私たちの研究は、一貫性と光の位置と距離を確保することにより、制御されたイメージングセットアップを使用した巨視的創傷測定の標準化に焦点を当てています。またはプロトコルは、変動を最小限に抑え、前臨床モデルでの創傷近接測定の通貨を改善することを目的としています。私たちは、顕微鏡的創傷測定における標準化の欠如に対処します。現在の方法論では、多くの場合、制御条件が欠如しており、データの一貫性が失われています。
当社のプロトコルは、均一な照明、位置決め、距離を確保し、確率を減らし、再現性を向上させる適用可能なセットアップを提供します。当社のプロトコルは、イメージング条件を標準化することにより、測定バイアスの一般的な原因を排除します。手動の方法とは異なり、実験間での一貫性が確保されるため、正確な比較が可能になり、創傷の面積と周辺測定のばらつきが減少します。
私たちの結果は、標準化された方法論を提供することにより、より正確で再現性のある創傷測定データを可能にします。これは、治療的介入と前臨床創傷研究を評価するための基礎です。まず、屋根の側端の内側にスロット付きアルミニウムプロファイルを固定します。
ポリエチレンを中心とする長方形のアルミニウム板を2枚、ルーフプロファイルの溝にセットして、両方のプロファイルをスライドさせます。両面テープを使用して、最初のパネルの下側の端に20センチメートルのRGB LEDチューブライトを45度の角度で取り付けます。次に、中央に7.82センチメートルの円形の切り欠きがある長方形のフォームボードパネルを各ルーフパネルに取り付けて、カメラレンズを取り付けます。
床工事の場合は、まず、40 x 40 cmの白いフォームボードの各コーナーから辺の長さが2.54センチメートルの正方形を切り取ります。この手順により、フォームボードが床面積のプロファイル内に適切に収まるようになります。角をトリミングした後、フォームボードを床面積のプロファイルの上に置きます。
フックとループファスナーストリップをアルミニウムプロファイルAおよびBに取り付けて、内部の写真ブース要素を簡単に操作できます。固定接着剤の留め具は、片側にある2つのフォーム段ボールの正方形の端から1センチメートルのところにあり、前面と背面の壁に配置します。シリコンを使用して、2つのパネルを側面CとDに接着して、左右の側面壁を形成します。
3Dプリントされたマスクを、40 x 28センチメートルの白いフォームボードの長方形のプレカットの端から11.5センチメートルのところに置き、マウスを吸入麻酔下で維持します。次に、参照ベースの中央に接着します。3Dプリントされた定規ブロックをマウスベースの左側から1センチメートルのところに固定して、デジタル画像処理の測定基準要素を収容します。
次に、15センチメートルのステンレス鋼の目盛り付き定規を定規ブロックに取り付け、画像スケーリングのためにキャビン内に完全な参照ベースを取り付けます。マウスに麻酔をかけた後、滅菌済みの5mm生検パンチを使用して、円を描くように圧力をかけ、肩甲骨レベルで皮膚表皮切開を行います。鋸歯状の鉗子でフラップを取り外し、虹彩先端ハサミでカットします。
宝石商の鉗子を使用して、直径1センチメートルの円形の皮膚フィルムを傷口に貼り、汚染と収縮を防ぎます。傷の画像を撮影するには、リファレンスベースをフォトブースの床の中央に配置します。次に、麻酔をかけたマウスをマウスプラットフォーム上の腹臥位に置きます。
フォトブースの正面壁を設置し、巨視的な画像を撮影します。作成したバックアップイメージを imagej で開くには、[ファイル]、[開く]、[検索] の順に移動します。次に、[開く] をクリックします。
次に、画像を最大化し、直線ツールを選択してから、プラスキーを使用してマウスの横にあるルーラーを拡大します。定規の画像に10ミリの直線を描きます。分析に移動し、スケールを設定します。
既知の距離として 10 を入力します。長さの単位をミリメートルに設定し、[OK] をクリックします。次に、長方形ツールを使用して、幅と高さが 150 の傷の周囲の領域を選択し、X 値と Y 値を記録します。
次に、長方形を右クリックして、[複製]を選択します。複製した画像に名前を付けて、Enterキーを押します。新しい画像で、プラスキーを 2 回押してズームインします。
画像をカラーチャネルに分割するには、[画像]、[タイプ]、および[RGBスタック]に移動します。赤チャンネルの画像で、画像を右クリックして[複製]を選択し、複製ウィンドウで[OK]を押します。次に、赤チャンネルの画像をクリックし、画像を選択し、調整し、しきい値を設定してセグメント化します。
[デフォルト] を選択し、[適用] をクリックしてしきい値処理を適用します。関心領域またはROIを修正して、完全な創傷カバレッジを確保し、セグメンテーションの歪みを回避します。対象エリアの周長を定義するには、[編集] を選択し、次に選択に移動して [選択セットの作成] を選択します。
その後、[編集]、[選択]の順に選択し、[マネージャーに追加]をクリックしてROIマネージャーに追加します。セグメンテーションを検証するには、ROI マネージャー ウィンドウを開き、確認する ROI を選択します。[その他]、[移動]の順にクリックし、記録されたX値とY値を入力して、[OK]を押します。
元の画像を最大化し、ROIマネージャーでROIを選択します。矢印キーを使用して、ROIが傷口と揃うまでROIを調整します。セグメンテーションが確認されたら、[分析] と [測定] を選択して創傷測定値を取得します。
創傷閉鎖率は、炎症過程により 2 日目に最初に 138.04% に増加し、その後減少して修復および硬化段階に向かって進行し、7 日目以降は一貫した閉鎖が観察されました。創傷縁の収縮距離は、炎症期に最初に増加しましたが、緩やかな創傷収縮を示すギルマンの方程式で示されるように、3日目以降に減少し始めました。
