이 연구는 국립 심장, 폐, 혈액 연구소 그랜트 HL- 103542, 그리고 CAP에 BCH 마취 연구 재단의 고유 선구자 상에 의해 지원되었다.

준비 <ol><li> 한 M K-HEPES 원액을 (KOH와 7.2 산도를 조정) 준비합니다. </li><li> 0.5 M K-EGTA 주식 솔루션 (KOH 8.0의 산도를 조정) 준비합니다. </li><li> 한 M KH 2 PO 4 원액을 준비합니다. </li><li> 한 M MgCl2를 원액을 준비합니다. </li><li> 균질화 완충액 (pH 7.2) 300 MM의 크로스, 10 mM의 K-HEPES 및 1 ㎜ K-EGTA를 준비합니다. 4 ℃에서 보관하십시오. </li><li> 호흡 버퍼 250 MM의 자당을 준비, 2 mM의 KH 2 PO 4, 10 mM의 MgCl2를, 20 mM의 K-HEPES 완충액 (pH 7.2) 및 0.5 mM의 K-EGTA (산도 8.0). 4 ℃에서 보관하십시오. </li><li> 의 NaCl 80g,의 KCl 2g, 나 2 HPO 4의 14.4 g, 1 L 더블 증류수 H 2 O (산도 7.4)에 KH 2 PO 4 2.4 g을 용해시켜 10 배 PBS 원액을 준비합니다. </li><li> 1 L 더블 증류수 H 2 O로 100 ML의 10 배 PBS 피펫 팅에 의해 1X PBS를 준비 </li><li> 서브 틸리의 4 밀리그램을 무게에 의해 서브 틸리 스톡 준비1.5 ML의 microfuge 튜브. 사용할 때까지 -20 ° C에서 보관하십시오. </li><li> 1.5 ml의 미세 원심 분리 튜브에 BSA의 20 밀리그램을 계량하여 BSA 콘텐츠를 준비합니다. 사용할 때까지 -20 ° C에서 보관하십시오. </li></ol> 미토콘드리아 절연 (그림 1) <ol><li> 분리 직전에, 균질화 완충액 1 ㎖에 용해 서브 틸리. </li><li> 분리 직전에, 균질화 완충액 1 ml의 BSA를 녹인다. </li><li> 얼음에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 1X PBS에서 6mm 생검 샘플 펀치와 저장소를 사용하여 두 개의 신선한 조직 샘플을 수집합니다. </li><li> 버퍼 균질화 빙냉 5 ㎖를 함유 해리 C 관 조직이 6mm 펀치를 전송합니다. </li><li> 티슈 dissociator에 해리 C 튜브 피팅에 의해 조직을 균질화하고 미리 설정된 미토콘드리아 분리 사이클 (60 초간 균질화)을 선택한다. </li><li> 얼음 양동이에 해리 C 튜브를 제거합니다. </li><li> 에 서브 틸리 원액의 250 μl를 추가파쇄는 반전하여 혼합하고 10 분간 얼음에 균질 배양. </li><li> 균질화 버퍼 얼음과 사전에 젖은 필터에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 40 μm의 메쉬 필터를 넣고 얼음에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 균질를 필터링 할 수 있습니다. </li><li> 여액에 새로 제조 된 BSA 원액의 250 μl를 추가하고 반전으로 섞는다. 참고 : 미토콘드리아 단백질 결정이 필요한 경우이 단계를 생략하십시오. </li><li> 균질화 버퍼 얼음과 사전에 젖은 필터에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 40 μm의 필터를 넣고 얼음에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 균질를 필터링 할 수 있습니다. </li><li> 균질화 버퍼 얼음과 사전에 젖은 필터에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 10 μm의 필터를 넣고 얼음에 50 ML 원뿔 원심 분리 관에 균질를 필터링 할 수 있습니다. </li><li> 10 분에서 9,000 XG에서이 미리 냉장 1.5 ML의 microfuge 튜브와 원심 분리기 여과 액을 전송4 ºC. </li><li> 상층 액을 제거하고 다시 중단하고 차가운 얼음 호흡 버퍼의 1 ml의 알약을 결합한다. </li></ol> ATP 분석 주 : ATP 발광 분석법은 ATP 분석 키트를 사용하여 수행 될 수있다 절연 미토콘드리아 대사 활성을 결정한다. 프로토콜은, 시약 및 표준 분석 키트에 공급되었다. 절차의 개요에 대하여 설명한다. <ol><li> RT에 키트 시약을 평형. </li><li> 이중 증류수 1,170 μL에서 동결 건조 된 ATP 펠렛을 용해시켜 10 mM의 ATP 원액을 준비합니다. ATP에게 얼음에 표준 원액 및 준비 미토콘드리아 샘플을 저장합니다. </li><li> 동결 건조 된 기질 용액 바이알에 기질 완충액 5 mL를 추가한다. 부드럽게 믹스와 어둠 속에서 배치합니다. </li><li> 블랙, 불투명 하단, 96 웰 플레이트의 모든 우물에 호흡 버퍼의 100 μl를 추가합니다. </li><li> 각 준비된 샘플에서 잘 O를 미토콘드리아의 10 μl를 추가FA 블랙, 불투명 하단, 96 웰 플레이트. 참고 : 시료는 세중 도금된다. 표준 및 음성 대조군 (호흡 버퍼)에 대한 세 우물에 대한 행을 포함합니다. </li><li> 표준 및 컨트롤을 포함한 모든 웰에 포유 동물의 세포 용해 용액 50 μl를 추가합니다. </li><li> 125 rpm에서 진탕에 5 분 동안 37 ºC에서 접시를 품어. </li><li> 배양 동안 10 mM의 ATP 원액 0.1 밀리미터, 0.05 밀리미터, 0.01 밀리미터, 0.005 밀리미터, 0.001 밀리미터, 및 0.0001 mM의 ATP의 농도 ATP 표준을 준비합니다. 얼음에 보관 기준. </li><li> 배양 후, 플레이트지도에 표시된 우물을 대응하는 ATP 기준의 10 μl를 추가합니다. 참고 : 표준은 중복 수행됩니다. </li><li> 각 웰에 재구성 된 기질 용액 50 μl를 추가합니다. </li><li> 125 rpm에서 5 분 동안 진탕 기에서 37 ºC에서 접시를 품어. </li><li> 분광 광도계로 연결된 컴퓨터에서 열기 GEN5 1.11 소프트웨어입니다. </li><li> &quot;에서새 항목을 만들 실험 &quot;&quot;클릭 &quot;. </li><li> &quot;기본 프로토콜&quot;을 클릭합니다. &quot;확인&quot;을 클릭합니다. </li><li> 왼쪽 열에서 다음, &quot;절차&quot;를 &quot;프로토콜&quot;을 선택합니다. </li><li> &quot;지연&quot;을 선택합니다. 0시 10분 0초로 설정합니다. &quot;확인&quot;을 클릭합니다. </li><li> 선택 &quot;읽기&quot;. 드롭 다운 메뉴에서 &quot;발광&quot;를 선택합니다. 다음에 다른 설정을 조정 : 유형 엔드 포인트, 통합 시간 공을 읽는다 01.00 MM : SS.ss, 필터 1 세트, 배출 홀, 광학 위치 최고, 감도 100, 최고 프로브 수직 1.00 mm 오프셋. </li><li> 판을 분석 할 준비가되면, 맨 윗줄에있는 &quot;판을 읽고&quot;아이콘을 클릭합니다. &quot;읽기&quot;를 클릭합니다. 분광 광도계가 열리면 왼쪽 상단 모서리에 잘 A1 트레이에 접시를 놓습니다. 온도에 상자가 열립니다. &quot;읽기&quot;를 클릭합니다. 참고 : 값이 높을수록 증가 ATP 수준 높은 신진 대사 활동과 상관 관계. </li></ol>

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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+of+isolated+mitochondria+during+early+reperfusion+for+cardioprotection.">Injection of isolated mitochondria during early reperfusion for cardioprotection.</a> American J Physiol Heart and Circ Physiol. 296 (1), 94-105 (2009).</li><li>Olson, M. S., Von Korff, R. 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모든 동물은 현재 기관 가이드 라인에 따라 처리 하였다. 우리는 공개 경쟁 금융 이익을 더이 없습니다.

성공적으로 미토콘드리아 생존을 유지하기 위해 얼음에 모든 솔루션과 조직 샘플을 유지하는 것이 필수적입니다이 프로토콜을 사용하여 미토콘드리아를 분리합니다. 얼음에서 유지하더라도, 절연 미토콘드리아는 19 시간에 걸쳐 기능적 활성의 감소를 나타내는 것이다. 우리는 솔루션 및 추가가 미리 준비하는 것이 좋습니다. 우리는 - 무게 사전 및 1.5 ml의 미세 원심 분리 튜브에 4 밀리?...

A correction was made to: <a href="http://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/51682">Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration.</a> An optional step was added to step 7 of the &#39;Mitochondrial Isolation&#39; section of the protocol. The step is:
1. Optional in the case that the tissue is fibrous: Centrifuge the solution at 750 x g for 4 min.

A correction was made to: Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration.

Erratum: Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

미토콘드리아는 적혈구를 제외한 체내 모든 세포에 존재하는 세포 및 중요한 대사 과정 1-4의 다수에 관여한다. 때문에 이러한 많은 기능의 미토콘드리아 손상이 해로운 영향 삼을 수 있습니다. 미토콘드리아 기능 부전 여러 미토콘드리아 분리 방법을 조사하기 위해서 설명되었다. 1940 5-8로 미토콘드리아 격리 날짜의 최초의 공표를 차지한다. 제 문서화 시도가 저속 5,8에서 염 용액에 원심 분리 박격포 간 조직을 분쇄하여 미토콘드리아 아이솔레이션을 보여 주었다. 나중에, 다른 그룹은 원래의 절차에 따라 팽창 차등 원심 6-8에 기초하여 조직 분획을 보여 주었다. 이러한 초기 방법은 종종 균질화, 및 / 또는 차등 원심 9-15 통합 현재 기술의 기초를 형성. homogenizati의 수단계와 원심 분리 프로토콜마다 다릅니다. 이러한 반복적 인 단계들은 미토콘드리아 분리를 위해 시간을 증가시키고, 궁극적으로 생존 능력을 감소시킨다. 제대로 10,16 제어하지 않을 경우 또한, 수동 균질화는 미토콘드리아 손상과 일치하지 않는 결과가 발생할 수 있습니다. 최근에, 우리는 심근 조직 (17, 18)에 이식 미토콘드리아를 분리 균질화 및 차등 원심 분리를 사용했다. 이 긴 분리 절차를 수행하는 데 약 90 분을 요구하고이 방법의 임상 적용 가능성 때문에 제한되었다. 임상 및 수술 적 치료에서의 급성 치료 적 사용을 허용하기 위해, 우리는 30 분 미만으로 수행 될 수있는 신속한 미토콘드리아 분리 과정을 개발 하였다. 이 프로토콜의 주요 장점은 표준화 된 조직 해리가 균일하고 쉽게 수동 균질화 달성되지 않은 조직의 일관성 균질화 수 있다는 것입니다. 와 T에서이온 차등 원심 분리 대신에 차동 여과의 사용은 시간이 많이 소요되고 고도로 정제 실용적이고 유능한 미토콘드리아 호흡의 더 신속한 분리를 허용 반복 원심 분리 단계를 제거한다. 미만 30 분에 실행 가능하고 호흡 능력 미토콘드리아를 분리 할 수​​있는 능력은 임상 적 적용이 가능합니다. 이 분리 프로토콜은 관상 동맥 우회 이식 수술 (CABG) 등의 치료 과정에 사용 목적이 가능성이있다.

<table><tbody><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>84100</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Substilsin A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5380</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5379</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6191</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P2173</td><td></td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>S374</td><td></td></tr><tr><td>ATPlite Luminescence Assay System,&lt;br/&gt; 1,000 Assay Kit</td><td>Perkin Elmer</td><td>6016941</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tubes</td><td>BD</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>40 &amp;mu;m Nylon Filters</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS C tube</td><td>Miltenyl Biotech</td><td>120-005-331</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Eppendorf tube</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>6 mm biopsy punch</td><td>Miltex</td><td>33-36</td><td></td></tr><tr><td>10 &amp;mu;m Pluristrainer</td><td>Pluriselect</td><td>43-500-10-03</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5415C</td><td>Marshall Scientific</td><td>EP-5415C&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS Dissociator&amp;nbsp;</td><td>Miltenyl Biotech</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>96-well plates, tissue culture treated</td><td>VWR</td><td>82050-732</td><td></td></tr><tr><td>Rotomax 120 orbital shaker</td><td>Heidolph</td><td>544-41200-00</td><td></td></tr><tr><td>Synergy H4 Hybrid Multi-Mode&lt;br/&gt; &amp;nbsp;Microplate Reader</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multisizer 4 Coulter Counter</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63076</td><td></td></tr><tr><td>Oxytherm System</td><td>Hansatech Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Fisher Scientific</td><td>267110</td><td></td></tr></tbody></table>

rapid isolation and purification of mitochondria for transplantation by tissue dissociation and differential filtration

차동 원심 분리 및 / 또는 피콜 구배 원심 분리를 사용하여 이전에 기술 된 미토콘드리아 분리 방법은 완료 60-100 분을 필요로한다. 우리는 상업적 조직 dissociator 및 차등 여과하여 포유류의 조직 검사에서 미토콘드리아의 신속한 분리를위한 방법을 설명한다. 이 프로토콜에서 수동 균질화는 조직 dissociator의 표준화 균질화 사이클로 대체됩니다. 이 균일하고 쉽게 수동 균질화 달성되지 않은 조직의 일관성 균질화 수 있습니다. 티슈 해리 다음, 균질 반복 원심 분리 단계를 제거 나일론 메쉬 필터를 통해 여과된다. 그 결과, 미토콘드리아 절연은 30 분 미만으로 수행 될 수있다. 이 분리 프로토콜은 0.18 ± 0.04 g (습 중량) 조직 샘플에서 약 2 × 10 10 실행 가능하고 호흡 능력 미토콘드리아를 얻을 수 있습니다.

티슈 해리 및 차등 여과를 이용하여 미토콘드리아 격리에서 절차 단계를 개략적 인 그림이도 1에 도시된다. 전체 절차 시간을 30 분 미만이다. 조직 샘플은 6mm 생검 펀치를 사용하여 수득 하였다. 조직의 무게는 0.18 ± 0.04 g (습 중량)이었다. 입경 계수에 의해 결정으로서 단리 미토콘드리아의 수는 2.4이었다 × 10 10 ± 0.1 × 10 10 골격근 미토콘드리아...

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Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

포유 동물 조직 생검에서 미토콘드리아의 신속한 분리를위한 방법을 설명한다. 쥐 간 또는 골격근 제제 상용 조직 dissociator 균질화하고, 미토콘드리아는 나일론 메쉬 필터를 통한 여과에 의해 미분을 분리 하였다. 대안적인 방법을 사용하여 100 분간 - 미토콘드리아 분리 시간은 60 비교 &lt;30 분이다.

조직 해리 차동 여과 이식 미토콘드리아의 신속한 분리 및 정제

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

rapid-isolation-purification-mitochondria-for-transplantation-tissue

Universidad de Cartagena UDEC

Research

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Biology

38.0K 조회수.  Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School.  포유 동물 조직 생검에서 미토콘드리아의 신속한 분리를위한 방법을 설명한다. 쥐 간 또는 골격근 제제 상용 조직 dissociator 균질화하고, 미토콘드리아는 나일론 메쉬 필터를 통한 여과에 의해 미분을 분리 하였다. 대안적인 방법을 사용하여 100 분간 - 미토콘드리아 분리 시간은 60 비교 

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Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from the oxidation of reduced compounds such as nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and flavin adenine dinucleotide (FADH2). The complete annotation of the Arabidopsis thaliana genome has established it as the most widely used plant model system, and thus the need to purify mitochondria from a variety of organs (leaf, root, or flower) is necessary to fully utilize the tools that are now available for Arabidopsis to study mitochondrial biology. Mitochondria are isolated by homogenization of the tissue using a variety of approaches, followed by a series of differential centrifugation steps producing a crude mitochondrial pellet that is further purified using continuous colloidal density gradient centrifugation. The colloidal density material is subsequently removed by multiple centrifugation steps. Starting from 100 g of fresh leaf tissue, 2 - 3 mg of mitochondria can be routinely obtained. Respiratory experiments on these mitochondria display typical rates of 100 - 250 nmol O2 min-1 mg total mitochondrial protein-1 (NADH-dependent rate) with the ability to use various substrates and inhibitors to determine which substrates are being oxidized and the capacity of the alternative and cytochrome terminal oxidases. This protocol describes an isolation method of mitochondria from Arabidopsis thaliana leaves using continuous colloidal density gradients and an efficient respiratory measurements of purified plant mitochondria.

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

As mitochondria are only a small percentage of the plant cell, they need to be purified for a range of studies. Mitochondria can be isolated from a variety of plant organs by homogenization, followed by differential and density gradient centrifugation to obtain a highly purified mitochondrial fraction.

절연 및 호흡 측정의 미토 콘 드리 아 애기 thaliana 에서

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

연구

생화학

Rapid Isolation of the Mitoribosome from HEK Cells

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative phosphorylation complexes encoded by the mitochondrial genome. Since all proteins synthesized by human mitoribosomes are integral membrane proteins, human mitoribosomes are tethered to the mitochondrial inner membrane during translation. Compared to the cytosolic ribosome the mitoribosome has a sedimentation coefficient of 55S, half the rRNA content, no 5S rRNA and 36 additional proteins. Therefore, a higher protein-to-RNA ratio and an atypical structure make the human mitoribosome substantially distinct from its cytosolic counterpart.
Despite the central importance of the mitoribosome to life, no protocols were available to purify the intact complex from human cell lines. Traditionally, mitoribosomes were isolated from mitochondria-rich animal tissues that required kilograms of starting material. We reasoned that mitochondria in dividing HEK293-derived human cells grown in nutrient-rich expression medium would have an active mitochondrial translation, and, therefore, could be a suitable source of material for the structural and biochemical studies of the mitoribosome. To investigate its structure, we developed a protocol for large-scale purification of intact mitoribosomes from HEK cells. Herein, we introduce nitrogen cavitation method as a faster, less labor-intensive and more efficient alternative to traditional mechanical shear-based methods for cell lysis. This resulted in preparations of the mitoribosome that allowed for its structural determination to high resolution, revealing the composition of the intact human mitoribosome and its assembly intermediates. Here, we follow up on this work and present an optimized and more cost-effective method requiring only ~1010 cultured HEK cells. The method can be employed to purify human mitoribosomal translating complexes, mutants, quality control assemblies and mitoribosomal subunits intermediates. The purification can be linearly scaled up tenfold if needed, and also applied to other types of cells.

Mitochondria have specialized ribosomes that diverged from their bacterial and cytoplasmic counterparts. Here we show how mitoribosomes can be obtained from their native compartment in HEK cells. The method involves isolation of mitochondria from suspension cells and consequent purification of mitoribosomes.

HEK 세포에서 Mitoribosome의 신속한 격리

The human mitochondria possess a dedicated set of ribosomes (mitoribosomes) that translate 13 essential protein components of the oxidative ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play essential roles in apoptotic cell death2, cell survival3, mammalian development4, neuronal development and function4, intracellular signalling5, and longevity regulation6. Our understanding of these complex biological processes controlled by mitochondria relies on robust methods for assessing their morphology, their protein and lipid composition, the integrity of their DNA, and their numerous vital functions. The budding yeast Saccharomyces cerevisiae, a genetically and biochemically manipulable unicellular eukaryote with annotated genome and well-defined proteome, is a valuable model for studying the molecular and cellular mechanisms underlying essential biological functions of mitochondria. For these types of studies, it is crucial to have highly pure mitochondria. Here we present a detailed description of a rapid and effective method for purification of yeast mitochondria. This method enables the isolation of highly pure mitochondria that are essentially free of contamination by other organelles and retain their structural and functional integrity after their purification. Mitochondria purified by this method are suitable for cell-free reconstitution of essential mitochondrial processes and can be used for the analysis of mitochondrial structure and functions, mitochondrial proteome and lipidome, and mitochondrial DNA.

We describe a rapid and effective method for purification of mitochondria from the yeast Saccharomyces cerevisiae. This method enables the high-yield isolation of pure mitochondria that are essentially free of contamination by other organelles and retain their structural and functional integrity after their purification.

효모 세포 Mitochondria의 정화

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

생물학

Preparation and Respirometric Assessment of Mitochondria Isolated from Skeletal Muscle Tissue Obtained by Percutaneous Needle Biopsy

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining samples of human Vastus lateralis, isolating mitochondria from minimal amounts of skeletal muscle tissue, and plate based respirometric profiling using an extracellular flux (XF) analyzer. Comparison of respirometric profiles obtained using 1.0, 2.5 and 5.0 &#956;g of mitochondria indicate that 1.0 &#956;g is sufficient to measure respiration and that 5.0 &#956;g provides most consistent results based on comparison of standard errors. Western blot analysis of isolated mitochondria for mitochondrial marker COX IV and non-mitochondrial tissue marker GAPDH indicate that there is limited non-mitochondrial contamination using this protocol. The ability to study mitochondrial respirometry in as little as 20 mg of muscle tissue allows users to utilize individual biopsies for multiple study endpoints in clinical research projects.

Methods for biopsy of Vastus lateralis, preparation of purified mitochondria, and respirometric profiling are described. The use of small muscle volume makes this technique suitable for clinical research applications.

경피적 바늘 생검에 의해 획득 골격근 조직에서 고립 된 미토콘드리아의 준비 및 호흡계 평가

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining ...

의학

미토콘드리아 접촉 부위의 분리

An Improved Method to Isolate Mitochondrial Contact Sites

Mitochondria are present in virtually all eukaryotic cells and perform essential functions that go far beyond energy production, for instance, the synthesis of iron-sulfur clusters, lipids, or proteins, Ca2+ buffering, and the induction of apoptosis. Likewise, mitochondrial dysfunction results in severe human diseases such as cancer, diabetes, and neurodegeneration. In order to perform these functions, mitochondria have to communicate with the rest of the cell across their envelope, which consists of two membranes. Therefore, these two membranes have to interact constantly. Proteinaceous contact sites between the mitochondrial inner and outer membranes are essential in this respect. So far, several contact sites have been identified. In the method described here, Saccharomyces cerevisiae mitochondria are used to isolate contact sites and, thus, identify candidates that qualify for contact site proteins. We used this method to identify the mitochondrial contact site and cristae organizing system (MICOS) complex, one of the major contact site-forming complexes in the mitochondrial inner membrane, which is conserved from yeast to humans. Recently, we further improved this method to identify a novel contact site consisting of Cqd1 and the Por1-Om14 complex.

저자 스포트라이트: 미토콘드리아 접촉 부위 및 아키텍처 인사이트 공개 

Mitochondrial contact sites are protein complexes that interact with mitochondrial inner and outer membrane proteins. These sites are essential for the communication between the mitochondrial membranes and, thus, between the cytosol and the mitochondrial matrix. Here, we describe a method to identify candidates qualifying for this specific class of proteins.

미토콘드리아 접촉 부위를 분리하는 개선된 방법

Mitochondria are present in virtually all eukaryotic cells and perform essential functions that go far beyond energy production, for instance, the ...

Supercomplex 분석을 위한 작은 조직 샘플의 미토콘드리아 분획

Isolation of Mitochondria for Mitochondrial Supercomplex Analysis from Small Tissue and Cell Culture Samples

Over the last decades, the evidence accumulated about the existence of respiratory supercomplexes (SCs) has changed our understanding of the mitochondrial electron transport chain organization, giving rise to the proposal of the "plasticity model." This model postulates the coexistence of different proportions of SCs and complexes depending on the tissue or the cellular metabolic status. The dynamic nature of the assembly in SCs would allow cells to optimize the use of available fuels and the efficiency of electron transfer, minimizing reactive oxygen species generation and favoring the ability of cells to adapt to environmental changes. 
More recently, abnormalities in SC assembly have been reported in different diseases such as neurodegenerative disorders (Alzheimer's and Parkinson's disease), Barth Syndrome, Leigh syndrome, or cancer. The role of SC assembly alterations in disease progression still needs to be confirmed. Nevertheless, the availability of enough amounts of samples to determine the SC assembly status is often a challenge. This happens with biopsy or tissue samples that are small or have to be divided for multiple analyses, with cell cultures that have slow growth or come from microfluidic devices, with some primary cultures or rare cells, or when the effect of particular costly treatments has to be analyzed (with nanoparticles, very expensive compounds, etc.). In these cases, an efficient and easy-to-apply method is required. This paper presents a method adapted to obtain enriched mitochondrial fractions from small amounts of cells or tissues to analyze the structure and function of mitochondrial SCs by native electrophoresis followed by in-gel activity assays or western blot.

저자 스포트라이트: Unveiling Oxidative Phosphorylation System Dynamics and Mitochondrial Roles in Health and Disease

This protocol describes a technique for the analysis of respiratory supercomplexes when only small amounts of samples are available.

Isolation of Mitochondria for Mitochondrial Supercomplex Analysis from Small Tissue and Cell Culture Samples(소조직 및 세포 배양 샘플에서 미토콘드리아 초복합체 분석을 위한 미토콘드리아 분리) 

Over the last decades, the evidence accumulated about the existence of respiratory supercomplexes (SCs) has changed our understanding of the mitochondrial ...

조직 해리 차동 여과 이식 미토콘드리아의 신속한 분리 및 정제

요약

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절연 및 호흡 측정의 미토 콘 드리 아 애기 thaliana 에서

HEK 세포에서 Mitoribosome의 신속한 격리

효모 세포 Mitochondria의 정화

경피적 바늘 생검에 의해 획득 골격근 조직에서 고립 된 미토콘드리아의 준비 및 호흡계 평가

미토콘드리아 접촉 부위를 분리하는 개선된 방법

미토콘드리아 접촉 부위를 분리하는 개선된 방법

미토콘드리아 접촉 부위를 분리하는 개선된 방법

Isolation of Mitochondria for Mitochondrial Supercomplex Analysis from Small Tissue and Cell Culture Samples(소조직 및 세포 배양 샘플에서 미토콘드리아 초복합체 분석을 위한 미토콘드리아 분리)

Isolation of Mitochondria for Mitochondrial Supercomplex Analysis from Small Tissue and Cell Culture Samples(소조직 및 세포 배양 샘플에서 미토콘드리아 초복합체 분석을 위한 미토콘드리아 분리)

Isolation of Mitochondria for Mitochondrial Supercomplex Analysis from Small Tissue and Cell Culture Samples(소조직 및 세포 배양 샘플에서 미토콘드리아 초복합체 분석을 위한 미토콘드리아 분리)