以前は、化学物質が動脈収縮性に及ぼす影響を調べる主な方法は、臓器浴でのex vivoワイヤーミオグラフィーによるものでした。この技術の意義は、化学物質や遺伝子操作が生体内の血管セグメントに及ぼす影響を調べることができることです。この技術の主な利点は、慢性的な曝露と、動脈収縮性と血流に対する薬物の影響の長期評価を実施できることです。
これは、臓器浴の孤立した血管では不可能です。胎児の外在化を開始するには、雌羊に十分な麻酔の深さを確保します。.臍から乳房の頭蓋部分までの線状のアルバに20番のメスの刃を使用して、10センチメートルの標準的な開腹術切開を行います。
次に、皮膚切開の下の体壁の正中線を小さく切開し、メッツェンバウムのハサミを使用して腹腔を開きます。胎児を含む子宮を腹壁から外装し、母体の腹部と子宮の間に滅菌手術用タオルを置きます。次に、子宮を触診して、胎児の位置と尾側のリードインを決定します。
焼灼を使用して、目に見える血管や胎盤を避けて、頭部の背側に大きな湾曲を伴って子宮壁を10センチメートル切開します。次に、4つのバブコッククランプで子宮と胎盤の膜を固定し、バブコッククランプを反対側の4つの角で引っ張って胎児の頭が見えるようにします。この切開部から胎児の頭蓋半分を外部化し、呼吸の開始を防ぐために、摂氏37度の温かい滅菌生理食塩水で満たされた滅菌非ラテックス手袋で頭を覆います。
胎児の頸部を露出させた状態で頸動脈血管周囲カテーテルのインスツルメンテーションを行うには、中央領域の首の片側にある胸鎖乳突筋またはSCM筋の前縁に沿って3〜3.5センチメートルの斜めの皮膚切開を行います。次に、蚊の鉗子で筋膜を分離します。カモノハシを分割し、SCM筋の内側境界に沿って腱から上方に、舌骨筋のレベルを下方に解剖します。
バブコッククランプで皮膚を引っ込めます。鈍解剖を行い、頸動脈を周囲の組織と頸動脈シートから解放します。次に、滅菌パックから3ミリメートルのフロープローブを取り出し、バッキングプレートを緩め、スライドさせて開いてLブラケットを露出させます。
鉗子を使用して、バッキングプレートを閉じた位置まで静かにスライドさせ、フロープローブブラケットを閉じます。次に、フロープローブのバックネジを締めて、フロープローブブラケットを固定します。3.0の非吸収性シルク縫合糸を使用して、フロープローブの近位の頸動脈の近くに事前にフラッシュされた血管周囲カテーテルを配置します。
血管周囲系の近位および遠位の長さとフロープローブを近くの間質組織に固定します。連続縫合を使用して、切開部位と胎児の皮膚を3.0の非吸収性縫合糸で閉じます。カテーテルに縫合糸を3回巻き付けて、カテーテルを皮膚に固定します。
手袋を外した後、胎児の頭を子宮に戻します。胎児の四肢カテーテル検査を行うには、胎児の後ろ脚を外側に出し、脚を持ち、横向きにして大腿部内を視覚化します。滅菌ガーゼで患部を洗浄した後、2センチの切開を行い、大腿動脈を露出させます。
頸動脈について以前に示したようにフロープローブを配置して固定し、切開部を閉じます。次に、脛骨の内側、膝から約0.5センチ離れたところに沿って2センチの切開を行います。厚壁の後脛骨動脈と薄壁の伏在静脈を露出させます。
ポリビニルカテーテルを挿入するには、標準的なカットカットダウン技術を使用して、鈍解剖で目的の血管を解放します。次に、3.0シルク縫合糸で、針なしで、3つのスローで正方形の結び目を使用して、血管の遠位部分を結紮します。血管の近位側に2番目のシルクフリータイを事前に配置しますが、結紮は解いたままにしておきます。
カストロビエホはさみを使用して、遠位結紮の近位2ミリメートルの血管に小さな横切り込みを入れます。近位ほどかれた縫合糸をそっと引き上げて、血管の血流を制限します。次に、カテーテルを滅菌ヘパリン化生理食塩水で満たします。
カテーテルの斜めの端を挿入し、先端を胎児血管に20センチ進めます。助手が近位シルクフリータイ縫合糸を結び、血管をカテーテルに固定している間、鉗子でカテーテルを所定の位置に保持します。挿入部位から2ミリメートルの角い結び目を使用して、挿入されたカテーテルの周囲に血管を完全に結紮し、3回投げます。
次に、遠位結紮糸を近位タイに結び付け、血管をカテーテルに固定します。連続パターンを使用して、3.0の非吸収性縫合糸を使用して皮膚切開を閉じます。抜いた場合に血流が制限されないように、縫合糸がカテーテルの周りに結ばれていることを確認してください。
事前に洗浄したカテーテルを子宮内に留置し、3.0の非吸収性縫合糸を使用して縫合糸で胎児に固定します。胎児を子宮に戻します。連続的なロックパターンを持つ3.0の非吸収性縫合糸を使用して胎児の膜を縫合し、次に3.0の非吸収性縫合糸を使用して子宮の筋肉層を閉じます。
18インチのステンレス鋼の外科用ロッドを腹壁に沿って肋骨傍領域まで皮下に挿入します。カテーテルを手術用ロッドの遠位端に取り付け、助手がロッドを肋骨傍開口部から完全に押し込むことにより、カテーテルとフロープローブケーブルを肋骨傍出口部位に供給します。次に、すべてのカテーテルとフロープローブケーブルを肋骨傍切開部位に固定します。
防水テープを貼った後、カテーテルを雌羊の皮膚に縫合します。プラスチック製のメッシュポーチを雌羊の外側に縫合し、カテーテルを保管するためのプローブをカテーテルの上に貼り付けます。1.0モノフィラメントの合成吸収性縫合糸材料を使用して、連続パターンでアルバ線を固定し、外科用ステープルで皮膚層を固定します。
血流を測定するには、血管周囲フローモジュールで胎児に挿入したフロープローブをPowerLabと付属のコンピューターに取り付けます。動脈カテーテルと羊水カテーテルを、アナログ-デジタルコンバーターに取り付けられたブリッジアンプに取り付けます。10マイクロモルのフェニレフリンの1ミリリットルのボーラスを胎児に静脈内投与し、頸動脈と大腿骨の流れを15分間測定します。
その後、30分間、または血流がベースラインに戻るまで待ちます。次に、1ミリリットルの10マイクロモルフェニレフリンを血管周囲カテーテルに注入し、15分間血流を測定します。血管周囲カテーテルから5ミリリットルの温かい生理食塩水を投与して、フェニレフリンを洗い流します。.
その後、30分間、または血流がベースラインに戻るまで待ちます。この研究では、近産および早産の胎児と羊における血流操作の局所的な影響を調べました。α-1 ARアゴニストである10マイクロモルフェニレフリンを1ミリリットル頸動脈の血管周囲腔に投与したところ、全身血圧に影響を与えることなく、近産のヒツジと早産児の両方で頸動脈血流の有意な減少が観察されました。
逆に、フェニレフリンを静脈内投与すると、頸動脈血流に影響を与えることなく、近産の胎児ヒツジと早産児の両方で全身血流の有意な増加を引き起こしました。その結果、早産児はフェニレフリンを介した頸動脈血流調節に反応しないが、短期胎児では反応が成熟していることが明らかになった。特に、フェニレフリンの静脈内投与は早産胎児でのみ頸動脈血流を増加させ、短期胎児には有意な効果はありませんでした。.
しかし、フェニレフリンの静脈内投与は、早産児と近産児の両方で全身血圧を上昇させました。.結果はまた、フェニレフリンの血管周囲の設置が全身血圧に影響を与えなかったことを実証しています。鈍的解剖を行って血管を識別し、カテーテルの斜めの端を挿入するために血管に切り込みを入れる際には、細心の注意を払う必要があります。
切り傷は小さく、容器全体を切断しないようにする必要があります。この方法では、あらゆる血管の血管収縮性と血流を測定できます。また、標的とする臓器や組織の近傍に薬品やベクターを送達するためにも使用できます。
この手法は、発育中の胎児の子宮内の脳血流自己調節の変化を決定し、転写をアップレギュレートまたはサイレンシングする任意の遺伝子を標的にするために利用できます。
