumor sites have been shown to mimic the tumor microenvironment and replicate important disease characteristics such as distant metastatic spread. These models often require tedious surgical procedures with prolonged anesthetic time and recovery periods. To address this, cancer researchers have recently utilized ultrasound-guided injection techniques to establish cancer xenograft models for preclinical experiments, which allows for rapid and reliable establishment of tissue-directed murine models. Ultrasound visualization also provides a noninvasive method for longitudinal assessment of tumor engraftment and growth. Here, we describe the method for ultrasound-guided injection of cancer cells, utilizing the adrenal gland for NB and renal sub capsule for ES. This minimally invasive approach overcomes tedious open surgery implantation of cancer cells in tissue-specific locations for growth and metastasis, and abates morbid recovery periods. We describe the utilization of both established cell lines and patient derived cell lines for orthotopic injection. Pre-made commercial kits are available for tumor dissociation and luciferase tagging of cells. Injection of cell suspension using image-guidance provides a minimally invasive and reproducible platform for the creation of preclinical models. This method is utilized to create reliable preclinical models for other cancers such as bladder, liver and pancreas exemplifying its untapped potential for numerous cancer models.

Here, we present a protocol to utilize ultrasound-guided injection of neuroblastoma (NB) and Ewing's sarcoma (ES) cells (established cell lines and patient-derived tumor cells) at biologically relevant sites to create reliable preclinical models for cancer research.

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

연구

암 연구학

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture systems, which inadequately reflect physiological conditions in vivo. Biological 3D matrices provide cells an environment in which cells can self-organize, allowing the study of tissue organization and cell differentiation. Such scaffolds can be seeded with a mixture of different cell types to study direct 3D cell-cell-interactions. To mimic the 3D complexity of cancer tumors, our group has developed a 3D in vitro tumor test system.	
	Our 3D tissue test system models the in vivo situation of malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs), which we established with our decellularized porcine jejunal segment derived biological vascularized scaffold (BioVaSc). In our model, we reseeded a modified BioVaSc matrix with primary fibroblasts, microvascular endothelial cells (mvECs) and the S462 tumor cell line. For static culture, the vascular structure of the BioVaSc is removed and the remaining scaffold is cut open on one side (Small Intestinal Submucosa SIS-Muc). The resulting matrix is then fixed between two metal rings (cell crowns).	
	Another option is to culture the cell-seeded SIS-Muc in a flow bioreactor system that exposes the cells to shear stress. Here, the bioreactor is connected to a peristaltic pump in a self-constructed incubator. A computer regulates the arterial oxygen and nutrient supply via parameters such as blood pressure, temperature, and flow rate. This setup allows for a dynamic culture with either pressure-regulated pulsatile or constant flow.	
	In this study, we could successfully establish both a static and dynamic 3D culture system for MPNSTs. The ability to model cancer tumors in a more natural 3D environment will enable the discovery, testing, and validation of future pharmaceuticals in a human-like model.

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Methods to create human 3D tumor tissues as test systems are described. These technologies are based on a decellularized Biological Vascularized Scaffold (BioVaSc), primary human cells and a tumor cell line, which can be cultured under static as well as under dynamic conditions in a flow bioreactor.

인간의 3 차원의 조직 공학<em&gt; 시험관</em&gt; 종양 테스트 시스템

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

생체공학

Preparation of Human Tissues Embedded in Optimal Cutting Temperature Compound for Mass Spectrometry Analysis

Sphingolipids are cellular components that have well-established roles in human metabolism and disease. Mass spectrometry can be used to determine whether sphingolipids are altered in a disease and investigate whether sphingolipids can be targeted clinically. However, properly powered prospective studies that acquire tissues directly from the surgical suite can be time consuming, and technically, logistically, and administratively challenging. In contrast, retrospective studies can take advantage of cryopreserved human specimens already available, usually in large numbers, at tissue biorepositories. Other advantages of procuring tissues from biorepositories include access to information associated with the tissue specimens including histology, pathology, and in some instances clinicopathological variables, all of which can be used to examine correlations with lipidomics data. However, technical limitations related to the incompatibility of optimal cutting temperature compound (OCT) used in the cryopreservation and mass spectrometry is a technical barrier for the analysis of lipids. However, we have previously shown that OCT can be easily removed from human biorepository specimens through cycles of washes and centrifugation without altering their sphingolipid content. We have also previously established that sphingolipids in human tissues cryopreserved in OCT are stable for up to 16 years. In this report, we outline the steps and workflow to analyze sphingolipids in human tissue specimens that are embedded in OCT, including washing tissues, weighing tissues for data normalization, the extraction of lipids, preparation of samples for analysis by liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS), mass spectrometry data integration, data normalization, and data analysis.

Sphingolipids are bioactive metabolites with well-established roles in human disease. Characterizing alterations in tissues with mass-spectrometry can reveal roles in disease etiology or identify therapeutic targets. However, the OCT-compound used for cryopreservation in biorepositories interferes with mass-spectrometry. We outline methods to analyze sphingolipids in human tissues embedded in OCT with LC-ESI-MS/MS.

질량분석 분석을 위한 최적의 절단 온도 화합물에 내장된 인체 조직의 준비

Sphingolipids are cellular components that have well-established roles in human metabolism and disease. Mass spectrometry can be used to determine whether ...

Testing Cancer Immunotherapeutics in a Humanized Mouse Model Bearing Human Tumors

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine cancer models are extremely limited in their diversity and suffer from poor translation to the clinic. To serve as a more physiological preclinical model for immunotherapy studies, this protocol has been developed to evaluate the treatment of human tumors in a mouse reconstituted with a human immune system. This unique protocol demonstrates the development of human immune system (HIS, &#34;humanized&#34;) mice, followed by implantation of a human tumor, either a cell-line derived xenograft (CDX) or a patient derived xenograft (PDX). HIS mice are generated by injecting CD34+ human hematopoietic stem cells isolated from umbilical cord blood into neonatal BRGS (BALB/c Rag2-/- IL2R&#947;C-/- NODSIRP&#945;) highly immunodeficient mice that are also capable of accepting a xenogeneic tumor. The importance of the kinetics and characteristics of the human immune system development and tumor implantation is emphasized. Finally, an in-depth evaluation of the tumor microenvironment using flow cytometry is described. In numerous studies using this protocol, it was found that the tumor microenvironment of individual tumors is recapitulated in HIS-PDX mice; &#34;hot&#34; tumors exhibit large immune infiltration while &#34;cold&#34; tumors do not. This model serves as a testing ground for combination immunotherapies for a wide range of human tumors and represents an important tool in the quest for personalized medicine.

This protocol outlines the generation of human immune system (HIS) mice for immuno-oncology studies. Instructions and considerations in the use of this model for testing human immunotherapeutics on human tumors implanted in this model are presented with an emphasis on characterizing the response of the human immune system to the tumor.

인간 종양을 지닌 인간화 마우스 모델에서 암 면역 치료제 테스트

Reversing the immunosuppressive nature of the tumor microenvironment is critical for the successful treatment of cancers with immunotherapy drugs. Murine ...

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 신선한 조직의 섬유아세포

Establishment of Pancreatic Cancer-Derived Tumor Organoids and Fibroblasts From Fresh Tissue

Tumor organoids are three-dimensional (3D) ex vivo tumor models that recapitulate the biological key features of the original primary tumor tissues. Patient-derived tumor organoids have been used in translational cancer research and can be applied to assess treatment sensitivity and resistance, cell-cell interactions, and tumor cell interactions with the tumor microenvironment. Tumor organoids are complex culture systems that require advanced cell culture techniques and culture media with specific growth factor cocktails and a biological basement membrane that mimics the extracellular environment. The ability to establish primary tumor cultures highly depends on the tissue of origin, the cellularity, and the clinical features of the tumor, such as the tumor grade. Furthermore, tissue sample collection, material quality and quantity, as well as correct biobanking and storage are crucial elements of this procedure. The technical capabilities of the laboratory are also crucial factors to consider. Here, we report a validated SOP/protocol that is technically and economically feasible for the culture of ex vivo tumor organoids from fresh tissue samples of pancreatic adenocarcinoma origin, either from fresh primary resected patient donor tissue or patient-derived xenografts (PDX). The technique described herein can be performed in laboratories with basic tissue culture and mouse facilities and is tailored for wide application in the translational oncology field.

저자 스포트라이트: Establishment of Pancreatic Cancer-Derived Tumor Organoids and Fibroblasts from fresh tissue  

Tumor organoids have revolutionized cancer research and the approach to personalized medicine. They represent a clinically relevant tumor model that allows researchers to stay one step ahead of the tumor in the clinic. This protocol establishes tumor organoids from fresh pancreatic tumor tissue samples and patient-derived xenografts of pancreatic adenocarcinoma origin.

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

Tumor organoids are three-dimensional (3D) ex vivo tumor models that recapitulate the biological key features of the original primary tumor tissues. ...

미세유체역학(Microfluidics) 기반 혈관화된 인간 미세종양 모델 준비

Establishing a Physiologic Human Vascularized Micro-Tumor Model for Cancer Research

A lack of validated cancer models that recapitulate the tumor microenvironment of solid cancers in vitro remains a significant bottleneck for preclinical cancer research and therapeutic development.&#160;To overcome this problem, we have developed the vascularized microtumor (VMT), or tumor chip, a microphysiological system that realistically models the complex human tumor microenvironment. The VMT forms de novo within a microfluidic platform by co-culture of multiple human cell types under dynamic, physiological flow conditions. This tissue-engineered micro-tumor construct incorporates a living perfused vascular network that supports the growing tumor mass just as newly formed vessels do in vivo. Importantly, drugs and immune cells must cross the endothelial layer to reach the tumor, modeling in vivo physiological barriers to therapeutic delivery and efficacy. Since the VMT platform is optically transparent, high-resolution imaging of dynamic processes such as immune cell extravasation and metastasis can be achieved with direct visualization of fluorescently labeled cells within the tissue. Further, the VMT retains in vivo tumor heterogeneity, gene expression signatures, and drug responses. Virtually any tumor type can be adapted to the platform, and primary cells from fresh surgical tissues grow and respond to drug treatment in the VMT, paving the way toward truly personalized medicine. Here, the methods for establishing the VMT and utilizing it for oncology research are outlined. This innovative approach opens new possibilities for studying tumors and drug responses, providing researchers with a powerful tool to advance cancer research.

저자 스포트라이트: Creating Human Vascularized Micro-Tumors as Models for Translational Cancer Research (중개 암 연구를 위한 모델로서의 인간 혈관 미세 종양 생성) 

This protocol presents a physiologically relevant tumor-on-a-chip model to perform high-throughput basic and translational human cancer research, advancing drug screening, disease modeling, and personalized medicine approaches with a description of loading, maintenance, and evaluation procedures.

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립

A lack of validated cancer models that recapitulate the tumor microenvironment of solid cancers in vitro remains a significant bottleneck for preclinical ...

번역 상 암 연구를위한 인체 조직에 대한 작업

요약

더 많은 비디오 탐색

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

인간의 3 차원의 조직 공학

질량분석 분석을 위한 최적의 절단 온도 화합물에 내장된 인체 조직의 준비

인간 종양을 지닌 인간화 마우스 모델에서 암 면역 치료제 테스트

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립