이 연구는 (LB)에 NIH R37 DK54824 및 R01 DK57284 보조금에 의해 지원되었다

여기에 설명 된 모든 절차는 피츠버그 대학에서 IACUC위원회에 의해 승인됩니다. 1 솔루션 <ol><li> 법에 따라 크렙스 솔루션을 준비합니다. 염화나트륨 (118)의 KCl 4.7, 염화칼슘 1.9, 황산 1.2, 탄산 수소 나트륨 24.9, KH 2 PO 4 1.2, 포도당 11.7 : MM의 조성. </li><li> 95 % O 2, 5 % CO 2 크렙스을 공급하십시오 및 실험을하는 동안 사용되는 37 ºC 물을 욕조에 넣습니다. 제쳐 놓고 ~ 실온에서 폭기 된 크렙스 용액 200 ㎖를 조직 절제술에 사용되는. </li><li> 화난 크렙스의 산도 (~ 7.4)와 삼투압 (~ 300 mOsm)를 측정한다. </li></ol> 2 실험 장치 (회로도 그림 1A) <ol><li> (95 % O 2, 5 % CO 2) 10 ㎖의 크 레브와 챔버 화난 채 웁니다. </li><li> 37 ° C에 챔버를 가열하는 순환 수 펌프를 시작합니다; 필요한 장비를 켜 : 앰프 (들), 자극 (들) 및 기록 소프트웨어입니다. </li><li> 1g의 무게와 트랜스 듀서를 보정합니다. </li></ol> 3 조직 (그림 1B) 다음 단계 다음 (~ 10~12주 이전 200~250g) 성인 순진한 여성 스프 라그 돌리 쥐에서 방광을 제거 <ol><li> 해부 영역과 필요한 장비 준비 : 전기 면도기, 치아 포셉, 메스 블레이드, 해부 가위, microscissors을,이 해부 집게, 조직 클립 (또는 실크 봉합사), 크렙스와 함께 실 가드 코팅 해부 접시 (저자는 뒤몽 집게 # 3를 선호) 조직 해부 핀입니다. </li><li> 유도 챔버에서 흡입 이소 플루 란 (2 O 4 %)으로 동물을 마취. 마취 동안 건조 함을 방지하기 위해 눈에 수의학 연고를 사용합니다. 연속 호흡율, 외부 자극에 응답하고, 휘어진 인출 후방 사지의 손실을 관찰함으로써 마취의 레벨을 모니터링한다. </li><li> 동물 면도 하복부 마취 할 때정말이에요. 중간 선 복부 절개를 통해 골반 장기 노출. 방광과 요도를 확인합니다. 근위부 요도에 가까운 방광 경부에서 절단하여 방광을 제거합니다. 화난 크렙스 솔루션을 가득 실 가드 코팅 접시에 즉시 조직을 놓습니다. </li><li> 필요한 경우,이 시점에서 추가적인 조직을 제거 : 요도, 위장 (GI) 관 및 / 또는 전립선 조각 등 </li><li> IACUC 승인 된 방법 (예를 들면, 마취제 또는 과다 보조 방법이어서 질식 CO 2)를 사용하여 동물을 희생한다. </li><li> 더 해부 조직을 안정시키기 위해, 방광 돔, 목, 및 요관을 통해 조직을 해부 핀을 삽입합니다. 조직을 늘리지 않습니다. 지방, 결합 조직, 근위부 요도, 요관하고있는 경우를 제거합니다. </li><li> 플랫 시트를 만드는 돔 기지에서 방광을 열고 장막면이 아래 / 내강면을 위로 (그림 1B). 조직의 각 모서리에 해부 핀을 놓습니다. 방광 돔을 제거전자와 목 조직. </li><li> 실험의 목적은 점막 (요로 상피 및 고유 층 - 다이어그램도 1C 참조)의 기여를 결정하는 경우 평활근 수축을, 함께 및 장착 점막없이 배뇨근 스트립의 특성을 비교한다. 이를 위해, 조직 스트립을 절단하기 전에 신중 홍채 해부 현미경 하에서 미세 가위 집게를 사용하여 스프링 점막층을 제거. 실험의 끝에, 점막의 완전한 제거를 확인하기 위해 H &amp; E 염색 용 스트립을 고정한다. 이 절차는 쥐의 방광에 비해 마우스 방광에서 쉽게합니다. </li><li> ~ 2 × 8mm (그림 1B)의 스트립으로 돔 기지에서 세로로 조직을 잘라. 넥타이 또는 각 스트립의 양단에 조직 클립을 첨부합니다. NOTE : 한 래트 방광은 보통 4 스트립으로 절단 할 수 있지만, 스트립의 수는 증가하거나 감소 동물 / 방광 크기에 따라. </li><li> exper에 스트립 전송imental 실. 한 조직의 수축을 측정하는 힘 센서, 각 스트립의 끝과 고정 유리 / 금속 막대에 다른 연결합니다. 참고 : 조직 챔버의 크기 (20 ㎖의 이상으로 0.2 ml)에 따라 다릅니다. 쥐의 방광에 대한 일반적인 챔버 스트립이 완전히 용액에 침수 될 충분한 높이를 제공하는 5 ~ 20 ㎖의입니다. 일부 챔버 내장 자극 전극, 다른 사람 없습니다에게 제공됩니다. 케어 달리 전계 자극이없는 신뢰성, 전극의 모든 접속 상태가 양호한 것을 확인해야한다. </li><li> 베이스 라인 장력이 1g (~ 10 MN)이 도달 할 때까지 부드럽게 조직을 스트레칭하여 각 스트립에있는 힘의 정의 금액을 적용합니다. 처음에 조직은 기준선 장력의 감소로 기록되어있는 이완되는 경향이있다. 워시 조직은 약 및 따뜻한 폭기 크렙스를 사용하여 15 분마다 각 세척 후 1g 기준선 장력을 조정합니다. (기준 긴장이 안정적 조직 ~ 1-2 시간이나 때까지 평형을 허용즉, 더 이상의 조직 휴식). </li><li> ~ 5 분간, 또는 고원 응답까지 조에 직접의 KCl (80 ㎜)에 추가하여 시험 조직 생존력이 도달된다. 고농도의 KCl에 대한 응답은 또한 실험 동안 또는 실험의 끝에서 반복 (데이터 해석 부 밑에 정규화 참조) 스트립 다른 약물에 대한 반응을 정규화 또는 사이에 사용될 수있다. </li><li> 따뜻한 화난 크렙스 씻을 조직을 여러 번 (3-5x)는 조직 전처리 조건에 반환 할 수 있습니다. </li></ol> 4 자극 프로토콜 <ol><li> 이러한 SCI, BOO 또는 신생아와 같은 다른 동물 모델에서 평활근 스트립을 사용, 자연, 근원 활동이나 평활근에 병리의 효과를 알아보고자 하였다.이 그림은 개발하는 동안 방광 자발적인 활동의 변화를 조사하기 위해이 방법을 사용하는 방법을 보여줍니다 및 SCI 후. 또한, 약학 제제는 SP를 변조하는데 사용될 수있다ontaneous 활동.도 3은 자발 활동 및 평활근 톤 KCNQ 채널 변조기, flupirtine 및 XE991,의 효과를 도시한다. </li><li> 직접 정의 된 시간 간격으로 목욕 농축 원액으로부터 화합물을 첨가함으로써 약리학 평활근 자극 구조체 농도 반응 곡선. 차량 및 시간 효과를 설명하기 위해 병렬 스트립에 약물 및 차량을 사용합니다. <ol><li> 1000X 최종 작업 농도에서 원하는 시험 화합물의 원액을 확인합니다. 10-5 M, 3 × 10-5 M, 10-4 M, 3 × 10-4 M, 10-3 M, 3 × 10-3 M : 카바 콜 (CCH), 무스 카린 수용체 작용제를 들어, 다음과 같은 종목을 준비 10 -2 M. 욕실에서 최종 농도는 10 -5 M (그림 4C, D)에 10 -8 M이다. 10-8 M, 10-7 : 뉴로 메딘의 B (NMB), 봄베 신 수용체 서브 타입 1 작용제를 들어, 다음과 같은 주식을 준비M, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, 10-3 M 및 욕조에 최종 농도 아르 10 -11 M에서 10 -4 M. CCH와 NMB 모두 조직의 수축력을 증가 할 것으로 예상된다. </li><li> 응답이 고원 (그림 4C, D)에 도달로 10 ml의 조직 목욕하는 순간 각 CCH 원액의 10 μl를 추가합니다. 병렬 스트립에서 차량 (물)의 같은 양을 추가합니다. 마찬가지로, 각 뉴로 메딘의 B 원액의 10 ㎕의 모든 ~ 5 분을 추가합니다. 참고 : 그림 4 종에서 스트립의 평활근에 NMB와 CCH의 흥분성 효과를 관찰한다. </li><li> 흥분 에이전트, 일반적으로 CCH 또는 KCl을 사전 계약 조직의 평활근의 이완 특성을 조사합니다. </li><li> 길항제 반응을 차단하는, 자극 작용제 전에 조직 침투를 허용하기 위해 길항제 10-20 분 동안 조직을 전처리. </li></ol></li><li> 신경 STIM을 위해평활근의 위험률도라는 전기장 자극 (EFS) 3.13에 단계 하나를 따라 아래에 설명 된대로 계속합니다. EFS는 선택적 평활근에 비해 신경을 활성화하기위한 것입니다. 자극 파라미터는주의 깊게 평활근에 직접 자극을 피하도록 선택되어야한다. <ol><li> 자극 매개 변수를 설정 : 아래 단계에 설명도 5A, B에 도시 된 바와 같이 자극 (단일 펄스 또는 기차), 기간 (펄스 지속 시간 및 열차 시간), 빈도와 강도의 유형을. <ol><li> 단일 펄스 자극, 세트 펄스 지속 시간, 간 자극 간격과 원하는 자극의 수하십시오. 통상, 자극 지속 기간 파라메터는 원하는 간격 (도 5a)에 전달 0.05-0.3 msec의 지속 기간의 하나의 펄스이다. 자극 강도에 대한 단계 4.3.1.4을 따르십시오. </li><li> 기차 자극의 경우, 기차 시간 간 열차 간격을 설정합니다. 방광 조직에 대한 일반적인 값은 3-10 초는 적어도 1m를 전달떨어져에서 (그림 5B). 조직의 피로 (즉, EFS 수축 제어 기간 동안 감소)가 발생하는 경우, 간 열차 간격을 증가시킨다. </li><li> 기차에서 펄스의 기차 자극의 주파수 (번호를 설정 - 그림 (b)). 0.5-50 Hz에서 범위의 주파수 응답 곡선을 실행. 방광의 일반적인 주파수는 ATP 및 아세틸 콜린에 의해 매개 재현하고 안정적​​인 수축을주고 10 ~ 20 Hz에서입니다. 이 방법은 콜린성 및 신경 전달에 퓨린 메커니즘의 기여를 평가하는 데 사용할 수있는 방법을 보여주는 그림 5에서 마우스 방광 스트립 EFS의 자극에 따라 주파수 응답을 관찰한다. </li><li> 자극 강도를 확립 : 수축의 진폭이 정체기에 도달 할 때까지 (하여 열차의 주파수를 일정하게 유지하는 경우) 체계적 자극의 세기 (전압)을 증가시킨다. </li><li> 에 따라 자극의 강도를 설정합니다실험의 목표로하고 있습니다. 목표 - 유발 신경을 수축을 증가시키는 경우, 수축의 진폭이 최대 수축 ~ 50 %가되도록 준 최대 강도를 사용한다. 목표 - 유발 신경을 수축을 감소시키는 경우, ~ 최대 진폭의 80 %가 조직의 피로를 방지하기 위하여 강도를 설정한다. </li></ol></li><li> 자극 매개 변수 (기간, 빈도와 강도)가 설립되면, EFS- 20 ~ 30 분 약물 검사 전에 안정 수축을 유발 ~ 수 있습니다. 참고 : (; 0.5 μM TTX) 신경 전송, 나 + 채널 차단제, 테트로도톡신와 블록 신경 전송을위한 EFS의 선택을 확인합니다. TTX 비교적 쉽게 떨어져 세척 같이, 실험의 시작에서이 단계를 수행한다. 또한, (단계 4.3.5 참조. 아래) 실험의 끝에이를 수행. </li><li> 최종 작업 농도가 1,000 배의 재고 솔루션을 준비 : 알파, 베타 - 메틸렌 ATP (ABMA, 퓨린 수용체의 활성화를및 desensitizer) 10 -2 M, 아트로핀 (무스 카린 수용체 길항제) 10 -3 M (그림 5C). 도 6에 다른 예를 관찰한다. 5HT4 수용체 작용제, 시사 프라이드 (3 × 10-6 M, 10-6 M을, 3 × 10-5 M, 10-5 M, 3 × 10-4 M을, 10-4 M, 3 × 10-3 M, 10-3 M)는, 조직 수축성 및 SB-203186 (3 × 10-3 M), 5HT4 수용체 길항제를 증가 시사 프라이드의 효과를 반전. </li><li> EFS (그림 5C)에 ABMA의 효과와 아트로핀을 테스트하려면, 두 개의 제어 주파수 응답 곡선을 수행합니다. 10 μM의 최종 농도에 화장실에 10 -2 M ABMA의 10 μl를 추가합니다. 이는 평활근에 직접 퓨린 수용체의 자극에 조직을 수축한다. 기준에 대한 응답을 반환 한 후, 주파수 응답 곡선을 반복합니다. 최종 정광 10 -3 M의 아트로핀의 10 μl를 추가1 μM의 이온. (무스 카린 수용체를 차단하기 위해 필요한 아트로핀) ~ 10 분, 반복 주파수 응답 곡선 후. 병렬 스트립의 각 단계에서, 차량, 물 10 μl를 추가합니다. NOTE :도 6의 다른 예를 들어, 정의 된 시간 간격들 (~ 15 분마다, 설명을 참조)에서 각 시사 프라이드 스톡 용액 10 μL를 추가 직접 조에 SB-203186 스톡 용액 10 ㎕를 다음과에 미치는 영향을 모니터링 수축을 EFS는 유도. 병렬 스트립에서 자동차, DMSO의 10 μl를 추가합니다. 시사 프라이드의 효과를 관찰,도 6 인간 방광과 회장 조직에서 EFS-유발 된 수축에 대한 5HT4 수용체 작용제는. 또한 인간 방광 및 회장 조직에서 EFS-유발 된 수축에 DMSO의 효과, 시사 프라이드 용 차량을 관찰 . </li><li> EFS 프로토콜의 끝에 나트륨 + 채널 차단제, 테트로도톡신 (TTX으로 신경 전달을 차단하여 EFS의 선택성을 확인; 0.5-1 &amp;# 181; M). TTX에 강한 수축이 남아있을 경우, 이후의 실험에서 자극의 지속 시간과 강도를 조절하는 것이 좋습니다. </li></ol></li><li> 사전 또는 사후 시냅스 사이트 (그림 7A)를 약물의 효과를 결정하기위한 4.3.2 단계 1을 따르십시오. 카르 바콜하는 재현 응답을 설정하고 EFS는 다음 약물 X를 추가 </li><li> 실험의 끝에, 또는 클립을 풉니 스트립을 풀어, 여분의 유체를 제거하고 나머지를 사용하여 각 스트립의 중량을 측정하는 티슈 종이 위에 부드럽게 그들을시킨다. 또한 단면적을 결정하는 캘리퍼스를 사용하여 조직의 길이를 측정한다. 이 정보는 데이터의 정상화를 위해 사용된다 (5.4 절 참조). </li></ol> (5) 데이터 분석 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하여 (예를 들어, Windaq, LabChart). <ol><li> 자발적 활동의 경우, 이전과 약물에 의한 반응과 나의 절정에 적어도 30 초 창을 선택슈어의 진폭과 근육 조직 활동의 주파수 (그림 3). <ol><li> 방광의 다른 부분 사이의 차이가 수축 반응에 기여하고 있는지 여부의 주파수 스펙트럼을 결정하기 위해 고속 푸리에 변환 분석을 사용하여 (예를 들어, 목 대 돔) 또는 개발 병리 및 약물 8. </li></ol></li><li> 평활근 톤 효과 전에 약물 유발 반응의 피크에서, 적어도 10-30 초간의 윈도우를 선택 및 수축의 진폭을 측정한다. </li><li> 신경을-유발 된 수축에 대한 효과를 위해 전 약물 유발 반응의 피크에서의 수축 곡선 (최소 3) 아래의 진폭, 지속 시간 및 면적을 측정한다. 주 : 퓨린 및 콜린성 다른 성분을 가지고 있기 때문에 반응 속도 EFS 유도 수축 곡선 아래의 면적 및 진폭 모두를 측정 할 필요가있다. 퓨린 성분이 빠르고 일시적인 (ATP는 purinergi를 활성화칼슘의 신속한 유입을 허용 같은 P2X1 C 등의 이온 성 채널, 그들은 이에 곡선 아래 면적에 대한 피크 진폭 응답에보다 덜 기여) 둔감. 콜린성 성분 (ACH 궁극적 수축을 유도하는 평활근 탈분극 이온 채널을 활성화 세포 내 경로를 활성화하기 위해 더 많은 시간을 필요로 대사 무스 카린 성 수용체를 활성화시킨다) 느리고 유지된다. 따라서, 무스 카린 성분 곡선 아래 면적을 측정하여 더 포착된다. </li><li> 스트립 및 약물 치료를 통해 결과를 비교할 수 있도록 데이터를 정규화한다. 정규화를 위해 선택된 파라미터는 병리학 적 조건이 연구 또는 실험 설계, 시험 화합물에 의해 좌우되어서는 안된다. 이러한 매개 변수를 사용 스트립 중량, 단면적, KCl을 응답 (도 4b), 다른 수축성 에이전트 최대 반응의 최대 반응 (도 7b) 또는 %의 % 중에서(예를 들어, CCH) 또는 편안한 에이전트 (예를 들어, 파파 베린). </li></ol>

저자는 그들이 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

본 논문에서는 방광 생리학 및 병리학뿐만 아니라, 방광 기능 장애를 치료하기위한 새로운 약물의 발견을 돕는 관련된 중요한 과학적 문제들을 해결하는데 사용할 수있는 시험 관내 평활근 수축 방법에서 간단한 설명. 우리는 방광 평활근 수축의 발달 병리학 적 및 약리학 적 특성 (그림 2-4), 신경 전달 변조 (그림 5-7A), 종의 차이 (그림 4), 장기?...

방광 평활근 소변 제거를 유도하기 위해 소변의 저장을 허용하도록 완화하고, 계약. 휴식은 내장 평활근 속성으로하고 배뇨근 베타 아드레날린 수용체 (β 인간의 3 AR)을 활성화 교감 신경에서 노르 에피네프린 (NE)의 토닉 릴리스에 의해 매개된다. 보이드는 교감 입력을 억제하고 아세틸 콜린 / ATP는 방광 평활근 일을 계약을 해제 부교감 신경을 활성화함으로써 달성된다. 뇌 및 / 또는 척수 손상, 신경 변성 질환, 당뇨병, 방광 출구 폐색 또는 간질 성 방광염 등 다양한 병적 상태, 뿌리깊 수명이 환자의 품질에 심각한 영향을주지 않고, 방광 기능을 변경할 수있다. 평활근, 원심성 또는 구 심성 신경 및 / 또는 이러한 조건은 하나의 블래 더에 영향을 미치는 요소에 의해 평활근의 수축을 변경할점막. 생체 내 및 방광 기능을 연구하기위한 생체 외 방법에서 여러 가지가 개발되어왔다. 생체은 방광 내압 측정은 방광 기능의 기본 측정이다. 이는 생리적 조건 하에서 주변 정보의 수집을 허용 그대로 제제이더라도, 평활근 스트립의 사용이 바람직하다하는 상황들이있다. 이러한 수술 및 / 또는 약리학 적 조작이 생존과 생체 제제의 안정성, 또는 영향을 미칠 수있는 상황을 포함 연구는 인간의 조직 또는 고가의 화학 물질의 사용을 필요로 할 때. 이 방법은 또한 방광의 각 구성 요소에 대한 약물, 나이 및 병리 효과 시험을 용이하게, 평활근, 점막, 원심성 및 구 심성 신경 즉. 방광 스트립은 과학적 질문에 대답 할 수 많은 그룹으로 수년에 걸쳐 이용되어왔다. 그들은 에바에 사용되었다근원 성 자발적인 활동 luate 변경 병리에 의해 유도. 이 활동은 과민성 방광 (OAB)의 긴급 및 주파수 증상에 기여하는 것으로, 따라서 OAB 3-9 개발되고 약물의 대상이다. 방광 스트립 또한 이완 또는 평활근 수축를 유도하는 대상이 될 수있는 이온 채널 및 / 또는 수용체 및 / 또는 세포 내 경로를 발견 할 목적으로 평활근 톤을 변조 근육 조직 및 신경 세포의 요인을 조사하기 위해 사용 하였다 3,10- 13. 다른 연구는 병리 (14, 15)에 의해 유도 된 송신기와 관련된 수용체 및 변경을 포함하여 신경 전달 물질의 특성에 초점을 맞추고있다. 또한,이 방법은 장기 19-21과 약물 구조 - 활성 관계의 평가 사이 22-24, 16 종 (18)로부터의 조직 사이의 비교를 위해 사용되어왔다. 이 방법의 확장은 지표 성과 데 사용되었습니다원심성 신경 송신기 (25)로부터 방출에 약물의 효과를 전자. 또한, 조직 (방광, 요도, 위장관, GI) (연구 승인을 수술 또는 장기 기증 조직부터) 동물이나 인간에서 수확 및 척수 손상 (SCI), 방광 출구 폐색을 포함한 동물의 다양한 모델에서 다양한 (BOO), 간질 성 방광염 (IC)은이 기술을 이용하여 조사 할 수있다. 본 논문에서는 위에서 언급 한 여러 과학적인 문제를 해결하기 위해 필요한 실험 프로토콜과 함께이 방법의 사용을 예시한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

우리는 체외 방광 평활근 수축을 측정하는 방법, 및 약리학 적 및 생리 평활근의 성질뿐만 아니라 병리학 적 변화에 의한 조사에 대한 사용을 설명한다. 이 방법은 수술 및 약리학 적 제제의 안정성 및 생존에 영향을 조작, 인체 조직의 사용 및 / 또는 고가의 화학 물질의 사용과 같은 생체 내 실험에서 발생 주요 방법론적인 어려움을 극복하면서, 방광 기능을 이해하는데 중요한 정보를 제공한다. 또한 건강하고 병적 조건의 각 방광 성분 (즉, 평활근, 점막, 신경)의 성질을 조사하는 방법을 제공한다. 방광은 마취 된 동물, 크렙스 용액에 넣고, 스트립으로 절단 제거한다. 스트립 따뜻한 크렙스 용액으로 채워진 챔버에 배치됩니다. 일단 아이소 장력에 부착수축력을 측정하는 n 개의 트랜스 듀서, 타단은 고정 된로드에 부착된다. 티슈 직접 목욕 또는 생체 내에서 방광 수축을 유발 유사한 신경을 활성화 전기장 자극 전극에 의해 화합물을 추가로 자극한다. 우리는이 방법의 사용은 발전 과정 및 실험 척수 손상 후 자발 평활근 수축을 평가 보여, 신경 전달 (관련된 송신기 및 수용체), 평활근 활성의 조절에 관여하는 인자의 성질, 개별 블래 성분의 역할 종 및 약리 에이전트에 응답 기관의 차이. 또한, 송신기는 릴리스 수축 및 / 또는 평활근의 이완, 약물 구조 활성 관계 및 평가에 관련된 세포 내 경로를 조사를 위해 사용될 수있다. 체외 평활근 수축 방법은 광범위하게 사용되어왔다 FO오십년 이상 R, 크게 방광 기능에 대한 우리의 이해뿐만 아니라 현재 방광 관리를 위해 임상 적으로 사용되는 화합물의 제약 발전에 기여 데이터를 제공하고 있습니다.

자발적인 근육 조직 활동 자발적인 근육 조직 활동은 출생 후의 개발 6-9 병리 (예를 들어, SCI, BOO) 3-5으로 변화를 겪는 중요한 평활근 특징입니다. 이 액티비티는 과민성 방광 (OAB) (2)의 증상에 기여하는 것으로 생각되기 때문에, 변조 수용체, 세포 내 경로 및 약리 제의 평가는 OAB 및 기타 평활근 장애에 대한 효과적인 치료법을 개?...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

이 원고는 약리학 제제 또는 신경 자극에 반응하여 평활근 수축을 평가하기위한 시험 관내 방법에있어서, 간단하지만 강력한을 제시한다. 주요 응용 프로그램은 약물 검사 및 이해 조직 생리학, 약리학, 병리학이다​​.

하부 요로 약리학을 평가하는 방법으로 방광 평활근 스트립 수축성

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

bladder-smooth-muscle-strip-contractility-as-method-to-evaluate-lower

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

26.2K 조회수.  University of Pittsburgh School of Medicine.  이 원고는 약리학 제제 또는 신경 자극에 반응하여 평활근 수축을 평가하기위한 시험 관내 방법에있어서, 간단하지만 강력한을 제시한다. 주요 응용 프로그램은 약물 검사 및 이해 조직 생리학, 약리학, 병리학이다​​. 

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Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

마우스 블레더 월 주입

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

연구

의학

Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, and persistent nerve and muscle impairments after hospital discharge.1-6 Using an explicit protocol with a structured approach to training and quality assurance of research staff, manual muscle testing (MMT) is a highly reliable method for assessing strength, using a standardized clinical examination, for patients following ARDS, and can be completed with mechanically ventilated patients who can tolerate sitting upright in bed and are able to follow two-step commands. 7, 8 
This video demonstrates a protocol for MMT, which has been taught to &ge;43 research staff who have performed &gt;800 assessments on &gt;280 ARDS survivors. Modifications for the bedridden patient are included. Each muscle is tested with specific techniques for positioning, stabilization, resistance, and palpation for each score of the 6-point ordinal Medical Research Council scale.7,9-11 Three upper and three lower extremity muscles are graded in this protocol: shoulder abduction, elbow flexion, wrist extension, hip flexion, knee extension, and ankle dorsiflexion. These muscles were chosen based on the standard approach for evaluating patients for ICU-acquired weakness used in prior publications. 1,2.

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and critical illness frequently develop long-lasting muscle weakness. Manual muscle testing (MMT) is a standardized clinical examination commonly used to measure strength of peripheral skeletal muscle groups. This video demonstrates MMT using the 6-point Medical Research Council scale.

수동 근육 시험 : 끝단 근육 강도를 측정하는 방법은 매우 불길한 환자에게 적용

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Method to Measure Tone of Axial and Proximal Muscle

The control of tonic muscular activity remains poorly understood. While abnormal tone is commonly assessed clinically by measuring the passive resistance of relaxed limbs1, no systems are available to study tonic muscle control in a natural, active state of antigravity support. We have developed a device (Twister) to study tonic regulation of axial and proximal muscles during active postural maintenance (i.e. postural tone). Twister rotates axial body regions relative to each other about the vertical axis during stance, so as to twist the neck, trunk or hip regions. This twisting imposes length changes on axial muscles without changing the body's relationship to gravity. Because Twister does not provide postural support, tone must be regulated to counteract gravitational torques. We quantify this tonic regulation by the restive torque to twisting, which reflects the state of all muscles undergoing length changes, as well as by electromyography of relevant muscles. Because tone is characterized by long-lasting low-level muscle activity, tonic control is studied with slow movements that produce "tonic" changes in muscle length, without evoking fast "phasic" responses. Twister can be reconfigured to study various aspects of muscle tone, such as co-contraction, tonic modulation to postural changes, tonic interactions across body segments, as well as perceptual thresholds to slow axial rotation. Twister can also be used to provide a quantitative measurement of the effects of disease on axial and proximal postural tone and assess the efficacy of intervention.

We have developed a device (Twister) to study the regulation of tonic muscle activity during active postural maintenance. Twister measures torsional resistance and muscular responses in standing subjects during twisting of the body axis. The device can be flexibly configured to study various aspects of tonic control across the neck, trunk, and/or hips.

축방향 및 근위 근육 톤을 측정하는 방법

The control of tonic muscular activity remains poorly understood.  While abnormal tone is commonly assessed clinically by measuring the passive resistance ...

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

요로의 프로브 기반 공 촛점 레이저 Endomicroscopy : 기술

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. Urinary exosome vesicles, 40-100 nm in size, are released into the urine under normal conditions by cells from all nephron segments and may contain protein, mRNA and microRNA representative of their cell type of origin. Under conditions of renal dysfunction or injury, exosomes may contain altered proportions of these components, which may serve as biomarkers for disease. There are currently several methods available for isolation of urinary exosomes, and we have previously conducted an experimental comparison of each of these approaches, including three based on ultracentrifugation, one using a nanomembrane ultrafiltration concentrator, one using a commercial precipitation reagent and one using a modification of the precipitation technique using ExoQuick reagent that we developed in our laboratory. We found the modified precipitation method produced the highest yield of exosome particles, miRNA, and mRNA, making this approach suitable for the isolation of exosomes for subsequent RNA profiling. We conclude that the modified exosome precipitation method offers a quick, scalable, and effective alternative for the isolation of exosomes from urine. In this report, we describe our modified precipitation technique using ExoQuick reagent for isolating exosomes from human urine.

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique.

수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

쥐의 방광 통증 모델로 방광 팽창 유발 내장 운동 응답

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

대동맥 석회화와 염증의 혈관 평활근 세포 및 이미지의 석회화

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We describe methods to measure ex vivo myometrium contractility. This assay can be used to investigate factors and molecules involved in the modulation of myometrial contraction and to determine their excitatory or inhibitory actions, and hence their therapeutic potential in vivo. Biopsies are obtained from women undergoing cesarean section delivery with informed consent. Fine strips of myometrium are dissected, clipped and attached to a force transducer within 1 mL organ baths superfused with physiological saline solution at 37 &#176;C. Strips develop spontaneous contractions within 2&#8211;3 h under set tension and remain stable for many hours (&#62;6 h). Strips can also be stimulated to contract such as by the endogenous hormones, oxytocin and vasopressin, which cause concentration-dependent modulation of contraction frequency, force and duration, to more closely resemble contractions in labor. Hence, the effect of known and novel drug leads can be tested on spontaneous and agonist-induced contractions.
This protocol specifically details how this assay can be used to determine the potency of known and novel agents by measuring their effects on various parameters of human myometrial contraction. We use the oxytocin- and V1a receptor antagonists, atosiban and SR49059 as examples of known compounds which inhibit oxytocin- and vasopressin-induced contractions, and demonstrate how this method can be used to complement and validate pharmacological data obtained from cell-based assays to aid drug development. The effects of novel agonists in comparison to oxytocin and vasopressin can also be characterized. Whilst we use the example of the oxytocin/ vasopressin system, this method can also be used to study other receptors and ion channels that play a role in uterine contraction and relaxation to advance the understanding of human uterine physiology and pathophysiology.

This article describes experimental protocols to study ex vivo contractions of human myometrium and their application in drug discovery. This technique is used to improve the understanding of myometrial physiology and pathophysiology as well as to validate pharmacological data from novel research probes or drug leads.

보조 약물 개발에 인간 자 궁 평활 근의 수축 측정

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...

Microelectrode Impalement Method to Record Membrane Potential from a Cannulated Middle Cerebral Artery

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ion channels and electrogenic pumps that regulate Vm in disease conditions could potentially alter Vm, vascular tone, and blood flow. Thus, a basic understanding of electrophysiology and the methods necessary to accurately record Vm in healthy and diseased states are essential. This method will allow modulating Vm using different pharmacological agents to restore Vm. Although there are several methods, each with its advantages and disadvantages, this article provides protocols to record Vm from cannulated resistance vessels such as the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. Middle cerebral arteries are allowed to gain myogenic tone in a myograph chamber, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes. The Vm signal is collected through an electrometer, digitized, and analyzed. This method provides an accurate reading of the Vm of a vessel wall without damaging the cells and without changing the membrane resistance.

The primary goal of this article is to provide details of how to record membrane potential (Vm) from the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. The cannulated middle cerebral artery is equilibrated to gain myogenic tone, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes.

축수 된 중간 대뇌 동맥에서 멤브레인 전위를 기록하는 마이크로 전극 Impalement 방법

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

부드러운 근육 세포 계보 추적 마우스의 고급 동맥 경 화성 병 변에서 세포 성분의 정량 분석

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...