PS는 망막 세포 생물학에있는 캐나다 연구 의자와 알콘 연구소의 새로운 탐정 상을 보유하고있다. 이 작품은 건강 연구의 캐나다 연구소 (221478)에서 교부금에 의해 지원되었다, 캐나다 당뇨병 협회 (OG​​ -3 - 11-3329 - PS), 캐나다 자연 과학 및 공학 연구위원회 (418637)와 재단 파이팅 실명 캐나다. 지원은 RESEAU 드 공들인 엉 상테 드 라 비전 뒤 퀘벡에 의해 제공되었다.

윤리 문 : 모든 동물 실험은 비전과 안과 안과에서 동물의 사용 및 비전 연구 및 동물 관리의 캐나다 협의회 (ARVO) 문에 연구를위한 협회에 의해 설립 된 동물 보호 지침을 준수합니다. 1. 산소 유도 망막 병증 (OIR) <ol><li> 기록 P0로 마우스 새끼의 생년월일. </li><li> 적절한 체중 범위를 보장하기 위해 O 2에 진입에 동물의 모든 무게를 기록한다. 참고 : P17의 C57BL / 6 마우스의 경우, 체중은 최대 NV 32 5 7.5 g 사이의 범위해야합니다. 환경의 일관성을 유지하기 위해서는, (유전자 변형 마우스뿐만 아니라 마우스는 실험적인 치료를받는) 제어로 한배 새끼를 사용하는 것이 추천된다. 바이러스 성 벡터의 효과를 평가할 때, 하나는 바이러스의 굴곡 운동을 고려하고 바이러스 성 전달 형질 전환 유전자의 완전한 표현을위한 충분한 시간을 허용해야합니다. 급속하게 표현하는 바이러스이러한 제 3 세대 lentiviruses 24, 25 등의 벡터는, 33를 권장합니다. </li><li> P7 (C57BL / 6 원하는 주)과 오일 (27)에 대해 75 %의 O 2로 설정 산소 챔버에 어머니를 육성 CD1에서 개최 마우스 새끼. 환경 습도와 온도는 O 2 노출에 걸쳐 일정하게 유지되었다. 참고 : O 2의 중앙 소스를 갖추고 연구 시설에 이상적입니다 및 빈 O 2 탱크의 번거로운 교체를 제한 할 수 있습니다. 유전자 변형 또는 녹아웃 마우스로 작업하는 경우, 그 제어 및 실험 쥐가 동일한 균주 30, 29 내 유전 감도를 제한하기 위해 동일한 업체로부터 획득되어 있는지 확인하는 것이 중요합니다. </li><li> P12에서, 산소 챔버로부터 마우스를 제거하고 O 2 대기 온도 동물을 반환. </li></ol> 내부 망막에 화합물의 배달 2. 유리체 강내 주입 (WH약물 화합물 또는 재조합 단백질의 EN 평가하는 효과) <ol><li> P14에서, 산소 2 L / 분 (또는 선택의 동물 보호위원회의 승인을 마취)의 2 % 이소 플루 란 (isoflurane)와 마우스를 마취. 마취의 효과를 확인하기 위해, 순차적 집게로 꼬리 뒷발 및 귀 핀치. </li><li> 배꼽에 마우스를 놓습니다. </li><li> 모따 인출 유리 바늘 장착 멸균 10 μL 주사기를 사용하여, 45 °로, 눈의 후방 윤부에서 조사되는 화합물 또는 비히클 (생리 식염수)을 함유하는 용액으로 1 μL의 최대 볼륨의 주입을 수행 렌즈를 피하는 각도. 주 : 뽑아 유리 바늘 에폭시 수지의 방울을 사용 주사기에 부착된다. </li><li> 마우스의 눈에 면봉으로 윤활유 안과 연고 (이상적으로 항생제)의 드롭을 적용합니다. </li><li> 어머니가 육성으로 다시 케이지에 마우스를 반환합니다. 마우스는 조심스럽게 재까지 모니터링덮여 완전히 외래. </li></ol> 형광 안저 촬영에 의한 선박 관류 및 장벽 기능 (무결성) 3. 평가 <ol><li> 산소 2 L / 분 (또는 선택의 동물 보호위원회의 승인을 마취)의 2 % 이소 플루 란 (isoflurane)와 마우스를 마취. 마취의 효과를 확인하기 위해, 순차적 집게로 꼬리 뒷발 및 귀 핀치. 참고 : 재생이 평가되는 경우는 일반적으로 P17에서 수행된다. 또한 테이크 아웃 분석 P19과 P21에 혈관 무결성이 시간이 지남에 보존되어 있는지 확인합니다. </li><li> 일단 마취, 마우스의 무게를. </li><li> 해부 가위로 정중선 복부 절개를합니다. 주 : 해부 악기를 정기적으로 점검하고 선명해야한다. </li><li> 옆으로 갈비뼈를 잘라 집게의 도움으로 흉곽을 올립니다. 주 : 심장 손상을 피하기 위하여 측방으로 가능한 한 삭감하는 것이 필요하다. </li><li> perip 제거한 후마음에서 heral 조직은, 지혈 겸자로 하행 대동맥 클램프. </li><li> 천천히 25 G 바늘을 사용하여 좌심실에 플루오 레세 인 덱스 트란을 주입. 참고 : 혈관 장벽 기능을 조사하는 경우, 70 kDa의 플루 - 덱스 트란이 혈관의 무결성이 손상 될 때이 혈관 밖으로 누출되므로 사용된다. 조사가 혈관을 캐스팅하고자하는 경우, 2 MDA의 형광 - 덱스 트란이 사용됩니다. 중요한 단계 : 1) 균질 다시 파티션, 원심 분리기 플루오 레세 인 덱스 트란을 보장하고, 상층 액을 주입, 2) 혈관 수축을 방지하기 위해, 따뜻하게 플루오 레세 인 덱스 트란 용액을 주입하기 위해, 3) 그 순환 시간해야 초과하지 4 분. </li><li> 운영 가위 주사 후 쥐에게 2 분 목을 벨. </li></ol> 4. 핵의 제거 및 눈 고정 참고 : 혈관 재생의 비율을 평가하는 경우, 첫 번째 P12에 추가적으로 P14과 P17에 망막을 수집. 샘플링 된 시점의 수를 늘재관류 24의 비율의보다 정확한 측정을위한의. <ol><li> 마우스 머리를 기울이고 옆에 놓습니다. </li><li> 피부와 해부 가위를 사용하여 눈을 덮고있는 눈꺼풀을 제거합니다. </li><li> 눈 아래의 곡선 포셉을 놓고 부드럽게 시신경이 절단 될 때까지를 당기십시오. </li><li> 그것의 다른면에 마우스의 머리를 켜고 동일한 단계를 (4.2 및 4.3 단계) 수행합니다. </li><li> 정착액의 잘 침투를 보장하기 위해 30 G 바늘을 이용하여 안구의 전방에 구멍을 천공. </li><li> 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)를 포함하는 튜브에 눈을 옮기고, 실온에서 1 시간 동안 고정한다. </li><li> PFA를 제거하고 얼음처럼 차가운 PBS 용액으로 눈을 4 번 씻는다. </li></ol> 5. 망막 해부 <ol><li> 차가운 PBS를 포함하는 배양 접시에 마우스 눈을 놓고 실체 현미경을 이용하여 망막의 해부를 수행합니다. </li><li> 마이크로 해부 SCI​​와 눈 주위의 여분의 지방 / 조직을 제거ssors. </li><li> 마이크로 해부 가위로 각막을 잘라. </li><li> 포셉 두 쌍을 사용하여 미세하게 떨어져 시신경을 향해 주변의 공막을 벗겨 버린다. </li><li> 집게로 렌즈 (각막 아래에 흰 공을) 조이고 아이 컵에서 압축을 풉니 다. 한 지원과 같은 집게의 쌍, 그립에 다른 사람을 사용하여 조심스럽게 렌즈를 제기하고 제거합니다. </li><li> 작은 브러쉬 (크기 0)와 집게를 사용하여 망막의 안쪽에서 hyaloid 혈관을 분리합니다. </li><li> 집게를 사용하여 시신경 유두에 연결 hyaloid 선박의 번들을 제거합니다. </li><li> 전송 전에 염색 절차를 시작하기에 얼음에 PBS와 장소를 포함하는 2 ㎖의 마이크로 원심 튜브에 망막을 해부. </li></ol> 6. 망막 혈관 염색 <ol><li> 밤새 부드러운의 찬란 PBS의 커플 isolectin의 B4 (로다 민 - 렉틴 등)이 1 ㎜ 염화칼슘을 함유 한 용액에 4 ° C에서 진탕 해부 망막을 품어 </서브&gt; (1:100가 2 ㎎ / ㎖ isolectin B4 용액의 희석 권장). 전체 염색 절차를 수행하는 동안, 알루미늄 호일이나 빛으로부터 보호하기 위해 불투명 호일로 튜브를 포함한다. </li><li> 다음 날, 염색 액을 제거하고, 실온에서 10 분 동안 PBS에서 3X 망막 씻는다. </li></ol> 망막 Flatmounts 7. 준비 <ol><li> 현미경 슬라이드에, 광수 쪽 아래로 망막을 전송하고 네 개의 동일한 크기의 사분면으로 망막을 분할하는 수술 메스를 사용하여 네 개의 깊은 등거리 방사상 절개를합니다. 이 이동하지 않도록 절개 동안 붓으로 망막 붙잡아. </li><li> PBS에 담가 두 브러쉬를 사용하여 조심스럽게 사분면의 광 수용체 측이 아래로 평평하게 사진 표백을 방지하기 위해 장착 매체에서 망막을 몰두. 조심스럽게 압력을 적용하고 공기 기포는 커버 슬립에 따라 누적되지 않도록하지 않고 장착 망막의 표면에 커버 슬립을 배치. &lt;/ 리&gt; </ol> 8. 이전 31 설명 된 이미징 및 Vasoobliteration (VO) 및 혈관 신생 (NV)의 정량화로 <ol><li> 10 배의 배율로 에피 형광 현미경으로 전체 마운트 망막의 이미지를 가져 가라. </li><li> 사진 편집 소프트웨어의 망막 이미지를 열고, 함께 스티치와 전체 망막 영역 및 무 혈관 영역을 측정합니다. 위치는 픽셀 단위로 표현 될 수있다. </li><li> 전체 망막 영역의 화소 수에 의해 무 혈관 영역에서 픽셀 수를 분할하여 VO의 정도를 결정한다. </li><li> 기재 (31)로서 전체 망막 영역의 화소 수로 NV의 픽셀 수를 분할함으로써 NV의 범위를 결정. </li></ol>

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	<li>Carmeliet, P., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+mechanisms+of+nerve+and+blood+vessel+wiring.">Common mechanisms of nerve and blood vessel wiring.</a> Nature. 436, 193-200 (2005).</li><li>Eichmann, A., Thomas, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Parallels+between+Neural+and+Vascular+Development.">Molecular Parallels between Neural and Vascular Development.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 3, (2012).</li><li>Larrivee, B., Freitas, C., Suchting, S., Brunet, I., Eichmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+of+vascular+development:+lessons+from+the+nervous+system.">Guidance of vascular development: lessons from the nervous system.</a> Circ Res. 104, 428-441 (2009).</li><li>Stefater Iii, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis+by+a+non-canonical+Wnt-Flt1+pathway+in+myeloid+cells.">Regulation of angiogenesis by a non-canonical Wnt-Flt1 pathway in myeloid cells.</a> Nature. 474, 511-515 (2011).</li><li>Checchin, D., Sennlaub, F., Levavasseur, E., Leduc, M., Chemtob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+role+of+microglia+in+retinal+blood+vessel+formation.">Potential role of microglia in retinal blood vessel formation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 3595-3602 (2006).</li><li>Quaegebeur, A., Lange, C., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurovascular+link+in+health+and+disease:+molecular+mechanisms+and+therapeutic+implications.">The neurovascular link in health and disease: molecular mechanisms and therapeutic implications.</a> Neuron. 71, 406-424 (2011).</li><li>Yamamoto, Y., Craggs, L., Baumann, M., Kalimo, H., Kalaria, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+molecular+genetics+and+pathology+of+hereditary+small+vessel+diseases+of+the+brain.">Review: molecular genetics and pathology of hereditary small vessel diseases of the brain.</a> Neuropathol Appl Neurobiol. 37, 94-113 (2011).</li><li>Brun, A., Englund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+white+matter+disorder+in+dementia+of+the+Alzheimer+type:+a+pathoanatomical+study.">A white matter disorder in dementia of the Alzheimer type: a pathoanatomical study.</a> Ann Neurol. 19, 253-262 (1986).</li><li>Prat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+of+multiple+sclerosis+lymphocytes+through+brain+endothelium.">Migration of multiple sclerosis lymphocytes through brain endothelium.</a> Arch Neurol. 59, 391-397 (2002).</li><li>Rule, R. R., Schuff, N., Miller, R. G., Weiner, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gray+matter+perfusion+correlates+with+disease+severity+in+ALS.">Gray matter perfusion correlates with disease severity in ALS.</a> Neurology. 74, 821-827 (2010).</li><li>Antonetti, D. A., Klein, R., Gardner, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+retinopathy.">Diabetic retinopathy.</a> N Engl J Med. 366, 1227-1239 (2012).</li><li>Hartnett, M. E., Penn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+management+of+retinopathy+of+prematurity.">Mechanisms and management of retinopathy of prematurity.</a> N Engl J Med. 367, 2515-2526 (2012).</li><li>Sapieha, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+of+prematurity:+understanding+ischemic+retinal+vasculopathies+at+an+extreme+of+life.">Retinopathy of prematurity: understanding ischemic retinal vasculopathies at an extreme of life.</a> J Clin Invest. 120, 3022-3032 (2010).</li><li>Chen, J., Smith, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+of+prematurity.">Retinopathy of prematurity.</a> Angiogenesis. 10, 133-140 (2007).</li><li>Cheung, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetic+retinopathy+and+systemic+vascular+complications.">Diabetic retinopathy and systemic vascular complications.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27, 161-176 (2008).</li><li>Smith, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Through+the+eyes+of+a+child:+understanding+retinopathy+through+ROP+the+Friedenwald+lecture.">Through the eyes of a child: understanding retinopathy through ROP the Friedenwald lecture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 5177-5182 (2008).</li><li>Caballero, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+vascular+damage+can+be+repaired+by+healthy,+but+not+diabetic,+endothelial+progenitor+cells.">Ischemic vascular damage can be repaired by healthy, but not diabetic, endothelial progenitor cells.</a> Diabetes. 56, 960-967 (2007).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-mediated+STAT3+activation+inhibits+retinal+vascularization+by+down-regulating+local+erythropoietin+expression.">VEGF-mediated STAT3 activation inhibits retinal vascularization by down-regulating local erythropoietin expression.</a> Am J Pathol. 180, 1243-1253 (2012).</li><li>Ritter, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid+progenitors+differentiate+into+microglia+and+promote+vascular+repair+in+a+model+of+ischemic+retinopathy.">Myeloid progenitors differentiate into microglia and promote vascular repair in a model of ischemic retinopathy.</a> J Clin Invest. 116, 3266-3276 (2006).</li><li>Saito, Y., Geisen, P., Uppal, A., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+NAD(P)H+oxidase+reduces+apoptosis+and+avascular+retina+in+an+animal+model+of+retinopathy+of+prematurity.">Inhibition of NAD(P)H oxidase reduces apoptosis and avascular retina in an animal model of retinopathy of prematurity.</a> Mol Vis. 13, 840-853 (2007).</li><li>Connor, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+dietary+intake+of+omega-3-polyunsaturated+fatty+acids+reduces+pathological+retinal+angiogenesis.">Increased dietary intake of omega-3-polyunsaturated fatty acids reduces pathological retinal angiogenesis.</a> Nat Med. 13, 868-873 (2007).</li><li>Banin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T2-TrpRS+inhibits+preretinal+neovascularization+and+enhances+physiological+vascular+regrowth+in+OIR+as+assessed+by+a+new+method+of+quantification.">T2-TrpRS inhibits preretinal neovascularization and enhances physiological vascular regrowth in OIR as assessed by a new method of quantification.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 2125-2134 (2006).</li><li>Dorrell, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+retinal+astrocytes+normalizes+revascularization+and+prevents+vascular+pathology+associated+with+oxygen-induced+retinopathy.">Maintaining retinal astrocytes normalizes revascularization and prevents vascular pathology associated with oxygen-induced retinopathy.</a> Glia. 58, 43-54 (2010).</li><li>Joyal, J. -. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+neurons+prevent+vascular+regeneration+of+neural+tissue+by+secreting+semaphorin+3A.">Ischemic neurons prevent vascular regeneration of neural tissue by secreting semaphorin 3A.</a> Blood. 117, 6024-6035 (2011).</li><li>Binet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+ER+Stress+Impedes+Myeloid-Cell-Induced+Vascular+Regeneration+through+IRE1alpha+Degradation+of+Netrin-1.">Neuronal ER Stress Impedes Myeloid-Cell-Induced Vascular Regeneration through IRE1alpha Degradation of Netrin-1.</a> Cell Metab. 17, 353-371 (2013).</li><li>Fukushima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sema3E-PlexinD1+signaling+selectively+suppresses+disoriented+angiogenesis+in+ischemic+retinopathy+in+mice.">Sema3E-PlexinD1 signaling selectively suppresses disoriented angiogenesis in ischemic retinopathy in mice.</a> J Clin Invest. 121, 1974-1985 (2011).</li><li>Smith, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse.">Oxygen-induced retinopathy in the mouse.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 35, 101-111 (1994).</li><li>Lange, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+retinal+vaso-obliteration+and+neovascularisation+in+the+oxygen-induced+retinopathy+(OIR)+mouse+model.">Kinetics of retinal vaso-obliteration and neovascularisation in the oxygen-induced retinopathy (OIR) mouse model.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 247, 1205-1211 (2009).</li><li>Connor, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse:+a+model+of+vessel+loss,+vessel+regrowth+and+pathological+angiogenesis.">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological angiogenesis.</a> Nature Protocols. 4, 1565-1573 (2009).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 2813-2826 (2010).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-aided+quantification+of+retinal+neovascularization.">Computer-aided quantification of retinal neovascularization.</a> Angiogenesis. 12, 297-301 (2009).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+Weight+Gain+Modifies+Severity+and+Functional+Outcome+of+Oxygen-Induced+Proliferative+Retinopathy.">Postnatal Weight Gain Modifies Severity and Functional Outcome of Oxygen-Induced Proliferative Retinopathy.</a> Am J Pathol. 177, 2715-2723 (2010).</li><li>Cerani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron-Derived+Semaphorin+3A+is+an+Early+Inducer+of+Vascular+Permeability+in+Diabetic+Retinopathy+via+Neuropilin-1.">Neuron-Derived Semaphorin 3A is an Early Inducer of Vascular Permeability in Diabetic Retinopathy via Neuropilin-1.</a> Cell Metabolism. 18, 505-518 (2013).</li><li>Sapieha, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eyeing+central+neurons+in+vascular+growth+and+reparative+angiogenesis.">Eyeing central neurons in vascular growth and reparative angiogenesis.</a> Blood. 120, 2182-2194 (2012).</li><li>Dorfman, A., Dembinska, O., Chemtob, S., Lachapelle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+manifestations+of+postnatal+hyperoxia+on+the+retinal+structure+and+function+of+the+neonatal+rat.">Early manifestations of postnatal hyperoxia on the retinal structure and function of the neonatal rat.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 458-466 (2008).</li><li>Dorfman, A. L., Joly, S., Hardy, P., Chemtob, S., Lachapelle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+oxygen+and+light+on+the+structure+and+function+of+the+neonatal+rat+retina.">The effect of oxygen and light on the structure and function of the neonatal rat retina.</a> Doc Ophthalmol. 118, 37-54 (2009).</li><li>Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis,+angiogenesis,+and+MRI+indices+of+functional+recovery+from+stroke.">Neurogenesis, angiogenesis, and MRI indices of functional recovery from stroke.</a> Stroke. 38, 827-831 (2007).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+improved+cerebral+blood+flow+in+the+ischemic+boundary+area+detected+by+MRI+after+administration+of+sildenafil+to+rats+with+embolic+stroke.">Angiogenesis and improved cerebral blood flow in the ischemic boundary area detected by MRI after administration of sildenafil to rats with embolic stroke.</a> Brain Res. 1132, 185-192 (2007).</li><li>Robinson, R., Barathi, V. A., Chaurasia, S. S., Wong, T. Y., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+animal+models+of+diabetic+retinopathy:+from+molecular+approaches+to+mice+and+higher+mammals.">Update on animal models of diabetic retinopathy: from molecular approaches to mice and higher mammals.</a> Dis Model Mech. 5, 444-456 (2012).</li><li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks.">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat Genet. 37, 1181-1186 (2005).</li><li>Jenuth, J. P., Peterson, A. C., Shoubridge, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+selection+for+different+mtDNA+genotypes+in+heteroplasmic+mice.">Tissue-specific selection for different mtDNA genotypes in heteroplasmic mice.</a> Nat Genet. 16, 93-95 (1997).</li><li>Mattapallil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rd8+mutation+of+the+Crb1+gene+is+present+in+vendor+lines+of+C57BL/6N+mice+and+embryonic+stem+cells,+and+confounds+ocular+induced+mutant+phenotypes.">The Rd8 mutation of the Crb1 gene is present in vendor lines of C57BL/6N mice and embryonic stem cells, and confounds ocular induced mutant phenotypes.</a> Investigative ophthalmolog., &amp; visual science. 53, 2921-2927 (2012).</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

허혈성 신경 조직의 새로운 건강한 혈관의 성장을 촉진하는 가장 효과적인 방법은 무엇입니까? 그것은 방해하고 혈관 재성장을 자연적으로 발생하는 가속 치료 유효합니까? 허혈성 망막 병증이나 뇌졸중과 같은 신경 허혈성 병변에서 혈관 변성 감소 된 신경 세포의 기능을 35 ~ 38과 연결되어 있습니다. 따라서 질병의 초기 / 즉시 세그먼트 동안 지역의 미세 순환을 복직, 초기 부상에 대응...

CNS의 발달, 신경, 면역 세포 및 혈관에 걸쳐 적절한 조직 관류를 보장하고 감각 정보 1-5의 송신을 허용하도록 현저 결합 네트워크를 확립한다. 부족한 조직의 산소 및 손상 대사 공급하고있는 혈관 시스템의 결과의 분석은 점점 더 신경 퇴행성 질환 (6)의 발병 기전에 중요한 기여로 인식되고 있습니다. 혈관 강하 및 뇌 내의 신경 혈관 기기의 열화는, 예를 들어, 혈관성 치매, 뇌 7의 흰색 물질의 혈관 병변과 동맥 및 소형 선박 8 협착 알츠하이머 질환과 관련이 있습니다. 또, 손상된 혈관 장벽 기능은 다발성 경화증 (9) 및 근 위축성 측삭 경화증 (10)을 올릴 것으로 생각된다. 눈부신,이 프로토콜에 설명 된 망막 모델에 직접 관련이당뇨병 성 망막 병증 (11)과 미숙아 망막 병증 (12)과 같은 질병은 13 초 혈관 변성의 위상을 특징으로한다. 신경 혈관 망막에 계속되는 허혈성 스트레스 가능성이 다시 임명하다 산소와 에너지 공급 14 ~ 16에 대한 보상 반응으로 발생한 과도하고 병적 인 혈관 신생의 두 번째 단계를 트리거합니다. 질병의 진행에 중심 허혈성 스트레스를 극복하는 매력적인 전략은 특별히 신경 망막 (그림 2와 3)의 허혈 영역에서 기능 혈관 네트워크를 복원하는 것입니다. 제어 혈관 반응을 자극하는 직관적 안티 - VEGFs 같은 항 혈관 신생 치료가 적합한 치료로 간주되는 조건으로 건너 올 수 있습니다. 그러나,이 방법의 유효성에 대한 증거가 설치된다. 예를 들어, ischem에서 &quot;생리와 같은&quot;혈관 재성장을 강화IC의 망막 병증은 우아 내피 전구 세포 (17),식이 ω-3 고도 불포화 지방산을 증가 다른 혈관 신생 인자 (18), 골수 전구 세포 (19)의 주입, NADPH 산화 효소에 의한 세포 사멸 (20)의 억제의 뮐러 세포 발현 된 VEGF에 의한 하향 조절 억제의 도입을 통해 입증되었습니다 산 입구 (21), 트립토판의 tRNA 합성 효소 (22)의 카르 복실 말단 단편, 그리고 glial 세포 (23)의 보호를위한 VEGF 또는 FGF-2의 직접적인 관리와 치료. 또한, 우리는 허혈성 망막 병증 이러한 Semaphorins 또는 Netrins 같은 고전의 연결을 유도 신호를 변조하는 망막 내에서 건강한 혈관의 혈관 재생을 촉진하고 결과적으로 병적 인 혈관 신생 (24, 25)를 감소 시킨다는 것을 증명하고있다. 직접 임상 관련성의, 전술 한 동물 연구의 몇 가지 증거를 제공하는 혈관 재 추진망막증의 조기 허혈성 단계 동안 생성 가능성이 상당히 허혈성 부담의 감소를 통해, 시력을 위협 사전 망막 신생 혈관 (19), (23, 24), (26)을 감소시킬 수있다. 기능 혈관의 재생을 자극하는 치료 전략을 고안하는 것은 혈관 생물학을위한 중요한 과제로 남아. 여기에서 우리는 망막 내 혈​​관의 재성장을 조절하는 전략을 탐구하는 산소에 의한 망막 병증 (OIR)의 마우스 모델을 사용하는 실험 시스템을 설명합니다. 스미스 등에 의해 개발 1994. (27),이 모델은 인간의 증식 망막 병증에 대한 프록시 역할을하며 실내 순환 O 2 장력 (그림에 P12까지 75 %의 O 2 P7 마우스 새끼를 노출 이후에 새끼를 다시 도입 구성 1). 이 패러다임은 느슨하게 미숙아는 통풍이 시나리오를 모방O 2. 고농도 산소에 마우스 새끼의 노출은 망막 모세 혈관 및 미세 혈관의 변성을 유발하고, 최대 VO 영역이 후 48 시간 (P9)에 도달하지만, 일반적으로, P12에서 O 2 종료에 따라 평가 혈관 폐색의 재현 영역 (VO)를 산출 O 2 28에 노출. 마우스에서 무 혈관의 VO 영역은 자발적으로 실내 공기에 다시 소개 다음 주에 걸쳐 재생 결국 VO 지역은 완전히 (그림 2) 다시 혈관이 있습니다. OIR을 실시 생쥐의 실내 공기에 재 도입은 일반적으로 항 혈관 신생 치료 패러다임의 효능을 결정하기 위해 평가된다 사전 망막 혈관 신생 (NV) (P17에서 최대)을 불러 일으킨다. 그것의 순수한 형태, OIR 모델은 산소 - 유도 된 혈관 변성을 평가하고 파괴 사전 망막 신생 혈관 29-31의 범위를 결정하기 위해 높은 재현성 및 정량화 도구를 제공한다. <p claSS = &quot;jove_content는&quot;&gt; CNS의 혈관 재생을 조절하는 다양한 답사의 치료 패러다임이 약물 화합물, 유전자 치료, 유전자 삭제 등의 사용을 포함하여 OIR 모델을 사용하여 조사 할 수있다. 혈관 재성장에 영향을 미칠 수있는 특정 방법의 성향은 단계별 P12 (고농도 산소 종료 후 최대 VO)와 P17 (최대 NV) 사이의 창에서 평가된다. 병적 NV의 치료 결과의 평가는 신속하고 용이하게 병렬로 결정될 수있다 철저히 스탈 및 동료 30, 31에 의해 설명되었다. 여기에서 우리는 약물 화합물, 미래의 치료제, 바이러스 성 벡터에 의해 신경 망막 내에서 생리적 재관류 술의 변조를 조사하거나 유전자 변형 또는 녹아웃 마우스에서 후보 유전자의 영향을 연구하기 위해 간단한 단계별 절차를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6 mice (Other strains may be used; angiogenic response varies from one strain to the other)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD1 nursing mothers</td><td>Vendor of choice</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operating Scissors straight</td><td>World Precision Instruments</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Scissors straight</td><td>World Precision Instruments</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Eye Scissors</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-8483</td><td></td></tr><tr><td>Iris Forceps, curved, serrated</td><td>World Precision Instruments</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>Brushes 362R size 0</td><td>Dynasty</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont Forceps #3; straight</td><td>World Precision Instruments</td><td>500338</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Blade, size 10</td><td>Bard-Parker</td><td>371110</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Laboratories, Inc</td><td>RL-1102</td><td></td></tr><tr><td>Microscope slides</td><td>VWR</td><td>16004-368</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Observer Z1 Inverted Phase and Fluorescence Microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica MZ9.5 Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein isothicyanate-dextran, 70000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46945</td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of vascular regeneration in the cns using the mouse retina

설치류 망막 아마도 중추 신경계 (CNS) 신경 혈관 내 상호 작용을 조사 할 수있는 가장 접근 포유류 시스템이다. 그것은 점점 인식되고 그 알츠하이머, 다발성 경화증, 혈관 손상의 근 위축성 측삭 경화증 본 요소 등 여러 가지 신경 퇴행성 질환. 또한, 소아 및 가능 연령 인구 (각각 미숙아 및 당뇨 망막 병증,)에서 실명의 가장 눈에 띄는 원인은 생리적 혈관 재성장의 혈관 변성과 실패에 의해 특징입니다. 이 기술 문서의 목적은 망막에 CNS의 혈관 재생을 연구하기 위해 상세한 프로토콜을 제공하는 것입니다. 방법은 허혈 손상 후에 혈관 성장의 실패로 이어질 분자 메커니즘을 규명하기 위해 사용될 수있다. 또한, 잠재적 인 치료 양식 건강한 혈관 plexuses을 가속화하고 복원하는 탐험 할 수있다. 연구 결과는 obtaineD 설명한 방법을 사용하여 당뇨병이나 미숙아 것과 허혈성 망막 병증에 대한 치료 적 수단을 제공 할 가능성이 CNS의 다른 혈관 질환에 유익있다.

OIR 모델은 널리 망막에 산소에 의한 혈관의 변성과 허혈에 의한 병적 인 혈관 신생을 연구하는 데 사용되며, 안구 질환 27, 29, 30에 대한 현재 사용중인 항 혈관 신생 치료의 개발에 도움이되었습니다. 이 모델을 사용하여 얻은 연구 결과는 느슨하게 증식 성 당뇨 망막 병증 및 미숙아 (30)의 망막 병증 등의 허혈성 망막 병증으로 추정 할 수있다. 여기에 우리가 ...

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Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

쥐의 망막은 오랫동안 뇌에 접근 창으로 인정을 받고있다. 이 기술 문서에서 우리는 허혈성 손상 후 중추 신경계 내에서 혈관 재생의 실패로 이어질 메커니즘을 연구하는 산소에 의한 망막 병증의 마우스 모델을 사용하는 프로토콜을 제공합니다. 기술 시스템은 망막과 중추 신경계 내에서 기능 혈관의 재성장을 촉진하는 전략을 탐구하는 무력화 할 수 있습니다.

마우스 망막을 사용하여 중추 신경계의 혈관 재생의 평가

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

assessment-of-vascular-regeneration-in-the-cns-using-the-mouse-retina

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.3K 조회수.  McGill University.  쥐의 망막은 오랫동안 뇌에 접근 창으로 인정을 받고있다. 이 기술 문서에서 우리는 허혈성 손상 후 중추 신경계 내에서 혈관 재생의 실패로 이어질 메커니즘을 연구하는 산소에 의한 망막 병증의 마우스 모델을 사용하는 프로토콜을 제공합니다. 기술 시스템은 망막과 중추 신경계 내에서 기능 혈관의 재성장을 촉진하는 전략을 탐구하는 무력화 할 수 있습?...

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Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, both in preclinical and clinical studies. However, to date results regarding functional outcome and/or tissue regeneration following stem cell transplantation are quite diverse. Generally, a clinical benefit is observed without profound understanding of the underlying mechanism(s)1. Therefore, multiple efforts have led to the development of different molecular imaging modalities to monitor stem cell grafting with the ultimate aim to accurately evaluate survival, fate and physiology of grafted stem cells and/or their micro-environment. Changes observed in one or more parameters determined by molecular imaging might be related to the observed clinical effect. In this context, our studies focus on the combined use of bioluminescence imaging (BLI), magnetic resonance imaging (MRI) and histological analysis to evaluate stem cell grafting.
BLI is commonly used to non-invasively perform cell tracking and monitor cell survival in time following transplantation2-7, based on a biochemical reaction where cells expressing the Luciferase-reporter gene are able to emit light following interaction with its substrate (e.g. D-luciferin)8, 9. MRI on the other hand is a non-invasive technique which is clinically applicable10 and can be used to precisely locate cellular grafts with very high resolution11-15, although its sensitivity highly depends on the contrast generated after cell labeling with an MRI contrast agent. Finally, post-mortem histological analysis is the method of choice to validate research results obtained with non-invasive techniques with highest resolution and sensitivity. Moreover end-point histological analysis allows us to perform detailed phenotypic analysis of grafted cells and/or the surrounding tissue, based on the use of fluorescent reporter proteins and/or direct cell labeling with specific antibodies.
In summary, we here visually demonstrate the complementarities of BLI, MRI and histology to unravel different stem cell- and/or environment-associated characteristics following stem cell grafting in the CNS of mice. As an example, bone marrow-derived stromal cells, genetically engineered to express the enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) and firefly Luciferase (fLuc), and labeled with blue fluorescent micron-sized iron oxide particles (MPIOs), will be grafted in the CNS of immune-competent mice and outcome will be monitored by BLI, MRI and histology (Figure 1).

This article describes an optimized sequence of events for multimodal imaging of cellular grafts in rodent brain using: (i) in vivo bioluminescence and magnetic resonance imaging, and (ii) post mortem histological analysis. Combining these imaging modalities on a single animal allows cellular graft evaluation with high resolution, sensitivity and specificity.

마우스의 중추 신경계에서 줄기 세포 주입의 Multimodal 이미징

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

연구

신경과학

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Angiogenesis is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting of new blood vessels from a pre-existing vessel network. Angiogenesis plays a key role not only in normal development of organs and tissues, but also in many diseases in which blood vessel formation is dysregulated, such as cancer, blindness and ischemic diseases. In adult life, blood vessels are generally quiescent so angiogenesis is an important target for novel drug development to try and regulate new vessel formation specifically in disease. In order to better understand angiogenesis and to develop appropriate strategies to regulate it, models are required that accurately reflect the different biological steps that are involved. The mouse neonatal retina provides an excellent model of angiogenesis because arteries, veins and capillaries develop to form a vascular plexus during the first week after birth. This model also has the advantage of having a two-dimensional (2D) structure making analysis straightforward compared with the complex 3D anatomy of other vascular networks. By analyzing the retinal vascular plexus at different times after birth, it is possible to observe the various stages of angiogenesis under the microscope. This article demonstrates a straightforward procedure for analyzing the vasculature of a mouse retina using fluorescent staining with isolectin and vascular specific antibodies.

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

The neonatal murine retina provides a well characterized physiological model of angiogenesis, which permits investigations of the roles of different genes or drugs that modulate angiogenesis in an in vivo context. Immunofluorescent staining to accurately visualize the vascular plexus is pivotal to the success of these types of studies.

혈관을 조사하기 위해 신생아 마우스 망막의 전체 마운트 면역 형광 염색<em&gt; 생체 내</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and postsynaptic projections to the visual cortex. Based on its distinct anatomical structure and convenient accessibility, it has become the favored structure for studies on neuronal survival, axonal regeneration, and synaptic plasticity. Recent advancements in MR imaging have enabled the in vivo visualization of the retino-tectal part of this projection using manganese mediated contrast enhancement (MEMRI). Here, we present a MEMRI protocol for illustration of the visual projection in mice, by which resolutions of (200 &#181;m)3 can be achieved using common 3 Tesla scanners. We demonstrate how intravitreal injection of a single dosage of 15 nmol MnCl2 leads to a saturated enhancement of the intact projection within 24 hr. With exception of the retina, changes in signal intensity are independent of coincided visual stimulation or physiological aging. We further apply this technique to longitudinally monitor axonal degeneration in response to acute optic nerve injury, a paradigm by which Mn2+ transport completely arrests at the lesion site. Conversely, active Mn2+ transport is quantitatively proportionate to the viability, number, and electrical activity of axon fibers. For such an analysis, we exemplify Mn2+ transport kinetics along the visual path in a transgenic mouse model (NF-&#954;B p50KO) displaying spontaneous atrophy of sensory, including visual, projections. In these mice, MEMRI indicates reduced but not delayed Mn2+ transport as compared to wild type mice, thus revealing signs of structural and/or functional impairments by NF-&#954;B mutations.
In summary, MEMRI conveniently bridges in vivo assays and post mortem histology for the characterization of nerve fiber integrity and activity. It is highly useful for longitudinal studies on axonal degeneration and regeneration, and investigations of mutant mice for genuine or inducible phenotypes.

In vivo Imaging of Optic Nerve Fiber Integrity by Contrast-Enhanced MRI in Mice

This video illustrates a method, using a clinical 3 T scanner, for contrast-enhanced MR imaging of the na&#239;ve mouse visual projection and for repetitive and longitudinal in vivo studies of optic nerve degeneration associated with acute optic nerve crush injury and chronic optic nerve degeneration in knock-out mice (p50KO).

마우스의 조영 증강 MRI에 의한 시신경 섬유 무결성의 생체 내 이미징

The rodent visual system encompasses retinal ganglion cells and their axons that form the optic nerve to enter thalamic and midbrain centers, and ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

일반 마우스의 70 % 부분 간 절제술 후 혈관 및 실질 재생의 시각화

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

의학

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent and cause visual impairment and blindness. Understanding how such diseases progress is critical to formulating new treatments. In vivo&#160;microscopy in animal models of disease is a powerful tool for understanding neurodegeneration and has led to important progress towards treatments of conditions ranging from Alzheimer&#39;s disease to stroke. Given that the retina is the only central nervous system structure inherently accessible by optical approaches, it naturally lends itself towards in vivo imaging. However, the native optics of the lens and cornea present some challenges for effective imaging access.
This protocol outlines methods for in vivo two-photon imaging of cellular cohorts and structures in the mouse retina at cellular resolution, applicable for both acute- and chronic-duration imaging experiments. It presents examples of retinal ganglion cell (RGC), amacrine cell, microglial, and vascular imaging using a suite of labeling techniques including adeno-associated virus (AAV) vectors, transgenic mice, and inorganic dyes. Importantly, these techniques extend to all cell types of the retina, and suggested methods for accessing other cellular populations of interest are described. Also detailed are example strategies for manual image postprocessing for display and quantification. These techniques are directly applicable to studies of retinal function in health and disease.

In vivo imaging is a powerful tool for the study of biology in health and disease. This protocol describes transpupillary imaging of the mouse retina with a standard two-photon microscope. It also demonstrates different in vivoimaging methods to fluorescently label multiple cellular cohorts of the retina.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Quantification of Vascular Parameters in Whole Mount Retinas of Mice with Non-Proliferative and Proliferative Retinopathies

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, gliosis&#160;and a progressive change in vascular function and structure. Although the onset of the retinopathies is characterized by subtle disturbances in visual perception, the modifications in the vascular plexus are the first signs detected by clinicians. The absence or presence of neovascularization determines whether the retinopathy is classified as either non-proliferative (NPDR) or proliferative (PDR). In this sense, several animal models tried to mimic specific vascular features of each stage to determine the underlying mechanisms involved in endothelium alterations, neuronal death and other events taking place in the retina. In this article, we will provide a complete description of the procedures required for the measurement of retinal vascular parameters in adults and early birth mice at postnatal day (P)17. We will detail the protocols to carry out retinal vascular staining with Isolectin GSA-IB4 in whole mounts for later microscopic visualization. Key steps for image processing with Image J Fiji software are also provided, therefore, the readers will be able to measure vessel density, diameter and tortuosity, vascular branching, as well as avascular and neovascular areas. These tools are highly helpful to evaluate and quantify vascular alterations in both non-proliferative and proliferative retinopathies.

This article describes a well-established and reproducible lectin stain assay for the whole mount retinal preparations and the protocols required for the quantitative measurement of vascular parameters frequently altered in proliferative and non-proliferative retinopathies.

비증식 및 증식 망막증을 가진 마우스의 전체 산 망막에 있는 혈관 매개변수의 정량화

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, ...

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To properly leverage this greater translatability, there is a need to devise reproducible methods of drawing quantitative data from these images. Optical coherence tomography (OCT) imaging can resolve retinal histology at micrometer resolution and reveal functional differences in vascular blood flow. Here, we delineate noninvasive vascular readouts that we use to characterize pathological damage post vascular insult in an optimized mouse model of retinal vein occlusion (RVO). These readouts include live imaging analysis of retinal morphology, disorganization of retinal inner layers (DRIL) measure of capillary ischemia, and fluorescein angiography measures of retinal edema and vascular density. These techniques correspond directly to those used to examine patients with retinal disease in the clinic. Standardizing these methods enables direct and reproducible comparison of animal models with clinical phenotypes of ophthalmic disease, increasing the translational power of vascular injury models.

In Vivo Vascular Injury Readouts in Mouse Retina to Promote Reproducibility

Here, we present three data analysis protocols for fluorescein angiography (FA) and optical coherence tomography (OCT) images in the study of Retinal Vein Occlusion (RVO).

생체 내 재현성 촉진을 위한 마우스 망막의 혈관 손상 판독

Advancements in ophthalmic imaging tools offer an unprecedented level of access to researchers working with animal models of neurovascular injury. To ...

Image-Guided Optical Coherence Tomography to Assess Structural Changes in Rodent Retinas

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural changes. These diseases affecting the fundus always exhibit typical abnormalities in certain cell types in the retina, including photoreceptor cells, retinal ganglion cells, cells in the retinal blood vessels, and cells in the choroidal vascular cells. Noninvasive, highly efficient, and adaptable imaging techniques are required for both clinical practice and basic research. Image-guided optical coherence tomography (OCT) satisfies these requirements because it combines fundus photography and high-resolution OCT, providing an accurate diagnosis of tiny lesions as well as important changes in the retinal architecture. This study details the procedures of data collection and data analysis for image-guided OCT and demonstrates its application in rodent models of choroidal neovascularization (CNV), optic nerve crush (ONC), light-induced retinal degeneration, and experimental autoimmune uveitis (EAU). This technique helps researchers in the eye field to identify rodent retinal structural changes conveniently, reliably, and tractably.

The protocol presented here details the procedures of data collection and data analysis for image-guided optical coherence tomography (OCT) and demonstrates its application in multiple rodent models of ocular diseases.

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural ...

An Ex Vivo Choroid Sprouting Assay of Ocular Microvascular Angiogenesis

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell (EC) proliferation assays using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs) or isolated primary retinal ECs are widely used in vitro models to study retinal angiogenesis. However, isolating pure murine retinal endothelial cells is technically challenging and retinal ECs may have different proliferation responses than choroidal endothelial cells and different cell/cell interactions. A highly reproducible ex vivo choroidal sprouting assay as a model of choroidal microvascular proliferation was developed. This model includes the interaction between choroid vasculature (EC, macrophages, pericytes) and retinal pigment epithelium (RPE). Mouse RPE/choroid/scleral explants are isolated and incubated in growth-factor-reduced basal membrane extract (BME) (day 0). Medium is changed every other day and choroid sprouting is quantified at day 6. The images of individual choroid explant are taken with an inverted phase microscope and the sprouting area is quantified using a semi-automated macro plug-in to the ImageJ software developed in this lab. This reproducible ex vivo choroidal sprouting assay can be used to assess compounds for potential treatment and for microvascular disease research to assess pathways involved in choroidal micro vessel proliferation using wild type and genetically modified mouse tissue.

This protocol presents choroid sprouting assay, an ex vivo model of microvascular proliferation. This assay can be used to assess pathways involved in proliferating choroidal micro vessels and assess drug treatments using wild type and genetically modified mouse tissue.

안구 미세 혈관 신생의 전 비보 코로이드 발아 분석

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell ...