Name: the mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport
Uploaded: 2015-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 17 s
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Funding from the Australian Research Council (ARC) and National Health and Medical Research Council (NHMRC) is gratefully acknowledged.

The authors have nothing to disclose.

쥐 장간막 림프절 삽관 모델은 다양한 물질로 도전하는 농도와 다양한 세포와​​ 소장에서 림프에 응답하여 발생하는 이들에 대한 변경 (예 : 지질 및 약물 등) 분자의 전송 속도를 직접 정량화 할 수 있습니다 (다이어트 항원 약물, 제형 등) 10,27 질병 (암, 바이러스, 대장염, 인슐린 저항성 등) 5-7. 림프 수집 성분은 또한 상기 추가의 실험에 이용 될 수있다. 예를 들?...

림프는 각 소장 융모 1에 포함 된 단일 lacteals에서 유래 단방향 프로세스를 통해 소장에서 흐른다. Lacteals 따라서 유체, 거대 분자 및 세포 림프 형성에 상대적으로 투과성 lacteals에 이러한 요소의 항목으로 시작한다. lacteals의 초기 림프 이후 림프 미세 혈관의 네트워크, 수집 (구 심성) 림프관, 장간막 림프절 궁극적으로 사후 노드 (원심성) 림프 혈관의 시리즈를 통해 소장에서 흐른다. 노드 내 림프 교환 혈액에서 노드를 입력 노드에 상주 면역 세포뿐만 아니라 물질로 발생하는 수질 부비동의 시리즈를 통해 전달합니다. 소장에서 흐르는 모든 림프 결국 원심성 장간막 림프절 덕트 및 이후 치스 테르 나디 라티 나에 chyli에 수렴한다. 치스 테르 나디 라티 나에 chyli 또한 림프 꼬리 주변 조직을 배출, intest를 수집원고 판은, 간 및 요추 지역과는 종격동과 몸의 뇌 부분에서 림프와 함께 흉부 림프 덕트를 결합한다. 흉부 림프 덕트는 왼쪽 경정맥과 쇄골 하 정맥의 교차점에 정맥 시스템에 직접 림프를 비 웁니다. 장간막 림프절에서 직접 림프 덕트의 수집을 가능하게 기재되어있는 프로토콜, 따라서 장 림프계를 통해 전신 (일반)에 순환 부위에서 직접 천이 다양한 인자의 분석을 용이하게한다. 장내 림프계에 할당 중요한 생리 학적 기능은 유체 밸런스를 유지하기 위해 지질 친 유성 분자의 흡수를 용이하게하기 위해, 적절한 한 면역 반응을 활성화한다. 종양 세포와 바이러스는 2-4 및 주요 변경 사항은 여러 가지 염증 및 대사 병리 5-7 림프관 내에서 발생하는 장 림프관을 통해 전파. 수장간막 다양한 세포 및 분자의 농도 및 전송 속도의 장 림프관을 통한 벌크 유체 흐름의 분석뿐만 아니라 정량을 가능 장간막 림프절 내에 덕트 nulation은 림프를 수집한다. 다양한 문제 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 모델에 대한 응답으로 농도 또는 이러한 요소의 대중 교통에 대한 변경 사항은 (예를 들어, 대장염, HIV, 당뇨병)도 평가 될 수있다. 이 광범위하게 분석하고 여기에 비교 될 수있다 각 림프 구성 요소를 설명하는 것은 불가능 동안, 장간막 림프절은 단순하게 수성, 지질 및 세포 단계로 구성된다. 성상에 대한 관심의 구성 요소는 항원 또는 tolerogens 8, 사이토 카인 및 비만 세포 매개 (9), 및 인크 레틴 10 대사 매개 면역 메신저로 펩타이드 및 단백질을 포함한다. 포스트 마디 장간막 림프절의 세포 분획 lymphocyt의 (99 %), 거의 전적으로 구성되어ES (11). 다양한 면역 세포 (수지상 세포, 비만 세포, 등)은 사전 마디 장간막 임파선를 입력하지만 노드 (12) 내에 남아있다. 심성 림프 세포 내의 관심있는 경우, 장간막 림프절의 제거를 통해 이러한 세포를 수집 할 수있다 장간막 림프절 덕트 (12)의 삽관 전에 몇 일 노드. 이러한 방식으로, 구 심성, 원심성 및 림프 도관에 직접 연결되고 심성 림프에서 임파구는 장간막 림프절 도관에 직접 전달한다. 장 림프관 통과 다양한 면역 세포의 표현형 및 운송 따라서 검사 할 수있다. 아마도 현재까지 장간막 림프절을 수집하기위한 인용 가장 일반적인 이유는, 그러나, 처리 장내 흡수식이 지질 친 유성 분자 (10)의 수송을 연구하는 것이다. 섭취 후,식이 지질은, 예를 들면, 트리글리 세라이드의 지방산과 모노 글리세리드, phosp로 (소화지방산 및 리소 인지질, 지방산 및 콜레스테롤 등) 콜레스테롤 에스테르로 holipid 담즙에서 양친의 첨가를 통해 작은 미셀 포성 구조로 장내 루멘 내에 분산 (인지질, 콜레스테롤 및 담즙 염)과의 작용 췌장 효소 (10, 13). 여기에서 그들은 장 세포로 흡수된다. 흡수 성분의 비율은, 흡수성 세포 (장 세포) 내 트리글리 세라이드, 인지질 및 콜레스테롤 에스테르를 형성하기 위해 재 에스테르 화. 이러한 재 - 에스테르 화 된 지질은 담즙 분비, 점막 지질 풀 또는 장내 혈액 (13)로부터 공급 외생 섭취 지질 성분 및 내인성 지질 성분의 조합으로부터 조립된다. 여기에서, 에스테르 화 지질 어느 장 세포 내에 저장되어 있거나 함께 다양 아포 단백질과 다른 분자와의 친 유성 장내 지단백질 (칠로 마이크론, 초 저밀도 지단백질 (VLDL)) (조립 <em&gt; 예를 들어, 비타민) (10, 13). 장 lacteals이 장 모세 혈관보다 자신의 항목 침투성이 더으로 장 세포를 종료 한 후, 지질 단백질은 특히 장간막 림프 시스템을 통해 전신 순환 장에서 수송된다. 흡수 된 지질 성분의 비율은 또한, 관련되지 않은 단일 지단백질 모세 혈관과 간문맥 통해 체순환으로 소장에서 반송 14 분자이다. 그러나, 일반적으로, 간문맥 수송로 짧고 중간 사슬 길이 지질의 흡수에만 상당한 플레이어이다. 장간막 림프절의 컬렉션은 따라서 소장에서 지질 단백질 및 관련 구성 요소 (지질, 친 유성 분자, 아포 단백질)의 전송에 대한 평가를 할 수 있습니다. 지단백질 정량화 및 장간막 임파선 지단백질, 일반적 nascen에 유리하게 특성화 될 수있다t 상태 그들은 광범위하게 이러한 지단백 리파제 (15) 전신 효소에 의해 수정되지 않은 때문이다. 장간막 림프절 삽관 된 래트 모델은 아마도 역사적으로 가장 광범위 소장에서 지질 / 지단백 교통 분석에 기술 된 반면, 관심을 확대 영역은 지용성 약물, 전구 약물 및 다른 생체이 13,16의 수송 림프관의 역할은 여기에서 설명하는 모델의 초점이다. (일반적으로 긴 사슬 중성 지방&gt; 50 ㎎ / g에서 로그 P&gt; 5 용해도의 예외가 분명 있지만) 친 유성 약 17, 18, ​​19 및 기타 생체이 13, 16 중 하나를 수동적으로 또는하여 장 림프관에 액세스 할 수 있습니다 드럭 적극적으로 장 지단백 전송 경로 (19)에 통합. 쥐 장간막 림프절 삽관 기술은 이렇게 많은 응용 프로그램이 있습니다. 볼만 등 알. 먼저 techniq 설명변형 모델의 다음 번호가 설명 되었기 때문에 단말. 1948 20 래트에서 장간막 림프절 덕트 cannulate한다. 쥐 다양한 마취제 (21, 22)로 마취 할 때 예를 들어, 수집이 발생할 수 있습니다, 또는 의식 상태에있는 동안은 (23, 24)를 이동 15 자유롭게을 억제. (- 5 ㎖ / hr로 대개 0) 25 래트 재수 다른 솔루션과 같은 위장, 소장 또는 비경 다른 속도로 지질 및 약물 제제와 같은 다른 물질을 투여 할 수있다. 몇몇 연구에서는 흉부 림프 덕트보다는 장간막 림프절 덕트 흉부 림프 덕트는 서로 림프를 받으면이 관심 요인에 따라, 소장에서 운송 과대 수도 있지만, 림프관을 통해 소장에서 전송을 추정 삽관 지역 22, 26. 림프 삽관 모델은 쥐 15,27, 미니 PI 등 여러 가지 다른 종에서 기술 된GS 12, 양 28, 29, 돼지 30 개 (31). 그러나, 래트 모델은 가장 널리 일관 인용. 의식이 25 림프의 수집 뒤에 또는 22 쥐 15,27을 마취 장간막 림프절 덕트의 삽관에 대한 자세한 프로토콜은 이전에 출판되었으며, 관심있는 독자는 이러한 프로토콜에 관한 것이다. 이 프로토콜은 시각화 형식으로 기술을 보여 처음이다. 림프 삽관 된 래트 모델은, 비용면에서 수술 윤리적 고려 용이성 큰 동물 모델에 비해 이점을 갖는다. 마우스 모델에 비해 마우스 모델은 트랜스 제닉 동물 (27)에서 더 상세한 연구를 가능하게하더라도, 장간막 림프절 삽관 수술은 또한 쥐 쉽다. 그럼에도 불구하고, 쥐 모델, 생리의 차이와 관련된 특히, 그 한계 extrapolat의 몇 가지 제한 사항이 있습니다다른 전임상 및 임상 상황에 이온. 예를 들어, 쥐 담즙 흐름에 상수 및 높은 종 식품 반면 식품 섭취 또는 지질 독립적 담즙 흐름 (32)를 자극한다. 이것은 큰 종과 인간에서 볼 반영 쥐의 대표 사전 및 식후 환경을 얻기에 어려움을 만듭니다. 현실적인 인간의 투여 량의 투여 25을 형성 한 후 림프 전송을 평가할 때 약물 전달 연구의 경우, 큰 종은 또한 바람직 할 수있다. 최근 연구에서, 장간막 림프절에서 지질 전송 속도는 종 (27)에 걸쳐 지질 전송 데이터를 외삽에 자신감을 제공하는 등가 질량과 지질의 종류를 투여 한 후 종 (마우스, 쥐, 개)에 걸쳐 유사한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 동물의 크기 (즉, 개&gt; 쥐&gt; 마우스)의 순서로 순위 모델 지용성 약물, 할로 판 트린의 전송. 스케일링 인자 따라서 EX해야 할 수도다른 종 쥐에서 임파 약물 전송 데이터인지 추정. 림프 삽관 모델의 제한은, 일반적으로, 림프관은 용기 (33)를 캐 뉼러를 한번 변경되는 압력 구배에 반대 보낸 림프 흐름 및 전송을 수정할 수 림프관부터 직접 해당 수동 림프 컬렉션이다. 림프 삽관 모델은 기술에 익숙하지 않은 실험실에서 파악하는 작업이 쉽지 않을 수도 있습니다. 대체 모델은 따라서 설명되었다. 예를 들면, 지질 단백질 및 친 유성 분자로서 장내 림프계를 통해 요인 통과 간접적 혈액의 컬렉션을 통해 연구되어왔다. 그러한 모델 오랄 존재 관리 및 억제제의 부재 다음과 같은 지질 및 / 또는 약물의 혈중 농도를 비교 포함한다 (예를 들면, 콜히친, 플루 L81, 사이클로 헥시) 림프 전송 블록 34 장 지질 단백질 생산. 장점혈액 샘플 수집을 통해 간접적으로 림프 전송을 정량화 모델의 침습 수술이 35 필요하지 않습니다으로는 인간의 림프 수송의 어떤 평가를 할 수 있다는 것입니다. 그러나, 림프 교통 억제제는 특정하지 않은 및 림프관을 통해 수송된다 요인이 희석과 같은 평가를 복잡하게 전신 순환에 수정됩니다. 체외 대안도 설명 하였다. 예를 들어, 카코 -2 세포 또는 격리 장 세포 배양 물보다 상세히 림프관 36-38 입력 분자의 장내 분비를 연구하기 위해 사용되어왔다. 인간의 장내 미세보다 잘 나타내는 고급 체외 모델은 최근 39 설명했다. 이 모델에서 림프관 내피 세포층 림프관으로 소장에서 물질 전달의보다 상세한 분석이 가능 카코 -2 세포와 공 배양된다. 그러나, vitr에서오 전지 시스템은 교환 흐름을 부족 및 장 루멘과 기본 혈액과 림프 혈관 공급 즉, 상호 연결을 전송합니다. 대안적인 접근법에서, Kassis는 외. 혈관 수축, 림프 흐름 및 장간막 림프관 33 형광 지질 농도 사이의 양적 비교를 가능 시츄 촬상 시스템의 듀얼 채널 (고속 명 시야 화상과 형광)을 설치했다. 시험 관내 시스템에서의 상기 이상이 모델의 이점은 림프관을 통한 면역 세포의 통로의 정확한 추적을 가능하게한다는 것이다. 대량 지질 (또는 약물) 전송의 절대 측정은, 그러나, 아직 이미징 방법을 사용하여 설립. 시험관과 실리에 구체적으로도 40 ~ 42을 게시 한 장 림프관을 통해 친 유성 약물 수송의 정도를 예측하기 위해 접근되지 않습니다. (C)의 여러 예를 들어, 생체 친 화성플라즈마 카일로 마이크론에 대한 ompounds 생체 (41)에서의 림프 전송으로 합리적으로 상관 관계가 밝혀졌다. 이어서, 동일 그룹들은 다수의 물리 화학적 특성에 기초하여 40 킬로 미크론 치료약 친 화성을 ​​예측하기 실리 모델을 확립. 홀름 등. 또한 명백한 분자량 디스크립터 (42)의 기초 림프 친 유성 화합물의 수송을 예측 모델에 실리 비교적 복잡한 설립. 이러한 모델은 알려지지 약물 수송 림프관의 정도를 예측하기위한 유용한 방법을 제공 할 수있다. 약물 및 다른 실험실에 걸쳐 광범위한 모델 검증 그러나, 정확성 및 재현성을 확인하기 위해 필요할 것이다. 장간막 림프절 덕트 삽관 따라서 직접 소장 및 인자 (세포 단백질의 복소 배열의 운송 속도를 배수 림프절의 내용을 검사 할 수있는 유일한 수단 남아생체 내 상황에서 림프 펩타이드, 지질, 약물). 여기에서 우리는 장간막 림프절 및 마취 쥐 전신 혈액의 수집을 가능하게하는 장간막 림프절 덕트 및 경동맥 동맥 삽관을위한 프로토콜을 설명합니다. 대표 데이터는 모델 장간막 림프계를 통해 소장에서 지질 및 약물 수송을 검사 할 수있는 방법을 보여준다. 이 모델과 문제 해결 가이드를 확립 발생할 수있는 문제에 대한 논의가옵니다. 설립되면 모델은 장 림프 전송을 조사하는 강력한 도구입니다.

<table><tbody><tr><td>Sterile saline</td><td>Baxter healthcare</td><td>AHB 1307</td><td>Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50</td></tr><tr><td>70 % ethanol in water</td><td>Any</td><td></td><td>Any brand can be used</td></tr><tr><td>Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4)</td><td>Livingstone International</td><td>JJ60243L</td><td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =JJ60243L</td></tr><tr><td>Betadine solution</td><td>Livingstone International</td><td>BU0510</td><td>Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =BU0510</td></tr><tr><td>Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&amp;nbsp;</td><td>KETA I 1</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr><tr><td>Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&amp;nbsp;</td><td>TRO-3828</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr><tr><td>ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&amp;nbsp;</td><td>VTG-DACP010020</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr><tr><td>Sodium pentobarbitone</td><td>PROVET VICTORIA&amp;nbsp;</td><td>24529</td><td>Any brand can be used. Example here is Lethabarb&amp;reg; 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au</td></tr><tr><td>Heparin (35000I.U. in 35 mL)</td><td>Sigma Pharmaceuticals</td><td>337220</td><td>http://sigmaco.com.au/</td></tr><tr><td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm</td><td>Microtube extensions</td><td>PE8050</td><td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96 x0.58 mm, 30 m</td></tr><tr><td>Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm</td><td>Microtube extensions</td><td>PE9658</td><td>Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8 x0.5 mm, 30 m</td></tr><tr><td>Ruler</td><td>Any</td><td></td><td>Any brand can be used</td></tr><tr><td>Markers</td><td>Any</td><td></td><td>Any brand can be used</td></tr><tr><td>Cigarette lighter</td><td>Any</td><td></td><td>Any brand can be used</td></tr><tr><td>Veterinary adhesive</td><td>Any</td><td></td><td>Any brand can be used</td></tr><tr><td>23 gauge needles</td><td>Livingstone International</td><td>DN23GX0.75LV</td><td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=&lt;br/&gt; 6&amp;amp;search=DN23GX0.75LV</td></tr><tr><td>25 gauge needles</td><td>Livingstone International</td><td>DN25GX1.0LV</td><td>Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search=&lt;br/&gt; DN25GX1.0LV</td></tr><tr><td>1 ml syringe</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS01TA</td><td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =T3SS01TA</td></tr><tr><td>10 ml syringe</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS10SA</td><td>Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =T3SS10SA</td></tr><tr><td>Gauze swabs</td><td>Livingstone International</td><td>GSC075</td><td>Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5x7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =GSC075</td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Livingstone International</td><td>CTAST075DP</td><td>Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =CTAST075DP</td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Ratek</td><td>WT1</td><td>Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.</td></tr><tr><td>Surgical light</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-0215 with 72-0267</td><td>Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_&lt;br/&gt; -1_HAI_ProductDetail and&amp;nbsp; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_&lt;br/&gt; -1_HAI_ProductDetail___</td></tr><tr><td>Surgical microscope</td><td>Zeiss</td><td>495005-0014-000</td><td>Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&amp;amp;p=us&amp;amp;f=e&amp;amp;i=10143</td></tr><tr><td>Silk suture</td><td>Livingstone International</td><td>DTSK163019F4</td><td>Any brand can be used. Example here is &amp;nbsp;&lt;br/&gt;&lt;br/&gt; 3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&amp;amp;CAT=6&amp;amp;search&lt;br/&gt; =DTSK163019F4</td></tr><tr><td>Scalpel blades</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10020-00</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10004-13</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&amp;amp;CategoryId=51</td></tr><tr><td>1 x Small surgical scissors</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>14060-09</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&amp;amp;CategoryId=17</td></tr><tr><td>2 x Forceps with serrated curved tip</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11001-13</td><td>Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8x1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&amp;amp;CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x Iridectomy scissors</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>15000-08</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&amp;amp;CategoryId=16&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1 x Forceps with straight serated tip</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11650-10</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&amp;amp;CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11251-10</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&amp;amp;CategoryId=29</td></tr><tr><td>1 x Forceps with smooth fine curved forceps</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11063-07</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td></tr><tr><td>2 x Hemostats</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>13010-12</td><td>Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&amp;amp;CategoryId=33</td></tr><tr><td>1 x Suture needle holder</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>12001-13</td><td>Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&amp;amp;CategoryId=70</td></tr><tr><td>1 x Artery clamp</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>18050-28</td><td>Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9x1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&amp;amp;CategoryId=82</td></tr><tr><td>Oleic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>O1008</td><td>When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&amp;amp;region=AU</td></tr><tr><td>14C-oleic acid</td><td>Perkin&amp;nbsp;</td><td>NEC317050UC&amp;nbsp;</td><td>Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50&amp;micro;Ci (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td></tr><tr><td>Sodium taurocholate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4009</td><td>Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate &amp;ge;95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&amp;amp;region=AU</td></tr><tr><td>Halofantrine</td><td>Glaxo Smith Kline</td><td></td><td>Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline</td></tr><tr><td>Sodium phosphate monobasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71507</td><td>Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, &gt;99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&amp;amp;region=AU</td></tr><tr><td>Sodium phosphate dibasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71643</td><td>Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, &gt;99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&amp;amp;region=AU</td></tr></tbody></table>

the mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport

장 림프 시스템은 유체 수송, 지질의 흡수와 면역 기능에 중요한 역할을한다. 림프 장간막 림프절 덕트 수렴 림프관 및 일련의 노드를 통해 소장에서 직접 흐른다. 장간막 림프절 덕트의 캐 뉼러 따라서 소장에서 흐르는 장간막 림프절의 수집을 할 수 있습니다. 장간막 림프 및 지단백 분획 (지질, 친 유성 분자와 아포 단백질) (사이토 카인과 장 호르몬 등의 유체, 펩타이드 및 단백질) 면역 세포 (99 % 림프구), 수성 부분의 세포 부분으로 구성되어 있습니다. 장간막 림프절 덕트 삽관 모델 따라서 림프계를 통해 농도 및 소장에서 다양한 요인의 이송 속도를 측정하는데 사용될 수있다. 다른 도전에 대한 응답에서 이러한 요소의 변경 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 (예를 들어, 염증성 장 질환, HIV는 당뇨병)도 수 b전자는 결정. 관심을 확대 영역은 장 지질 흡수 경로와 연관 경구 투여 친 유성 약물과 전구 약물의 흡수에 림프 수송의 역할이다. 여기에 우리가 설명, 세부 사항, 장 배달 다음 몇 시간 동안 림프 시스템을 통해 속도와 지질 및 약물 수송의 정도의 평가를 할 수있는 장간막 림프절 덕트 유관 쥐 모델. 방법은 림프 다른 파라미터의 측정에 용이하게 적응할 수있다. 우리는 실험 성공을 확인하고 얻은 데이터를 해석하는 방법에 대한 교육을 제공하기 위해이 복잡한 수술 방법을 설정할 때 발생할 수있는 문제에 대한 자세한 설명뿐만 아니라, 실패와 성공의 실험에서 대표 데이터를 제공합니다.

대표적인 실험의 결과는도 4 및도 5에 도시되어 장간막 림프절 삽관 모델을 이용하여 장내 전달 다음 림프계를 통해 누적 범위와 지질 및 약물 수송 속도를 정량화한다.이 실험에서, 모델 친 유성 200 μg의를 포스페이트 완충에 5.6 ㎖의 5 mM의 나트륨 타우로 콜산에 분산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 - 약물 할로 판 트린 40 mg의 올레산 (5 μCi를 14 C-올레산 2 포함) 아세트산 함유 제제?...

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The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

28.4K 조회수.  Monash University (Parkville Campus). Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

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Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

신생아 돼지에서 림프의 창자 림프 트렁크와 컬렉션의 장기 도관

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

연구

의학

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

생물학

Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA cannulation is more difficult in rats due to small anatomical dimensions. The aim of the study is to describe a surgical technique for cannulation of the SMA in rats to perform long-term infusion of drugs into the SMA vascular bed in unrestricted animals, which will result in a high rate of catheter patency after the post surgical recovery for 24 hours. 
To avoid the risk of SMA thrombosis or bleeding from direct access, a proximal branch of the SMA is isolated, ligated distally and cannulated with a 0.25 mm polyurethane capillary tube whose tip is advanced close to the origin of the SMA from the aorta. The cannula is then tunnelled subcutaneously to the back of the animal's neck and through the skin via an artificial valve. The external portion of the cannula is inserted in a semi-rigid support system and connected to the continuous infusion pump outside the cage where the rat is free to move. 
Correct positioning of the cannula was demonstrated by post-surgical angiography and autopsy findings. Catheter patency after 24 hours of saline infusion into the SMA region was assured in most rats by the total discharge of the pump and recognition of a functional cannula for blood sampling or saline infusion.

Access for long-term infusion in the superior mesenteric artery (SMA) of rats is a surgical procedure that consists of cannulation of a proximal branch of the SMA. The cannula exits from the abdominal wound and is tunneled through the subcutaneous space back to the interscapular fold.

쥐의 작은 창자를 대상으로: 우수한 장막 동맥에 장기 주입

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA ...

생체공학

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease conditions1, 2. Network growth is commonly attributed to angiogenesis, defined as the growth of new vessels from pre-existing vessels. The angiogenic process is also directly linked to arteriogenesis, defined as the capillary acquisition of a perivascular cell coating and vessel enlargement. Needless to say, angiogenesis is complex and involves multiple players at the cellular and molecular level3. Understanding how a microvascular network grows requires identifying the spatial and temporal dynamics along the hierarchy of a network over the time course of angiogenesis. This information is critical for the development of therapies aimed at manipulating vessel growth.
The exteriorization model described in this article represents a simple, reproducible model for stimulating angiogenesis in the rat mesentery. It was adapted from wound-healing models in the rat mesentery4-7, and is an alternative to stimulate angiogenesis in the mesentery via i.p. injections of pro-angiogenic agents8, 9. The exteriorization model is attractive because it requires minimal surgical intervention and produces dramatic, reproducible increases in capillary sprouts, vascular area and vascular density over a relatively short time course in a tissue that allows for the two-dimensional visualization of entire microvascular networks down to single cell level. The stimulated growth reflects natural angiogenic responses in a physiological environment without interference of foreign angiogenic molecules. Using immunohistochemical labeling methods, this model has been proven extremely useful in identifying novel cellular events involved in angiogenesis. Investigators can readily correlate the angiogenic metrics during the time course of remodeling with time specific dynamics, such as cellular phenotypic changes or cellular interactions4, 5, 7, 10, 11.

This article describes a simple model for stimulating angiogenesis in the rat mesentery. The model produces dramatic increases in capillary sprouting, vascular area and vascular density over a relatively short time course in a tissue that allows en face visualization of entire microvascular networks down to the single cell level.

쥐의 장간막의 Exteriorization : Angiogenesis에 관련된 세포 역학을 조사하기위한 모델

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

면역학 및 감염병학

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

쥐 페이어의 패치에서 림프구 역학의 현미경 관찰

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

The Isolation of Flowing Mesenteric Lymph in Mice to Quantify In Vivo Kinetics of Dietary Lipid Absorption and Chylomicron Secretion

Intestinal lipoproteins, especially triglyceride-rich chylomicrons, are a major driver of metabolism, inflammation, and cardiovascular diseases. However, isolating intestinal lipoproteins is very difficult in vivo because they are first secreted from the small intestine into the mesenteric lymphatics. Chylomicron-containing lymph then empties into the subclavian vein from the thoracic duct to deliver components of the meal to the heart, lungs, and, ultimately, whole-body circulation. Isolating na&#239;ve chylomicrons is impossible from blood since chylomicron triglyceride undergoes hydrolysis immediately upon interaction with lipoprotein lipase and other lipoprotein receptors in circulation. Therefore, the original 2-day lymph fistula procedure, described by Bollman et al. in rats, has historically been used to isolate fresh mesenteric lymph before its entry into the thoracic vein. That protocol has been improved upon and professionalized by the laboratory of Patrick Tso for the last 45 years, allowing for the analysis of these critical lipoproteins and secretions from the gut. The Tso lymph fistula procedure has now been updated and is presented here visually for the first time. This revised procedure is a single-day surgical technique for installing a duodenal feeding tube, cannulating the mesenteric lymph duct, and collecting lymph after a meal in conscious mice. The major benefits of these new techniques include the ability to reproducibly collect lymph from mice (which harnesses the power of genetic mouse models); the reduced anesthesia time for mice during the implantation of the duodenal infusion tube and the lymph cannula; the ability to continuously sample lymph throughout the feeding and post-prandial period; the ability to quantitatively measure hormones and cytokines before their dilution and enzymatic hydrolysis in blood; and the ability to collect large quantities of lymph for isolating intestinal lipoproteins. This technique is a powerful tool for directly and quantitatively measuring dietary nutrient absorption, intestinal lipoprotein synthesis, and chylomicron secretion.

The Isolation of Flowing Mesenteric Lymph in Mice to Quantify In Vivo Kinetics of Dietary Lipid Absorption and Chylomicron Secretion

The present protocol describes a detailed surgical protocol for isolating flowing intestinal lymph in response to intraduodenal nutrient infusions in mice. This allows for the physiological determination of total intestinal lipid absorption and chylomicron synthesis and secretion in response to various experimental nutrients.

식이 지질 흡수 및 유미미크론 분비의 생체 내 동역학을 정량화하기 위한 마우스의 흐르는 장간막 림프의 분리

Intestinal lipoproteins, especially triglyceride-rich chylomicrons, are a major driver of metabolism, inflammation, and cardiovascular diseases. However, ...

Mesenteric Lymph Duct Cannulation in a Rat Model to Harvest Lymph Fluid

Source: Trevaskis, N. L., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/52389">The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats. This method enables direct access to the entire volume of components present in the lymph fluid.

Mesenteric Lymph Duct Cannulation in a Rat Model to Harvest 림프액을 수확합니다.

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunopathology

Assay and Analysis

Intraduodenal Cannulation in a Rat Model for Immunopathology Studies

Source: Trevaskis, N. L. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/52389">The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2015)
This video demonstrates intraduodenal cannulation in a rat model. After anesthetizing the rat, the duodenum is located and a small puncture is created. A J-shaped cannula with a beveled tip is carefully inserted and secured, and the incision is closed. The cannulated rat model enables intra-intestinal infusion for immunopathology studies.

면역병리학 연구를 위한 쥐 모델의 십이지장 내 삽관(intraduodenal cannulation)

Cannulation of the Carotid Artery in a Rat Model

Source: Trevaskis, N. L. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/52389">The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we demonstrate a surgical procedure to cannulate the left carotid artery in a rat model.