膀胱充填中にスブロテリウムに直接アクセスするために脱皮筋を除去した分散型(Ex Vivo)マウス膀胱モデル

デトレータ筋肉を取り除いた膀胱モデルは、膀胱充填中のラミアプロプリアと膀胱内腔における尿路上皮メディエーターの可用性を同時に研究するための新しい実験的アプローチである。このモデルは、尿路上皮、サブロテル、および充填時の膀胱興奮性を調節する排尿筋の間のシグナル伝達メカニズムに関する新しい洞察を提供することができる。まず、10°Cの酸素化されたKBSを含む解剖顕微鏡の下で解剖皿に無傷のマウス膀胱標本を入れ、膀胱の周りの結合組織と脂肪組織を掃除することから始めます。

分離された膀胱のドームの一部を、suburotheium Lamia propriaに面した筋肉の最も内側の端からKBSで満たされたシルガード覆われた解剖皿まで遠く離れたデトレータ筋肉の最も外側の端までピン留めし、尿管と膀胱頸部をピン留めして無傷の膀胱製剤を表示する。細かい筋力を使って、尿管と膀胱本体の間の角にあるセロサの一片をそっと引っ張り、顕微鏡の光を調整して透明性を高め、粘液筋の下の粘膜下のマージンを区別します。準備壁を穿パーニングすることを避けるために、膀胱粘膜の横端がはっきりと見える間だけ、デトルネータの筋肉を切り取るようにしてください。

細かい先端のはさみを使用して、粘膜の横端が組織の端に触れるのを避けながら観察することができるように注意して、調製から切断セグメントを穏やかに引き離しながら、デトルサ筋肉層の内面に沿って膀胱壁を切断し始める。デトルナーの筋肉の小片を膀胱ドームの上に置いて、プロトコルの残りのステップ中に準備を固定し、20ポリエチレンチューブの2センチメートルを37°Cの酸素化されたKBSで満たします。膀胱尿道のオリフィスにカテーテルを挿入した後、カテーテル先端が膀胱の近似真ん中に達するまでカテーテルを軽く押します。

次に、二重ループ6.0ナイロン縫合糸で膀胱頸部の周囲の組織のカテーテルを固定します。漏れのために組織をチェックした後、37度の水ジャケットのオルガン皿の3ミリリットルの部屋に脱ヌード膀胱調製物を置き、準備が灌流溶液の表面の上に浮かばないようにチャンバーの側面にカテーテルを固定します。37°Cの酸素化されたKBSで満たされた3ウェイストップコックと注入注射器に接続されたポリエチレン20チューブの一部に膀胱カテーテルを接続し、注入ポンプを開始して、充填時の脳内圧の充填量を監視するためにKBSで膀胱を満たします。

調製物のサブウロテリウム・ラミネラ・プロプリアの側面内のメディエーターを検出するために、種々の適切な実験時点で浴液のアリコートを収集し、計画された下流分析に従ってサンプルを処理する。脱ヌード膀胱調製壁には尿路上皮とsuburotheliumが含まれていますが、滑縮筋は含まれていません。圧力量の関係は、無傷で裸の準備において著しく類似しています。

充填時にサブロテリウム・ラミナ・プロプリア側で放出される尿路上皮由来メディエーターを測定するためのモデルの適合性は、脱裸化製剤のサブウロテリウム・ラミナ・プロポリアを浴びる溶液中へのプリンメディエーターの放出を測定することによって試験することができる。実証されているように、純粋なデトルター筋肉を持つ単離された膀胱製剤を含む浴中で、ごくわずかな量のピューリンを検出することができるが、これらのピューリンの量は、脱裸の膀胱調製物を含む浴から採取されたサンプルにおいて有意に高い。特に、充填終了時に内腔およびサブウロテリウム・ラミナ・プロプリアから採取されたサンプル中の純素および代謝物の分布は有意に異なる。

無増動製剤の副内皮側にアテノATPを添加すると、無増散性製剤の下因性側に、無類の調製が行われ、アテノATP製品、アテノADP、アテノADP、アテノAMP、アテノADOの増加が生じます。同様に、内腔調製物にアテノATPを添加すると、アテノATPの減少と、内腔におけるアテノADP、アテノAMP、およびアテノADOの増加が生じる。また、無裸化製剤のサブロテルラミウム層にアテノATPを添加すると、内腔内にアテノAMPおよびアテノADOの出現をもたらす。

同様に、内腔にアテノATPを添加すると、サブウロテリウムラミナプロプリアにアテノAMPとアテノADOが現れ出る。この手順に従って、興奮性および阻害メディエーターの利用可能性は、膀胱充填の異なる段階で層内プロプリアおよび膀胱内腔で測定することができる。メディエーターの両側経尿道輸送およびメディエーターの代謝もこのモデルを用いて研究することができる。

この新しい膀胱モデルを使用すると、尿路上皮と排尿器平滑筋の間の固有の局所的なメカノイ感受性シグナル伝達の新しい理解をもたらし、健康と病気の膀胱興奮性を制御する。